miRNA-145在卵巢癌组织中的表达及其对增殖、迁移与侵袭的影响

摘 要：［目的］ 检测不同卵巢组织中miRNA-145的表达,并探讨miRNA-145在卵巢细胞SKOV-3增殖、迁移与侵袭的作用。［方法］ 采用定量聚合酶链反应（qPCR）测定正常卵巢组织、卵巢癌旁组织与卵巢癌卵巢组织的miRNA-145表达水平,随机将SKOV-3细胞分为正常对照组、空白病毒组和病毒转染组,分别采用MTT法测定各组细胞的增殖情况,采用qPCR测定miRNA-145的表达水平,采用划痕实验测定迁移能力,采用Transwell小室法测定侵袭能力。［结果］ 卵巢癌组织miRNA-145表达水平为0.56±0.23,较卵巢癌旁组织和正常卵巢组织显著性降低（P<0.05）。卵巢癌组织miRNA-145表达水平与患者国际妇产科联合会分期和组织分化程度相关（P<0.05）,但与年龄无关（P >0.05）。病毒转染组细胞的miRNA-145表达水平为4.63±0.47,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增加（P<0.05）。病毒转染组细胞在培养24h、48h和72h时OD值分别为0.68±0.15、1.17±0.23和1.62±0.26,均较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。病毒转染组细胞的划痕宽度为675±46μm,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增大（P<0.05）。病毒转染组穿膜细胞数量为36±6个,较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。［结论］ miRNA-145低表达可能与卵巢癌的发生发展有关,过表达miRNA-145能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭。miRNA-145可以作为治疗卵巢癌的新作用靶点。     

膜联蛋白A7对肿瘤细胞黏附分子表达及生物学行为的影响

摘 要：［目的］ 研究Annexin A7基因对肿瘤细胞黏附分子表达及其生物学行为的影响。［方法］ 采用shRNA干扰技术稳定转染小鼠Hca-P细胞,获得Annexin A7下调表达及Hca-P无关序列细胞株,采用Western Blot、qRT-PCR分别检测Annexin A7对黏附相关分子FAK、Src、E-cadherin等基因及蛋白表达水平的影响,应用淋巴结粘附及Transwell侵袭实验检测Annexin A7下调对Hca-P细胞淋巴结粘附及侵袭能力的干扰。［结果］ Annexin A7基因表达下调组细胞的FAK和Src基因及蛋白表达水平较A7无关序列组分别上升1.81倍、1.80倍及1.58倍、1.59倍（P<0.05）,E-cadherin基因及蛋白表达水平则分别下降54.11%和54.27%,而上述分子基因与蛋白表达水平在未处理Hca-P组与A7无关序列组间无统计学差异（P>0.05）,且在Annexin A7下调后Hca-P细胞的淋巴结粘附及侵袭能力上升,ShRNA-AnnexinA7组淋巴结黏附细胞数(1074±162.8)显著性多于A7无关序列组（234.7±40.08）及Hca-P组（220.3±39.53）（P<0.05）,ShRNA- A7细胞组穿过小室的细胞数目（294.8±64.40）明显多于A7无关序列细胞组（79±28.04）及Hca-P细胞组（57.60±25.62）（P<0.05）,而Hca-P与无关序列细胞组之间则无统计学差异（P>0.05）。［结论］ Annexin A7可通过影响黏附相关分子FAK、Src、E-cadherin等基因与蛋白表达水平从而改变Hca-P细胞生物学行为。     

GOLM1对宫颈癌上皮间质转化的影响及其与临床病理特征的关系

摘 要：［目的］ 探究GOLM1对宫颈癌上皮间质转化的影响及其与临床病理之间的关系。［方法］选取76例宫颈鳞状细胞癌手术标本和50例正常宫颈组织标本作为研究对象,采用免疫组化法检测GOLM1在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达水平,并分析GOLM1蛋白表达与宫颈癌组织临床病理特征之间的关系。构建GOLM1正常表达及GOLM1低表达Hela细胞系,Western blot检测GOLM1蛋白与E-cadherin、Vimentin表达水平变化;采用Transwell实验检测GOLM1蛋白对宫颈癌Hela细胞侵袭能力的影响。［结果］ 与正常宫颈组织中GOLM1蛋白的阳性表达率（22.0%）相比,GOLM1蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率（72.3%）升高（P<0.05）。GOLM1蛋白在不同年龄组、肿瘤直径中的表达无显著性差异（P＞0.05）;但在不同FIGO分期、分化程度、淋巴结转移以及深肌层浸润的宫颈癌组织中的表达则有显著性差异（P<0.05）。与对照组细胞相比,shRNA组细胞GOLM1和Vimentin蛋白表达水平显著性下调,E-cadherin表达水平则显著性升高（P<0.05）。与对照组侵袭细胞数（465.72±40.19）相比,shRNA组侵袭细胞数（103.36±9.89）显著性降低（P<0.05）。［结论］ GOLM1表达与宫颈癌的侵袭转移存在相关性,为宫颈癌的诊断和治疗提供了新的思路。     

敲低性别决定区Y-box蛋白5对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

摘 要：［目的］ 探讨敲低性别决定区Y-box蛋白5（Sox-5）的表达水平及对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。［方法］ 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞和正常人胃黏膜上皮细胞中Sox-5 mRNA的相对表达水平；sh-NC和sh-Sox-5质粒转染BGC823细胞，蛋白免疫印迹实验检测Sox-5蛋白表达水平；MTT实验、划痕实验和Transwell实验分别检测BGC823细胞增殖活性、迁移能力和侵袭能力；蛋白免疫印迹实验检测扭曲蛋白（Twist）、波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。［结果］ 胃癌细胞中Sox-5 mRNA的相对表达水平高于正常人胃黏膜上皮细胞（P<0.01）；与转染sh-NC组相比，转染sh-Sox5质粒组中Sox-5蛋白的相对表达水平降低（1.120±0.142 vs 0.124±0.010，t=9.032，P<0.001）；与转染sh-NC组相比，转染sh-Sox-5组细胞增殖活性显著降低（1.32±0.10 vs 0.74±0.06，t=3.514，P=0.005），迁移率能力减弱（46.2%±4.7% vs 17.6%±2.5%，t=9.625，P<0.001），侵袭能力减弱（93.7±9.1 vs 113.7±6.5，t=3.103，P=0.036）；敲低Sox-5蛋白表达后Twist和Vimentin蛋白表达减弱，E-cadherin蛋白表达增强（P均<0.001）。［结论］ 敲低胃癌细胞中Sox-5的表达，可抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT。     

三结构域家族蛋白22在宫颈癌中的表达及其对高危型人乳头瘤病毒阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨三结构域家族蛋白22（tripartite motif protein 22,TRIM22）在宫颈癌中的表达及其与临床病理学特征的关系,并分析TRIM22对高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。［方法］ 收集2017年8月至2018年9月41例手术切除或活检的宫颈癌组织和18例正常子宫颈组织,分别提取总RNA和总蛋白。实时定量PCR分析TRIM22 mRNA表达,Western blot分析TRIM22蛋白水平,并分析TRIM22 mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。以HPV16阳性宫颈癌细胞系CaSki和HPV18阳性宫颈癌细胞系HeLa为研究对象,用TRIM22表达质粒（pUNO1-hTRIM22a）和对照表达质粒（pUNO1）稳定转染CaSki细胞和HeLa细胞,以未转染细胞为对照组。实时定量PCR和Western blot检测转染后细胞中TRIM22 mRNA表达和蛋白水平。采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测抗磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）和磷酸化AKT（phosphorylated AKT,p-AKT）蛋白表达。［结果］ TRIM22在宫颈癌组织中mRNA表达（0.99±0.16 vs 4.39±1.41,t=15.40,P<0.001）和蛋白水平（0.30±0.12 vs 1.32±0.27,t=19.97,P<0.001）均明显低于正常子宫颈组织,TRIM22在高危型HPV阳性宫颈癌组织中mRNA表达（0.94±0.14 vs 1.17±0.12,t=4.21,P<0.001）和蛋白水平（0.27±0.08 vs 0.43±0.18,t=3.86,P<0.001）均明显低于高危型HPV阴性宫颈癌组织。TRIM22 mRNA表达与淋巴结转移明显相关（1.04±0.16 vs 0.89±0.13,t=3.15,P=0.003）,与肿瘤大小、临床分期无明显相关（P>0.05）。pUNO1转染CaSki细胞和HeLa细胞与未转染细胞在TRIM22 mRNA和蛋白水平、细胞增殖、侵袭数、细胞周期、凋亡率、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量的差异均无统计学意义（P>0.05）,pUNO1-hTRIM22a转染后CaSki细胞和HeLa细胞中TRIM22 mRNA和蛋白水平显著性高于pUNO1组和对照组（P<0.001）,细胞增殖、侵袭数量（CaSki细胞：31.00±5.30 vs 135.30±17.24 vs 120.40±22.95,F=56.01,P<0.001;HeLa细胞：27.20±9.04 vs 112.80±12.03 vs 117.00±18.56,F=67.45,P<0.001）、处于G2~M期的细胞比例（CaSki细胞：2.04%±0.36% vs 12.72%±1.98% vs 12.40%±1.62%,F=57.82,P<0.001;HeLa细胞：3.07%±1.08% vs 8.26%±2.98% vs 10.92%±3.56%,F=22.82,P<0.001）、PI3K、p-AKT蛋白表达量均显著性低于pUNO1转染细胞和未转染细胞,而凋亡率显著性高于pUNO1组和对照组（CaSki细胞：11.90%±2.78% vs 5.27% ±1.78% vs 6.64%±1.19%,F=16.78,P<0.001;HeLa细胞：18.79%±4.64% vs 6.78%±1.03% vs 5.23%±1.09%,F=27.91,P<0.001）。［结论］ TRIM22在宫颈癌中的表达明显减低,其表达水平与高危型HPV感染、转移恶化密切相关。上调TRIM22表达可明显减弱高危型HPV阳性宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力,促进宫颈癌细胞凋亡。     

miR-218-5p靶向N-cadherin调节胃癌细胞迁移、侵袭分析

摘 要：［目的］ 研究miR-218-5p靶向N-钙黏蛋白（N-cadherin）调节胃癌细胞迁移、侵袭的作用及机制。［方法］ 收集28例胃癌组织及癌旁组织，检测miR-218-5p及N-cadherin的表达水平；培养MNK45胃癌细胞，分为转染阴性对照（NC）mimic的NC组和转染miR-218-5p mimic的miR-218-5p组，检测细胞的迁移及侵袭数目、N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力。［结果］胃癌组织中miR-218-5p的表达水平（0.45±0.09）显著低于癌旁组织的（0.71±0.22）（P<0.05），N-cadherin的表达水平（0.93±0.20）显著高于癌旁组织的（0.67±0.14）（P<0.05），且miR-218-5p的表达水平与N-cadherin的表达水平呈负相关（r=-0.201，P<0.05）。miR-218-5p组MNK45胃癌细胞的迁移数目（65.57±11.49）及侵袭数目（67.11±10.34）均少于NC组（113.84±20.13，98.72±18.57；P均<0.05），N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、野生型N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力低于NC组（P<0.05）。［结论］ miR-218-5p在胃癌中低表达，过表达miR-218-5p能够抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，靶向抑制N-cadherin是可能的分子机制。     

Akt抑制剂哌立福新通过减少乳酸生成抑制胃癌细胞增殖与迁移

摘　要：［目的］ 探究Akt抑制剂哌立福新对胃癌细胞增殖、凋亡及迁移的作用及其可能机制。［方法］ 采用不同浓度哌立福新处理胃癌MGC803和SGC7901细胞。细胞增殖采用磺酰罗丹明B法检测,流式细胞仪Annexin V-/PI双染法检测细胞凋亡,细胞迁移和侵袭分别采用细胞划痕实验法和Transwell小室实验检测,乳酸含量的测定采用ELISA法,以蛋白印迹法检测糖酵解通路相关蛋白水平的变化。［结果］ 哌立福新在2.0 μmol/L浓度剂量时即能有效抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901细胞增殖。经哌立福新低中高剂量（2.0、10.0、20.0 μmol/L）处理后,MGC803细胞凋亡明显增加（P<0.05）。划痕间距分别为407.2±34.4 μm,657.2± 49.2μm和910.8±51.4.1μm,与对照组240.3±27.8 μm相比均有显著性差异（P<0.05）,且呈量效关系。Transwell小室实验显示每个视野下侵袭的MGC803细胞数对照组为2584±228个,而经哌立福新低中高剂量处理后分别为2052±158 (P<0.05),1410±105(P<0.01) 和887±87 (P<0.01),与对照组相比均有显著性差异,并呈剂量依赖性。不同剂量哌立福新均可显著性降低培养基和细胞中乳酸含量,同时,蛋白质印迹结果提示哌立福新显著性抑制与糖酵解乳酸生成相关的乳酸脱氢酶-A,葡萄糖转运蛋白（Glucose transporter,GLUT）1,GLUT4和IGF-1的表达（P<0.05）,且呈剂量依赖性。［结论］ 哌立福新能有效抑制MGC803细胞迁移与侵袭,其机制与降低糖酵解从而减少乳酸生成相关。     

JQ1下调SKP2和上调p27诱导HeLa细胞凋亡的研究

摘 要：［目的］ 观察JQ1对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及可能的作用机制。［方法］ 采用CCK-8比色法检测JQ1对HeLa细胞增殖的影响,分为二甲亚砜（DMSO）对照组和JQ1处理组（终浓度分别为0.01、0.1、1和10μmol/L）,分别处理24、48、72和120h。将细胞分为DMSO对照组和10μmol/L JQ1处理组进行后续实验,细胞培养12d后计算细胞克隆形成数量;细胞培养72h后采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白印迹法检测S期激酶相关蛋白2（SKP2）和p27的表达变化。［结果］ JQ1抑制HeLa细胞增殖,且作用呈剂量与时间依赖性,10μmol/L JQ1处理细胞72h后细胞存活数量减半;与DMSO对照组相比,10μmol/L JQ1显著抑制HeLa细胞克隆形成（细胞克隆形成数量：3±2 vs 240±10,P<0.001）;且能诱导HeLa细胞凋亡（细胞凋亡百分比：12.80±0.88 vs 2.90±0.27,P< 0.01）;与DMSO对照组相比,JQ1能抑制细胞SKP2 mRNA 和蛋白表达（其中SKP2 mRNA表达倍数：0.43±0.02 vs 1.00±0.03,P<0.01）,并上调p27 mRNA 和蛋白表达（p27 mRNA表达倍数：2.60±0.13 vs 1.00±0.11,P<0.01）。［结论］ JQ1通过诱导细胞凋亡来抑制HeLa细胞的增殖,其可能的机制是抑制SKP2表达和上调p27表达。     

干扰ANXA3基因表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探究干扰膜联蛋白A3（ANXA3）基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响以及可能作用机制。［方法］ 以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,RNA干扰技术沉默ANXA3基因表达,荧光定量RT-PCR和Western Blot检测转染后细胞中ANXA3 mRNA及蛋白表达;四甲基偶氮唑（MTT）法检测细胞的增殖能力变化,膜联蛋白 V-FITC（Annexin V-FITC）/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白的水平。［结果］ 空白对照组、阴性对照组和ANXA3干扰组细胞中ANXA3 mRNA的表达量分别为0.078±0.006、0.072±0.007和0.008±0.001;ANXA3蛋白表达量分别为0.792±0.085、0.764±0.078和0.353±0.039;细胞的凋亡率分别为（3.425±0.643）%、（3.537±0.740）%、（23.455±3.686）%;Bcl-2蛋白水平分别为1.256±0.247、1.239±0.265、0.624±0.065;Bax蛋白水平分别为0.856±0.086、0.842±0.079、1.526±0.344;Cleaved Caspase-3蛋白水平分别为0.522±0.057、0.535±0.062、1.230±0.367。与空白对照组相比,ANXA3干扰组细胞中ANXA3 mRNA和蛋白水平显著性降低（P<0.05）,细胞的增殖能力显著性降低（P<0.05）,其凋亡率显著性增加（P<0.05）;细胞中Bcl-2蛋白水平显著性下调（P<0.05）,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著性上调（P<0.05）。［结论］ 干扰ANXA3表达抑制乳腺癌细胞增殖,诱导其凋亡,其作用与Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平变化引起的细胞凋亡通路的变化有关。     

盐酸川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞黏附能力的影响

摘 要：［目的］ 探讨盐酸川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞侵袭黏附能力的影响及其作用机制。［方法］ 小鼠Lewis肺癌细胞体外培养,细胞黏附侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,Western Blot检测各组细胞Twist、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的变化。［结果］ 经DDP与TMP干预36h后,与对照组相比,用药组细胞的侵袭能力呈剂量依赖性下降,且DDP联合TMP组与单独使用DDP组相比,抑制细胞侵袭的能力更为显著（P＜0.05,P＜0.01）。细胞黏附实验显示,与对照组（23.76±1.64）相比,单独应用顺铂（47.40±0.85）可显著性增高细胞黏附抑制率（P＜0.01）,而单独应用TMP需药物浓度达到2000μg/ml时才可显著性增高黏附抑制率（P＜0.01）,两药联合组黏附抑制率均高于单独使用DDP组,尤以高剂量组抑制率最为显著（P＜0.01）。与单独用药相比,DDP+TMP可降低Twist、N-cadherin蛋白,并上调E-cadherin蛋白的表达（P<0.01）。［结论］ 盐酸川芎嗪联合顺铂能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的侵袭和转移,其机制可能与直接抑制肿瘤细胞侵袭,抑制相关基因蛋白Twist及N-cadherin,促进黏附分子E-cadherin蛋白表达有关。