首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到10条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
 目的研究p38在卵巢癌多细胞球体化疗耐药中的作用。方法构建p38正义真核表达载体,稳定转染卵巢癌细胞并三维培养形成多细胞球体,RT-PCR及Western blot分析p38表达;CCK-8细胞毒性试验和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果(1)多细胞球体p38表达低于单层细胞。(2)FACS检测转染p38真核表达载体的多细胞球体经顺铂作用后,细胞凋亡率高于转染空载体和未转染的多细胞球体;(3)CCK-8细胞毒性试验示转染p38真核表达载体的多细胞球体相对于转染空载体和未转染的细胞球体对顺铂敏感性更高。结论p38介导顺铂对卵巢癌化疗耐药,上调p38表达,可提高卵巢癌多细胞球体对顺铂的敏感性。  相似文献   

2.
目的:构建AKT2基因特异性短发卡状RNA(shRNA)真核表达载体,观察RNA干扰(RNAi)技术,对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用,并探讨其促进细胞凋亡的机制。方法:运用基因工程技术,设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA,构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体(Lipofectamine^TM 2000)包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞,荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达,计算转染效率,半定量RT—PCR(Semi-quantitative RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测AKT2的表达及干扰效率,流式细胞学检测法(FACS)检测细胞凋亡率,比较抑制AKT2基因前后卵巢癌细胞抵抗凋亡能力。结果:成功构建了PAKT2-ShRNA载体。A2780和SKOV3细胞转染pAKT2-shRNA后,荧光显微镜下观察转染效率约40%;Semi-quantitative RT-PCR和Western blot检测结果示,转染后AKT2 mRNA和蛋白表达均显著降低。FACS检测结果显示,转染pAKT2-shRNA后,紫杉醇25nmol/L处理细胞12h,与空白对照组和阴性对照组相比,细胞凋亡率显著增加,P〈0.05。结论:构建的pAKT2-shRNA真核表达载体能有效抑制AKT2基因表达;运用RNAi技术,降低卵巢癌细胞中AKT2基因表达水平,能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。  相似文献   

3.
目的:探讨AKT2基因在肿瘤细胞对紫杉醇敏感性中的作用。方法:分别构建2个针对同一AKT2基因不同位点的短发卡状RNA(shRNA)载体,转染人卵巢癌细胞A2780、SKOV3,荧光显微镜观察细胞内荧光蛋白的表达及转染效率,运用RT—PCR、蛋白质免疫印迹(western blotting)方法比较单独转染的抑制瘤和共转染对AKT2表达的沉默效率;抑制AKT2表达后,流式细胞仪(FACS)检测肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性。结果:构建的2种shRNA表达载体均可抑制AKT2mRNA和蛋白的表达,共转染的抑制率明显高于分别单独转染的抑制率(P〈0.05);FACS结果显示,共转染沉默AKT2基因后,细胞凋亡率明显增加(P〈0.05)。结论:共转染针对AKT2基因不同位点的2个shRNA真核表达载体,对AKT2基因的抑制效率高于单独转染1个载体;抑制卵巢癌细胞中AKT2基因表达,能增强其对紫杉醇的敏感性。  相似文献   

4.
卵巢癌多细胞球体对紫杉醇耐药及其机制的探讨   总被引:4,自引:1,他引:3  
Xing H  Gao QL  Yang XK  Li J  Gao C  Wu JH  Lu YP  Ma D 《癌症》2003,22(8):826-830
背景和目的:多细胞球体(multicellularspheroids,MCS)对传统细胞毒化疗药物的敏感性明显低于单层细胞。本实验旨在探讨卵巢癌MCS耐药的分子机制。方法:以单层细胞为对照,以三维培养方法获得的人卵巢癌A2780MSC和CAOV3MCS为模型,采用台盼蓝拒染法比较紫杉醇对单层细胞和MCS生长的抑制作用,流式细胞仪比较单层细胞和MCS细胞周期的分布和细胞凋亡率;采用流式细胞仪、蛋白质免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测单层细胞及MCS的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达及亚细胞分布;采用RT-PCR法检测mdr1mRNA表达水平。结果:(1)不同浓度的紫杉醇(0.2、2.0、10.0、20.0μmol/L)作用后,MCS细胞生长抑制率明显低于单层细胞(PA2780=0.003,PCAOV3=0.015);经20.0μmol/L的紫杉醇作用后,单层细胞的细胞凋亡率明显高于MCS,差异有统计学意义(PA2780=0.034,PCAOV3=0.032)。(2)流式细胞仪、蛋白质免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测提示P-gp在单层细胞中不表达,在MCS中表达明显升高(P均<0.05);RT-PCR证实MCS中有mdr1mRNA表达,而单层细胞中未检出其表达。(3)流式细胞仪检测提示将单层细胞培养成MCS时,G0/G1期细胞比率增加,S期和G2/M期细胞比率降低(P均<0.05)。结论:卵巢癌MCS对紫杉醇化疗耐药性增加,其高表达P-gp,并且与G0/G1期细  相似文献   

5.
杨蓉  张濰  王建  陈必良 《现代肿瘤医学》2019,(13):2231-2235
目的:采用siRNA技术沉默IFITM1基因表达,观察对卵巢癌CP70细胞侵袭及凋亡能力的影响及其可能的分子机制。方法:利用脂质体转染法将靶向IFITM1的小干扰RNA转染卵巢癌CP70细胞株;Western blot检测CP70细胞IFITM1蛋白的表达;Transwell侵袭小室、MTT、流式细胞仪检测转染细胞侵袭力、顺铂敏感性和凋亡的变化;Western blot观察转染后CP70细胞caspase-3的表达变化。结果:转染IFITM1 siRNA后卵巢癌CP70细胞的IFITM1表达受到高效而特异的抑制,减低了卵巢癌细胞的侵袭力,增加了细胞对顺铂的敏感性,促进了细胞凋亡,蛋白印迹结果显示转染细胞在顺铂作用下caspase-3磷酸化水平明显上调。结论:沉默IFITM1可以降低卵巢癌细胞的侵袭能力,提高对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡可能与上调凋亡相关的关键分子密切相关,IFITM1可能成为卵巢癌治疗的潜在靶点之一。  相似文献   

6.
目的:检测人卵巢癌多细胞球体中p27和P-gp的表达。观察P27反义寡核苷酸(p27-ASON)抑制p27表达前后人卵巢癌多细胞球体多药耐药P-糖蛋白(P-gp)的表达,探讨P-gp蛋白表达与p27蛋白表达的相关性及p27反义寡核苷酸对卵巢癌细胞多药耐药的逆转作用。方法:以单层细胞为对照,以三维培养方法获得的人卵巢癌A2780、CAOV3多细胞球体(MCS)为模型,通过脂质体将p27-ASON转染入两卵巢癌细胞株,采用流式细胞仪(FACS)、蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测p27、P-gp蛋白水平的表达;激光共聚焦显微镜(Confocal)检测p27、P-gp蛋白的亚细胞分布。结果:FACS、Westernblot、Confocal检测提示单层细胞低表达p27,低表达P-gp,而在MCS中p27和P-gp表达明显升高。p27-ASON转染后培养的MCS,p27表达明显下调,同时P-gp表达下调。结论:卵巢癌多细胞球体中P-gp和p27的表达呈相关性,多药耐药性可能和p27的表达上调有关,p27-ASON可下调多细胞球体中P-gp的表达,从而可一定程度的逆转卵巢癌多药耐药性。  相似文献   

7.
HSP27在卵巢癌顺铂耐药细胞系中的作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
 目的探讨HSP27在卵巢癌耐药细胞系及敏感细胞系中的表达及其在卵巢癌顺铂耐药中的作用。方法通过 RT-PCR及Western blot检测卵巢癌细胞株OV2008和CI3K中HSP27 mRNA和蛋白的表达水平;将合成的针对HSP27基因的特异性siRNA及正义真核表达质粒pEGFP-C1-HSP27(命为p-HSP27),分别转染CI3K和OV2008细胞。通过RT-PCR及Western blot检测转染前后CI3K及OV2008细胞中HSP27 mRNA和蛋白表达的变化;MTT及流式细胞仪分别测定转染前后CI3K及OV2008细胞对顺铂敏感度的变化。结果(1)HSP27 在CI3K细胞中的mRNA和蛋白表达水平显著高于OV2008细胞,差异有统计学意义(P<0.05);(2)转染siRNA 48 h,CI3K细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50 )明显低于转染空载体和未转染的CI3K细胞(P<0.05);转染正义质粒p-HSP27 48 h,OV2008细胞对顺铂的IC50明显高于转染空载体和未转染的OV2008细胞(P<0.05);(3)转染siRNA及正义质粒 48 h,再用顺铂作用CI3K细胞24 h。转染siRNA的CI3K细胞的凋亡率比转染空载体和未转染的CI3K细胞的凋亡率明显增加,前者明显高于后两者(P<0.05);转染正义质粒的OV2008细胞的凋亡率比转染空载体和未转染的细胞的凋亡率明显下降,前者明显低于后两者(P<0.05)。结论CI3K及OV2008细胞内 HSP27基因表达的强弱可影响其对顺铂的敏感度,提示HSP27可能在卵巢癌顺铂耐药中起重要作用。  相似文献   

8.
目的:研究hMSH2重组质粒对卵巢癌顺铂敏感性方面的影响。方法:构建重组真核表达质粒pCAN-hMSH2,通过酶切及测序法对重组质粒进行鉴定。采用脂质体转染技术对卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP进行瞬时转染,对照组为未转染细胞和SKOV3敏感细胞;hMSH2在细胞内的表达变化由Western blotting和RT-PCR进行检测;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法对细胞的顺铂敏感性进行检测;耐药细胞的凋亡情况通过Hoechst染色法检测。结果:重组质粒pCAN-hMSH2转染进SKOV3/DDP后,经RT-PCR和Western blotting检测证实转染成功,hMSH2的表达得到增强;MTT结果提示转染后的卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性明显增强;Ho-echst染色发现,转染后耐药细胞的凋亡明显增强。结论:hMSH2基因转染后能提高其在SKOV3/DDP细胞中的表达,增强SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性,促进在顺铂作用下的凋亡。  相似文献   

9.
目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。  相似文献   

10.
shRNA干扰对肺癌细胞内Skp2和p27水平及其生长的影响   总被引:2,自引:1,他引:2  
李胜  梅同华  黎联  张明川 《肿瘤》2008,28(6):485-489
探讨干扰肺腺癌SPC—A—1细胞中skp2(S-phase kinase associated protein,Skp2)基因的发夹结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)对肺癌细胞Skp2和p27基因表达的影响及对细胞生长的影响。方法:设计、合成特异性的shRNA序列并与pGenesil-1质粒载体连接转染SPC-A-1细胞,经过稳定筛选后的肺癌细胞,通过RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞内Skp2、p27 mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞生长情况并绘制生长曲线。结果:在转染干扰RNA后SPC-A-1细胞内的Skp2 mRNA及蛋白表达下降明显,而p27蛋白水平却明显上升,这与抑制了Skp2表达导致p27降解减少有关。生长曲线表明细胞生长受到了抑制。结论:成功构建了针对脚2基因的shRNA真核表达载体,能有效抑制肺癌细胞生长,并使得Skp2基因表达下降,p27基因的表达增多,为肺癌细胞的基因治疗提供了实验依据。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号