前列腺癌患者血浆白细胞介素6浓度检测及临床意义

研究发现白细胞介素 6 (ＩＬ 6 )参与多种实体瘤的发生发展 ,并与预后有关。我们检测了 37例前列腺癌 (ＰＣａ)患者血浆ＩＬ 6的表达及与ＰＳＡ的关系 ,报告如下。材料与方法　ＰＣａ患者 37例。年龄 4 8～ 82岁 ,平均 (6 7.3± 7.2 )岁。病理分级 :Ⅰ级 7例、Ⅱ级 14例、Ⅲ级     

白细胞介素6对前列腺癌细胞体外生长的影响及其调节

目的　了解白细胞介素６（ＩＬ６） 对前列腺癌（ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ,ＰＣａ） 细胞体外生长的影响及地塞米松（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ,Ｄｅｘ） 对此的调节。方法　采用ＥＬＩＳＡ 法测定ＰＣａ 细胞系ＰＣ３ｍ 细胞ＩＬ６ 的自分泌及Ｄｅｘ 处理后的分泌状况,并用结晶紫法观察ＩＬ６ 、抗ＩＬ６ 抗体和Ｄｅｘ 对ＰＣ３ｍ 细胞生长的影响。结果　ＰＣ３ｍ 细胞可自分泌ＩＬ６,ＩＬ６ 无促进ＰＣ３ｍ 细胞增殖作用（ Ｐ＞ ０．０５）;抗ＩＬ６ 抗体可抑制ＰＣ３ｍ 细胞生长,细胞毒性由（１４．８４ ±１．２５） ％ 递增至（４１ ．４１ ±０ ．８０）％ ,呈剂量依赖关系（ Ｐ＜０．０５） 。Ｄｅｘ 不能减少ＩＬ６ 的产生但可抑制ＰＣ３ｍ 细胞增殖。细胞毒性由（１４ ．０６ ±０．２０）％ 递增至（３１ ．２５ ±１ ．１９）％ ,呈浓度依赖关系（ Ｐ＜ ０ ．０５）。结论　ＩＬ６ 为ＰＣ３ｍ 细胞的自分泌生长因子;Ｄｅｘ 可抑制ＰＣ３ｍ 细胞增殖,但并非通过抑制ＩＬ６ 的生成而发挥作用。     

靶向TRPV6的siRNA对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的体外研究

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术阻断前列腺癌LNCaP细胞中瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚家族6(TRPV6)基因的表达,探讨TRPV6基因沉默对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:针对TR-PV6基因,构建2条小干扰RNA(siRNA)序列;在脂质体介导下转染前列腺癌LNCaP细胞,用RT-PCR测定TRPV6mRNA的表达;MTT法和流式细胞技术测定siRNA对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:两条siRNA序列均能有效地阻断LNCaP细胞中TRPV6基因在mRNA水平上的表达(P<0.01),且mRNA表达随着转染时间的延长而减少,转染72h后TRPV6mRNA的表达减少至对照组的27%和23%;siRNA转染能显著抑制LNCaP细胞增殖,转染48h细胞增殖抑制率最高,分别为34.53%和29.32%,与转染24h和72h比较有统计学意义(P<0.05);转染48h后,siRNA转染组G0～G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少,与空白对照组及阴性对照组相比有统计学差异(P<0.01);siRNA转染组细胞的凋亡率分别为14.45%和12.73%,显著高于空白对照组及阴性对照组3.78%和5.22%(P<0.05)。结论:针对TRPV6的siRNA在体外能有效地抑制LNCaP细胞TRPV6mRNA的转录,同时能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加。     

异丙酚对白介素-6所致中性粒细胞凋亡障碍的影响

目的 观察白介素－6（IL－6）对健康人中性粒细胞凋亡的抑制作用，及异丙酚对IL－6所致中性粒细胞凋亡抑制的影响。方法 分离20例健康志愿者的中性粒细胞，每例分成6部分，在RPMI1640培养液中孵育，其中1份作为对照，其余5份分别加入IL－6、异丙酚、异丙酚的溶剂Intralipid、IL－6＋异丙酚、IL－6＋Intralipid,置入CO2培养箱中孵育24h，观察中性粒细胞的凋亡率并进行比较。结果 IL－6可导致中性粒细胞凋亡的抑制（P＜0．01）；异丙酚和其溶剂Intralipid对健康人中性粒细胞的凋亡没有影响；与IL－6共同孵育时，异丙酚可部分逆转IL－6所导致的中性粒细胞凋亡障碍，而Intralipid则没有这种作用。结论 异丙酚可部分逆转IL－6导致的中性粒细胞凋亡障碍，提示异丙酚对细胞因子介导的全身炎症反应具有抑制作用。     

E1AF基因对LNCaP细胞生长特性的影响

Ｅ1ＡＦ是Ｅｔｓ癌基因家族的新成员。Ｅｔｓ基因的过度表达使细胞侵袭能力增强。我们将Ｅ1ＡＦ基因转染ＬＮＣａＰ细胞 ,观察其对ＬＮＣａＰ细胞生长特性的影响。报告如下。材料与方法　主要试剂、ＰＣＲ引物及Ｅ1ＡＦ基因转染方法见参考文献[1] 。将转染后的ＬＮＣａＰ细胞用     

神经内分泌分化对前列腺癌细胞生长及雄激素受体表达影响的实验研究

目的探讨神经内分泌分化对前列腺癌细胞生长的作用及对雄激素受体表达的影响。方法建立神经内分泌分化的前列腺癌细胞模型PC3MNE和LNCaPNE;采用甲基噻唑基四唑(MTT)试验观察其调节前列腺癌细胞生长的作用[以吸光度值(A)表示];采用逆转录聚合酶链反应和Western杂交方法检测LNCaPNE对LNCaP细胞雄激素受体表达的影响。结果PC3MNE的培养上清液可促进PC3M细胞的生长(A值在培养24h为034±018与050±009,48h为038±016与057±009,72h为038±015与055±005,P均<005);在有雄激素时,LNCaPNE的培养上清液不促进LNCaP细胞的生长,对其雄激素受体的表达也没有显著影响;去除雄激素后,LNCaPNE的培养上清液可促进LNCaP细胞的生长,并能下调其雄激素受体的表达(P均<005)。结论在雄激素阻断后,神经内分泌分化的前列腺癌细胞能以旁分泌的方式支持其他前列腺癌细胞生长,降低其雄激素受体的表达。     

硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导细胞杀伤作用的敏感性

目的:探讨硼替佐米是否能够增强前列腺癌细胞对NK细胞介导杀伤作用的敏感性,以及是否在不同类型的人前列腺癌细胞系中有相似的作用。方法:以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺癌细胞株DU145为模型,不同浓度(0、5、10、15、20、25nmol/L)硼替佐米处理细胞后,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,Annexin V/PI法检测细胞凋亡率。结果:15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞48、72h后,各处理组细胞的增殖率分别为(82.79±2.04)%、(73.59±2.95)%、(74.16±6.16)%和(71.24±5.30)%、(51.20±2.91)%、(38.02±2.67)%,同样处理LNCaP细胞后,各处理组细胞的增殖率分别为(77.04±7.74)%、(42.61±6.62)%、(23.85±6.04)%和(36.45±7.02)%、(14.94±5.76)%、(11.65±5.87)%。与对照组相比,硼替佐米强烈抑制两种细胞系的增殖(P0.05)。15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞24h后,DU145细胞的凋亡率分别为(14.41±1.32)%、(16.13±1.55)%、(14.48±1.42)%,而在LNCaP细胞,20、25nmol/L硼替佐米处理24h后,凋亡率为(12.77±1.28)%和(14.84±1.65)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),DU145细胞对硼替佐米诱导的凋亡作用较LNCaP细胞更加敏感。但是,在短期分析中硼替佐米不能致敏两种细胞系对NK细胞介导的杀伤作用。在长效分析中,用硼替佐米处理肿瘤细胞后,20nmol/L硼替佐米+NK组诱导的DU145细胞和LNCaP细胞凋亡率分别为(41.83±5.06)%和(30.31±3.62)%,较单独应用硼替佐米或者NK细胞更高(P0.05)。结论:硼替佐米能够应用于致敏前列腺癌细胞对NK细胞介导的杀伤作用的敏感性,提高当前前列腺癌的治疗水平。而且此治疗策略对雄激素非依赖性的前列腺癌患者更有效。     

雄激素受体反义寡核苷酸对前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨雄激素受体 (AR)反义寡核苷酸 (aODN)对前列腺癌细胞AR表达和生长的抑制作用。　方法　合成 1对AR正、反义寡核苷酸 ,与LNCaP细胞共培养 ,观察LNCaP细胞的增殖情况 ,RT PCR和Westernblot方法检测ARmRNA水平和AR蛋白表达水平。　结果　含ARaODN的培养基培养处于静止期和对数生长期的LNCaP细胞增殖较对照组均明显减慢。RT PCR证实aODN组吸光度A值 (0 .5 3± 0 .18)与ODN组 (1.14± 0 .2 1)差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,提示ARaODN可导致LNCaP细胞ARmRNA显著下调。Westernblot分析显示aODN组条带的吸光度A值 (2 6 .35± 1.33)与ODN组 (33.5 1± 1.4 8)之间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,提示ARaODN可下调LNCaP细胞AR蛋白含量。　结论　ARaODN可抑制前列腺癌细胞AR表达并抑制前列腺癌细胞增殖。     

苦参碱对雄激素依赖性前列腺癌细胞的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine）对雄激素依赖性前列腺癌细胞株（LNCaP）凋亡及前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）表达的影响。方法：分别用0.5g／L、1.0g／L、1.5g／L、2.0g／L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12h、24h、36h后MTT法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞凋亡的变化;24h后Western印迹法检测细胞内Bel-2和Bax的表达;12h、24h、36h后化学发光法检测LNCaP细胞培养液中PSA的变化。结果：苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。苦参碱诱导LNCaP细胞凋亡,各浓度组凋亡细胞比例均显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;LNCaP细胞内Bcl-2含量呈浓度依赖性下降,Bax含量呈浓度依赖性升高（P〈0.01）;LNCaP细胞培养液中PSA的表达显著下降（P均〈0.05）。结论：苦参碱能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,诱导其凋亡,并抑制PSA的表达。     

氟他胺耐受性前列腺癌细胞系LNCaP-flu的建立

目的建立氟他胺耐受前列腺癌细胞系LNCaPflu,并初步研究其细胞特性。方法在体外氟他胺作用下,连续培养LNCaP细胞,得到可在10-7mol/L氢化氟他胺中稳定生长的LNCaP亚系,LNCaPflu。使用相差显微镜,电子显微镜,流式细胞仪,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、放免法和transwell穿膜实验对细胞特性进行鉴定。结果建立氟他胺耐药细胞系LNCaPflu,与普通LNCaP细胞相比,在氟他胺作用下,此细胞株(65.0±1.7)%处于G1期,明显少于对照组的(82.7±2.3)%(P<0.05);前列腺特异性抗原分泌活力无变化,LNCaPflu为(11.25±2.23)ng/L,LNCaP为(10.15±0.86)ng/L(P>0.05);穿膜侵袭能力未受氢化氟他胺明显影响,LNCaP穿膜数为(35.21±4.52)个/高倍视野,LNCaPflu为(26.15±3.69)个/高倍视野,(P>0.05)。结论LNCaP细胞经长时间体外培养可在氟他胺中稳定生长,LNCaPflu细胞可在体外模拟前列腺癌细胞由氟他胺敏感转化为氟他胺不敏感的过程。     

HSP 70反义寡核苷酸逆转LNCaP和PC-3m细胞耐药性的研究

目的：探讨热休克蛋白（HSP70）反义寡核苷酸逆转入前列腺LNCaP及PC－3m耐药性的作用。方法用MTT法和成集落试验测定了10μmol/L,HSP70反义寡核苷酸作用后不同浓度阿霉素、丝裂霉素C对LNCaP和PC－3m生长抑制率的影响。结果10μmol/LHSP70反义寡核苷酸可以显著增加4－12μg/ml阿霉素和10－100μg/ml丝裂霉素－C对PC－3m的生长抑制率以及0．01－0．08μg/ml阿霉素和1－6μg/ml丝裂霉素C对LNCaP的生长抑制率,差别有显著性意义（P＜0．05）。抑制率均超过505。结论HPS70与前列腺癌细胞的耐药性有关;HSP70反意义（P＜0．05）。报制率均超过505。结论HSP70与前列腺部细胞的耐药性有关;HSP70反义寡核苷酸可以特异性地逆转二种不同生物学特性的前列腺癌细胞的耐药性。为临床前列腺癌化疗提供了新方法。     

前列腺癌组织神经内分泌细胞的免疫组化超微诊断及意义

应用透射电镜技术对４０例前列腺癌、２０例前列腺增生症及１０例正常前列腺组织的神经内分泌（ＮＥ）细胞进行观察，并与抗嗜铬粒蛋白Ａ（ＣｇＡ）、神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）和６种激素抗体免疫组化技术进行对比观察。前列腺癌中含ＮＥ型癌细胞３２例，依据内分泌颗粒的形态不同可分为三种类型，前列腺增生症ＮＥ细胞的形态与正常前列腺组织相似，但数量有明显变化。对正常前列腺组织细胞的超微形态与功能，前列腺癌中ＮＥ细胞超微诊断及临床病理意义进行了探讨     

腺病毒载体介导的PML生长抑制因子对前列腺癌细胞生长和致瘤能力的抑制效果

为探讨用腺病毒载体携带ＰＭＬ（ＰｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃＬｅｕｋｅｍｉａ）基因作为前列腺癌基因治疗的可能性，应用重组人携带ＰＭＬ基因腺病毒（ＡｄＰＭＬ）感染培养的前列腺癌细胞，观察表达ＰＭＬ蛋白的癌细胞与对照组癌细胞的体外生长和裸鼠体内致瘤能力变化，对荷瘤裸鼠瘤体周围注射ＡｄＰＭＬ，观察治疗组和对照组肿瘤生长的变化。结果显示，感染ＡｄＰＭＬ的前列腺癌细胞体外生长和裸鼠体内致瘤能力明显下降，荷瘤裸鼠瘤体周围注射ＡｄＰＭＬ后肿瘤生长速度明显减慢。证实了ＰＭＬ是一种生长抑制因子，提示其可能被应用于前列腺癌的基因治疗研究     

PML生长抑制因子过表达抑制前列腺癌细胞生长和致瘤能力的实验研究

为探讨ＰＭＬ（Ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅａｋｅｍｉａ）生长抑制因子对人前列腺癌细胞的作用，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导基因转染技术将ＰＭＬ基因和Ｇ４１８抗性基因联合导入体外培养的人前列腺癌细胞，经Ｇ４１８筛选、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测出ＰＭＬ蛋白过表达细胞克隆，经体外生长抑制试验和裸鼠体内致瘤能力试验，观察ＰＭＬ过表达对前列腺癌细胞体外生长和裸鼠体内致瘤能力的影响。结果证实ＰＭＬ基因被成功地导入前列腺癌细胞中并得到高效表达。过表达ＰＭＬ蛋白的细胞体外生长能力和裸鼠体内致瘤能力明显低于对照细胞。提示ＰＭＬ生长抑制因子过表达能够有效地抑制前列腺癌细胞的体外生长和裸鼠体内的致瘤能力。     

蛙皮素对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞系的作用

目的观察蛙皮素(bombesin,BBS)对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞系的作用;检测PC-3细胞BBS受体及其 mRNA的表达。方法①MTT法检测BBS对PC-3细胞增殖的影响;②检测BBS处理后PC-3细胞贴壁率;③Millcell小室实验检测BBS对PC-3细胞播散能力的影响;④免疫荧光组织化学结合激光扫描共聚焦显微镜检测BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达[1];⑤用Fluo-3/AM荧光标记技术检测不同浓度BBS处理后PC-3细胞[Ca2 ]i浓度[2]。⑥免疫组化方法检测PC-3细胞中蛙皮素受体(BBS-R)蛋白表达;⑦利用逆转录聚合酶链反应(Rt-PCR)观察PC-3细胞BBS-R mRNA的表达。结果经BBS处理的PC-3细胞吸光度A值增高,细胞贴壁率增高,细胞播散能力提高,并呈现一定浓度依赖性;10-5mol/L浓度的BBS可促进PC-3细胞CK表达;BBS提高PC-3细胞[Ca2 ]i浓度;PC-3细胞中BBS-R蛋白表达呈阳性;Rt-PCR产物与预期的BBS-R的cDNA分子量完全相符。结论BBS可通过特异性受体介导致PC-3细胞系增殖、粘附、播散、伪足形成。一定浓度的BBS可明显提高PC-3细胞[Ca2 ]i浓度以及CK表达进而影响细胞骨架形态。     

强力霉素抑制前列腺癌细胞PC-3增殖的体外研究

目的研究强力霉素对雄激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3增殖能力的影响及其机制。方法采用MMT法观察强力霉素对前列腺癌细胞PC-3增殖能力的影响，应用流式细胞术(FCM)和透射电镜观察强力霉素对前列腺癌细胞周期的影响和超微结构的改变。结果不同浓度的强力霉素均能抑制PC-3细胞的增殖，细胞周期的改变表现为S期明显受到抑制，G1～S期阻滞。超微结构的改变表现为线粒体的肿胀、空泡化，粗面内质网脱颗粒，且以上改变均具有剂量依赖性。结论强力霉表演是通过抑制DNA的合成和影响细胞增殖时的能量和物质代谢来抑制前列腺癌细胞的恶性增殖，有可能应用于前列腺癌的治疗。     

前列腺增生和癌变组织中碱性成纤维细胞生长因子的表达及其临床意义

为了探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在前列腺组织中表达、分布情况及临床意义，应用免疫组化方法检测１４例正常前列腺（ＮＰ）、５６例前列腺增生症（ＢＰＨ）和３３例前列腺癌（Ｐｃａ）组织中ｂＦＧＦ的分布和表达。结果显示：ＢＰＨ中ｂＦＧＦ阳性率为６４３％，主要分布于间质细胞核，部分间质细胞浆、少数腺上皮细胞浆也见阳性染色；Ｐｃａ中ｂＦＧＦ阳性表达位于癌细胞浆，阳性率为８４８％，但ｂＦＧＦ表达强度与Ｐｃａ的病理分级、临床分期无明显关系；正常前列腺组织中ｂＦＧＦ表达均为阴性，三者之间阳性率差异有显著意义，表明ｂＦＧＦ参与ＢＰＨ、Ｐｃａ发生过程。     

膀胱移行细胞癌伴前列腺癌的诊断与治疗

目的　提高膀胱移行细胞癌伴前列腺癌的诊治水平。　方法　对 8例膀胱移行细胞癌伴前列腺癌患者的临床资料进行分析。　结果　 8例术前均经膀胱镜检查及活检病理证实为膀胱移行细胞癌。 7例经直肠前列腺穿刺活检确诊前列腺癌 ,1例为前列腺增生症 ,行膀胱前列腺全切术后病理证实为前列腺癌。 4例行经尿道膀胱肿瘤电切及双侧睾丸切除术 ,术后使用丝裂霉素或BCG等膀胱灌注及氟他胺内分泌治疗。 1例行膀胱前列腺全切加回肠膀胱术。 8例中 2例失访 ,3例因多发性转移 ,术后存活 <1年 ,3例行根治性膀胱前列腺全切术 ,术后随访 1.5～ 4.0年 ,经胸片、CT、同位素和PSA等检查未见肿瘤复发或转移。　结论　血清PSA测定、前列腺直肠指诊、经直肠前列腺B超检查、活检及膀胱镜检查是诊断膀胱移行细胞癌伴前列腺腺癌的主要方法 ,根治性膀胱前列腺切除是影响预后的重要因素     

全雄激素阻断治疗晚期前列腺癌

为了评价全雄激素阻断治疗晚期前列腺癌的疗效，采用双侧睾丸切除、Ｆｌｕｔａｍｉｄｅ和Ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄ联合治疗Ｄ２期前列腺癌病人５例。随访１５～２０个月，结果ＰＳＡ均正常，前列腺体积缩小６１．２％～６９．３％，有显著性差异（Ｐ＜０．０１），骨转移灶缩小、部分消失，积水肾脏完全恢复正常，所有病人治疗后全部有效。表明全雄激素阻断对晚期前列腺癌有良好的治疗效果。提出在三个层次上阻断雄激素治疗晚期前列腺癌的策略。     

前列腺癌放射免疫治疗的实验研究

为评价放射免疫治疗对前列腺癌治疗效果的作用，用１３１Ｉ标记人精浆蛋白（γＳｍ）单克隆抗体对前列腺癌荷瘤裸鼠模型放射免疫治疗。３５只荷瘤裸鼠分对照组、腹腔给药组、瘤内给药组、分次给药组及非特异抗体组５组。比较各组移植物的体积，生长抑制率及动物生存时间。结果：１３１ＩγＳｍ对人前列腺癌裸鼠移植物有较强的抑制作用，在同样剂量下瘤内给药抑制效果优于其它方法给药，肿瘤生长抑制率为８５．７％。结论：１３１ＩγＳｍ放射免疫治疗可作为前列腺癌治疗的新方法