瘦素对三苯氧胺诱导的乳腺癌MCF-7细胞的凋亡抑制作用及相关机制

目的 探讨瘦素在体外对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡抑制作用及其抑制MCF-7细胞凋亡的相关机制.方法 将MCF-7细胞接种于48孔板中.分组处理48 h后,ELISA测定不同浓度瘦素对不同浓度三苯氧胺引起的MCF-7细胞凋亡.实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中Survivin、BCL-2、BAX的mRNA的相对表达水平改变.结果 103 ng/mL和104 ng/mL瘦素可以有效抑制TAM诱导的MCF-7细胞凋亡.104 ng/mL明显上调了乳腺癌MCF-7内Survivin mRNA的表达,而BCL-2、BAX mRNA改变无统计学意义.结论 瘦素可以有效抑制TAM诱导的MCF-7细胞凋亡,其机制可能与瘦素上调Survivin mRNA的表达有关.     

异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

LncRNA NUTM2A-AS1调控miR-183-5p/TGFα影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的研究

目的 探讨LncRNA NUTM2A-AS1对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的软骨细胞损伤的影响及分子机制。方法 将软骨细胞随机分为对照组、模型组（5 μg/L的IL-1β）、miR-183-5p+模型组、miR-NC+模型组、si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、si-TGFα+模型组、si-NC+模型组、pcDNA-TGFα+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、pcDNA+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组;运用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测LncRNA NUTM2A-AS1、miR-183-5p和TGFα mRNA的表达水平;运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活性;运用流式细胞术检测软骨细胞凋亡情况;通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α、IL-6水平;通过双荧光素酶报告实验检测NUTM2A-AS1、miR-183-5p、TGFα之间的靶向关系。结果 IL-1β诱导的软骨细胞中LncRNA NUTM2A-AS1和TGFα表达升高,miR-183-5p表达降低,软骨细胞活性降低,而凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高。低表达LncRNA NUTM2A-AS1、低表达TGFα或过表达miR-183-5p后可促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎症反应。结论 低表达LncRNA NUTM2A-AS1通过调控miR-183-5p/TGFα抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症反应,促进细胞存活。     

T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族-3对干扰素-γ活化的小鼠肝Kupffer细胞分泌炎性细胞因子的调节作用及机制

目的探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族-3(Tim3)对IFN-γ活化的小鼠Kupffer细胞的调节作用并探讨其相关机制。方法将真核表达质粒pc DNA3.1-Tim3转染小鼠肝Kupffer细胞,以Real-time PCR和Western blot检测Tim3在小鼠肝Kupffer细胞的表达。通过ELISA检测质粒pc DNA3.1-Tim3、Tim3阻断型抗体对IFN-γ活化的小鼠肝Kupffer细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)产生的影响,Western blot检测JAK2/STATl蛋白表达。结果 Real-time PCR检测结果显示,IFN-γ能够显著提高小鼠肝脏Kupffer细胞中Tim3 m RNA的表达水平(P0.05);pc DNA3.1-Tim3组的TNF-α、IL-6和IL-1β分泌较对照组显著下降(P0.01);ELISA结果显示,Tim3阻断型抗体组与对照组相比,TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌增加(P0.01);Western blot检测显示,与对照组相比,Tim3阻断型抗体预处理的小鼠Kupffer细胞JAK2及STAT1蛋白的表达上调(P0.05)。结论Tim3通过调控Jak2/Stat1蛋白表达参与了Kupffer细胞活化的调节。     

N端α位乙酰基转移酶10在甲状腺癌中的表达及其对TPC-1甲状腺癌细胞中可溶性Fas受体表达的影响

目的探讨N端α位乙酰基转移酶10(Naa10)在甲状腺癌中的表达及对TPC-1甲状腺癌细胞中可溶性Fas受体(sFas)表达的影响。方法蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测甲状腺癌及癌旁组织中Naa10蛋白及mRNA表达, 将TPC-1细胞随机分为siRNA Naa10(siRNA组)和siRNA NC组(对照组), 培养48 h, Western blot及Real-time PCR检测Naa10蛋白及mRNA表达, MTT法检测细胞活力, 细胞克隆形成实验检测细胞克隆能力, Hoechst染色检测细胞凋亡, 酶联免疫吸附法(ELISA)及Real-time PCR法检测sFas、sFas配体(sFasL)蛋白及mRNA表达, Western blot法检测剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase)-3、cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9蛋白表达, 组间比较采用t检验。结果癌症组Naa10蛋白及mRNA表达量高于癌旁组(0.78±0.07比0.32±0.0...     

电刺激对LPS诱导M1型小胶质细胞活化的影响

目的评价电刺激对LPS诱导M1型小胶质细胞活化的影响。方法将生长良好的BV2小胶质细胞采用随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、LPS组和LPS+电刺激组(LE组)。C组常规培养24 h, LPS组和LE组加入浓度为100 ng/ml的LPS培养基孵育24 h, LE组于LPS孵育前给予100 mV/mm的直流电刺激4 h。采用ELISA法检测上清液TNF-α和IL-1β浓度;免疫荧光染色法检测M1型小胶质细胞表面标志物CD32和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平;qRT-PCR法检测细胞CD32和iNOS的mRNA表达水平。结果与C组相比, LPS组和LE组上清液TNF-α和IL-1β浓度升高, 细胞CD32和iNOS及其mRNA表达上调(P<0.05);与LPS组相比, LE组上清液TNF-α和IL-1β浓度降低, 细胞CD32和iNOS及其mRNA表达下调(P<0.05)。结论电刺激可抑制LPS诱导M1型小胶质细胞活化, 从而减轻炎症反应。     

人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡诱导作用

[目的]探讨人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡诱导作用及其具体作用机制。[方法]MG-63细胞分为空白对照组和CK药物处理组。采用MTT法检测细胞活性及增殖能力,倒置显微镜下观察细胞凋亡形态。细胞凋亡形态检测、Hoechst细胞核染色及Annexin V/PI细胞凋亡实验检测药物CK对细胞的诱导凋亡作用;Western blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-9、Bcl-2及BAX的表达,研究其具体凋亡机制。[结果]CK能够显著降低MG-63的体外活性及生存率(P<0.05);细胞凋亡形态检测、Hoechst细胞核染色及Annexin V/PI细胞凋亡实验证明CK可诱导MG-63凋亡(P<0.05);CK处理后MG-63细胞表达的Caspase-9及BAX表达上调,相反Bcl-2表达下调(P<0.05)。[结论]人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63具有凋亡诱导作用,而以Caspase-9为关键因素的线粒体凋亡途径在此凋亡中起着决定性作用。     

甲基强的松龙对重症急性胰腺炎大鼠脑组织神经细胞凋亡的影响

目的 探讨甲基强的松龙对重症急性胰腺炎大鼠脑组织神经细胞凋亡的影响.方法 将36只SD大鼠分为3组,假手术组、重症急性胰腺炎组、甲基强的松龙组,每组12只.逆行胰胆管注射5%牛磺脱氧胆酸钠建立重症急性胰腺炎模型.观察各组血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平、腹水量和胰腺组织的病理学改变.RT-PCR法分析脑组织Bcl-2、Bax mRNA的表达水平,TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果 重症急性胰腺炎组血清IL-6、TNF-α升高,腩组织Bcl-2 mRNA表达减少,Bax mRNA表达上调,Bcl-2/Bax比值降低,脑组织神经细胞凋亡增加;甲基强的松龙组血清IL-6、TNF-α表达明显下降,脑组织Bcl-2 mRNA表达变化不明显,但Bax mRNA表达下调明显,Bcl-2/Bax比值升高,脑组织神经细胞凋亡显著减少.结论 重症急性胰腺炎时脑组织神经细胞凋亡可能是胰性脑病的发病机制之一;甲基强的松龙可抑制细胞因子的释放,促进脑组织Bcl-2和Bax基因表达的平衡,降低脑组织神经细胞凋亡指数,使脑组织损伤得以改善.     

红花提取物对高糖处理的小鼠足细胞损伤的影响

目的:探讨红花提取物对高糖处理的小鼠足细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌的影响及分子机制。方法:将小鼠足细胞MPC5分为对照(NC)组、高糖(HG)组、不同浓度红花提取物组、红花提取物+HG组、miR-NC+HG组、miR-516a-5p+HG组、anti-miR-NC+HG组、anti-miR-516a-5p+HG组、红花提取物+miR-NC+HG组、红花提取物+miR-516a-5p+HG组。MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-516a-5p表达水平;ELISA检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:红花提取物处理后,高糖处理的小鼠足细胞中细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低,miR-516a-5p表达水平降低(P0.05)。过表达miR-516a-5p促进高糖处理的小鼠足细胞炎症因子表达和细胞凋亡,抑制细胞增殖;抑制miR-516a-5p表达与其作用相反。miR-516a-5p过表达可以逆转红花提取物对高糖处理的MPC5细胞增殖、凋亡,炎症因子表达的影响。结论:红花提取物可能通过下调miR-516a-5p表达抑制高糖处理的小鼠足细胞炎症因子表达和细胞凋亡,促进细胞增殖。     

XBP1在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧环境下抗凋亡作用实验研究

目的探讨在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧情况下,X盒结合蛋白1(XBP1)在骨肉瘤细胞中表达量的变化、其对细胞凋亡的影响及与低氧诱导因子(HIF)-1α信号转导通路的关系。方法通过氯化钴诱导骨肉瘤MNNG、MG-63细胞达到模拟缺氧状态,通过实时聚合酶链式反应(PCR)检测不同时间、不同氯化钴浓度下HIF-1α和XBP1的表达情况;采用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞凋亡率;采用siRNA干扰技术,下调XBP1。实验将骨肉瘤细胞分为干扰组(经XBP1 siRNA转染骨肉瘤细胞)和空白对照组(未经XBP1 siRNA转染骨肉瘤细胞)。结果 XBP1表达具有氯化钴浓度和时间依赖性:一定范围内,随着氯化钴浓度增高和时间延长,XBP1表达升高;敲除XBP1后,干扰组骨肉瘤细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05);PCR检测HIF-1α及下游靶基因mRNA表达无明显变化(P0.05)。结论 XBP1在氯化钴诱导缺氧的骨肉瘤细胞中表达明显增高,其对骨肉瘤细胞在缺氧环境下抗凋亡有明显作用,其抗凋亡作用与HIF-1α信号转导通路无直接关联,具体机制有待进一步研究。