DEAD box家族蛋白与精子生成的研究进展

精子的发生和成熟过程不但需要多种相关基因正确表达,而且还需要多种RNA的参与.因此,这些RNA需要较好的稳定性以保证其功能的正确执行.DEAD-box家族蛋白是一个ATP依赖的RNA解旋酶家族,参与RNA的各种代谢过程如RNA二级结构变换,转录起始,线粒体RNA剪接,核糖体和剪接体装配、mRNA降解以及维持mRNA的稳定性等.最近的一些研究显示这个家族的一些成员如DDX3,DDX4,DDX25等与精子生成有着密切的关系.     

靶向沉默DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响CSCD

目的通过sh RNA干扰技术,探讨靶向沉默RNA解旋酶DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响。方法以人永生化食管鳞状上皮细胞Het-1A为对照,实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测DDX46基因m RNA在TE-1细胞中的相对表达;DDX46基因RNAi靶点序列慢病毒感染的TE-1细胞为实验组,阴性对照序列慢病毒感染的TE-1细胞为对照组,进行细胞计数、克隆形成和细胞凋亡实验;Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit检测DDX46基因靶向沉默前后信号通路关键分子的变化。结果与对照组相比,靶向沉默DDX46基因后细胞计数显示TE-1细胞生长被显著抑制(P<0.01),克隆形成实验显示细胞克隆形成能力被显著抑制(P<0.001),Annexin V-APC单染法流式细胞仪凋亡检测显示细胞凋亡显著增加(P<0.001)。Path Scan?Antibody Array检测发现Akt(Ser473,phosphorylation)和IκBα(total,N/A)表达水平显著下降(P<0.01),Caspase-3(Asp175,cleaved)表达水平升高(P<0.05)。结论 DDX46基因在食管鳞癌TE-1细胞中高表达;RNAi靶向沉默DDX46基因可抑制TE-1细胞增殖、诱导细胞凋亡;DDX46基因沉默可能是通过下调Akt/NF-κB信号转导通路,进而发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。     

靶向沉默DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响

目的通过sh RNA干扰技术,探讨靶向沉默RNA解旋酶DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响。方法以人永生化食管鳞状上皮细胞Het-1A为对照,实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测DDX46基因m RNA在TE-1细胞中的相对表达;DDX46基因RNAi靶点序列慢病毒感染的TE-1细胞为实验组,阴性对照序列慢病毒感染的TE-1细胞为对照组,进行细胞计数、克隆形成和细胞凋亡实验;Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit检测DDX46基因靶向沉默前后信号通路关键分子的变化。结果与对照组相比,靶向沉默DDX46基因后细胞计数显示TE-1细胞生长被显著抑制(P0.01),克隆形成实验显示细胞克隆形成能力被显著抑制(P0.001),Annexin V-APC单染法流式细胞仪凋亡检测显示细胞凋亡显著增加(P0.001)。Path Scan?Antibody Array检测发现Akt(Ser473,phosphorylation)和IκBα(total,N/A)表达水平显著下降(P0.01),Caspase-3(Asp175,cleaved)表达水平升高(P0.05)。结论 DDX46基因在食管鳞癌TE-1细胞中高表达;RNAi靶向沉默DDX46基因可抑制TE-1细胞增殖、诱导细胞凋亡;DDX46基因沉默可能是通过下调Akt/NF-κB信号转导通路,进而发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。     

Argonaute蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其与预后的相关性

肾细胞癌是泌尿系统肿瘤中病死率最高的肿瘤,其中约有80％是来源于肾小管的肾透明细胞癌.不同临床分期患者术后5年生存率差异明显,因此临床上迫切需要1个有效可靠的分子标志物,能对肾癌患者的进行个体化预后风险进行评估.Argonaute蛋白(AGO蛋白)是RNA诱导沉默复合物(RISC)中重要的组成部分之一,共同参与基因沉默即RNA干扰(RNAi)的过程,近年来AGO蛋白家族在各种肿瘤中作为潜在的肿瘤相关因素,逐渐成为一个新的研究热点.我们通过免疫组织化学方法检测AGO蛋白在肾癌组织中的表达,并结合临床病理资料探寻其在肾癌发生、发展中的潜在作用,探讨其与肾癌患者预后的相关性.     

原位杂交检测DDX24基因在膀胱癌的表达

目的　探讨DDX2 4基因在膀胱移行细胞癌 (TCC)发生发展的作用。方法　采用核酸分子原位杂交 ,应用RNA探针对 3 2例TCC组织与 8例正常组织的DDX2 4基因表达情况进行检测。结果　显示DDX2 4基因在正常组织中高表达而在TCC组织中表达下调或不表达 ,并且表达程度与TCC的分级、分期呈负相关。结论　DDX2 4基因对TCC的生物学行为有重要影响 ,其表达程度可作为TCC的恶性程度的一指标。     

非编码RNA通过竞争性内源性RNA机制对肿瘤生物学行为的调控

非编码RNA(non-coding RNA,nc RNA)表达谱的异常见于包括肿瘤在内的多种人类疾病。由于研究体系的不成熟,nc RNA家族中的长链非编码RNA(lnc RNA)、假基因(pseudogene)、环状RNA(circular RNA,circ RNA)等的研究仍处于起步阶段。近年来的研究显示,lnc RNA、假基因、circ RNA等可以作为竞争性内源性RNA(competitive endogenous RNA,ce RNA)调控恶性肿瘤的各类生物学行为,包括增殖、凋亡、侵袭、转移以及自噬。以ce RNA机制为背景,论述nc RNA(主要包括lnc RNA、假基因、circ RNA)在肿瘤生物学行为中的最新研究进展。     

Du145细胞中HuR表达水平测定及HuR shRNA腺病毒载体构建鉴定

正胚胎致死性异常视觉蛋白(embryonic lethal abnormal vision,ELAV)家族属于RNA结合蛋白,其家族成员之一的ELAV1即人类抗原R蛋白(human antigen R,HuR),广泛表达于小肠、脾脏、卵巢等组织中,通过转录后机制参与细胞中许多分子的调控表达~([1])。然而,其他家族成员HuB、HuC、HuD几乎只表达在神经组织中参与相关分子的表达调控~([1])。     

Mcl-1基因与肿瘤的靶向治疗

髓细胞白血病基因-1 (Mcl-1)基因是Bcl-2基因家族成员之一,在细胞的生长和分化过程中有重要作用.Mcl-1蛋白是通过线粒体途径参与细胞凋亡过程的重要分子,半衰期很短,其表达受多种信号转导通路调控.Mcl-1基因在人类多种肿瘤细胞中高表达,并且与肿瘤的耐药关系密切.近年来的研究显示,通过应用药物抑制Mcl-1基因的表达,可促进肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的治疗提供了新的靶点.本文就Mcl-1基因的功能以及靶向Mcl-1基因的药物在肿瘤化疗中的研究作一综述.     

连环蛋白家族的新成员——p120-连环蛋白

目的介绍连环蛋白家族新成员p120-连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)及其在肿瘤研究中的进展。方法查阅近年来国内、外有关对p120ctn研究的文献并作综述。结果①p120ctn参与钙黏蛋白-连环蛋白复合体的形成,参与细胞生长、增殖和黏附连接;②调控Rho GTP酶的活性,促进细胞运动性;③与核内转录因子Kaiso结合形成Kaiso-p120ctn复合体,参与基因转录的调控;④参与血管内皮生长因子诱导的血管新生过程;⑤参与炎症、细胞恶变以及肿瘤侵袭、转移过程。结论 p120ctn作为连环蛋白家族中的一个新成员,依靠它的细胞定位参与多种生物过程,从分子水平深入了解p120ctn的生物学功能及作用机理,有利于从p120ctn的异常改变判断肿瘤的发生和发展,为肿瘤的预防和治疗提供新的手段。     

Livin凋亡抑制蛋白与肿瘤治疗的研究进展

凋亡抑制蛋白Livin是凋亡抑制因子(IAP)家族的新成员,在多种肿瘤细胞中高表达,参与抑制细胞凋亡,与肿瘤发生、发展及预后密切相关,是一种具有潜在价值的肿瘤标志物,可作为肿瘤早期诊断和治疗的新分子靶点.本文就Livin基因分子结构、组织表达、生物学功能及在肿瘤治疗中的应用等研究进展作一综述.     

DDX41 expression is associated with tumor necrosis in clear cell renal cell carcinoma and in cooperation with VHL loss leads to worse prognosis

BackgroundHistologic tumor necrosis (TN) is a well-established independent prognostic indicator in patients treated surgically for clear cell renal cell carcinoma (ccRCC). However, the precise mechanisms by which TN alters disease progression remain unknown. The DEAD-box protein DDX41, a member of a large family of helicases, has been characterized as a pattern recognition receptor against an array of double-stranded (ds)DNA produced from bacteria, dsDNA viruses, and nearby cells that have released dsDNA fragments through necrosis. We hypothesized that DDX41 expression may be upregulated in ccRCC with TN, leading to worse prognosis.MethodsRelationship between the presence of TN and DDX41 expression were examined using The Cancer Genome Atlas data sets or using ccRCC samples in our institution. Further, the molecular functions of DDX41 were investigated with human ccRCC cells.ResultsThe presence of TN was significantly associated with the upregulation of mRNA and protein expression of DDX41 in the 2different patient cohorts with ccRCC. In addition, the mRNA and protein expression levels of DDX41 revealed a worse prognosis. In vitro analyses with ccRCC cells revealed that DDX41 expression promotes tumor-promoting activity. Furthermore, VHL loss, 1of the most common features in ccRCC, was shown to play an extremely important role in increasing the expression of the CXCL family in DDX41-expressing ccRCC, leading to the acquisition of a worse malignant phenotype.ConclusionsDDX41 expression is associated with TN in ccRCC and leads to a worse prognosis in cooperation with VHL loss.     

DEAD盒RNA解螺旋酶5和微小RNA-205在前列腺癌中的表达及临床意义

目的 检测DEAD盒RNA解螺旋酶5（DDX5）和微小RNA-205（miR-205）在前列腺癌（PCa）中的表达情况,并分析二者与PCa预后的关系。方法 选取2015年4月至2017年4月于北京市朝阳区双桥医院行前列腺癌根治术或穿刺活检术的86例PCa患者为研究对象,取患者术中切除的癌组织及癌旁组织分别作为PCa组和对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测组织中DDX5 mRNA、miR-205的水平。采用免疫组化法检测组织中DDX5的表达情况。分析DDX5、miR-205表达水平与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存分析DDX5、miR-205表达水平与PCa患者的预后关系。采用Cox回归分析PCa预后不良的影响因素。结果 PCa组的DDX5 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组（均P<0.05）,miR-205表达水平低于对照组（P<0.05）。PCa患者中DDX5、miR-205表达与肿瘤分期、血清PSA、Gleason评分、肿瘤转移均有相关性（均P<0.05）,而与患者年龄、切缘性质均无相关性（均P>0.05）。经Kaplan-Meier生存分析,DDX5阳性表达患者的3年累积生存率低于DDX5阴性表达患者（P<0.05）;miR-205高表达患者的3年累积生存率高于miR-205低表达患者（P<0.05）。多因素Cox分析结果显示,DDX5水平偏高、miR-205水平偏低是PCa不良预后的危险因素（HR=2.598、3.342,均P<0.01）。结论 在PCa患者癌组织中DDX5高表达,miR-205低表达,二者与PCa的多种临床病理及预后有关,是PCa患者预后不良的危险因素。     

一个多发性骨骺发育不良大家系的临床特点及致病基因分析

目的通过对一个5代疑似多发性骨骺发育不良(multiple epiphyseal dysplasia,MED)的大家系(患者17例)进行临床特征分析和致病基因的筛查,为遗传咨询和产前分子诊断提供实验依据。方法采集家系成员病史,一般体检、关节、髋部X线片资料;收集该家系外周血样,提取样本DNA,靶向基因高通量测序方法对先证者DNA临床全外显子进行测序,使用Next Gene软件对测序序列进行比对分析,并进一步利用Ingenuity软件对存在的突变进行功能注释,寻找先证者致病突变。针对可疑突变,PCR和Sanger测序对家系其他成员DNA样本进行验证。结果该家系共5代,现存家系成员38人,系谱分析符合常染色体显性遗传特征。家系共有患者17例,其临床表现为:幼时出现走路姿势异常,后出现髋关节及膝关节疼痛,X线有典型骨骺发育不良病理改变。高通量测序及数据分析后,筛选出先证者(Ⅳ-3)软骨低聚物基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)基因c.1153G>A(p.Asp385Asn)错义杂合突变,该突变导致其编码蛋白的第385位天冬氨酸被天冬酰胺替代。先证者家系其他成员符合基因型与表型共分离。结论COMP基因c.1153G>A错义杂合突变是导致该MED家系患者发病的分子机制,该突变首次在大家系中被报道,进一步明确了COMP基因c.1153G>A突变的致病性,有利于家系患者的进一步的诊治,也为产前诊断提供了实验依据。     

Familial Endocrine Syndromes

Endocrine tumors may present as sporadic events or as part of familial endocrine syndromes. Familial endocrine syndromes (or inherited tumor/neoplasm syndromes) are characterized by multiple tumors in multiple organs. Some morphologic findings in endocrine tumor histopathology may prompt the possibility of familial endocrine syndromes, and these recognized histologic features may lead to further molecular genetic evaluation of the patient and family members. Subsequent evaluation for these syndromes in asymptomatic patients and family members may then be performed by genetic screening.     

胃肠间质瘤KIT和PDGFRA基因突变的检测和意义

目的 探讨中国胃肠间质瘤(GIST)患者KIT和血小板源性生长受体α(PDGFRA)基因突变的特点,分析其临床意义.方法 对136例GIST患者肿瘤组织进行DNA抽提、聚合酶链反应(PCR)扩增和直接测序,检测KIT基因外显子9、11、13、17和PDGFRA基因12、18外显子突变;并对8例取得伊马替尼耐药瘤组织的患者进行2次检测.结果 在136例患者中,KIT突变111例(81.6%).其中外显子11突变95例(69.8%),外显子9突变16例(11.8%),未检测到PDGFRA突变的病例.KIT和PDGFRA野生型25例(18.4%).KIT外显子11突变最常见为5'缺失突变,共60例(60/95,63.2%),其次为点突变21例(21/95,22.1%);KIT外显子9突变均为插入串联重复,其中14例(14/16,87.5%)为常见的密码子502和503重复,而另外2例为罕见的密码子501和502重复.不同性别、年龄以及晚期GIST患者和潜在恶性的GIST患者间突变情况差异无统计学意义(P＞0.05);而不同部位GIST的KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义(P＜0.01).伊马替尼耐药GIST的检测中发现1例继发的KIT外显子17点突变(Asp820Val+Tyr823Asp).结论 KIT基因突变在中国GIST患者中常见,不同部位间KIT外显子11突变差异有统计学意义.KIT继发性突变发生于靶向药物伊马替尼耐药的患者.     

Molekularbiologische Aspekte von Lymphknotenmetastasen

The risk of local and systemic lymphatic metastasis of a tumor increases with the size of the malignant neoplasia. Lymph vessels are generated in the tumor and seem to follow anatomically defined pathways. However, the precise molecular and biological mechanisms seem to be complex and require definition. At present, molecules belonging to the vascular endothelial growth factors family and podoplanin have been identified as key for the proliferation of the tumor’s lacteals. Molecular mechanisms of the tumor origin and the hematogenic and lymphatic dissemination are increasingly better defined by the use of new diagnostic and therapeutic approaches for tumor patients. Simultaneously, we might be able to influence processes such as cell growth, apoptosis, angiogenesis, and lymphogenic dissemination by novel drugs and thereby develop novel approaches for tumor treatment. Chemokine receptors seem to control essential steps of lymphogenic dissemination such as migration, invasion, and proliferation of tumor cells.