小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上细胞周期蛋白D2的表达

目的检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位。结果 GV-CCs的CCND2mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P0.01)。免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV-CCs减弱。结论卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程。     

猪体外成熟卵母细胞的卵丘扩散与胚胎发育能力的相关性

目的　探讨卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩散与其体外受精后胚胎发育能力的关系。　方法　取猪卵丘 卵母细胞复合体 (COCs)在体外进行成熟、受精和培养 ,在体外成熟培养液中添加不同直径卵泡 (<2 ,2～ 5和 >5mm)的不同浓度 (15%、5% )卵泡液。　结果　在含卵泡液的成熟培养液中培养 48h ,卵泡液明显抑制了COCs的卵丘扩散 (P <0 .0 5) ,但不影响第一极体的排出 ;COCs成熟培养 2 4h后 ,移入不含卵泡液的成熟培养液中继续培养 2 4h ,卵丘扩散显著高于对应的 48h培养组 (P <0 .0 5) ,但第一极体的排出率无显著差异 ;体外成熟过程中COCs扩散的卵丘面积与其受精后的胚胎发育能力 (发育到 2～ 4细胞、>4细胞和桑葚胚 /囊胚的百分率 )呈显著正相关 (P =0 .0 0 58,0 .0 0 0 1和 0 .0 3 4 8)。　结论　卵泡液对COCs的卵丘扩散有抑制作用 ,这种抑制作用与卵泡液的作用时间相关 ;在体外成熟过程中扩散的卵丘团面积可以作为预测卵母细胞受精后胚胎发育能力的参数     

小鼠成熟卵丘-卵母细胞复合体蛋白质谱图的建立

目的通过聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术,全面展示小鼠成熟卵丘卵母细胞复合体(COC)的蛋白质表达谱。方法采用13cmpH3～10的非线性胶条进行双向凝胶电泳,分离成熟雌鼠COC总蛋白,并作质谱鉴定。结果获得了较高分辨率的小鼠成熟COC蛋白质表达谱图,并对胶上的3个蛋白点进行了质谱鉴定。结论蛋白质组学是全面分析COC蛋白表达的有效手段。成熟COC蛋白质表达谱的建立为研究卵泡发育机理提供了依据。     

卵丘细胞在卵母细胞发育过程中的作用

卵母细胞能否正常发育成熟是影响女性生育能力的重要因素,目前人们普遍认为,人类卵母细胞和卵丘细胞之间的相互交流,对于卵母细胞发育是不可或缺的。在卵泡窦腔形成过程中,颗粒细胞分化为壁颗粒细胞和卵丘细胞,卵丘细胞与其他卵泡细胞不同,具有本身独特的功能、促进排卵前卵母细胞的生长和成熟及支持排卵后卵母细胞功能的作用。本文主要对卵丘细胞的功能及在卵母细胞发育过程中的作用进行论述。     

体内外成熟卵丘复合体中卵丘细胞蛋白质组学差异的研究

目的比较体内外成熟卵丘复合体的卵丘细胞蛋白质组学差异,探讨体外成熟卵母细胞发育能力差的原因,进一步阐明卵母细胞发育调控机制。方法收集20例因男性因素行卵胞浆内单精子注射-压胎移植(ICSI-ET)的患者成熟卵丘复合体的卵丘细胞为对照组,该20例患者的不成熟卵丘复合体经体外培养成熟后的卵丘细胞为实验组,将两组卵丘细胞进行双向凝胶电泳分析,并通过质谱技术鉴定差异蛋白质。结果实验组与对照组相比共有13个蛋白质表达上调(其中7个蛋白质的表达水平,实验组是对照组的3倍以上;6个蛋白质在实验组有表达,而在对照组中无表达),10个蛋白质表达下调(其中2个蛋白质的表达水平,对照组是实验组的3倍以上;8个蛋白质在实验组无表达,而在对照组中有表达),筛选质谱鉴定了6个蛋白点,得到5种蛋白质包括PRO2044蛋白、KIAA1191蛋白、乙酰辅酶A酰基转移酶2、11型角蛋白亚基蛋白和ARID2蛋白。结论通过蛋白质组学研究技术发现卵丘复合体在体内成熟与体外成熟存在差异,这些差异蛋白质主要与清除自由基、抗凋亡、细胞周期调控等相关,推测这些蛋白质的表达异常可能与体外成熟卵母细胞质量差的原因有关。     

卵母细胞代谢及其调节

卵母细胞发育与成熟过程依赖大量ATP,因此物质代谢旺盛。卵母细胞以葡萄糖和/或其中间产物丙酮酸为底物,在线粒体内氧化磷酸化,产生大量ATP,是卵母细胞最主要的供能形式。但是,卵母细胞糖代谢模式有种属特异性差异。同时,卵母细胞也存在脂肪酸和氨基酸的代谢。除提供能量外,这些代谢产物在细胞信号传导、渗透压调节等方面也有重要作用。卵母细胞代谢的精确调控受多方面因素的影响如卵母细胞胞内、胞间、胞外的调控等。研究卵母细胞代谢及其机制,对探寻改善卵母细胞质量、提高卵母细胞体外成熟效能具有重要的意义。     

卵巢储备功能减退患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨卵巢储备功能减退(DOR)患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以期为女性因DOR导致的生育功能降低和不孕症的发生提供新的科学实验数据。方法 选取SPF级4～6周龄C57BL/6J未孕雌性小鼠,收集未成熟卵母细胞并进行体外成熟培养;同时收集DOR患者卵泡液,并提取外泌体。利用Dio荧光标记外泌体后与小鼠未成熟卵丘-卵母细胞复合物(COCs)共孵育培养,观察外泌体摄入情况;通过添加不同浓度0、50、100和150μg/ml外泌体处理小鼠未成熟COCs 16 h观察卵丘扩展和第一极体排出情况,分析其对卵母细胞成熟的影响并筛选出最佳处理浓度;设置分组为体内成熟组(control)、外泌体添加组(exo+)和未添加组(exo-),各组成熟后的COCs利用qPCR检测卵丘扩展相关基因Has2、Tnfaip6和Ptgs2以及凋亡相关基因Bax、Bcl2的mRNA相对表达水平,分析各组间的差异。结果 (1)Dio标记的外泌体与小鼠COCs共孵育,卵丘颗粒细胞上能观察到明显的Dio荧光信号,证实COCs能够摄入外泌体;(2)不同浓度外泌体处理组的GV期卵母细胞百分比均显著高于0μg/...     

卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的研究授精前剥除部分卵丘细胞的卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法授精前用机械法剥除卵母细胞外包裹的部分卵丘细胞,每个卵母细胞采用微滴法单独受精(A组)。对照组(B组)采用常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)受精方式进行。比较两组受精率(2PN、1PN和3PN)、卵裂率(2PN、1PN和3PN)、优胚率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果 A组和B组的受精率分别是76.51%和73.74%(2PN受精率分别是60.64%,61.62%;1PN受精率分别是1.61%,0.86%;3PN受精率分别是10.44%,9.69%)、卵裂率分别是98.95%和99.17%(2PN卵裂率分别是97.02,98.01%;1PN卵裂率分别是100%,85.71%;3PN卵裂率分别是100%,100%)、优质胚胎率分别是60.75%,62.68%、临床妊娠率分别是63.89%,61.76%、种植率分别是48.00%,38.78%、流产率分别是9.09%,11.90%。所有指标均无统计学意义。结论卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞不会影响IVF-ET的临床结局,为利用卵丘细胞进行非侵入性种植前遗传学诊断提供临床依据。     

HLA-G及其亚型在人卵丘细胞中的表达

目的 研究HLA-G分子及其亚型在人卵丘细胞中的表达.方法 收集临床行辅助生殖治疗取卵患者的卵丘细胞,共聚焦免疫荧光技术探究HLA-G分子在卵丘细胞的表达和定位,微滴式数字PCR技术对HLA-G各亚型(HLA-G1～HLA-G7)在卵丘细胞内的表达水平进行绝对定量检测.结果 卵丘细胞的细胞膜和细胞质中均可见HLA-G分...     

γ-氨基丁酸及其A型受体α5亚单位在小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的表达

目的探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及其A型受体α5亚单位(GABRA5)在小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的表达情况。方法在性成熟前小鼠给予孕马血清促性腺激素(PMSG)以刺激卵泡生长,并予以人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导排卵,于给药后不同时间取出卵巢和输卵管,并收集不同时期的颗粒细胞。釆用实时荧光定量聚合酶链反应检测GABRA5mRNA在生发泡期(GV)和减数第2次分裂中期(MⅡ)卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的表达;用Western blotting和免疫荧光技术检测GABRA5蛋白在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的表达;用免疫组织化学方法检测GABA在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的分布。结果 (1)GABRA5mRNA在GV期和MⅡ期卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中均有表达,且MⅡ期卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达水平高于其在GV期卵母细胞时卵丘颗粒细胞中表达水平(P<0.05)。(2)GABRA5蛋白在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞的细胞膜和细胞质中均有表达,且其表达量随卵泡发育呈上升趋势(P<0.05)。(3)免疫组化染色结果显示,GABA均定位于在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞的胞质中。结论 GABA及其A型受体α5亚单位均表达于小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中,其中A型受体α5亚单位的表达与卵母细胞的成熟度相关,其表达量随卵母细胞成熟而升高,提示其可能参与小鼠卵泡发育和成熟的过程。     

缺氧诱导因子-1α基因转染人间充质干细胞的体内促血管生成作用

目的研究将缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染人间充质干细胞（hMSCs）的体内促血管生成作用，为促进组织工程骨血管化提供新的方法和策略。方法构建pIRES3／HIF-1α逆转录病毒载体，制备含目的基因的重组逆转录病毒，感染hMSCs。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测转基因hMSCs表达HIF-1α的水平，用免疫组织化学法检测转基因hMSCs在缺氧和常氧条件下HIF-1α蛋白的存在情况。体内促血管生成的实验分为两组：实验组采用转基因hMSCs，对照组采用未转基因的hMSCs。两种细胞分别接种到13d的鸡胚绒毛尿囊膜（CAM），3d后将CAM制片，在显微镜下观察并摄像。用图像分析方法测量并分析血管面积。结果转基因hMSCs中HIF-1α mRNA表达较未转基因的hMSCs明显增高。转染HIF-1α基因的hMSCs，缺氧条件下细胞核内HIF-1α能稳定存在；常氧条件下细胞核内HIF-1α不能稳定存在。图像分析结果显示实验组CAM较对照组CAM血管面积明显增多，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIF-1α基因能稳定转染到hMSCs并得到强制表达。转染HIF-1α基因的hMSCs有明显的促血管生成作用，对于促进组织工程骨的血管化有重要作用。     

ADAMTS-1在人卵泡颗粒细胞和卵泡液中的表达研究

目的探讨Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)mRNA和蛋白在人卵泡壁颗粒细胞(GCs)和卵丘颗粒细胞(CCs)中的表达水平及变化。方法收集2014年3月至2016年6月期间在华中科技大学同济医学院生殖医学中心接受ICSI治疗的患者卵泡液,其中大卵泡(直径≥18 mm)和小卵泡(≤10 mm)各86份,离心后上清用于Western Blot和ELISA实验,沉淀用密度梯度离心法分离纯化得到GCs;收集脱颗粒细胞的培养液直接离心法获得CCs。GCs和CCs均分别提取mRNA和蛋白,荧光定量PCR检测GCs和CCs中ADAMTS-1 mRNA水平,Western Blot检测ADAMTS-1蛋白水平,比较ADAMTS-1 mRNA和蛋白在不同颗粒细胞中的表达差异。结果 ADAMTS-1 mRNA在大卵泡GCs、小卵泡GCs、CCs中均有表达,且其在小卵泡GCs中表达量最高,显著高于CCs(P<0.05)。ADAMTS-1蛋白在大卵泡GCs、小卵泡GCs、CCs及卵泡液中均有表达,且存在成熟ADAMTS-1蛋白(85 KDa)及前体(110 KDa)两种形式;...     

Cox7a2在TM3睾丸Leydig细胞中表达,定位及与ERK1/2磷酸化相关性研究

目的:研究Cox7a2的荧光表达载体在TM3睾丸Leydig细胞中的表达和定位及对ERK1/2磷酸化的影响。方法:将Cox7a2克隆到pEYFP-N1。细胞转染和细胞荧光显微镜观察其在TM3细胞中的表达和定位,Westernblot检测ERK1/2磷酸化水平。结果:在TM3细胞中,绿色荧光YFP-Cox7a2和红色荧光线粒体标记物-Mitotracker有完全的共定位,过量表达YFP-Cox7a2能引起ERK1/2磷酸化水平增高。结论:成功表达了YFP-Cox7a2融合蛋白,确认了其在TM3细胞的线粒体定位。YFP-Cox7a2过表达和ERK1/2磷酸化水平有联系,为探讨Cox7a2对TM3细胞睾酮分泌及其相关信号传导通路的影响奠定了基础。     

Hyaluronic acid modulates gene expression of connective tissue growth factor (CTGF), transforming growth factor‐β1 (TGF‐β1), and vascular endothelial growth factor (VEGF) in human fibroblast‐like synovial cells from advanced‐stage osteoarthritis in vitro

Intraarticular injection of hyaluronan (hyaluronic acid; HA) is the common way to treat osteoarthritis (OA) of knees. This treatment cannot only maintain the viscoelastic properties of knee but also release the OA pain. However, the exact molecular mechanism is unknown. In this study, after human synovial cells were stimulated with HA and Hylan (Synvisc®) for 24 h, real‐time polymerase chain reaction (real‐time PCR) was used to detect the alteration of connective tissue growth factor (CTGF), transforming growth factor‐β1 (TGF‐β1), and vascular endothelial growth factor (VEGF) gene expression, which were specific genes related to pathogenesis of OA knees. Our results illustrated that both HA and Hylan might not cause cytotoxicity or apoptosis of synovial cells in serum deprivation environment. The gene expressions of TGF‐β1 and VEGF were significantly increased at the concentration of 0.1 mg/mL HA and 0.1 mg/mL Hylan, respectively (α < 0.05). The synovial cells with treatment of 0.1 mg/mL Hylan decreased the CTGF gene expression (0.66‐fold) and VEGF (0.78‐fold) compared to 0.1 mg/mL HA (α < 0.05). We suggested that the profile of CTGF, TGF‐β1, and VEGF gene expressions in our study might provide the rational mechanism for the therapeutic effect of hyaluronan on OA knees. © 2009 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 28:492–496, 2010     

体内外人脂肪间充质干细胞向肝样细胞分化的实验研究

目的 分离、培养人脂肪间充质干细胞(hADSCs),研究其在体内外向类肝样细胞转化的能力.方法 采用Ⅰ型胶原酶消化皮下脂肪,贴壁分选去除造血细胞的方法获得较纯的干细胞.通过对形态观察、表面分子鉴定、透射电镜内部结构扫描以及成脂、成骨定向诱导对脂肪间充质干细胞进行鉴定.用EGF、FGF、OSM、HGF、TSA细胞因子体外诱导hADSCs向肝样细胞分化.尾静脉输注hADSCs至急性肝损伤裸鼠,观察hADSCs在裸鼠肝脏内定植、向肝样细胞分化情况,以及hADSCs对裸鼠肝损伤的保护作用.结果 分离获得的细胞呈长梭形贴壁生长,低表达CD34、CD45,高表达CD73、CD90、CD105,具有多向分化潜能.诱导细胞表现出肝样细胞形态,表达AFP、alb,并且和肝细胞一样具有吸脂性.体内诱导:移植细胞在裸鼠体内生存、分布,并且细胞表达人alb,细胞体积较裸鼠肝脏细胞大,形态不均一,与人肝脏细胞形态有差异.同时研究发现hADSCs可改善急性肝损伤裸鼠肝功能,降低转氨酶.结论 人脂肪间充质干细胞可在体内外向肝样细胞分化,分化的细胞具有肝细胞样生物学性状.hADSCs对裸鼠急性肝损伤具有一定的治疗作用.

Abstract：

Objective To isolate and culture human adipose derived mesenchynal stem cells (hADSCs) and study the potential of hADSCs to differentiate into hepatocyte-like cells. Methods To ensure the removal of contaminating hematopoietic cells, hADSCs were selected based on plastic adherence. Cell surface antigen was confirmed by flow cytometry; ultramicrostructure was detected by transmission electron microscopy; adipogenic and osteogenic differentiation of hADSCs was analyzed by oil Red O staining and yon Kossa staining. hADSCs were exposed to differentiation medium containing EGF,FGF,OSM, HGF,TSA in vitro. 10% CCl4 (100 μ1/20 g body weight )was injected into immune-deficient BALB/c-nu mice and hADSCs (5 × 105 cells) were simultaneously administrated from the tail vein. Blood samples were collected and concentration of aminotransferase and direct bilirubin were detected. Administration without hADSCs was used as a control. One month later, we sacrificed the mice and liver sections were examined by histochemical immunofluorescence with human ALB specific antibodies. Results hADSCs exhibited fibroblast-like morphology, and expressed CD73, CD90,CD105, and were lacking of CD34 and CD45. Adipogenic and osteogenic differentiation showed that hADSCs have the capacity of multidifferentiation. The differentiated cells showed hepatocyte-like cell morphologies and hepatocyte-specific markers including albumin (alb) and α-fetoprotein (AFP). The bioactivity assays revealed that these hepatocyte-like cells could uptake low-density lipoprotein (LDL).Histochemical immunofluorescence showed that hADSCs were incorporated into injured livers. Some human alb-positive cells were found in liver sections after implantation of undifferentiated hADSCs. Transaminase activity in the experimental group was lower than in the control group. Conclution hADSCs can differentiated into functional hepatocyte-like cells and can relieve CCl4 induced BALB/c-nu acute liver injury.     

老年大鼠阴茎海绵体中P-Erk1/2和P-Akt1激酶的表达

目的:一氧化氮(NO)是阴茎勃起的关键因子,其生成主要由一氧化氮合酶(NOS)调节,而磷酸化Erk1/2(P-Erk1/2)和磷酸化Akt1(P-Akt1)均能调节一氧化氮合酶(NOS)的表达及活性从而影响阴茎勃起。本实验研究P-Erk1/2和P-Akt1激酶在老年大鼠阴茎海绵体中的表达,探讨其在老年大鼠勃起功能障碍(ED)发生中的可能作用。方法:A组(2月龄)和B组(18月龄)雄性SD大鼠各10只,测其血清睾酮(T),免疫组化和RT-PCR方法检测大鼠阴茎海绵体中P-Erk1/2和P-Akt1的表达水平。结果:血清T值在B组[(4.73±0.94)nmol/L]较A组[(9.57±1.57)nmol/L]显著下降(P<0.05)。P-Erk1、P-Erk2的mRNA和P-Erk1/2蛋白的相对表达量(积分光密度值IA)在B组(0.95±0.06、0.92±0.05、32.09±8.45)较A组(0.47±0.09、0.61±0.11、7.50±1.81)显著升高(P<0.05);P-Akt1的mRNA和P-Akt1蛋白的相对表达量在B组(0.94±0.05、10.93±3.06)与A组(0.97±0.04、11.67±5.61)无显著差异(P>0.05)。结论:P-Erk1/2的过表达可能是老年性ED发生的机制之一。     

Hint1基因抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性的实验研究

目的 探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞AP-1转录因子活性的影响.方法 分子克隆获得Hint1基因序列,构建pHA-Hint1重组融合基因表达载体.阳离子脂质体介导,pHA-Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞,RT-PCR和Western blot检测HepG2细胞中外源HA-Hint1表达.pHA-Hint1质粒、启动子荧光素酶报告质粒AP-1/Luc及巨细胞病毒-β-半乳糖酶报告质粒(β-gel)共转导HepG2细胞.36 h后测定荧光素酶活性及β-gel活性.结果 重组质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,获约100 bp特异条带,测序证实成功构建pHA-Hint1表达载体.pHA-Hint1及空载体pcDNA3/HA转导HepG2细胞,半定量RT-PCR结果显示pHA-Hint1组Hint1mRNA表达高于空载体组(t=3.89,P<0.05);Western blot结果显示pHA-Hint1组HA标签蛋白表达高于空载体组(t=3.12,P<0.05).AP-1转录因子活性检测结果:pHA-Hint1终浓度为0 μg/ml,0.5 μg/ml,1.0 μg/ml,1.5 μg/ml,2.0 μg/ml时,AP-1转录因子相对活性(106)为:5.12±0025、4.24±0.74、3.43±0.31、2.62±0.48、2.09±0.21.随着pHA-Hint1浓度增加,荧光素酶活性呈明显下降,当pHA-Hint1浓度达到1.5 μg及2.0 μg时,差异有统计学意义(F=72.009,P<0.05).结论 过表达Hint1基因可抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性.     

营养剥夺诱导髓核细胞Bcl-2/腺病毒干扰蛋白3表达及线粒体转位的实验研究

目的通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测Bcl-2/腺病毒干扰蛋白3（Bcl-2/adenovirusE1B 19-kDa-interacting protein 3,BNIP3）表达及线粒体转位情况,为进一步探索髓核细胞退变死亡机制提供实验依据。方法成年清洁级SD大鼠2只,雌雄不限,体重150～200 g。体外分离获取鼠尾椎问盘髓核细胞,将传代后细胞分别置入正常环境（对照组:L-DMEM培养基、10%FBS、21%O₂）和营养剥夺环境（实验组:DMEM无糖无血清培养基、1%O₂）培养24、48、72 h后,实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色及Western blot检测BNIP3基因及蛋白表达,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位。结果实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色及Western blot检测显示对照组细胞低表达BNIP3;实验组随培养时间延长,BNIP3表达呈上升趋势,且BNIP3与线粒体相结合;除培养后24 h实验组BNIP3基因表达与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）外,其余各时间点实验组BNIP3基因及蛋白表达与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测显示,对照组细胞凋亡率较低,且细胞保持较高的线粒体膜电位;而实验组随培养时间延长细胞凋亡率增加、线粒体膜电位降低,与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论营养剥夺可能通过诱导BNIP3表达增加并结合线粒体导致线粒体功能障碍,最终导致髓核细胞死亡。     

B7-H1及其受体PD-1在膀胱癌患者外周血免疫细胞中的表达及其临床意义

目的：研究膀胱癌患者外周血中树突状细胞（dendritic cells,DCs）表面B7-H1和CD8＋T淋巴细胞表面PD-1的表达情况及其临床意义。方法：分离30例膀胱癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,联合培养后采用流式细胞术检测DCs表面B7-HI及CD8＋,T细胞表面PD-1的表达情况。结果：膀胱癌患者外周血DCs表面B7-H1表达水平及CD8＋T细胞表面PD-1表达水平均明显高于正常人,差异具有显著统计学意义（P〈0．01）,并且二者的表达水平随着病理分级和临床分期的增加均升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：在膀胱癌发生发展过程中存在着DCs表面B7-H1和CD8＋T细胞表面PD-1分子表达的上调,B7-H1／PD-1信号通路可能在T细胞免疫应答的初始阶段亦参与了膀胱癌免疫逃逸的发生。