富集低丰度蛋白的人类精子全蛋白二维电泳整合图的建立

目的:运用二维电泳(2-DE)技术分离人类正常精子低丰度蛋白并建立全精子蛋白的2-DE整合图。方法:30例精子标本混匀后一次性进行蛋白提取,分别使用0.8、0.6、0.5、0.3 mg的蛋白上样量进行2-DE。运用MALD I-TOF法对确定2个恒定蛋白点的等位点(PI)和相对分子质量(Mr)作为图像的内参照点,对不同上样量的2-DE图进行比较分析,最后合成1张富集低丰度蛋白的整合图。结果:在0.5 mg图中分离出(1 080±23)个蛋白点,并合成具889个匹配点的整合图A。在上样量为0.8、0.6及0.3 mg的2-DE图中,分别新检测到381、50、32个在0.5 mg图中未检测到的蛋白点。最后合成具1 352个蛋白点的整合图B。结论:通过改变上样量的方法促进低丰度蛋白分离并合成具1 352个蛋白点富集低丰度蛋白的2-DE整合图。     

层黏素受体下调对蛋白水解酶MMP-2、MMP-9、u-PA蛋白表达的影响

目的研究层黏素受体(LNR)反义硫代磷酸寡核苷酸片段(AsODN)对人胆管癌QBC939细胞基质蛋白水解酶-2(MMP-2)、基质蛋白水解酶-9(MMP-9)以及尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激酶(u-PA)蛋白表达的影响。方法应用Western blotting分析浓度12μmol/L的LNR AsODN作用48h后,QBC939细胞MMP-2、MMP-9以及u-PA蛋白表达水平。结果LNR AsODN能明显抑制人胆管癌细胞表达MMP-2、MMP-9以及u-PA,与对照组相比,MMP-2、MMP-9、u-PA蛋白表达下降分别为21.8%、16.5%和9.0%(P<0.05)。结论胆管癌细胞QBC939蛋白水解酶MMP-2、MMP-9以及u-PA基因表达水平与层黏素受体的表达水平明显相关,LNR AsODN表达能够使胆管癌细胞蛋白水解酶基因表达下降,提示层黏素受体在介导胆管癌转移中发挥重要作用。     

大鼠睾丸间质tau蛋白和微管结合蛋白表达的变化

目的 :检查老龄和青年大鼠睾丸间质组织中tau蛋白和微管结合蛋白的表达情况 ,籍此评价老龄大鼠睾丸衰退的发生机制。　方法 :应用二步法免疫组化技术检查 6月龄SD雄性大鼠 (10只 ,青年组 )和 2 8月龄同品系大鼠 (10只 ,老龄组 )睾丸组织抗Tau蛋白和抗微管结合蛋白的抗体免疫反应情况。　结果 :老龄大鼠睾丸间质组织中tau蛋白免疫反应阳性细胞数明显高于青年组 (P <0 .0 0 1) ,而青年组大鼠睾丸间质组织中微管结合蛋白免疫反应阳性细胞数明显高于老龄组 (P <0 .0 1)。　结论 :tau蛋白和微管结合蛋白免疫反应阳性细胞数量的变化可能与睾丸衰退有密切关系     

KLF6蛋白在散发性结直肠癌组织中的表达及其与p21蛋白的关系

目的 分析Krupple样转录因子6(KLF6)蛋白在结直肠癌中的表达及其与p21蛋白的关系,探讨KLF6蛋白及p21蛋白在结直肠癌中发生发展中的作用.方法 应用免疫组织化学SP法检测KLF6蛋白及p21蛋白在结直肠癌、结直肠腺瘤及正常结直肠组织中的表达,分析KLF6蛋白及p21蛋白与结直肠癌各种临床病理参数的关系,探讨结直肠癌中KLF6与p21蛋白表达的关系.结果 KLF6蛋白及p21蛋白在正常结直肠组织、结直肠腺瘤到结直肠癌组织中表达逐渐下调(85.7%、76.5%、43.6%),三者比较差异有统计学意义(x2=25.20,P＜0.01);KLF6蛋白表达水平与组织学类型无关(x2=0.13,P＞0.05),与分化程度(x2=4.04)、淋巴结转移(x2=6.79)、TNM分期(x2=6.16)有关(P＜0.05).KLF6与p21蛋白在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.74,P＜0.05).结论 KLF6表达下降,可能参与了结直肠癌的发生发展;KLF6基因可能是结直肠癌的一个重要抑癌基因并参与结直肠癌细胞凋亡的凋节.KLF6与p21蛋白表达呈正相关,p21可能是KLF6基因的效应蛋白.     

肾脏水通道蛋白2基因和蛋白表达的调节及影响因素

水通道蛋白2(AQP2)属于膜整合蛋白,在肾脏内髓部集合管分布较多,主要受抗利尿激素(AVP)调节,是调节体内水代谢平衡的重要物质基础.近年研究表明除受抗利尿激素调节外还受渗透压、酸碱度、肾上腺皮质激素、药物、饮食、神经系统等因素影响.本文就影响水通道蛋白2基因和蛋白水平表达的因素作一综述.     

细胞S期激酶相关蛋白2、p16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 观察细胞s期激酶相关蛋白2(SKP2)、p16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,探讨它们之间的关系及其临床意义.方法 利用组织芯片和免疫组织化学技术检测SKP2、p16蛋白在89例非小细胞肺癌,10例肺良性病变组织中的表达.结果 NSCLC组织中SKP2、p16蛋白表达阳性率分别为(23.52±13.57)%、(44.72±15.97)%,均与肺良性病变组织差异有统计学意义(2.91±1.27)%、(91.13±6.57)%(P＜0.01).SKP2蛋白在NSCLC组织中的表达水平与细胞分化程度,病理类型,TNM分期密切相关(P＜0.01),而与淋巴结转移差异无统计学意义(P＞0.05).p16蛋白在NSCLC组织中的表达水平与细胞分化程度,病理类型,TNM分期,淋巴结转移密切相关(P＜0.01).NSCLC组织中SKP2、p16蛋白表达呈负相关(r=-0.309,P＜0.01).NSCLC组织中SKP2蛋白表达率与患者生存时间呈负相关(r=-0.241,P＜0.01),p16蛋白表达率与患者生存时间呈负正相关(r=0.144,P＜0.01).结论 SKP2蛋白表达增高与p16蛋白表达降低共同在NSCLC的发生发展中起促进作用,且它们对NSCLC患者的预后也有相反的影响.     

二甲基甲酰胺对胶质瘤C-myc蛋白表达的影响

目的　观察胶质瘤荷瘤大鼠在二甲基甲酰胺 (DMF)诱导分化治疗过程中C myc蛋白表达 ,并探讨其意义。方法　实验组Wistar荷瘤大鼠给予每天 2次腹腔注射DMF 5 70mg/kg体重 ,共 2周 ;对照组给予盐水注射。计数荷瘤大鼠生存时间。免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶染色及计算机图像分析检测大鼠肿瘤组织C myc蛋白表达。 结果　实验组生存时间(3 6.3± 2 .7)d较对照组 (2 8.0± 2 .4)d明显延长 (P <0 .0 1)。大鼠C myc蛋白阳性表达平均百分率 ,对照组为 (77.62± 12 .11) % ;实验组肿瘤周边为 (2 3 .80± 13 .83 ) %、肿瘤中心为 (4 4 .0 2±2 1.5 8) % ;肿瘤周边与中心比较、肿瘤周边及中心分别与对照组比较 ,差异均有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论　DMF诱导胶质瘤凋亡的机制与抑制肿瘤细胞C myc蛋白表达有关     

细胞周期蛋白A与p16蛋白在肝细胞癌发生中的协同作用

目的 探讨细胞周期蛋白A(Cyelin A)与p16蛋白在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达、相互关系及其临床意义.方法 以Western blot检测35例肝细胞肝癌及相应的非癌组织中Cychn A与p16蛋白的表达;免疫组织化学检测Cyclin A的表达.结果 35例HCC中2l例(60.0%)有Cyclin A的过表达,22例(62.9%)出现p16蛋白表达缺失,Cyclin A蛋白过表达标本中19例(90.5%)存在p16蛋白表达缺失,无Cyclin A蛋白过表达的14例标本中3例(21.4%)出现p16蛋白表达缺失,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 肝细胞癌中存在Cyclin A蛋白过表达及p16蛋白表达缺失,两者引起肝细胞周期失控并可能相互加强促进.     

聚糖蛋白抗体的制备及其在肝癌组织及细胞系蛋白表达检测中的应用

目的制备聚糖蛋白3(glypican-3,GPC3)抗体并应用其对肝癌组织及细胞系中GPC3蛋白表达进行研究,探讨GPC3蛋白作为肝癌潜在的新的肿瘤标志物的可能性。方法利用原核表达系统诱导表达了GPC3抗原并制备了特异性好的兔抗GPC3多克隆抗体,应用该纯化的抗体对40例组织(正常肝7例,肝细胞型肝癌26例,胆管细胞型肝癌7例)及4个细胞系(肝癌细胞系HepG2、HuH-7、Hep3B,非肝癌细胞系Hela)进行了蛋白印记杂交试验。结果Western blot结果显示,肝癌组织及肝癌细胞系HepG2、HuH-7、Hep3B细胞系中有相对相对分子质量约70000的蛋白主带,与GPC3的核心蛋白带相对分子质量大小相一致;正常肝组织不表达GPC3蛋白,肝细胞型肝癌中癌组织(HCC)及癌旁组织表达GPC3蛋白的比例分别为84.6%(22/26)及30.8%(8/26),7例胆管细胞型肝癌(ICC)中有2例癌组织及其旁组织表达GPC3。结论GPC3蛋白广泛存在于肝癌组织中,很可能成为一种新的肝癌肿瘤标志物。     

前列腺癌PTEN蛋白表达和微血管密度的相关性研究

目的　研究前列腺癌组织中PTEN蛋白的表达和微血管密度(MVD)的相关性及其意义。方法　应用免疫组化SP法检测3 2例前列腺癌及5例良性前列腺增生组织中PTEN蛋白表达及微血管计数,分析其意义和相关性。结果　3 2例前列腺癌中8例PTEN蛋白表达阳性(2 5 % ,8/3 2 ) ,并随病理分级升高阳性表达率下降,高分化组同中分化组间差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,但高分化、中分化组同低分化组之间差异有显著性(P <0 .0 5 ) ,且在浸润型肿瘤(C D)期与局限性肿瘤(A B)期的差异有显著性(P <0 .0 1)。前列腺癌组织中MVD(5 2 .86±17.87) ,MVD随病理分级和临床分期的升高而升高,并同PTEN蛋白的表达成负相关(r =-0 .65 3 ,P <0 .0 1)。结论　PTEN蛋白低表达和微血管的形成在前列腺癌的发生、发展中起重要作用。检测PTEN蛋白的表达和MVD有助于判断病情及预后。PTEN蛋白的低表达与肿瘤微血管的形成相关。     

护理人员护患沟通能力培训及其态度、行为状况的调查

目的了解护理人员护患沟通能力培训及其态度、行为状况,为有效促进临床护患沟通提供参考。方法随机抽取湖北省6所三级甲等医院护士445人,采用自设问卷对其进行护患沟通能力培训及其态度、行为的调查。结果 87.19%的护士接受过护患沟通培训,49.23%上次培训时间在1年内,接受培训的方式以专题讲座(60.57%)为主。88.09%的护士认为护患沟通很重要,96.42%的护士乐于与患者沟通,但仍有25.85%的护士认为有效、融洽的护患沟通比较困难。认为影响沟通的原因是太忙(81.35%),66.07%的护士认为沟通不良是投诉主要原因。沟通途径以口头为主(95.28%),62.25%的护士每天沟通在5次以下,94.16%的护士在白班时间沟通。结论护士接受护患沟通知识培训率偏低,培训方式单一,且培训频率较低;护士有良好的护患沟通意识。为提高护患沟通的有效性,应加强护士沟通技能培训,使之端正沟通态度,将意识付诸行动,注重沟通技巧,综合掌握灵活运用,提高护患沟通效果。     

甲状腺素及促甲状腺素对骨转换作用机制的研究进展

甲状腺功能亢进症是引起继发性骨质疏松症的危险因素。目前关于甲亢导致的骨质疏松机制还不完全明了,但过量甲状腺素会对骨转换产生影响,促甲状腺素水平的降低可能也参与其中。本文综述甲状腺素、促甲状腺素对骨转换作用机制的研究,为以后甲亢性骨质疏松病因机制研究提供新思路。     

Nitroprusside- and nitroglycerin-induced hypotension: Effects on hemodynamics and on the microcirculation

After a short summary of the effects and metabolism of sodium nitroprusside (SNP) and nitroglycerin (NTG), the influence of induced hypotension on hemodynamics and on the microcirculation is investigated. The continuous registration of the local tissue pO₂ in skeletal muscle, myocardium, and liver with the multiwire surface electrode provides the opportunity to recognize immediately a change in the microcirculatory bed. This new method shows in animal experiments that the local oxygen supply during SNP-induced hypotension is dramatically reduced, while the arterial pO₂ remains in a normal range. These changes are not found during NTG-induced hypotension. Electron microscopic examination of various organs, and especially of the myocardium, shows that the alterations of the oxygen supply found after application of SNP were connected with changes in the ultrastructure.

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Résumé Après un bref résumé sur les effets et le métabolisme du sodium-nitroprusside (SNP) et de la nitroglycérine (NTG), l'influence de l'hypotension provoquée sur les hemodynamiques et sur la microcirculation est examinée en détail. L'enregis-trement continu du PO2 du tissu local dans les muscles squelettiques, le myocarde et le foie au moyen de l'électrode de surface à multiples fils métalliques donne l'occasion de reconnaître immédiatement un changement dans la couche microcirculaire. Cette nouvelle méthode montre que, dans les expériences pratiquées sur les animaux, l'approvisionnement local en oxygène pendant l'hypotension provoquée par le SNP est considérablement réduit tandis que le PO2 artériel demeure dans une zone normale. Ces changements ne sont pas présents dans l'hypotension provoquée par la nitroglycerine. L'examen de divers organes (et particulièrement du myocarde) à l'électron microscopique révèle que la modification de l'approvisionnement en oxygène constaté après l'application du SNP était liée à des changements dans l'ultrastructure.

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Supported by a grant from the Ministerium für Wissenschaft und Forschung des Landes Nordrhein-Westfalen.     

Effect of duodenal osmolality on gastrin and secretin release and on gastric and pancreatic secretion

We have measured the osmolality of duodenal contents in 9 dogs after a hypertonic meal, given either by mouth or directly into the stomach or perfused into the duodenum. A test meal of 2,475 mosm/kg, given by mouth, raised the intraduodenal osmolality to 700–1,500 mosm/kg over a 1-hour period. Hypertonic glucose solutions (2,000 and 3,400 mosm/kg), given into the stomach, were found to be diluted to about 700 and 1,100 mosm/kg, respectively, at the level of the mid-duodenum 30 minutes later. Hypertonic saline solutions (1,800 and 2,700 mosm/kg), perfused into the duodenum, created a stable intraluminal osmolality of 800 and 1,200 mosm/kg, respectively, (about 45% that of the perfusate) after 30 minutes. In 6 Heidenhain pouch dogs, gastric secretion and gastrin release stimulated by food were significantly diminished by administration of hypertonic sodium chloride solution (1,800 mosm/kg) into the duodenum. This hyperosmolality caused greater suppression of acid secretion (52%) than of gastrin release (28%). Stimulation of pancreatic water and bicarbonate secretion and of release of radioimmunoassayable secretin by intraduodenal HCl (pH 1.3) were significantly suppressed when the osmolality of the HCl solution was raised to 2,700 mosm/kg. Pancreatic protein secretion remained unchanged with hypertonic solutions. We have confirmed that stimulation of intraduodenal osmoreceptors inhibits gastric acid secretion in dogs, and we suggest that this is due, at least in part, to a suppression of gastrin release. We further suggest that duodenal osmolar inhibition of pancreatic secretion involves suppression of secretin but does not appear to involve cholecystokinin.

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Résumé Nous avons mesuré l'osmolalité du contenu duodénal chez 9 chiens après un repas hypertonique administré soit per os, soit directement dans l'estomac, soit par perfusion dans le duodénum. Un repas à 2,475 mosm/kg, administré per os, élève l'osmolalité duodénale à 700–1,500 mosm/kg pendant une heure. Des solutions de glucose hypertonique à 2,000 et 3,400 mosm/kg, introduites directement dans l'estomac, sont, 30 minutes plus tard, diluées à 700 et 1,100 mosm/kg au niveau de la partie moyenne du duodénum. Des solutions salines hypertoniques à 1,800 et 2,700 mosm/kg, en perfusion intraduodénale, donnent, après 30 minutes, une osmolalité duodénale de 800 et 1,200 mosm/kg (±45% de la solution perfusée).Chez 6 chiens à poche de Heidenhain, la sécrétion gastrique et la libération de gastrine provoquées par un repas sont réduites de façon significative par la perfusion intraduodénale de chlorure de sodium en solution hypertonique (1,800 mosm/ kg). Cette hyperosmolalité réduit plus la sécrétion d'acide (52%) que la libération de gastrine (28%). La perfusion dans le duodénum d'une solution d'HCl (pH 1.3), dont l'osmolalité est portée à 2,700 mosm/kg, diminue la stimulation des sécrétions d'eau et de bicarbonate pancéatiques et la libération de sécrétine mesurable par radio-immunoessai. La sécrétion pancréatique de protéines n'est pas modifiée par les solutions hypertoniques. Nous avons done confirmé l'inhibition de la sécrétion gastrique d'acide chez le chien par stimulation des osmorécepteurs duodénaux; nous pensons que cette inhibition est due, en partie en tous cas, à la suppression de la libération de gastrine. Nous estimons de plus que l'inhibition de la sécrétion pancréatique par l'hyperosmolalité duodénale résulte d'une suppression de la libération de sécrétine, mais est sans effet sur la libération de cholécystokinine.

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Supported by grants from the National Institutes of Health (AM 15241) and the John A. Hartford Foundation, Inc.

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An abstracted preliminary report of a portion of this work has appeared (Physiologist 20:93, 1977).

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Recipient of a grant from the Deutsche Forschungsgemeinschaft (Te 79/1).     

间充质干细胞归巢及其在骨科疾病中的研究

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是近些年在骨科研究领域中治疗各种疾病很有吸引力和潜力的种子细胞。因MSCs具有向成骨细胞分化的特性,且前的研究主要集中在MSCs的成骨分化。随着研究的深入,逐渐发现MSCs归巢在骨形成和骨科疾病治疗中也起到重要作用。MSCs归巢是指MSCs离开原有的微环境(主要是骨髓)进入外周血循环,并迁出外周血管至组织损伤处的过程。MSCs归巢是骨形成的前提条件,只有MSCs首先归巢至损伤处后,进而分化为成骨细胞,才能参与骨组织的修复。促进MSCs归巢在骨质疏松症、骨折、骨缺损及颗粒磨损性骨溶解等骨科疾病治疗中已起到积极的作用。因此,进一步研究MSCs归巢将对治疗骨科疾病提供新的思路。     

手法松解结合针刺治疗膝骨关节炎临床效果及作用机制

目的探讨手法松解结合针刺对膝骨关节炎的临床效果及作用机制。 方法选取广州医科大学附属第一医院针灸门诊确诊为膝骨关节炎患者60例分为：手法松解结合针刺、机械推拿结合针刺、常规推拿结合针刺3组,分别对3组患者进行治疗,并在治疗前后行关节功能评定,关节超声及关节X线检测。另设健康对照组20例,研究结束后对收集的数据行方差分析及配对样本t检验。 结果3组患者治疗前后膝骨关节炎指数量表评分比较差异有统计学意义(t ＝8.382、5.681、5.335,均为P<0.01),胫股内侧间隙手法松解组治疗后与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05);髌骨外上缘至股外上髁距离手法松解组治疗前与对照组比较有统计学意义(t ＝－0.433,P<0.05),3组治疗组治疗后与对照组比较有统计学意义(F＝4.395,P<0.05);治疗前后3组股四头肌肌腱弹性与健康对照组比较(治疗前F＝5.363,P<0.01;治疗后F＝5.250,P<0.01)及髌腱弹性与健康对照组比较减小(治疗前F＝17.068,P<0.01;治疗后F＝15.064,P<0.01)。 结论手法松解结合针刺治疗方法能够对膝骨关节炎患者关节内结构、关节周围肌群力学产生作用以及能促进膝骨关节炎症状改善及生活质量提高。     

氯胺酮对发育早期小鼠学习记忆及脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察氯胺酮对发育早期小鼠学习记忆能力及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法取14日龄昆明小鼠50只随机均分为五组:腹腔注射氯胺酮25mg/kg(K1组)、50mg/kg(K2组)、100mg/kg(K3组);生理盐水组(N组),腹腔注射等容生理盐水,每日1次,连续7d;正常对照组(C组)不注射任何药物。在实验第8、9天用跳台法测定小鼠的学习记忆能力,测定结束后取海马测定BDNF的表达。结果与C组比较,K1组学习潜伏期延长、错误次数增加(P<0.05),N组错误次数增加(P<0.01),BDNF的表达减少(P<0.05)。结论反复腹腔注射氯胺酮有可能损害发育早期小鼠的学习记忆能力,BDNF表达的减少有可能是其介导因素。