SIX4和miR-103a-3p在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探究SIX同源盒蛋白4(SIX4)、微小RNA(miR)-103a-3p在胆囊癌组织中的表达情况,以及二者对胆囊癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 胆囊癌组织及癌旁组织取自永州市中心医院2019年10月至2021年9月32例接受手术治疗的胆囊癌患者,并将体外培养的胆囊癌细胞系GBC-SD分为对照组、mimic NC组、miR-103a-3p mimic组、miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组、miR-103a-3p mimic+SIX4组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SIX4 mRNA、miR-103a-3p水平;蛋白印迹法检测SIX4、增殖细胞核相关抗原Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)以及基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况。双荧光素酶验证SIX4 mRNA 3’UTR与miR-103a-3p的结合作用。结果 与癌旁组织相比,胆囊癌组织中SIX4 mRNA水平升高,miR-103a-3p水平降低(P<0.05)。miR-103a-3p靶向负调控SIX4。与对照组、mi...     

miR-195-3p在肾癌中的表达及其临床意义研究

目的 研究miR-195-3p在肾癌与癌旁组织及肾癌细胞与正常细胞系中的表达差异,分析差异表达与患者临床病理特征间的关系,探究其临床意义. 方法 提取27例配对标本(组织及细胞系)的总RNA,经过逆转录、实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测标本中miR-195-3p标本中的表达量,统计分析miR-195-3p在不同组织、细胞系间的表达差异及其与临床病理特征间的相关性.通过转染上调和下调miR-195-3p,并进行细胞增殖实验(MTT),评估miR-195-3p对肾癌细胞增殖的影响. 结果 miR-195-3p在肾癌组织(18例,66.67％)及肾癌细胞系中的表达较癌旁组织及正常细胞系明显上调(P＜0.05),miR-195-3p在肾癌中的表达量与患者的年龄、性别、癌组织类型、TNM分期、AJCC分期无明显相关性(P＞0.05).miR-195-3p在肾癌细胞系(ACHN、786-O)表达上调后促进肾癌细胞增殖,表达下调后抑制肾癌细胞增殖. 结论 miR-195-3p在肾癌组织中明显升高,并且促进肾癌细胞增殖,提示其可能与肾癌的发生发展有一定关系.     

miR-520a-3p对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨miR-520a-3p在肾癌细胞系中的表达水平及其对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-520a-3p在正常肾小管上皮细胞HK2和肾癌细胞系786-O、A498、OS-RC-2及ACHN中的表达水平.选取miR-520a-3p表达水平最低的肾癌细胞系786-O...     

miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达状况,以及miR-338-5p过表达对结肠癌细胞系HCT116和SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法使用实时定量PCR方法检测miR-338-5p在40例临床诊断为结直肠癌患者配对癌组织及癌旁组织中的表达情况。随后使用miR-338-5p-mimics转染结肠癌细胞系HCT116和SW620,确认过表达成功后,分别使用CCK-8法、FITC-AnnexinV．PI法及Propidiumiodide法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期的改变。结果①miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于其在相应的癌旁组织中的表达（P〈0．01）。②与转染阴性对照比较,转染miR-338．5p．mimics后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显减弱（P〈0．01）,凋亡率明显增加[HCT116细胞：（11．43±0．67）％比（7．98±0．36）％,P〈0．01;SW620细胞：（10．5±0．2）％比（7．93±0．5）％,P〈0．01],诱导HCT116和SW620细胞G1期阻滞[HCT116细胞：（80．41±1.34）％比（64．87±1．83）％,P〈0．01;SW620细胞：（68．76±0．41）％比（54．89±0．78）％,P〈0．01]。结论miR-338-5p可能作为抑癌基因在结直肠癌中发挥作用,并对细胞增殖、凋亡和周期有显著影响。     

miR-4783-3p在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究miR-4783-3p在肝癌组织中的表达及对肝癌Huh-7细胞增殖及迁移产生的影响。方法采用cBioPortal数据库分析肝癌组织和癌旁组织中miR-4783-3p的表达, 严格按照Lipofectamine? 2000转染试剂盒说明书, 分别将miR-4783-3p过表达模拟物或过表达对照模拟物转染至Huh-7细胞, 即过表达组和对照组。通过CCK-8实验分析Huh-7细胞增殖情况, 细胞划痕法分析Huh-7细胞迁移情况。双荧光素酶报告基因法检测miR-4783-3p与胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)mRNA的靶向关系。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测IGFBP2mRNA的表达。Western-blotting检测IGFBP2蛋白和EGFR-STAT3分子通路蛋白的表达。正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示, 组间比较采用t检验或单因素方差分析。结果肝癌组织中miR-4783-3p的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。与对照组比较, 过表达组Huh-7细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。对照组和过表达组中Huh-7细胞划痕愈合率...     

p27^kipl高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭转移的影响

目的探讨外源性人p27kip1的高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法利用携带人p27kip1基因的腺病毒(Ad-p27kip1)体外转染人前列腺癌PC-3细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测目的基因不同水平的表达,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测PC-3转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化.以Ad-X-gal病毒作为对照.结果 RT-PCR、Western印迹法检测转染Ad-p27kip1后PC-3细胞的p27kip1-mRNA(320bp)、p27蛋白(27×103)表达阳性,转染后对PC-3细胞的生长有抑制作用,出现明显的G0-G1期阻滞,早期细胞凋亡率有所增加,与对照组比较差异有显著性,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制.结论重组腺病毒介导的人p27kip1基因在体外对前列腺癌细胞系PC-3的细胞增殖和侵袭力有明显抑制作用,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具.     

lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响。方法：q RT-PCR方法测定肝癌组织及细胞内SCAMP1表达变化。肝癌SNU-449细胞分成Control组、si-NC组（转染si RNA control）、si-SCAMP1组（转染SCAMP1 si RNA）组,CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,克隆形成实验测定各组细胞克隆能力的变化,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平的变化。在线靶基因软件预测SCAMP1的靶基因可能是miR-197-3p,经双荧光素酶报告系统鉴定两者之间的靶向关系。在肝癌SNU-449细胞中分别把SCAMP1 siRNA、miR-197-3p inhibitor共转染,利用上述方法检测细胞增殖、克隆、侵袭、迁移能力。结果：肝癌组织中SCAMP1表达水平高于癌旁组织,肝癌细胞内SCAMP1表达水平高于正常肝细胞,差异均有统计学意义（P<0.05）。与Control组、si-NC组比较,si...     

miR-17-92基因簇对骨肉瘤细胞增殖侵袭的影响

[目的]探究miR-17-92基因簇对骨肉瘤（osteosarcoma, OS）细胞增殖、侵袭的影响及可能机制。[方法] qRTPCR检测OS细胞MG-63转染前（MG-63细胞）、人成骨细胞hFOB1.19 (hFOB细胞)中的miR-17-92基因簇水平。分别对MG-63细胞行miR-17-92基因簇模拟物组转染（miR-17-92组）与阴性对照转染（miR-NC组）,比较两组miR-17-92基因簇水平、细胞增殖水平及侵袭能力,及转染后MG-63细胞转化生长因子-β1 (transforming growth factor beta 1, TGF-β1)、Smad3、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）-2、MMP-9蛋白水平。[结果] MG-63细胞的miR-17 [(4.1±1.0) vs (1.2±0.3),P<0.05]、miR-18a [(2.3±0.5) vs (1.4±0.5), P<0.05]、miR-19a [(2.0±0.4) vs (1.3±0.4), P<0.05]、miR-19b [(2.1±0....     

miR-128-3p在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨微小RNA（miR）-128-3p在胃癌中的表达及其临床意义。方法:通过qRT-PCR检测2014年1月至2016年1月126例在河南省肿瘤医院手术切除的胃癌和癌旁组织中miR-128-3p表达水平,同时检测miR-128-3p在胃癌细胞系中表达情况,在AGS和BGC823细胞中转染miR-128-3p抑制剂...     

miRNA-6516-5p通过靶向ODC1调控肾癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨微小RNA(miRNA)-6516-5p在肾癌细胞系中的表达及调控肾癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞系和正常近端肾小管上皮细胞系中miR-6516-5p的表达。用脂质体法分别将miR-6516-5p模拟物和无意义序列(NC)瞬时转染至miR-6516-...     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

miR-542-3p对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及机制探讨

目的 探讨microRNA-542-3p(miR-542-3p)在人肝癌细胞系及组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响.方法 采用RT-PCR检测miR-542-3p在肝癌细胞系(HCCLM3、Hep3B、Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97L)以及人正常肝细胞LO2中的表达;...     

姜黄素调控miR-199a-3p基因抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨姜黄素调控miR-199a-3p的基因表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:将miR-199a-3p抑制物及阴性对照转染至C4-2细胞中,并分别标记为anti-miR-199a-3p组和anti-miR-con组;将仅加入脂质体的C4-2细胞标记为对照组。运用MTT法检测通过姜黄素(0、20...     

miR-299-3p通过调控PAX3基因表达介导乳腺癌细胞增殖和凋亡

目的:研究miR-299-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制.方法:以乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中miR-299-3p和PAX3 mRNA的表达,Western blot检测MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中PAX...     

miR-490-3p在胃癌中的表达及其临床价值

目的 探讨miR-490-3p表达水平与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测80例胃癌患者的癌组织与癌旁正常组织中miR-490-3p的相对表达量,分析其与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier曲线、Cox比例风险回归模型进行预后分析。结果 miR-490-3p在癌组织中的相对表达量为(0.652±0.072),低于癌旁正常组织中的(1.259±0.069),差异有统计学意义(t=40.528,P<0.05);miR-490-3p表达与浸润深度、淋巴结转移及TMN分期显著相关(P<0.05);miR-490-3p低表达和高表达患者无进展生存期差异有统计学意义(23个月vs 30个月,χ²=8.583,P=0.03);miR-490-3p、淋巴结转移及TNM分期是胃癌预后的独立影响因素(HR=2.396、0.472、0.230,均P<0.05)。结论 mi R-490-3p表达降低可促进胃癌的增殖、分化和迁移,可成为胃癌诊断和预后的潜在分子标志物。     

circSIPA1L1对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制研究

目的探讨环状RNA信号诱导增殖相关基因1(circSIPA1L1)对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及相关机制。方法该研究于2019年1—12月完成。采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测天津市第四中心医院55例肾癌患者肾癌、癌旁组织,以及正常肾细胞KiMA和肾癌细胞A498、OSRC2中circSIPA1L1、miR-22-3p的表达;采用脂质体法将circSIPA1L1干扰载体阴性对照(si-NC组)、circSIPA1L1干扰载体(si-circSIPA1L1组)、si-circSIPA1L1+miR-22-3p抑制载体质粒阴性对照(anti-miR-NC组)、si-circSIPA1L1+miR-22-3p抑制载体质粒(anti-miR-22-3p组)分别转染至A498、OSRC2细胞;双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系;克隆形成实验、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭。将稳定转染sh-circSIPA1L1和sh-NC的A498细胞按照2×10⁶个/0.2 ml接种于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,分别为sh-circSIPA1L1组和sh-NC组,行裸鼠成瘤实验检测肿瘤的形成能力。结果肾癌组织中circSIPA1L1表达量(3.89±1.35)高于癌旁组织(1.09±0.44),miR-22-3p表达量(0.44±0.19)低于癌旁组织(1.02±0.30),肾癌组织和癌旁组织中circSIPA1L1和miR-22-3p表达量的差异均有统计学意义(P<0.05)。肾癌细胞A498、OSRC2中circSIPA1L1的表达量(4.61±0.33、3.86±0.23)高于正常肾细胞KiMA细胞(1.00±0.13),miR-22-3p的表达量(0.34±0.05、0.40±0.04)低于KiMA细胞(1.00±0.08),差异均有统计学意义(P<0.05)。si-circSIPA1L1组A498、OSRC2细胞克隆数量[(130.67±15.04)、(99.00±14.80)个]低于si-NC组[(314.33±29.57)、(234.67±21.50)个];细胞迁移数量[(108.33±17.01)、(85.67±11.93)个]低于si-NC组[(265.00±20.00)、(210.33±18.58)个];细胞侵袭数量[(84.00±12.00)、(66.00±10.15)个]低于si-NC组[(210.33±18.58)、(173.00±17.52)个],差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示circSIPA1L1靶向负调控miR-22-3p表达。si-circSIPA1L1+anti-miR-22-3p组A498、OSRC2细胞克隆数量[(234.20±21.90)、(185.06±20.72)个]高于si-circSIPA1L1+anti-miR-NC组[(134.65±26.55)、(106.14±16.38)个];细胞迁移数量[(187.02±23.54)、(117.86±15.09)个]高于si-circSIPA1L1+anti-miR-NC组[(110.59±12.12)、(91.70±14.83)个];细胞侵袭数量[(168.23±11.69)、(103.70±9.23)个]高于si-circSIPA1L1+anti-miR-NC组[(90.46±11.53)、(61.35±9.10)个],差异均有统计学意义(P<0.05)。sh-NC组、sh-circSIPA1L1组第35天裸鼠肿瘤体积分别为(578.65±68.67)mm3和(242.56±42.35)mm3;裸鼠肿瘤重量分别为(0.68±0.06)g和(0.38±0.04)g,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论circSIPA1L1在肾癌组织中高表达,可促进癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长,其作用机制与直接靶向负调控miR-22-3p相关。     

miR-1303靶向抑制LPAR3对肾癌786-O细胞增殖和迁移的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA(miRNA)-1303通过靶向调控溶血磷脂酸受体3(LPAR3)的表达抑制肾癌786-O细胞增殖和迁移的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞株(A498、ACHN、786-O、OS-RC-2)及正常肾小管上皮细胞HK-2中miR-1303的相对表达量。将miR-1...     

miR-195-5p通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨miR-195-5p对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法通过转染miR-195-5p mimics或inhibitors分别过表达或抑制肾癌细胞中miR-195-5p的表达,转染靶向Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的小干扰RNA敲低肾癌细胞中ROCK1的表达量,利用细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测肾癌细胞的迁移和侵袭能力。通过双荧光素酶报告实验验证miR-195-5p对ROCK1的靶向调控作用,利用免疫印迹试验检测ROCK1及上皮-间质转化相关蛋白的表达水平。结果过表达miR-195-5p可显著抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化,而抑制miR-195-5p的表达可明显促进肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(P<0.05)。miR-195-5p可通过靶向ROCK1调控其在肾癌细胞中表达。敲低ROCK1后可部分抵消miR-195-5p inhibitors对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。结论miR-195-5p可通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化。