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相似文献
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1.
目的探讨通过体外模拟气腹环境,观察不同压力二氧化碳(CO2)和氦气(He)对胃癌细胞MKN-45迁移运动的影响。方法将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中,按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组,模拟气腹压力分别12mm Hg和15mm Hg,作用时间均为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值;用Transwell法观察细胞迁移运动变化。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈酸性,He组细胞培养液呈碱性。CO2组和He组在12mm Hg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无明显统计学(P〉0.05),CO2 15mm Hg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少(P〈0.01);He 15mm Hg组与对照组差异无明显统计学(P〉0.05)。结论在临床常用气腹压力下(12mm Hg)CO2对胃癌细胞迁移运动无明显影响。  相似文献   

2.
不同压力二氧化碳气腹对胃癌细胞增殖运动的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 通过体外模拟气腹环境,观察不同压力CO2对胃癌细胞MKN-45增殖、运动的影响.方法 将MKN-45细胞置于充满CO2的密闭培养箱中,按CO2压力不同分为对照组、0、5、10和15mm Hg组(1 mm Hg=0.133 kPa),作用时间均为4 h.用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪观察细胞周期变化;Transwell法观察细胞迁移运动变化.结果 0、5、10和15 mm Hg组细胞培养液在0 h呈酸性.MTF法检测细胞增殖发现0、5、10 mm Hg组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg组与对照组比较吸光度(OD)值在1~3 d差异无统计学意义(t=0.625,-0.537,0.137.P>0.05),在4~7 d差异有统计学意义(t=26.622,13.376,18.839,7.595,P<0.01).0、5、10mm Hg组细胞增殖指数和细胞穿过滤膜的数量与对照组比较差异无统计学意义(t=1.134,-0.538,-0.829:t=0.330,0.794,0.508,P>0.05),15 mm Hg组与对照组比较差异有统计学意义(t=11.225,8.775,P<0.01).结论 在15 mm Hg压力下,CO2对MKN-45细胞增殖、运动起抑制作用.  相似文献   

3.
目的通过体外模拟气腹环境,观察二氧化碳(CO2)和氦气(He)在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法实验分为对照组、CO2组和He组,其中CO2组和He组又按照压力不同分为0、5、10、15mmHg组(作用时间均为4h)。细胞在密闭培养箱内经不同压力CO2或He作用4h后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈弱酸性,He组细胞培养液呈弱碱性。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg组OD值与对照组比较无明显差异(P>0.05),15mmHg组OD值与对照组比较在前3天无明显差异(P>0.05),在4~7天OD值明显低于对照组(P<0.01)。而在He组,不同压力组细胞增殖活性与对照组比较无明显差异(P>0.05)。在CO2环境下,0、5mmHg组细胞凋亡指数与对照组比较无明显差异(P>0.05),而10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.01)。0、5mmHg组细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异(P>0.05...  相似文献   

4.
目的通过体外模拟气腹环境,观察CO2在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法以CO2为气体介质,在气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为0、5、10、15mmHg,作用时间为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;采用AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈酸性,但在恢复正常培养后6h即恢复正常。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg压力下处理组与对照组比较无明显差异(P>0.05),而在15mmHg压力下处理组与对照组比较OD490值在前3d无明显差异(P>0.05),在4~7dOD490值下降非常显著(P<0.01)。在CO2环境下,0mmHg组细胞凋亡指数和凋亡比例与对照组相比无明显差异(P>0.05),而5、10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.05)。结论在较低压力范围内(≤10mmHg)CO2对胃癌细胞增殖、凋亡影响不大,而在15mmHg压力下,CO2可抑制MKN-45细胞增殖,促进其凋亡。  相似文献   

5.
目的比较不同压力CO2气腹处理的人胃癌MKN-45细胞在裸鼠腹腔内的成瘤数量、重量及裸鼠生存时间,探讨CO2气腹对胃癌细胞侵袭转移能力的影响。方法实验分为4组(对照组和5、10、15mmHg CO2气腹组),即将胃癌细胞在5%CO2 37℃条件下或5、10、15mmHg100%CO2 37℃条件下培养4h,然后收集细胞并将2×10^5个细胞注射入裸鼠腹腔,建立胃癌腹腔转移动物模型。4周后处死裸鼠,观察其腹腔成瘤率、成瘤数量和重量以及裸鼠生存时间。结果各组裸鼠腹腔成瘤数量、肿瘤总重量和生存时间均无显著差异(P〉0.05)。结论在气腹压力≤15mmHg时CO2对胃癌MKN-45细胞在裸鼠腹腔内的种植转移无显著影响。  相似文献   

6.
不同压力CO_2气腹对人胃癌MKN-45细胞生长的影响   总被引:12,自引:0,他引:12  
目的研究体外模拟不同压力CO2气腹环境对人胃癌MKN-45细胞生长增殖能力的影响。方法实验组于体外建立模拟CO2气腹环境,全自动气腹机维持气腹压力分别为9、12、15mm Hg,作用时间均为4h,对照组直接放入37℃、5%CO2孵箱中培养。处理后第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h,用pH计检测细胞培养液pH值变化;第1、2、3、4、5、6、7天,MTT法检测细胞增殖情况。结果15mmHgCO2气腹处理后胃癌细胞增殖较对照组下降显著(P<0.05),但9、12mmHg组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。CO2气腹处理后细胞培养液pH值较对照组下降非常显著(P<0.01),但在恢复正常培养后最长3h即恢复正常。胃癌细胞增殖在第1天与不同压力CO2气腹处理后细胞培养液的即时pH值有显著相关性(P<0.05),而第2、3、4、5、6、7天均无相关性(P>0.05)。结论模拟9、12mmHgCO2气腹对胃癌MKN-45细胞增殖没有显著影响,模拟15mmHgCO气腹对胃癌MKN-45细胞增殖有显著的抑制作用。  相似文献   

7.
目的通过建立体外模拟CO2,气腹环境,研究CO2,气腹对人结肠癌SW480细胞生长的影响。方法建立体外模拟CO2,气腹环境,在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力分别为9、12、15mmHg,持续时间分别为1、2、4h。在处理后第12h通过流式细胞仪观察细胞周期变化;在处理后第12、24、36、48、60、72h用MTT法检测细胞增殖情况;在处理后0、0.5、1、1.5、2、2.5h通过电子pH计检测细胞培养液pH值的变化。结果流式细胞仪检测细胞周期结果显示,CO2,气腹组G02/G1期细胞比例与对照组差异无统计学意义(P〉0.05)。CO2,气腹压力对于人结肠癌G0/G1期细胞周期有显著影响(P=0.008),但对s期、G2/M期无影响(P〉0.05);CO,气腹持续作用时间对各细胞周期无影响(P〉0.05)。MTT法检测细胞增殖结果显示,各气腹组人结肠癌SW480细胞的D(490)值均低于对照组,且9mmHg一4h、12mmHg一4h、15mmHg一2h气腹组在处理后第24、36h,15mmHg一4h气腹组在处理后第24、36、48、60h的人结肠癌SW480细胞的JD(490)值与对照组差异具有统计学意义(P〈0.05)。压力处理后第24、36h对SW480细胞的增殖有显著的一过性影响(P〈0.01),而在第12、48、60、72h对SW480细胞的增殖无影响(P〉0.05);作用时间对SW480细胞的增殖无影响(P〉0.05)。电子pH计检测细胞培养液pH值结果显示,除9mmHg一1h气腹组在处理后2.5h细胞培养液的pH值与对照组无统计学差异外(P〉0.05),其余各气腹组在处理后0、0.5、1、1.5、2、2.5h与对照组差异有统计学意义(P〈0.05)。结论体外模拟CO,气腹环境,不会促进结肠癌细胞的增殖,且高CO,气腹压力对结肠癌细胞的增殖有一过性抑制作用,CO2:气腹持续时间对结肠癌细胞的增殖无影响。  相似文献   

8.
目的 通过将不同压力CO2气腹环境下培养的胃癌MKN-45细胞接种于裸鼠皮下,观察CO2气腹对胃癌细胞体内生长增殖的影响.方法 将胃癌MKN-45细胞置于0、10、12和15 mm Hg CO2气腹环境下培养4 h,然后取2×106个细胞接种于裸鼠皮下,3周后处死裸鼠,测量肿瘤的体积和重量,再对各组移植瘤行HE染色和Ki-67免疫组化染色.结果 0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤成瘤时间、肿瘤体积和重量(分别为7.8 d、7.2 d、7.8 d;1.2 cm3、1.3 cm3、1.3 cm3;1.5 g、1.9 g、1.6 g)与对照组(分别为7.3 d、1.2 cm3、1.4 g)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15mm Hg CO2气腹组移植瘤成瘤时间(12.5 d)与对照组比较显著延长,肿瘤体积(0.5 cm3)和重量(0.5 g)与对照组比较显著下降(P<0.05).0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤细胞内Ki-67抗原阳性率(61.2%、60.5%、63.4%)与对照组(59.6%)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg CO2气腹组的阳性率(27.5%)与对照组比较显著下降(P<0.01).结论 临床常用压力CO2气腹对胃癌MKN-45细胞体内生长增殖无显著影响.  相似文献   

9.
目的探讨腹腔镜手术CO2气腹对绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记活细胞血路肝迁徙的影响。方法将SD大鼠剖腹,经门静脉注入转染GFP的C57BL/6小鼠肝细胞(5×10^6 cells/只),立即关腹后随机分成4组(每组10只),快速建立大鼠体内CO2气腹模型,采用持续性不同强度的CO2气腹压力(0、5、10、15mmHg)进行处理。30min后处死动物取出肝脏,肝组织取样行快速冰冻切片检查,比较各组动物肝内荧光细胞的表达情况。结果各组GFP荧光细胞表达阳性率分别为:无气腹组8只,5mmHg气腹组9只,10mmHg气腹组9只和15mmHg气腹组10只,4组差异无统计学意义(x^2=2.222,P=0.528)。各组GFP荧光细胞数目分别为:无气腹组6.63±2.45、5mmHg组7.67±2.83、10mmHg组13.89±4.37和15mmHg组15.50±6.29,4组GFP荧光细胞数目有显著统计学差异(F=10.78,P=0.000);其中10mmHg和15mmHg气腹组GFP荧光细胞数目均明显高于无气腹气腹组和5mmHg气腹组,有显著统计学差异(P〈0.05)。结论腹腔镜手术CO2气腹能促进GFP标记活细胞经血路肝脏迁徙、积聚的发生,并且随着气腹压力的升高作用越明显。  相似文献   

10.
目的 通过体外模拟CO2气腹环境,构建沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的RNAi表达载体,探讨HIF-1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞MKN-45凋亡的影响及机制.方法 利用密闭培养箱模拟CO2气腹,气腹机维持培养箱内压力分别为0、5、10、15mm Hg.采用荧光定量RT-PCR方法和Western blot方法观察沉默HIF-1α前后MKN-45细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达的变化;免疫细胞化学技术观察沉默HIF-1α前后细胞bcl-2/bax表达的变化;Annexin V-FITC/PI双标染色、流式细胞仪检测沉默HIF-1α前后细胞凋亡比例的变化.结果 沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达(分别为1.51±0.04、4.44±0.30)均显著高于对照组(0.584±0.06、2.01±0.06)(P<0.01).沉默HIF-1α前15mmHg组细胞bcl-2/bax比值(0.77±0.05)较对照组(1.43±0.02)明显降低(P<0.05),细胞凋亡比例(11.60±2.11)较对照组(0.30±0.02)增加.而在沉默HI-1α后15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA(0.464±0.04)和蛋白表达(0.92±0.02)、bcl-2/bax比值(1.61±0.04)、细胞凋亡比例(0.4±0.03)与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在CO2气腹环境压力为0、5、10mm Hg CO2时MKN-45细胞凋亡比例与对照组比较无差异,压力为15mm Hg时CO2气腹可促进胃癌细胞凋亡.HIF-1α可能为促进细胞凋亡的原因之一.  相似文献   

11.
Hao YX  Yu PW  Zeng DZ  Zhao YL  Shi Y  Rao Y  Zhou LX 《中华外科杂志》2010,48(11):847-851
目的 通过体外模拟CO2气腹环境,构建沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的RNAi表达载体,探讨HIF-1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞MKN-45凋亡的影响及机制.方法 利用密闭培养箱模拟CO2气腹,气腹机维持培养箱内压力分别为0、5、10、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),采用RT-PCR方法和Western blot方法观察沉默HIF-1α前后MKN-45细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达变化.免疫组化技术观察沉默HIF-1α前后细胞bcl-2/bax表达变化.Annexin V-FITC/PI舣标染色、流式细胞仪检测沉默HIF-1α前后细胞凋亡比例变化.结果 沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达(1.48±0.22和1.34±0.09)以及10 nnn Hg组细胞蛋门表达(1.25±0.10)均显著高于对照组(0.55±0.17和0.83±0.04)(P<0.05).0、5、10 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和0、5 mm Hg蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞bcl-2/bax比值(0.78±0.05)较对照组(1.43±0.15)明显降低(P<0.05),细胞凋亡比例(11.70±0.12)较对照组(0.22±0.07)显著增加(P<0.01).而在沉默HIF-1α后15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA表达(0.52±0.11)和蛋白表达(0.92±0.02)、bcl-2/bax比值(1.57±0.04)、细胞凋亡比例(0.45±0.11)与对照组比较均无显著差异(P>0.05).结论 在CO2气腹环境压力为0、5、10 mmHg CO2时MKN-45细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异,压力为15 mm Hg时CO2气腹可促进胃癌细胞凋亡,HIF-1α可能为促进细胞凋亡的重要因子.  相似文献   

12.
目的 研究CO_2气腹对胃癌MKN-45细胞黏着斑激酶(FAK)的影响.方法 体外模拟不同压力CO_2气腹环境,实验组:人胃癌MKN-45细胞置于5、10、15 mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)CO_2气腹环境培养4 h.对照组:常规条件培养人胃癌MKN-45细胞.采用Western blot法检测各组细胞FAK及磷酸化FAK(FAK Tyr397)的表达量,且分别观察15 mm Hg CO_2作用0.5、2、4 h的情况.多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD法检验.结果 实验组5、10、15 mm Hg CO_2气腹环境下,FAK表达量分别为2.14±0.17、2.07±0.21、2.52±0.26;FAK Tyr397表达量分别为1.82±0.28、1.93±0.52、3.71±0.37;而对照组FAK表达量为2.43±0.46,FAK Tyr397表达量为1.71±0.23,两组比较差异有统计学意义(F=2.171,26.951,P<0.01).15 mm Hg CO_2作用0.5、2、4 h后,FAK Tyr397表达量分别为3.41±0.44、4.12±0.56、5.24±0.41,三者比较差异有统计学意义(F=116.119,P<0.01).脱离气腹后恢复至处理前水平(0.72±0.16).结论 不同压力CO_2气腹环境处理胃癌MKN-45细胞4 h不增加其FAK表达,但可使其磷酸化而激活,且压力越高,作用时间越长,磷酸化程度越高,但脱离气腹环境后,其活性迅速降至处理前水平.  相似文献   

13.
目的 探讨不同压强持续性CO2气腹环境对胃癌细胞黏附与侵袭转移的影响.方法 建立体外CO2气腹模型,选用3种不同分化程度的胃癌细胞株MKN-45(低分化腺癌细胞)、SGC-7901(中分化腺癌细胞)和MKN-28(高分化腺痛细胞),分别在9 mm Hg、15 mm Hg以及常规条件下(0 mm Hg,对照组)作用2 h和4 h后,用RT-PCR法、CytoMatrixTM细胞黏附试剂盒和ECMatrixTM细胞侵袭试剂盒检测黏附分子E钙黏蛋白(E-cadherin)和细胞间黏附分子1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)以及侵袭分子基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)的表达.将胃癌细胞注入裸鼠腹腔(2×106个细胞/只),每组10只.4周后每组取5只处死,记录腹腔成瘤情况,观察其余裸鼠的生存时间.结果 RT-PCR结果显示3种胃癌细胞株经CO2处理后,随着时程的延长及压强的升高,E-cadherin表达有下降的趋势(MKN-45:2.26→2.19、SGC-7901:2.16→2.09、MKN-28:2.06→1.99),而ICAM-1(MKN-45:2.20→2.28、SGC-7901:2.10→2.18、MKN-28:2.00→2.08)、MMP-2(MKN-45:2.05→2.13、SGC-7901:1.95→2.03、MKN-28:1.85→1.93)和VEGF-A(MKN-45:2.10→2.16、SGC-7901:2.00→2.06、MKN-28:1.90→1.96)则有升高的趋势,但是各实验组之间比较或实验组与对照组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05).黏附侵袭实验也得出类似的结果.裸鼠模型显示3种胃癌细胞株在不同CO2气腹环境及对照条件下,腹腔成瘤个数随着时程的延长及压强的升高而增加(MKN-45:22→23、SGC-7901:20→22、MKN-28:21→22),存活天数则减少(MKN-45:23→21、SGC-7901:22→21、MKN-28:22→21),但各组的腹腔成瘤个数和存活时间之间相比差异均尤统计学意义(P>0.05).结论 在不高于15 mm Hg 压强以及不超过4 h的情况下,不同压强与时程的CO2对3种胃癌细胞株的黏附和侵袭能力并无显著影响,且不增加肿瘤的转移风险.  相似文献   

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