CO2气腹对胰腺功能的影响及糖尿病患者的腹腔镜手术

本文综述CO2气腹对胰腺功能的影响、糖尿病患者腹腔镜手术后并发症以及腹腔镜手术在糖尿病患者中的应用。     

增强型绿色荧光蛋白转染活细胞效率的研究

目的 研究影响增强型绿色荧光蛋白(EGFP)逆转录病毒表达系统转染活细胞效率的主要相关参数,建立一种稳定高效的活细胞EGFP标记技术.方法 培养、扩增携带EGFP逆转录病毒载体的包装细胞PGl3,分别于12h、24h、36 h和48 h收集病毒液,转染骨髓基质细胞(BMSCs),通过流式细胞仪和荧光显微镜检测不同时间点病毒转染效率.选择转染率最高时间点的病毒液,连续转染BMSCs两次,小剂量嘌呤霉素筛选6h,观察病毒转染率及细胞活力.再以上述方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),观察这种方法标记其他干细胞或成熟分化细胞的可行性.结果 根据流式细胞仪及荧光显微镜观察结果,24h收集的病毒液转染BMSCs效率最高(64.56±2.53)％,36 h次之(56.98±3.22)％,12 h(47.39+1.82)％与48 h(37.84±1.77)％相对较低.连续转染两次并经短暂筛选后,BMSCs转染率可达80％以上,且细胞活力不受影响.采用相同方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),转染率均能达到80％,且细胞形态、增殖能力均未见明显改变.结论 本实验建立了一种稳定高效的活细胞EGFP转染技术,为研究组织工程种子细胞的体内、外转归及细胞间相互作用提供了稳定且直观的检测手段.     

绿色荧光蛋白标记神经干细胞的体外研究

目的　构建携带绿色荧光蛋白 (GFP)基因的逆转录病毒载体pLNCX2 GFP ,用GFP对神经干细胞进行标记示踪。方法　应用基因克隆的方法 ,制备 pLNCX2 GFP ,借助阳离子脂质体转染包装细胞PA3 17,G418筛选阳性克隆 ,获取病毒上清 ;从胚胎大鼠脑中解剖分离和培养神经干细胞 ,用病毒上清感染大鼠胚胎神经干细胞。结果　经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了重组GFP逆转录病毒 ,pLNCX2 GFP转染包装细胞后可以产生GFP逆转录病毒 ,病毒感染大鼠胚胎神经干细胞可以长期表达绿色荧光。结论　逆转录病毒能够快速、稳定、长期地将GFP基因转入神经干细胞 ,这种标记方法非常有利于神经干细胞移植后结构和功能的研究     

增强型绿色荧光蛋白基因对树突状细胞功能的研究

目的研究瘤内注射的树突状细胞（DC）的迁移及在肿瘤局部的作用。方法建立大鼠C6脑胶质瘤颅内肿瘤模型，脂质体介导的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因转染DC细胞，瘤内注射DC后取大鼠同侧的淋巴结在荧光显微镜下检测，并用流式细胞仪检测肿瘤周围组织CD4^＋T和CD8^＋T细胞的浸润。结果同侧的颈深部淋巴结可见EGFP表达的DC，对侧淋巴结未见到。DC治疗组证实有CD4^＋T和CD8^＋T明显浸润（CD4^＋T8．19％，CD8^＋T11．05％），RPMI1640治疗组CD4^＋T0．95％和CD8^＋T1．17％，生理盐水对照组CD4^＋T0．62％和CD8^＋T0．77％。结论瘤内注射的DC不仅能够迁移，而且有效地引起肿瘤局部的T细胞显著浸润，为瘤内注射DC细胞提供了依据。     

一种应用绿色荧光蛋白筛选小鼠原位膀胱癌模型的非侵入实验方法

小鼠原位膀胱癌模型能模拟肿瘤的生物微环境 ,为研究浅表膀胱癌的治疗方法提供了可能。作者利用绿色荧光蛋白 (GFP)转染细胞 ,通过检测裸鼠膀胱癌模型尿液中是否存在表达GFP的细胞 ,为筛选浅表膀胱癌动物模型提供了一种敏感的实验方法。作者将膀胱癌细胞系KU 7,UM UC 3和UM UC 14转染绿色荧光蛋白表达载体pEGFP N3,用G4 18筛选能稳定表达GFP的细胞系KU 7 GFP ,UM UC 3 GFP和UM UC 14 GFP ,然后将上述三种细胞灌注到裸鼠膀胱留置 3h ,制备小鼠原位浅表膀胱癌动物模型。连续 3周收集小鼠尿样 ,通过荧光显微镜观察脱落细胞…     

绿色荧光蛋白和大鼠睾丸AQP7融合蛋白表达载体构建及其表达

目的 :构建真核表达的pEGFP C1与大鼠睾丸AQP7的融合蛋白表达载体。　方法 :RT PCR的方法扩增Wistar大鼠睾丸AQP7cDNA编码区全长序列 ,测序鉴定 ,将AQP7cDNA融合于pEGFP C1基因的下游。以脂质体转染方法将pEGFP C1 AQP7融合蛋白转入中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞 ,应用免疫细胞化学方法和Western印迹技术对转染细胞株进行鉴定。　结果 :①Wistar大鼠AQP7cDNA序列登录到GenBank ,登录号 :AY15 7737;②通过鉴定证明CHO细胞已经稳定表达了pEGFP C1 AQP7融合蛋白 ,其相对分子质量为 5 30 0 0 ;③绿色荧光蛋白作为标记物观察到AQP7在CHO细胞的定位。　结论 :稳定表达pEGFP C1 AQP7融合蛋白的CHO细胞株的建立 ,为AQP7在细胞内定位与功能研究奠定了基础。     

绿色荧光蛋白标记的犬脂肪干细胞体外复合珊瑚材料的生长特性

目的研究犬脂肪干细胞(AdiposeDividedStromalCells,ADSCs)作为种子细复合珊瑚材料体外培养的生长特性。方法分离犬ADSCs,成骨诱导并转染绿色荧光蛋白(GFP)后,复合珊瑚材料培养。检测细胞总数,激光共聚焦观察细胞形态。结果ADSCs-珊瑚复合物体外增殖良好。激光共聚焦显示培养2周后细胞呈老化形态。结论GFP转染不影响细胞传代、增殖。细胞-材料复合物体外培养7天后回植较为适宜。     

表达增强型绿色荧光蛋白的骨肉瘤细胞亚株建立及生物学特性

目的 建立经绿色荧光蛋白基因转染的骨肉瘤细胞亚株并研究其生物特性。方法 利用脂质体转染增强型绿色荧光蛋白真核表达质粒（pEGFP-N1）人人骨肉瘤MG63细胞系，通过有限稀释法和细胞电泳，获得两株细胞克隆M6和M8，经体外细胞增殖、软琼脂形成、生长曲线、裸鼠成瘤试验综合分析其生物学行为改变。应用组织形态学观察、染色体分析、软琼脂克隆形成法研究癌细胞的生物学特性。结果 M6和M8两株在细胞电泳率和侵袭性上差异有统计学意义（P〈0．05），其中M6的群体倍增时间为38．4h，软琼脂形成率为18．7％，M8群体倍增时间为23．0h，软琼脂形成率为29．3％。裸小鼠背部皮下接种M6和M8，发现M8成瘤时间短，细胞增殖快，但在4周内两者均不发生转移。结论 骨肉瘤细胞亚系有不同的转移特性，GFP的整合及表达未对MG63细胞的生长状态造成明显影响，可作为报告基因进一步了解骨肉瘤细胞转移的差异性分析。     

持续性CO2气腹影响胃癌细胞在腹腔镜切口种植的实验研究

目的 观察实验大鼠DO2气腹对肿瘤细胞切口播散的影响。方法 在雄性SD大鼠腹腔内注入不同量人胃癌细胞株SGC－7901，用气腹机分别产生不同压力的持续性气腹，通过5mm腹穿刺管收集气体至培养瓶中，在37℃、5％CO2环境中培养7d后，鉴定是否有肿瘤细胞生长，另取腹腔冲洗液作阳性对照。结果 注入10^6／ml浓度的胃癌细胞，气腹压达30mmHg，流量为5L／min，持续60min、120min及180min后，部分培养瓶中有肿瘤细胞生长（P＜0．01），而在注入10^4／ml胃癌细胞所收集的气体中未发现肿瘤细胞。结论 在10^6／ml肿瘤细胞数量下，长时间高气腹压可以造成肿瘤细胞切口播散。     

红色荧光蛋白标记的裸鼠胰腺癌转移模型的建立

目的 建立稳定、高表达红色荧光蛋白标记的裸鼠胰腺痛转移模型.方法 将RFP基闪转入人胰腺癌细胞株SW1990.评价转染前后细胞生物学行为有无改变,并采用SW1990-RFP建立实验性肺转移模型和实验性肝转移模型.应用整体荧光成像系统评价各组转移模型肿瘤转移的发生.结果 获得稳定,高表达RFP的单克隆细胞系SW1990-RFP,转染前后细胞生物学行为无明显改变.成功建立了裸鼠胰腺癌实验性肺转移模型和肝转移模型,并应用整体荧光成像系统检测到各脏器微小转移的发生.建模成功率均为66.7%(4/6).结论 RFP基因不改变SW1990的细胞生物学行为,本实验所建立的裸鼠胰腺癌转移模型稳定、可靠,具有较强的灵敏性及特异性.     

CO2气腹对胃癌细胞腹腔种植转移影响的动物实验研究

目的比较不同压力CO2气腹处理的人胃癌MKN-45细胞在裸鼠腹腔内的成瘤数量、重量及裸鼠生存时间，探讨CO2气腹对胃癌细胞侵袭转移能力的影响。方法实验分为4组（对照组和5、10、15mmHg CO2气腹组），即将胃癌细胞在5％CO2 37℃条件下或5、10、15mmHg100％CO2 37℃条件下培养4h，然后收集细胞并将2×10^5个细胞注射入裸鼠腹腔，建立胃癌腹腔转移动物模型。4周后处死裸鼠，观察其腹腔成瘤率、成瘤数量和重量以及裸鼠生存时间。结果各组裸鼠腹腔成瘤数量、肿瘤总重量和生存时间均无显著差异（P〉0．05）。结论在气腹压力≤15mmHg时CO2对胃癌MKN-45细胞在裸鼠腹腔内的种植转移无显著影响。     

三种麻醉方法对腹腔镜手术二氧化碳气腹期间自主神经活动趋势的影响

目的以心率变异性（heart rate variability，HRV）为观察指标，观察分析不同的麻醉方法对腹腔镜胆囊切除手术（Laparoscopic cholecystectomy，LC）二氧化碳（CO2）气腹期间自主神经活动趋势的影响。方法选择ASAⅠ～Ⅱ级的择期L患者45例，按手术日期分为全身麻醉组（Ⅰ组，对照组）、全身麻醉＋艾司洛尔组（Ⅱ组）和全麻复合硬膜外阻滞组（Ⅲ组），分别在麻醉前，气腹前，气腹后5、10、20及30min观察HRV及血流动力学的变化。结果与气腹前相比，Ⅰ组低频（LF）、低频／高频（LF／HF）在气腹后不同时点均显著升高（P〈0．05）；Ⅱ组LF／HF在气腹后5、10min显著升高（P〈0．05）；Ⅲ组气腹后各时点LF、HF、LF／HF均无显著变化（P〉0．05）。组间比较，Ⅰ组LF、LF／HF在气腹后各时点均显著高于Ⅱ、Ⅲ组（P〈0．05），Ⅱ组LF在气腹后10min显著高于Ⅲ组（P〈0．05），LF／HF在气腹后5、10min显著高于Ⅲ组（P〈0．05）。HF各组间差异无显著性（P〉0．05）。结论艾司洛尔可减轻气腹引起的应激反应，但不能完全阻止其交感活性的增强；全麻复合硬膜外阻滞用于腹腔镜胆囊切除手术，可以抑制气腹引起的交感神经兴奋，维持自主神经的稳定性。     

Effect of insufflation gas and intraabdominal pressure on portal venous flow during pneumoperitoneum in the rat

BACKGROUND: Carbon dioxide, the primary gas used to establish a pneumoperitoneum, causes numerous systemic effects related to cardiovascular function and acid-base balance. Therefore, the use of other gases, such as helium, has been proposed. Furthermore, the pneumoperitoneum itself, with the concomitant elevation of intraabdominal pressure, causes local and systemic effects that have been only partly elucidated. Portal blood flow, which plays an important role in hepatic function and cell-conveyed immune response, is one of the affected parameters. METHODS: An established animal model (rat) of laparoscopic surgery was extended by implanting a periportal flow probe. Hemodynamics in the portal vein were then measured by transit-time ultrasonic flowmetry during increasing intraabdominal pressure (2-12 mmHg) caused by gas insufflation (carbon dioxide vs helium). RESULTS: The installation of the pneumoperitoneum with increasing intraperitoneal pressure led to a significant linear decrease in portal venous flow for both carbon dioxide and helium. At higher pressure levels (8-12 mmHg), portal blood flow was significantly lower (1.5-2.5-fold) during carbon dioxide pneumoperitoneum. An intraabdominal pressure of 8 mmHg caused a decrease to 38.2% of the initial flow (helium, 59.7%); whereas at 12 mmHg, portal flow was decreased to 16% (helium, 40.5%). CONCLUSION: Elevated intraabdominal pressure generated by the pneumoperitoneum results in a reduction of portal venous flow. This effect is significantly stronger during carbon dioxide insufflation. Portal flow reduction may compromise hepatic function and cell-conveyed immune response during laparoscopic surgery.     

不同气腹压力对子宫内膜异位症模型异位病灶超微结构的影响

目的观察不同气腹压力对大鼠子宫内膜异位症模型异位病灶超微结构的影响。方法SD大鼠子宫内膜腹膜自体移植制成子宫内膜异位症模型,造模成功后随机分为对照组、10mmHg气腹组和20mmHg气腹组（每组10只）,作用时间1h,手术结束后1周取子宫内膜异位灶行电镜检查,观察异位病灶腺上皮细胞凋亡和其他细胞器超微结构改变。结果对照组异位灶腺细胞结构良好,基质细胞排列整齐,微绒毛正常。10mmHg和20mmHg气腹组均有异位灶腺细胞染色质边集,线粒体嵴消失,线粒体肿胀明显;微绒毛减少或消失,细胞连接缝隙增宽断裂,基底层细胞排列紊乱。与10mmHg比较,20mmHg气腹组异位灶各细胞器受损程度相对严重。结论CO2气腹可导致子宫内膜异位灶细胞超微结构破坏,20mmHg气腹组对其损伤作用大于10mmHg组。     

Portal venous flow during CO2 pneumoperitoneum in the rat

Backround: CO₂ gas insufflation is routinely used to extend the abdominal wall. The resulting pneumoperitoneum has a number of local and systemic effects on the organism. Portal blood flow, which plays an important role in hepatic function and cell-conveyed immune response, is one of the affected parameters. Methods: An established animal model (rat) of laparoscopic surgery was modified by implanting a perivascular flow probe. Hemodynamics in the portal vein were then measured during increasing intraabdominal pressure generated by carbon dioxide insufflation. Results: Using this technique, an adequate flowmetry of the portal vein was achieved in all animals. The creation of a CO₂ pneumoperitoneum with increasing intraabdominal pressure led to a linear decrease in portal venous flow. Conclusions: Elevated intraabdominal pressure caused by carbon dioxide insufflation may compromise hepatic function and cell-conveyed immune response during laparoscopic surgery. Received: 28 January 1998/Accepted: 22 June 1998     

CO2气腹对慢性肺功能不全兔肺功能影响的实验研究

目的探讨腹腔镜手术中建立的CO2气腹对慢性肺功能不全兔肺功能的影响和损伤机制. 方法依据随机原则,将50只健康雄性日本大耳白兔分为4组,即正常对照组(N0:n=5,免气腹),实验对照组(T0:n=5,免气腹),10 mmHg气腹实验组(T10:n=20, 10 mmHg气腹),15 mmHg气腹实验组(T15:n=20, 15 mmHg气腹).兔肺气肿模型稳定后,建CO2气腹,压力为10 mmHg(1.33 kPa)和15 mmHg(2.00 kPa)2种,作用时间2 h.分别在气腹前后各时点通过脉冲振荡法测4组肺功能(呼吸总阻力、中心阻力、总气道阻力). 结果兔肺气肿模型稳定后呼吸总阻力、中心阻力、总气道阻力升高.与气腹前相比,气腹结束时呼吸总阻力、中心阻力、总气道阻力显著下降(q=17.824, P<0.05;q=69.643, P<0.0.5;q=9.315,P<0.05),气腹后2 h表现为各值升至最高(q=48.631,P<0.05;q=107.842,P<0.05;q=57.213, P<0.05),此后开始降低,气腹后18 h升至比气腹结束时略高状态(q=26.313, P<0.05;q=73.499,P<0.05;q=23.547,P<0.05).15 mmHg(2.00 kPa)压力下变化更为显著. 结论在CO2 气腹条件下,慢性肺功能不全机体易发生血流动力学紊乱和肺通气障碍、顺应性降低,导致肺功能损伤,且气腹压力越高损伤越显著.     

不同压强持续性CO2对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨不同压强持续性CO2气腹对结肠癌细胞体内侵袭转移能力的影响.方法建立体外气腹模型,将人结肠癌细胞株SW1116分为5组,分别在不同压强CO2气体[6、9、12、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)]以及常规培养条件下暴露1 h后,各自注入每组16只裸鼠腹腔(1×106个细胞/裸鼠).2周后,各组裸鼠取10只处死,观察腹腔内肿瘤结节数及各脏器转移情况.各组剩余6只裸鼠观察生存时间.结果各组裸鼠致瘤率对照组10/10例,6 mm Hg组9/10例,9 mm Hg组9/10例,12 mm Hg组9/10例和15 mm Hg组10/10例,差异无统计学意义.裸鼠腹腔内瘤结节数6 mm Hg组(41.70±14.90)与15 mm Hg组(29.70±9.91)之间差异有统计学意义(P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).各脏器转移情况在各压强组差异无统计学意义(P＞0.05).各组裸鼠生存时间差异无统计学意义(P＞0.05).结论CO2气腹并不增加肿瘤细胞在腹腔内以及对各脏器的侵袭转移能力,对致瘤裸鼠的生存时间无影响.高压强CO2气腹对肿瘤细胞在体内的转移侵袭能力有抑制作用.     

实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的 :探讨大鼠精索静脉曲张对睾丸生精细胞凋亡的影响 ,阐明精索静脉曲张引起不育的病理机制。　方法 :选用雄性SD大鼠 32只 ,随机分为假手术组、4 5d模型组、6 0d模型组及 90d模型组。采用肾静脉缩窄法建立精索静脉曲张动物模型 ,流式细胞术分别检测各组大鼠睾丸凋亡细胞数及各级生精细胞数。　结果 :假手术组未出现明显的凋亡峰 ,各模型组均出现明显的凋亡峰 ,且随着造模时间的延长凋亡峰增高。　结论 :精索静脉曲张可引起睾丸生精细胞大量凋亡 ,各级生精细胞数减少 ,这可能是精索静脉曲张引起睾丸生精功能障碍从而导致不育的根本机制     

不同体位和不同压力的CO2气腹对腹腔镜手术患者下肢深静脉血流动力学的影响

目的探讨腹腔镜手术特殊的体位及CO2气腹对患者下肢深静脉血流动力学的影响。方法2007年11月至2008年9月．通过彩色多普勒测定37例腹腔镜胃癌手术患者气腹前3种体位（平卧位、头低脚高位和头高脚低位）及平卧位气腹建立后的3种CO2气腹压（8、12和16mmHg）时股静脉直径、平均血流速度和血流量。结果与气腹前平卧位比较。头低脚高位患者股静脉直径显著减少（P〈0．05）,平均血流速度及血流量均显著增加（P〈0．01,P〈0．05）;头高脚低位及平卧位气腹建立后股静脉直径均显著增大（P〈0．01）．平均血流速度及血流量均显著减少（P〈0．01,P〈0．05）,且随着气腹压的增加,股静脉直径逐渐增大,平均血流速度及血流量逐渐减少,组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论头低脚高位有利于血液的回流,而头高脚低位及CO2气腹压均可使血液回流不畅．可能影响下肢深静脉血栓的发生。