冠心病患者冠脉病变程度与心外膜脂肪脂联素表达的关系

目的 探讨冠心病患者心外膜脂肪(EAT)脂联素(APN)表达与冠脉病变程度的关系.方法 两组患者冠心病组52例,瓣膜病组54例,获取静脉血和心外膜脂肪,冠心病组按Gensini's评分分为＜30分、30～90分、＞90分3组.采用酶联免疫吸附试验(EUSA)、逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和免疫印迹分析(Western blot)检测APN血清mRNA和蛋白表达.结果 血清APN瓣膜病组(14.1±4.2) mg/L,冠心病组(9.3±4.5) mg/L (P＜0.01);冠心病3组血清APN分别为(10.9±5.5) mg/L(n=16)、(8.4±4.2) mg/L(n=20)、(6.2±5.3) mg/L(n=18) (P ＜0.05);心外膜脂肪RT-PCR和Western blot法检测APN显示随着Gensini's积分增加APN呈下降趋势.结论 冠心病心外膜脂肪APN表达下降与冠状动脉病变程度相关.     

胰岛素干预后脂肪来源干细胞分泌功能对HaCaT细胞生物学影响

目的 分离培养脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),探讨胰岛素刺激前后其分泌因子的变化及对人角质形成细胞株HaCaT细胞生物学影响.方法 从腹部外科手术患者自愿捐献皮下脂肪组织中分离、培养ADSCs,取第3代ADSCs调整密度为5×104个/mL,采用1×10-7mol/L胰岛素刺激作为A组,以未加胰岛素刺激作为B组,培养3 d后收集两组ADSCs培养上清液(conditioned medium of ADSCs,ADSC-CM),ELISA法测定其VEGF、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)含量.取人角质形成细胞株HaCaT细胞培养,将第4代细胞根据培养液不同分为4组.A1组:含A组ADSC-CM和2%FBS各0.5 mL:B1组:含B组ADSC-CM和2%FBS各0.5 mL;C1组:1 mL含终浓度为1×10-7mol/L胰岛素的2%FBS;D1组:仅含2%FBS 1 mL.培养3 d采用MTT法测定HaCaT细胞增殖情况:培养12 h Annexin V-FITC双染测定细胞凋亡情况;培养0、12、24、36、48 h采用体外细胞划痕法测定其迁移能力.结果 A组VEGF、HGF含量分别为(643.28±63.57)、(929.95±67.52)pg/mL,B组分别为(286.52±46.68)、(576.61±84.29)pg/mL,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).细胞增殖测定A1、B1组吸光度值分别为0.881±0.039、0.804±0.041,与C1组(0.663±0.027)及D1组(0.652±0.042)比较,差异有统计学意义(P＜0.01);A1组高于B1组(P＜0.05).A1、B1组凋亡率分别为5.23%±1.98%、8.82%±2.59%,均低于C1组(31.70%±8.85%)和D1组(29.60%±8.41%),差异有统计学意义(P＜0.05),但B1组凋亡率高于A1组(P＜0.05).A1、B1、C1和D1组36 h迁移距离分别为(0.184 6±0.019 2)、(0.159 8±0.029 4)、(0.059 2±0.017 6)及(0.058 2±0.012 3)mm,48 h分别为(0.231 8±0.174 0)、(0.205 1±0.012 1)、(0.079 2±0.008 1)及(0.078 4±0.0117)mm,两时间点A1组和B1组距离明显大于C1组和D1组(P＜0.01),A1组大于B1组(P＜0.05);其他时间点迁移距离差异无统计学意义(P＞0.05).结论 胰岛素干预后ADSCs能更有效促进HaCaT细胞增殖、迁移和抑制凋亡.     

促进脂肪移植的最佳SVFs浓度的实验研究

目的 探讨应用自人脂肪组织新鲜分离的不同浓度的血管基质层细胞( stromal vasvular fraction cells,SVFs)辅助脂肪移植,从而提高移植物的存活率的方法.方法 脂肪组织来自临床行吸脂术者,提取SVFs,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与浓度为①5×105个/ml(A组);②1 × 106个/ml(B组);③2×106个/ml(C组)的SVFs混合,另设对照组为完全培养基+单纯脂肪颗粒(D组),随机注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况:①湿重.②切片HE 染色计数血管密度.③方网测试系统“点计数”法检测存活脂肪细胞计数以及纤维坏死组织计数.结果 ①湿重:A组(60.000±6.325) mg,B组(81.670±7.528) mg,C组(68.330±7.528) mg,D 组(48.330±7.528) mg,B组脂肪存活率均高于A、C、D组(P<0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②血管密度:A、B、C组血管密度均高于D组,且B组明显高于其他3组(P＜0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).③点计数:B组存活脂肪细胞计数均高于A、C、D组(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P ＜0.05),A、C2组之间比较差异均无统计学意义(P＞　0.05).结论 来源于人自体SVFs复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中1×106个/ml数量级的SVFs移植脂肪的存活率最高,更适合用于脂肪移植,具有广阔的临床应用前景.     

天然水蛭素对猪随意型皮瓣静脉淤血影响的实验研究

目的 探讨局部应用天然水蛭素对猪随意型皮瓣移植后静脉淤血的影响. 方法 6～8月龄广西巴马小型猪3只,雌雄不限,体重10～15 kg.于每只猪背两侧制备6个大小为14 cm×4 cm的随意型皮瓣,共18个皮瓣.根据术后注射药物不同,皮瓣随机分为3组(n=6).术后即刻、1、2、3 d,A组:局部注射3 mL生理盐水,作为对照组;B组:局部注射3 mL天然水蛭素20 ATU:C组:局部注射3 mL天然水蛭素40 ATU.术后1、10 d行大体观察,1、7d行组织学观察,3、7 d测定湿重/干重比值,5 d测定皮瓣表面温度,7 d皮瓣局部血流彩色超声检测,12 d测定皮瓣成活率. 结果 术后即刻,3组皮瓣均出现远端2/3范围内轻度淤血,差异无统计学意义(P＞O.05):术后1 d,A组皮瓣淤血长度明显长于B、C组(P＜0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后10 d,A、C组皮瓣坏死长度明显长于B组,差异有统计学意义(P＜0.05),A、C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).组织学观察:术后1 d,B组真皮内毛细血管及微静脉红细胞淤滞现象较A组明显减轻;术后7 d,B组皮下胶原及肉芽组织增生明显优于A组.术后3 d,A、B、C组湿重/干重比值分别为3.94 4±0.14、3.43±0.14、3.60±0.19,A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);术后7 d,A、B、C组湿重/干重比值分别为3.61±0.11、3.08±0.13、3.34±0.21,A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后5 d,A、B、C组皮瓣表面温度分别为(36.64±0.70)、(38.61±0.42)和(37.50±0.46)℃,A组与B、C组比较差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后7 d,皮瓣局部血流彩色超声检测示A组血流信号稀少,B组见较完整的动静脉回流信号,可见垂直于皮肤的动脉穿支,C组可见动脉血流信号.术后12 d,A、B、C组皮瓣成活率分别为45%4±7%、67%±4%、52%±4%,B、C组与A组比较,筹异有统计学意义(P＜0.05),B、C组问比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 局部应用天然水蛭素对猪随意犁皮瓣移植后静脉淤血有较明显的改善作用.     

瑞芬太尼术毕时不同应用模式对颅脑手术患者苏醒期的影响

目的 评价神经外科手术患者全麻苏醒期应用不同模式瑞芬太尼对患者拔管期呛咳反应的影响.方法 ASAⅠ或Ⅱ级择期行颅脑手术的患者60例,均在快速诱导下进行气管插管,术中以微量泵持续输注丙泊酚、瑞芬太尼维持麻醉,术毕按瑞芬太尼的给药方式采用完全随机法分为3组(每组20例):A组缝皮结束时停止输注瑞芬太尼;B组缝皮结束时停止输注瑞芬太尼,包扎头部时再静脉单次注射瑞芬太尼1 μg/kg,C组缝皮结束后继续微泵输注瑞芬太尼0.05 μg· kg-1· min-1至拔管后.记录拔管前、拔管即刻、拔管后1、3 min的心率(heart rate,HR)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、血氧饱和度(oxygen saturation,SpO2),记录手术时间、苏醒时间(丙泊酚停止输注至睁眼时间)、拔管时间(缝皮结束至拔管)、丙泊酚与瑞芬太尼的总用量、呛咳程度、拔管后意识状态等.结果 拔管即刻HR:A组(101±7)次/min,B组(90±8)次min,C组(78±9)次min;拔管后1 min的HR:A组(98±9)次min,B组(83±6)次/min,C组(80±5)次/min;拔管后3min的HR:A组(93±5)次/min,B组(82±7)次/min,C组(82±5)次/min;B组、C组在拔管后3个时点的HR低于A组,差异有统计学意义(P＜0.05).拔管即刻MAP:A组(97±11) mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa),B组(87±9)mm Hg,C组(77±7) mmHg;拔管后1 min的MAP:A组(92±8) mm Hg,B组(84±8) mm Hg,C组(75±6) mm Hg;拔管后3 min的MAP:A组(85±6) mm Hg,B组(80±5) mm Hg,C组(76±6) mm Hg;B组在拔管即刻、拔管后1 min的MAP低于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),C组在拔管后3个时点的MAP均低于A组,差异有统计学意义(P＜0.05).C组拔管后3个时点的HR、MAP与拔管前比较差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、C3组苏醒时间、拔管时间、拔管后OAA/S评分差异无统计学意义(P＞0.05);拔管期A组均出现呛咳,8例轻度、12例中度,B组13例无呛咳、7例轻度呛咳,C组16例无呛咳、4例轻度呛咳,与A组比较,B组、C组呛咳的发生率及程度均降低(P＜0.05).结论 手术结束时继续持续输注0.05 μg·kg-1·min-1的瑞芬太尼或单次静脉注射瑞芬太尼1μg/kg可提高患者的耐管性,减少呛咳反应,抑制拔管期间HR、MAP的过度变化,且不影响患者苏醒时间.     

低位直肠癌经肛内外括约肌间切除术后肛肠动力学研究

目的 检测3种不同治疗方法下低位直肠癌经肛内外括约肌间切除术(ISR)患者术后肛肠动力学指标,观察不同治疗方法对排便功能的影响.方法将113例低位直肠癌ISR患者分为3组,分别为新辅助化疗联合腹腔镜直肠前切除ISR组(A组,n=32):腹腔镜直肠前切除ISR组(B组,n=43):开腹直肠前切除ISR组(C组,n=38),采用肛肠压力监测仪分别检测3组术前、术后3、6、9、12个月肛管动力学、结肠末端动力学、肛管结肠末端动力学相关指标,观察并对比其变化趋势.结果 肛管静息压A、B、C组术后3个月[(33.53±6.58)、(24.69 ±5.62)、(14.86±5.54) mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)]均分别低于术前[(49.37±14.32)、(47.32±7.87)、(46.50±10.02) mm Hg] (P ＜0.05),且A组[(33.53±6.58) mm Hg]比同期B、C组[(24.69±5.62)、(14.86±5.54) mm Hg]降低幅度小(P＜0.05).3组直肠肛管抑制反射阳性率于术后3个月均降低(P＜0.05),且A组比同期B、C组高(P＜0.05).球囊排出试验时间、初始排便容量阈值及最大耐受容量A组均较B组提前3个月恢复至术前水平(P＜0.05),较C组提前6个月恢复至术前水平(P＜0.05).结论新辅助化疗联合腹腔镜直肠前切除对排便动力学影响小.     

血管基质片段细胞携血管内皮生长因子对移植颗粒脂肪血管化的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)复合血管基质片段细胞( stromal vascular fraction cells,SVFs)细胞疗法对移植颗粒脂肪组织血管化的影响,寻找一种安全、有效、简单的细胞辅助脂肪移植术式.方法 取患者植皮术后废弃的皮下脂肪,提取SVFs.用DiI染色观察SVFs染色标记情况,锥虫蓝染色观察SVFs活性.将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与0.2 ml下列细胞混合:①复合有VEGF的SVFs(A组);②SVFs(B组);③DMEM完全培养基(C组).按照随机化原则将3组脂肪组织混合物分别注射移植于裸鼠背部皮下,每只裸鼠背上注射3个点(共12只).观察移植物外形、成活情况、湿重、直径,HE染色及CD31染色镜下观察并计数毛细血管密度.使用SPSS 16.0进行方差分析检验.结果 新鲜提取的SVFs可被DiI标记染色,加用VEGF仍能保持较好的细胞活性,移植术后2个月3组移植脂肪的湿重为:A组(191.90 ±9.81)mg、B组( 177.01±10.50)mg、C组(92.05±8.30)mg,A组＞B组＞C组(P＜0.01).移植物直径为:A组(0.49±0.24)cm、B组(0.40±0.26) cm、C组(0.32±0.28) cm,A组＞B组＞C组(P＜0.01).CD31染色镜下,每高倍镜视野微血管密度:A组(14.58±2.06)个、B组(11.55±2.18)个、C组(7.87±1.55)个,与B组和C组比较,A组较少见纤维结缔组织增生及坏死凋亡细胞.结论 结合VEGF因子的SVFs辅助脂肪移植是一种临床可操作性强、简便可行的较理想的细胞疗法,比单纯SVFs更能有效地促进移植脂肪血管化.     

射频消融联合无水乙醇注射治疗肝癌协同效果的实验研究

目的 研究不同方式的射频消融(RFA)与无水乙醇(PEI)联合应用对正常兔肝脏的消融效果.方法 采用24只活体新两兰大白兔正常肝脏进行研究.分为4组,每组6只.A组为RFA后PEI组:1 cm单极射频针射频3 min+局部注射PEI 1.5ml;B组为PEI后RFA组:局部注射PEI 1.5 ml+局部1 cm单极射频针射频3 min;C组为RFA组:局部1 cm单极射频针射频3 min;D组为PEI组:局部注射PEI 1.5 ml.观察各组RFA术中的电阻、电流及单位消融体积能耗,行肝脏增强CT扫描分析各组消融灶大小、形态、体积、类圆率的情况.结果 B组消融长径和短径[分别为(24.1±4.4)mm和(21.4±4.0) mm]显著大于C组[分别为(12.4±1.6)mm和(11.1±1.4)mm]、D组[分别为(7.7±2.3)mm和(5.1±1.5)mm] (P＜0.01).在高径和消融体积上,B组[分别为(20.3±4.9) mm3和(5879±2607) mm3]显著大于A组[分别为(14.8±2.7)mm3和(3130±1250) mm3]、C组[分别为(10.7±1.6)mm3和(767±173)mm3]、D组[分别为(6.7±1.O)mm3和(146±83)mm3](P＜0.01).B组产生的消融灶类圆率最高,两两比较各组类圆率差异无统计学意义(P＞0.05).B组RFA术中电阻显著高于A组及C组(P＜0.05),B组RFA术中电流显著低于A 组及C组(P＜0.05).单位消融体积能耗A组、B组显著低于C组(P＜0.01).结论 PEI后RFA 组产生的消融体积明显大于RFA后PEI组、RFA组、PEI组;PEI后RFA组单位消融体积能耗最低;PEI后RFA组产生的消融灶类圆率最高.     

灯盏细辛对大鼠肾冷缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的 观察中药灯盏细辛对大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤(IRI)中肾脏细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 封闭群SD大鼠36只,随机分为3组,每组12只.假手术组(A组),对照组(B组),实验组(C组).药物应用:C组术前15 min,灯盏细辛注射液按1.2 ml/100 g通过尾静脉注射,A、B组按相应剂量注射生理盐水.动物手术:A组,切除右肾.B、C组采用的是冷IRI模型,3组大鼠均在术后24h再次手术切除左肾进行检测.透射电镜检查肾组织形态学,免疫组织化学检测凋亡相关的基因bcl-2与bax的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 (1)超微结构检查(透射电镜):A组结构正常;B组细胞呈损伤形态:线粒体肿胀,微绒毛减少,胞质内空泡形成,部分细胞核可见凋亡迹象.C组病变较B组显著减轻.(2)免疫组织化学蛋白阳性染色指数(PI):缺血再灌注后B、C组的bcl-2表达分别为(21.21±1.18)％和(35.52±1.94)％,较A组(4.95±0.77)％均增多(P＜0.05),B组低于C组(P＜0.05).B、C组的bax表达分别为(58.55±2.90)％和(45.90±3.14)％,较A组(4.67±0.67)％增多(P＜0.05),而且B组高于C组(P＜0.05).A组的蛋白阳性染色指数的比值bcl-2/bax为(1.06±0.07)高于B组(0.35±0.03)和C组(0.78±0.07,P＜0.05),而且C组高于B组(P＜0.05).(3)细胞凋亡检测(TUNEL):细胞凋亡指数B组(28.57±3.58)％和C组(19.99±3.37)％均显著大于A组(2.33±0.42)％(P＜0.01),C 组小于B组(P＜0.01).结论 灯盏细辛减少大鼠肾脏冷IRI诱导的肾脏细胞的凋亡,与调节凋亡相关基因bcl-2与bax表达有关.     

红花黄素腹腔注射联合BMSCs移植对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的 探讨红花黄素腹腔注射联合骨髓阳J充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤保护作用及其机制.方法 体外分离、培养BMSCs;SD大鼠45只,改良Allen法制备脊髓损伤模型,随机分为3组:A组、B组、C组.A组腹腔注射红花黄素治疗(40 mg/kg),B组和C组注射等体积的生理盐水,每日1次,共14 d;A组和B组损伤局部行BMSCs移植(6×106/60μl),C组注射等体积的PBS液.于术后1 d、2 d、3 d、4 d、7 d取材检测损伤处超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和细胞凋亡,术后1 d和7 d、14 d、21 d、28 d采用改良BBB评分法进行行为学检查评分.结果 术后随着时间的推移,各组BBB评分得分均增高,术后28 d时A组得分为(19.33±1.37),B组为(15.83±1.17),C组为(9.0±1.41),A组高于B组和C组,B组高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).SOD活性在相同时间点,均有A组高于B组和C组,B组高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05);MDA含量在术后2 d、3 d、4d A组低于B组和C组(P＜0.05),且有A组低于B组(P＜0.05).术后3 d时各组细胞凋亡达高峰:A组(72.83±13.38),B组(96.33±6.35),C组(219.33±28.64);之后各组细胞凋亡数逐渐减少,至术后7d:A组(3.67±3.72),B组(16.33±5.54),C组(86.17±12.27);除术后第1天,在相同时间点,细胞凋亡数有A组少于B组和C组,B组少于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 红花黄素和BM-SCs移植均能抑制损伤脊髓局部自由基生成、脂质过氧化和细胞凋亡,减轻继发损伤,两者联合具有累加协同效应,有助于脊髓损伤大鼠肢体运动功能的恢复.