首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 46 毫秒
1.
目的 探讨合成的新型神经营养因子TAT-BDNF对胚胎干细胞(ESCs)分化的影响,为进一步TAT-BD-NF联合干细胞移植治疗脊髓损伤提供实验依据.方法 取ESCs E14进行体外培养,在全反视黄酸诱导分化的基础上加入20μg/L TAT-BDNF,通过免疫细胞化学染色观察此融合蛋白对ESC分化的影响.结果 TAT-BDNF能促使E14胚胎干细胞分化为多巴胺能神经元和γ氨基丁酸能神经元.随着作用时间的延长,表达成熟神经元NF-200的细胞比例逐步提高(7 d时约37.4%±2.7%、21 d时82.3%±7.6%);TH阳性的细胞比例也逐渐增多(7 d时约7.9%±1.6%,21 d时44%±3.5%),而且神经元的轴突也更加细长.结论 新型神经营养因子TAT-BDNF能促进ESCs细胞向神经元分化并促进神经元成熟.  相似文献   

2.
人脐血细胞体外扩增的实验研究和意义   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的:了解脐血造血干细胞在体外扩增培养过程中的生长分化特点,探讨脐血干细胞与体外扩增后的祖细胞混合移植的可行性以及合适的移植时机。方法:按种脐血单个核细胞(MNC)于含体积浓度为20%胎牛血清(FCS)的IMDM悬浮培养体系中,加入干细胞因子(SCF)、Flt-3配基(FL)、粒-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6) ,培养21d,每周半量换液,同时进行细胞计数,涂片形态学观察,粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红细祖细胞(BFU-E)集落培养,细胞表面CD34^ 、CD33^ 、CD3^+、CD19^+标记和细胞增周期的动态观察。结果 培养7d时的脐血细胞,CFU-GM、BFU-E集落形成最多,之后逐渐减少,21d时已低于培养前水平。CD34^ 细胞比例在培养后7d达高峰,14d开始下降;CD33^+细胞比例在培养后7-14d达高峰,21d时开始下降;CD3^ 、C CD19^ 细胞比例均在培养第7d时显著下降,并持续低水平至21d。培养7d后G0期细胞比例明显减少,S期细胞快速增高,至21d时仍有较高比例。培养第21d的细胞涂片见少量中、晚幼粒细胞。结论:理论上脐血干细胞与扩增后的祖细胞混合移植用于成人具有可行性,体外扩增培养7d左右是混合移植的最佳时机。  相似文献   

3.
目的观察移植脊髓源性神经干细胞在臂丛根性撕脱伤后相应脊髓前角的存活、迁移、分化情况。方法取新生鼠脊髓,分离获得脊髓源性神经干细胞,在体外培养、扩增,鉴定,并用5-溴2-脱氧尿苷(BrdU)标记。取SD大鼠20只,将右侧C5~C7神经根经后路撕脱,将标记后的神经干细胞移植于损伤侧C6脊髓前角。术后1、2、4、8、12周取脊髓标本利用免疫组化染色观察神经干细胞的分化情况。结果移植神经干细胞不仅能存活,并可向二端迁移达一个脊髓节段,分化为神经元及星型胶质细胞,其分化趋向呈时间相关性。结论脊髓源性神经干细胞在植入臂丛根性撕脱伤相应脊髓节段前角后不仅能存活和迁移,并能分化为神经元以及星型胶质细胞。  相似文献   

4.
目的 观察绿色荧光蛋白转基因神经干细胞(NSCs/GFP)脑出血大鼠脑内移植后血管生成与神经形态学改变.方法 分离、培养及纯化NSCs/GFP,并进行体外诱导分化.注射动脉血制作大鼠脑出血模型,3d后将NSCs/GFP注入血肿同侧尾状核,观察NSCs/GFP在脑内分化情况以及大鼠不同时间点行为学的变化.结果 成功分离、培养及鉴定NSCs/GFP,体外诱导分化为内皮细胞和平滑肌细胞;移植入脑出血大鼠脑内后,能促进其肢体功能恢复(P<0.05),且能分化为神经元、星型胶质细胞、内皮细胞及平滑肌细胞.结论 NSCs/GFP移植入脑出血大鼠脑内能改善其运动功能,并有生成血管与神经的能力.  相似文献   

5.
目的建立一套系统的体外分离、培养及诱导人骨髓基质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的方法。方法采用人淋巴细胞分离液从骨髓中分离出BMSCs,体外培养、扩增后,加以复合神经诱导剂进行诱导,诱导期间观察细胞形态的变化,并通过免疫细胞化学鉴定诱导细胞表面标志物的表达情况。结果人BMSCs在体外分离、培养、扩增后,经复合神经诱导剂诱导48h后,部分细胞出现胞体收缩和突起伸出,呈现神经元细胞样改变。免疫细胞化学染色显示巢蛋白或鼠抗人神经丝单克隆抗体阳性,兔抗人胶质纤维酸性蛋白阴性。结论本实验成功培养并诱导人BMSCs分化为神经元样细胞,并建立了一套系统的实验方法。  相似文献   

6.
目的 探讨绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因大鼠胚胎脊髓神经干细胞(neural stem cells,NSC)体外增殖、分化的生物学活性以及植入体内后存活、分化和迁移的情况。方法 对GFP转基因大鼠的胚胎脊髓NSC进行体外分离、培养和诱导分化,并应用特异性抗体分别对神经干细胞、神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞进行免疫荧光染色鉴定。建立F344大鼠胫神经切断的动物模型,将体外稳定传代的GFP-NSC单细胞悬液移植于胫神经远侧段。移植12周后取材,应用激光共聚焦显微镜和普通荧光显微镜观察神经干细胞体内的存活、分化和迁移情况,并对胫神经冰冻切片行神经元特异性免疫荧光染色鉴定。结果 通过体外分离培养的方法获得了稳定传代的GFP-NSC,体外诱导分化形成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。GFP-NSC体内移植后,部分分化为神经元,并发出轴突样的结构向远端生长。结论 GFP-NSC具有良好的生物学活性,体内移植后可以分化为神经元,为进一步研究其体内移植防治骨骼肌失神经萎缩及治疗其他神经元损伤性疾病提供了实验依据。  相似文献   

7.
目的体外诱导大鼠骨髓基质干细胞(BMSC)分化为神经元样细胞。方法采用Percoll(密度:1.073g/ml)梯度分离液,离心分离鼠BMSC,体外培养,提取大鼠胚胎脊髓组织匀浆诱导BMSC分化为神经元样细胞。形态学观察及免疫组织化学鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果大鼠骨髓基质干细胞在诱导后细胞形态变化,突起交织;免疫组织化学发现分化细胞NSE、NF-200表达阳性率分别为(68.0±1.7)%,(76.2±2.9)%,少数GFAP阳性。结论胚胎脊髓组织匀浆可诱导骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞。  相似文献   

8.
目的 探讨人脂肪组织来源的基质细胞(adipose tissue-derived stromal cells,ADSCs)向神经元样细胞分化的可能性,为神经移植探索新的细胞来源。方法 采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs,含血清的培养基进行培养,胰蛋白酶消化传代,采用第3~9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化,采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果 成功培养出ADSCs来源的基质细胞,细胞在体外生长形态类似成纤维细胞,可维持在未分化状态并稳定增殖,体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白,大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和βⅢ管蛋白;应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化,其中0.1%~0.2%的细胞分化为神经元样细胞,40%~50%分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态,并能表达神经元标志物;部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论 脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞,并能克服间充质细胞的限制,分化为神经元样细胞,但这种细胞是否为有功能的神经元,还需深入研究。  相似文献   

9.
目的 探讨骨髓间质分离的多能成体祖细胞(MAPCs)移植后在大鼠脑组织内神经细胞分化及修复神经功能的作用机制.方法 制作帕金森病大鼠模型,将在体外纯化、增殖和已用5-溴-2脱氧尿苷(BrdUrd)处理过的MAPCs注入帕金森病大鼠脑内.3个月后,对移植大鼠采用免疫组织化学技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、行为学测试等方法鉴定和分析MAPCs在大鼠脑组织内神经元样细胞分化和修复神经功能的作用机制.结果 6-羟多巴诱导的大鼠行为学变化MAPCs组明显好于对照组;细胞移植后第4、8、12周时,移植的PD大鼠1h内的旋转圈数为对照组(687.8±2.7、754.1±13.4、763.2±14.8)和MAPCs组(528.0±12.7、440.5±12.0、435.0±7.1).MAPCs在中脑黑质和纹状体区分化为神经元样细胞和多巴胺能神经元;PCR检查发现多巴胺-β-羟化酶、多巴胺转运体和神经生长因子表达水平MAPCs组(分别为0.510±0.028、0.620±0.046、0.850±0.051)明显比对照组(分别为0.310±0.072、0.400±0.044、0.480±0.057)升高(P<0.05).结论 骨髓间质分离的MAPCs移植后能在大鼠脑组织微环境中自主分化为多巴胺能神经细胞并有效地修复6-羟多巴诱导的神经功能缺损.  相似文献   

10.
骨髓源性多巴胺前体细胞移植治疗帕金森病模型鼠   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导分化为多巴胺(DA)能前体细胞后移植治疗帕金森病(PD)模型鼠的疗效及作用机制.方法 将纯化的BMSCs诱导为DA前体细胞,免疫荧光染色和流式细胞仪检测TH阳性细胞的表达及百分比.将PD大鼠模型随机分为3组,分别注入诱导、未诱导的BMSCs和生理盐水于模型鼠右侧纹状体区.干预后观察行为学的变化,免疫荧光鉴定以及高效液相色谱检测腑内DA含量的变化.结果 诱导后可见TH阳性细胞,且比例可达10.3%.移植治疗6周后诱导组旋转次数变化多于未诱导组(P<0.05)和生理盐水组(P<0.01);诱导组可见BrdU/TH、BrdU/NSE双标阳性的细胞,未诱导组只见BrdU/GFAP双标细胞;BMSCs诱导组DA脑内含量明显高于未诱导组和生理盐水组(P<0.05),而后两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 BMSCs诱导为DA前体细胞移植治疗PD模型的疗效总体好于未诱导的BMSCs组和生理盐水组.  相似文献   

11.
目的: 研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法: 采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中(分别为过表达组和抑制剂组),并设置miR 阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果: 与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达(P<0.05),而HOXB4在骨肉瘤中高表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞减少(P<0.05)。敲低miR-181a-5p促进骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于S期细胞增加(P<0.05)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因系统验证HOXB4为miR-181a-5p的下游靶基因(P<0.05)。Western blot显示,过表达miR-181a-5p的HOS细胞中,HOXB4蛋白表达低于阳性对照组(P<0.05),而敲低miR-181a-5p的HOS细胞中HOXB4蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论: miR-181a-5p在骨肉瘤细胞中低表达,过表达miR-181a-5p能够抑制骨肉瘤细胞HOS增殖、周期和迁移能力,该作用可能通过靶向HOXB4发挥作用。  相似文献   

12.
目的:探讨TXNDC9基因在结肠直肠癌组织和细胞中的表达,以及沉默TXNDC9高表达后对细胞株SW1116增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:分别应用免疫组织化学技术、免疫印迹法观察TXNDC9在结肠直肠癌组织和细胞中的表达水平:应用小干扰RNA瞬时转染TXNDC9高表达的结肠癌细胞株SW1116,用实时PCR筛选最高效率的干扰片段,并用Western印迹法检测基因沉默效果:最后研究瞬时转染后SW1116细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果:结肠直肠癌组织中TXNDC9的表达明显高于对照的癌旁正常组织(P〈0.01),Western印迹法证实TXNDC9在SW1116、SW620、SW480、Colo205四株细胞中呈高表达,在HCT116和DLD1细胞中表达最少。在成功沉默SW1116细胞中TXNDC9基因的表达后,与两对照组相比,干扰组在72~96 h内细胞增值能力显著下降(P〈0.01),细胞迁移和侵袭能力亦有明显下降(P〈0.01)。结论:TXNDC9在结肠直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常黏膜上皮,并与肿瘤的大小和浸润深度相关,SW1116是TXNDC9基因高表达的细胞株之一,下调TXNDC9表达能显著抑制该细胞的增殖能力、细胞迁移和侵袭能力。TXNDC9基因对维持肿瘤细胞的增殖和运动能力有重要作用,并可能成为抑制肿瘤生长和转移的有效途径。  相似文献   

13.
Cancer of the urinary bladder is the fifth most common cancer in men and the second most urological malignancy in Western society [17], with an incidence rate per year of 29.8/100 000 males. Bladder tumors are distinguished as either invasive or superficial: invasive tumors are generally associated with poor prognosis, while 20–30% of superficial carcinomas recur and progress to become invasive and metastatic [26, 27]. The most common prognostic factors for classification of urothelial cancer are staging and grading, which are based on morphological criteria. In the past decade, however, other criteria have been developed as a possible prognostic aid to better disease management, such as expression of specific cell surface antigens, DNA content, chromosomal aberrations, gene rearrangements and point mutations [26, 7]. Since most tumors of the bladder are carcinomas and are associated with dedifferentiation and high metastatic capability, we investigated whether reduced expression of socalled differentiation factors in combination with increased cell motility might be correlated with tumor progression.  相似文献   

14.
破骨细胞形成过程中的融合与分裂   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
 目的 研究破骨细胞的形成及其特殊细胞生物学行为。方法 采用活细胞成像技术连续动态观察大鼠周围血单核细胞在核因子κB 受体激活物配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子 (macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导下向破骨细胞分化及形成具有骨吸收功能的多核细胞的全过程。采用倒置相差显微镜观察、抗酒石酸酸性磷酸酶染色、骨磨片扫描电镜观察法对破骨细胞进行鉴定。结果 细胞诱导培养2周后,倒置相差显微镜观察可见大量多核细胞形成;抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示绝大部分多核细胞与单核细胞均呈阳性反应;骨磨片扫描电镜观察可见较多的骨吸收陷窝、坑洼、沟道及破骨细胞。活细胞成像观察表明多核破骨细胞是由单核细胞、单核细胞与多核细胞及多核细胞之间相互融合而成,其细胞间的融合均发生在贴壁状态;显微缩时电影观察显示破骨细胞形态复杂多变,多核破骨细胞可以发生分裂。结论 大鼠周围血单核细胞在RANKL和M-CSF诱导下可向破骨细胞分化,形成具有骨吸收功能的破骨细胞。破骨细胞能够通过多种方式融合形成巨大的多核细胞,使其核数增加、体积增大、形态伸缩多变、质膜贴附面积广泛扩展,同时破骨细胞还可通过分裂来缩小体积、减少核数,以适应局部形态学、生物力学及骨吸收动力学的需求。这提示破骨细胞的融合及非有丝分裂方式可能是其发挥功能效应与骨吸收效率的一种特殊细胞生物学行为。  相似文献   

15.
断层皮片成纤维细胞原代培养法   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的在人成纤维细胞的生物学特性观察研究中,进行成纤维细胞的原代培养,以获得足够量的成纤维细胞.方法我们采用整形外科断层取皮技术,使用细胞刮刀,可相对简单获取有活力的成纤维细胞,并应用台盼蓝细胞活力染色排除法进行检测.结果该方法简单、经济可获取足够量的成纤维细胞,使得短期内即可获得大量的传代细胞.1 cm×2 cm的断层皮片可达到的细胞的数量级106左右.结论断层皮片成纤维细胞培养方法,较胰酶消化法和组织块贴壁法有明显的优越性,在进行成纤维细胞移植方面,值得加以推广和应用.  相似文献   

16.
目的:建立一种稳定的成体小鼠卵圆细胞的分离和培养方法。方法:采用喂饲2-乙酰氨基芴(AAF)加2/3肝切除方法诱导肝脏卵圆细胞的增殖。经门静脉灌注消化法和等密度离心法分离卵圆细胞,并在体外进行长期培养。免疫荧光和免疫双标法对培养的卵圆细胞加以鉴定。结果:体外培养的卵圆细胞呈集落样生长,稳定传代并已培养至3个月。免疫荧光和免疫双标法证实培养的细胞为卵圆细胞,并显示该细胞具有分化潜能。结论:该方法是一种稳定的成体小鼠卵圆细胞的分离和培养方法,为肝脏干细胞的相关研究和应用奠定基础。  相似文献   

17.
强骨宝方对体外培养成骨细胞影响的实验研究   总被引:3,自引:3,他引:0  
目的:探讨不同浓度强骨宝方提取液直接添加对体外培养成骨细胞增殖、分化与矿化功能的影响。方法:采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从2只1~2日龄SD乳鼠颅盖骨中分离出成骨细胞,鉴定细胞并传代培养后,分为对照组与4个实验组,实验组分别用终浓度为100、50、10、5μg/ml的强骨宝方提取液加入成骨细胞培养体系,对照组用不含强骨宝方提取液的培养基培养,应用MTT比色法、ALP含量测定、矿化结节形成等分别观察其对成骨细胞增殖、分化及矿化能力的影响。结果:100、50及10μg/ml浓度的强骨宝方提取液均具有促进体外成骨细胞增殖、分化与矿化的作用,以100μg/ml与50μg/ml促进作用最强。结论:每毫升含生药2g的强骨宝方提取液,pH=7.0,50μg/ml的添加浓度可能最适合于体外培养成骨细胞的增殖、分化及矿化成骨能力。  相似文献   

18.
目的 探讨低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响.方法 24 h内新生SD大鼠,断头处死,分离、培养和传代星形胶质细胞,取本室构建的永生化神经前体细胞,根据培养条件的不同分为3组,每组24孔,对照组永生化神经前体细胞在正常培养条件下培养(O2 17%-CO2 5%-N2 78%);共培养组取第三代星形胶质细胞孵育24 h后接种永生化神经前体细胞,培养条件同对照组;低氧/复氧后共培养组取第三代星形胶质细胞,先置入低氧培养箱(O2 2%-CO25%-N2 93%)中孵育12 h后,恢复正常培养条件12 h,再接种永生化神经前体细胞.3组以相同密度接种永生化神经前体细胞(1×104/cm2),隔天半量置换培养基,培养时间为6 d.共培养6 d后每组取6孔,采用免疫荧光细胞化学法,观察共培养后永生化神经前体细胞的增殖与分化情况,计算其增殖倍数、神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率.结果 与对照组和共培养组相比,低氧/复氧后共培养组永生化神经前体细胞增殖倍数升高(P<0.05),神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论 低氧/复氧后星形胶质细胞可促进永生化神经前体细胞增殖,但对其分化无影响.  相似文献   

19.
In the last few years, the demand has increased for research on polymeric materials, which can be used as substitutes for injured tissues and organs or to improve their regeneration. In this work, we studied poly(L-lactic acid) (PLLA) membranes, a resorbable biomaterial, which were either dense or had different pore diameters (less than 45 microm, between 180 and 250 microm, and between 250 and 350 microm), in relation to stimulation of cell adhesion, growth, and differentiation in vitro. We used Vero cells, a fibroblastic cell line, as the biological model of investigation. We found that cells attached slowly to all PLLA membranes studied. On the other hand, once the adhesion occurs, the cells are able to grow and differentiate on the different polymers. The cells grew to form a confluent monolayer and were capable of producing collagen Type IV and fibronectin on different PLLA membranes. This behavior indicates that cells try to create a better environment to stimulate their growth. This also indicates that Vero cells alter their differentiation pattern once they are producing extracellular matrix molecules related to epithelial differentiation.  相似文献   

20.
目的 探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的数量及功能特点.方法 选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例,采用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,用添加牛脑垂体提取物和胎牛血清的M199培基进行体外诱导分化培养.用免疫组化和透射电镜行EPC表型鉴定;采用流式细胞仪计数CD133+/KDR+细胞;采用改良的Boyden小室,黏附能力测定实验和MTT比色法,观察EPC的迁移、黏附及增殖能力.结果 紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞的数量增多[集落记数(14.7±3.1)/100倍视野对(8.2±1.3)/100倍视野;DiIAcldl+/UEA-Ⅰ+细胞数(72.2±9.73)/200倍视野对(51.2±3.83)/200倍视野;CD133+/KDR+细胞百分比(0.66±0.20)%对(0.18±0.08)%,P<0.01],其迁移能力[(140.6±9.24)/200倍视野对(91.84±8.58)/200倍视野]、黏附能力[(149.00±11.58)/200倍视野对(112.6±7.02),200倍视野]及增殖能力(OD值0.34±0.02对0.27±0.01)增强(P<0.01).结论 紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量增多,其迁移、黏附及增殖能力增强.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号