Notch信号转导系统与淋巴细胞发育的研究进展

Notch蛋白及其配体在进化上是保守的信号转导系统,本文阐述了Notch蛋白及其配体在淋巴细胞发育中的重要作用.     

姜黄素对前列腺癌PC3细胞生长及Notchl信号的作用

研究表明Notch信号通路在器官、细胞发育及肿瘤发生等病理生理过程中起重要作用[1].Notch信号通路尤其是Notch1蛋白的表达与前列腺的发育和肿瘤转化密切相关[2-3].我们通过观察姜黄素对PC-3细胞体外增殖、凋亡及Notch1和配体Jagged1表达的影响,探讨其对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的作用.     

Notch1/DLL4信号通路与VEGF在胃癌浸润和转移中的作用及其相关性

目的探讨Notch1和其配体DLL4蛋白在胃癌组织中的表达及其与肿瘤血管转移之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测45例胃癌及25例癌旁正常组织中Notch1,DLL4,VEGF的表达情况,并分析它们与各临床病理参数的关系。结果Notch1,DLL4,VEGF蛋白在胃癌中表达的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。Notch1蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移(P<0.01)及远处转移(P<0.05)有关;DLL4蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度(P<0.01),淋巴结转移及临床分期(P<0.05)有关;VEGF蛋白在胃癌中表达与浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移、远处转移及TNM分期(P<0.05)有关,上述各因素分组间差异有统计学意义。Notch1,DLL4,VEGF蛋白的表达三者两两间均呈正相关关系(rs=0.355,rs=0.367,rs=0.334;均P<0.05)。结论Notch1/DLL4受体通路在胃癌组织中的表达上调与血管内皮生长因子有关,它们可能共同调控肿瘤新生血管形成,参与胃癌的侵袭和转移。     

胃癌组织中Notch1和DLL4蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨Notch1及其配体DLL4在胃癌中的表达及其与各临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测45例胃癌及25例正常胃组织中Notch1和DLL4的表达情况,并分析它们与各临床病理参数的关系.结果 Notch1和DLL4蛋白在胃癌中表达的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P＜0.01);Notch1蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.05)以及远处转移(P＜0.05)有关,DLL4蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.05)以及临床分期有关(P＜0.05);Notch1和DLL4蛋白的表达呈正相关(r=0.355,P<0.05).结论 Notch1和DLL4蛋白在胃癌组织中的表达上调与肿瘤侵袭转移密切相关,可能在胃癌的发生、发展中起重要作用.     

Notch1/DLL4信号通路与VEGF在胃癌浸润和转移中的作用及其相关性

目的：探讨Notch1和其配体DLL4蛋白在胃癌组织中的表达及其与肿瘤血管转移之间的关系。
方法：采用免疫组织化学SP法检测45例胃癌及25例癌旁正常组织中Notch1,DLL4,VEGF的表达情况,并分析它们与各临床病理参数的关系。
结果：Notch1,DLL4,VEGF蛋白在胃癌中表达的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义（P＜0.01）。Notch1蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移（P＜0.01）及远处转移（P＜0.05）有关;DLL4蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度（P＜0.01）,淋巴结转移及临床分期（P＜0.05）有关;VEGF蛋白在胃癌中表达与浸润深度（P＜0.01）、淋巴结转移、远处转移及TNM分期（P＜0.05）有关,上述各因素分组间差异有统计学意义。Notch1,DLL4,VEGF蛋白的表达三者两两间均呈正相关关系（rs=0.355,rs=0.367,rs=0.334;均P＜0.05）。
结论：Notch1/DLL4受体通路在胃癌组织中的表达上调与血管内皮生长因子有关,它们可能共同调控肿瘤新生血管形成,参与胃癌的侵袭和转移。     

阻断Notch信号抑制角质形成细胞的分泌功能的研究

目的:探讨Notch信号对角质形成细胞分泌功能的影响及意义。方法:采用角质形成细胞的血清刺激模型研究Notch信号对其分泌功能的影响。结果:血清刺激可以明显促进Notch受体,配体及下游基因的表达,其中Notch1,Jagged1的表达明显上升并具有时间依赖性,其下游蛋白P21表达升高,并在血清刺激后6h达到高峰,P63表达下降,并在血清刺激后6h,下降幅度最大。此外给予血清刺激后,纤维化相关因子(包括TGF-β1,TGF-β2,I GF-1,CTGF,VEGF及EGF)的表达明显升高,并在12h达到高峰。给予DAPT(N-[N-(3,5-Di fl uorophenancetyl-L-alanyl)]-S-phenylglycinet-butyl ester,γ分泌酶抑制剂)进行Not ch信号阻断后,明显抑制其下游蛋白P21的表达,提高的P63的表达水平,同时抑制了纤维化相关因子的表达。结论:阻断Not ch信号能够明显抑制角质形成细胞分泌纤维化相关因子。     

Notch信号在表皮及皮肤疾病中的研究进展

Notch信号通路是人体重要信号通路,其信号分子在机体内的各个器官中均有表达,其作用涉及细胞周期调节、细胞增殖及凋亡。皮肤作为人体重要的器官,在人的生命活动中一直不断的更新。据近期一系列研究报道,在包括角质形成细胞等多种表皮细胞的表面,Notch及其配体均有大量表达,且特异性的Notch信号活化在维持皮肤细胞自身更新及分化过程中起重要作用。本文就Notch信号在表皮及皮肤疾病中的研究进展和现状综述如下。     

Notch信号通路相关蛋白在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

目的:探讨Notch1、Notch3及Hes1在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及临床意义。方法:收集48例手术切除的原发性GIST组织标本以及48例GIST瘤旁胃肠组织标本,用免疫组化法检测Notch1、Notch3及下游靶基因Hes1蛋白的表达,并分析各蛋白表达与GIST患者临床病理因素的关系。结果:与瘤旁胃肠组织比较,GIST组织中Notch1(58.33%vs.29.17%)、Notch3(97.97%vs.35.47%)、Hes1(35.47%vs.10.42%)蛋白的阳性表达率均明显升高(均P0.05)。将GIST患者按性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及NIH危险分级分组比较各蛋白的表达阳性率,结果显示,Notch1蛋白表达与GIST的NIH危险分级有关(χ2=16.53,P=0.001);Notch3蛋白的表达与以上各因素级均无关(均P0.05);Hes1蛋白表达与GIST的大小有关(χ2=7.78,P=0.02)。结论:Notch信号通路相关蛋白在GIST组织中表达升高,且可能在GIST的发生、发展中起重要作用。     

结直肠癌表观沉默蛋白Bmi1与Notch信号通路调控的关系

目的 探讨人结直肠癌中表观沉默蛋白Bmi1和Notch1的蛋白表达与结直肠癌病理特征的关系,观察Notch通路对结直肠癌细胞增殖凋亡及Bmi1表达的影响。方法 应用免疫组织化学技术(SP法)检测85例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch1及Bmi1的蛋白表达;将Notch1通路中γ-分泌酶抑制剂DAPT,作用于结肠癌SW480细胞株,运用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响,Western blot检测ICN及Bmi1蛋白的表达。结果 结直肠癌组织中Notch1和Bmi1蛋白表达的阳性率明显高于正常肠黏膜(P＜0.05),分别为61.2％ (52/85)对15.3％ (13/85)和56.5％ (48/85)对17.6％ (15/85);Bmi1表达率与Notch1表达率呈正相关(r =0.625,P＜0.01),并与肿瘤分化程度、分期及淋巴结转移有关(P＜0.05);阻断Notch1通路(DAPT)可抑制SW480细胞的增殖,诱导其凋亡,作用12、24、36 h后其增殖抑制率分别为13.1％、17.5及22.6％,而凋亡率为32.7％、45.6％及67.2％;同时Notch1胞内活性段ICN随作用时间延长而下降,而Bmi1表达水平也逐渐降低。结论 结直肠癌中Bmi1与Notch1表达密切相关,阻断Notch通路可抑制Bmi1表达,同时可抑制结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

微小RNA-195靶向调控Delta样配体4抗结直肠癌分子机制研究

目的观察微小RNA(microRNA,miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达,探讨其作用靶点,明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本,3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量,应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll43’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性,采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480,运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA),独立样本t检验比较蛋白表达量差异,统计学方法分别采用独立样本t检验、配对样本t检验及单因素方差分析。结果结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜,而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜,分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003)(t=3.116、2.374,P<0.05),差异均有统计学意义,体外转入miR-195后,Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002,t=4.305,P<0.01),差异有统计学意义,miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路,抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%,t=4.232,P<0.01),差异有统计学意义,诱导其凋亡(13.7%比48.3%,t=8.355,P<0.01),两者具有协同作用(t=7.474,P<0.01),差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。结论结直肠癌中miR-195及Dll4呈拮抗性表达,与其病理学特征密切相关,Dll4为miR-195调控的下游靶基因,miR-195通过负性调控Dll4/Notch信号通路抗结直肠癌。     

Notch信号在骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞过程中的表达

目的 探讨Notch信号在骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞过程中的调控作用.方法 分离培养犬BMSCs,并用流式细胞仪鉴定,观察其增殖及传代情况.将BMSCs分为实验组与对照组,实验组将BMSCs诱导分化为成骨细胞,未诱导分化的BMSCs为对照组,用RT-PCR及Western-blot方法等检测BMSCs分化为成骨细胞的情况,以及Notch信号蛋白的表达情况.结果 流式细胞仪鉴定BMSCs表面标记CD29,茜素红染色及RT-PCR显示诱导分化为成骨细胞,Western-blot显示实验组有Notch信号蛋白的表达,随着分化时间的延长而增强,而对照组表达微弱.结论 BMSCs在分化为成骨细胞过程中Notch信号蛋白的表达增强.     

Notch信号通路和Notch相关疾病

Notch信号通路是一条进化上十分保守的信号转导系统。Notch受体通过与配体的相互作用转导细胞信号。从而在细胞增殖、分化、凋亡中发挥重要的调控作用。Notch信号通路中某些分子的基因突变与多种疾病的发生发展有关。如肿瘤、遗传性疾病、自身免疫性疾病等。另外,Notch信号通路在同一疾病的不同类型载不同发展阶段起的作用也不尽相同。     

苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞的影响

目的 研究苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞系WBF-344细胞的增殖及AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.方法 用MTT法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞增殖的影响,免疫细胞化学及RT-PCR方法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.结果 5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清作用于WBF-344细胞24 h、48 h、72 h均有不同程度的抑制增殖作用,且存在时间、剂量依赖性.正常培养WB-F344细胞有少量AFP、Notch1蛋白和mRNA表达,肝癌前病变模型组血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达上调,苦参碱含药血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达较模型组血清AFP、Notch1蛋白和mRNA表达下调. 结论肝癌前病变模型组血清可能具有诱导WBF-344细胞向肝癌细胞方向分化的作用,苦参碱含药血清可逆转此作用,以上作用与调节Notch1表达关系密切.     

Notch信号转导通路对软骨发育分化的影响

Notch信号转导通路广泛存在于多种动物细胞中,对调节细胞的增殖、存活、分化和凋亡等过程有重要意义,其受体和配体都是跨膜蛋白,因此是介导细胞间通讯的一种重要方式。软骨的分化发育起始自间充质细胞的凝集,Notch家族在软骨形成过程中的表达呈多样性,并对软骨的发育分化呈现时间和空间的调控。在此就Notch信号转导通路的组成、分布、转导机制及其对软骨分化发育的影响进行综述。     

结直肠癌Dll-1/Notch信号传导通路的研究

目的 研究Dll-1/Notchl信号传导通路与结直肠癌病理学特征的关系,明确此通路对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用固定化蛋白质印迹法检测63例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Dll-1及Notch1蛋白表达;用Notch1通路中γ-分泌酶抑制剂DAPT作用于结肠癌细胞系SW480,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响,固定化蛋白质印迹法检测Notch1胞内活性段及其靶基因产物Hes-1和Bcl-2蛋白的表达.分别采用独立样本t检验、配对样本t检验及单因素方差分析.结果 结直肠癌组织中Notch1和Dll-1蛋白表达水平分别高于正常肠黏膜的1.75及2.21倍(t=2.554,P=0.012及t=3.565,P=0.005);二者表达与肿瘤分化程度(t =2.463,P=0.017及t=2.390,P=0.019)、分期(t=2.675,P=0.007及f=2.310,P=0.021)及淋巴结转移(t =2.229,P=0.021及t=2.210,P=0.023)有关.用γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch1通路可抑制SW480细胞的增殖,诱导其凋亡;同时NICD和Bcl-2的表达水平随作用时间延长而降低.结论 Dll-1及Notch1的高表达与结直肠癌病理学特征密切相关,阻断Notch1通路可抑制Bcl-2表达,同时可抑制结肠癌细胞的增殖,并诱导其凋亡.     

Delta样配体4与肿瘤血管生成的研究进展

Delta样配体4(DU4)是新近发现的Notch受体的一个配体,在肿瘤血管中高表达,对肿瘤的血管生成起负调控的作用.阻断D114/Notch信号通路可以使肿瘤血管生成增加,但是由于新生的血管血液灌注不良,肿瘤的生长反而受到抑制,并且对VEGF信号通路阻断无效的患者也具有抗肿瘤的作用,从而使DIM成为针对肿瘤血管生成的抗肿瘤治疗的新靶点.     

乏氧与Notch通路在骨肉瘤表达及耐药作用的研究

[目的]检测乏氧和Notch通路相关蛋白在人骨肉瘤标本组织中的表达情况,并采用MG-63细胞实验研究多种相关蛋白参与骨肉瘤化疗的耐药机制。[方法]免疫组织化学方法检测HIF-1α、Notch1、MDR1/P-gp、MRP1蛋白在骨肉瘤及骨软骨瘤临床标本组织中表达情况。采用Notch si RNA转染乏氧环境中的MG-63细胞,Western blot检测相关蛋白表达情况,MTT方法检测细胞化疗药物敏感性的影响。[结果]骨肉瘤组织中HIF-1α、Notch1、MDR1/P-gp、MRP1蛋白的阳性表达率均显著高于骨软骨瘤组织,差异有统计学意义(P0.05)。HIF-1α与Notch1之间,Notch1与MRP1之间,以及HIF-1α与MRP1之间存在显著正相关(P0.05),而MDR1/P-gp与其他三种蛋白表达无相关性(P0.05)。乏氧状态下MG-63细胞对顺铂、阿霉素、甲氨蝶呤或异环磷酰胺的半数抑制浓度IC50显著高于常氧状态,差异有统计学意义(P0.05)。而乏氧环境Notch1 si RNA转染的MG-63细胞对顺铂、阿霉素、甲氨蝶呤或异环磷酰胺的半数抑制浓度IC50显著降低,差异有统计学意义(P0.05),且Notch1-ICN和MRP1蛋白表达水平明显降低。[结论]骨肉瘤组织中HIF-1α、Notch1、MDR1/P-gp、MRP1蛋白的阳性表达率高于骨软骨瘤。乏氧条件下MG-63细胞对多种化疗药物呈耐药性,阻断Notch1可逆转乏氧诱导的骨肉瘤细胞多药耐药,提示Notch1是治疗骨肉瘤耐药的有效分子靶点。     

Delta样配体4与肿瘤血管生成的研究进展

Delta样配体4(Dll4)是新近发现的Notch受体的一个配体,在肿瘤血管中高表达,对肿瘤的血管生成起负调控的作用.阻断Dll4/Notch信号通路可以使肿瘤血管生成增加,但是由于新生的血管血液灌注不良,肿瘤的生长反而受到抑制,并且对血管内皮生长因子信号通路阻断无效的患者也具有抗肿瘤的作用,从而使Dll4成为针对肿瘤血管生成的抗肿瘤治疗的新靶点.     

Notch1和Jagged1表达与肾透明细胞癌发病及预后

目的:探讨肾透明细胞癌Notch1与Jagged1的表达及意义。方法:应用Western blot和免疫组化染色法,检测肾透明细胞癌及正常肾组织中Notch1、Jagged1的蛋白表达,分析两者与临床病理参数的相关性。随访肾透明细胞患者术后情况,分析Notch1、Jagged1蛋白的表达水平与预后的关系。结果:肾透明细胞癌组织中Notch1、Jagged1的阳性表达率高于正常肾组织(分别为95.3%比36.4%,P<0.05;93.0%比42.4%,P<0.05),Notch1和Jagged1的表达水平与肾癌的病理分级、临床分期和肿瘤的大小均有关。结论:Notch1和Jagged1高表达可能在肾透明细胞癌发生发展中发挥作用,Notch1和Jagged1表达水平对肾透明细胞癌预后判断具有一定价值。     

Notch信号通路在胃癌组织中的表达及其意义

目的 探讨Notch信号通路在胃癌组织中的表达及意义.方法 收集北京大学人民医院胃癌及正常胃黏膜组织标本63例,采用组织芯片免疫组化技术检测胃癌组织与正常胃黏膜中Notch信号通路相关蛋白的表达,分析这些蛋白与胃癌各临床病理指标之间的关系.结果 本组63例胃癌组织中Notch信号相关蛋白Notchl、Jaggedl、Deltal和NFKB的表达水平(分别为37%、29%、14%、27%)明显高于正常胃黏膜组织(分别为5%、2%、3%、2%)(P值均＜0.01).胃癌组织中Notchl蛋白的表达与胃癌的分化程度有关(X2=3.944,P＜0.05).胃癌组织中Jaggedl蛋白的表达与NFKB的表达相关(r=0.486,P＜0.01).结论 Notchl信号通路过表达可能参与胃黏膜的癌变过程,而且Notchl的表达与胃癌恶性程度负相关,表明Notch信号通路在胃癌组织中的双重效应.