人肋软骨细胞体外培养中生长代谢及功能的变化

目的　通过检测体外培养的人肋软骨细胞老化过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(aggrecan)的表达变化 ,为组织工程软骨构建的种子细胞选择适宜的回植时机。方法　取体外培养的P1 ～P5人肋软骨细胞 ,通过观察细胞形态 ,细胞增殖率 ,Alcianblue法定量检测每代Aggrecan中GAG含量 ,免疫组化蛋白水平观察Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及RT PCR从mRNA水平分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达量。结果　人肋软骨细胞从第 3代起逐渐向成纤维样细胞形态转换 ;每代软骨细胞Aggrecan中GAG含量随传代次数逐渐降低 ,第 3代后处于较低水平 ;Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达在蛋白水平及mRNA水平基本一致 ,第 2代以前Ⅱ型胶原表达较强 ,Ⅰ型胶原表达较弱 ,之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱 ,Ⅰ型胶原表达逐渐增强 ;而Aggrecan在第 3代以前表达较高 ,从第 4代后明显下降。结论　人软骨细胞体外培养老化过程中综合细胞扩增及细胞功能因素 ,第 2代的软骨细胞 (体外扩增约 18 32 6倍 )可作为构建人组织工程软骨的种子细胞。     

人骨髓间充质干细胞向软骨细胞定向分化的研究

目的探讨体外单层培养中诱导人骨髓间充质干细胞(Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,hBMSCs)向软骨细胞定向分化的条件.方法采集志愿者骨髓3例,分离培养BMSCs,流式细胞仪分析表面标志.用含TGF-β1的无血清诱导培养基培养7d后,分别行Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交检测,碱性磷酸酶染色,3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入实验检测细胞的增殖情况.结果培养的BMSCs表达CD9,而CD34、CD38、CD45、CD61呈阴性.细胞经诱导培养7d后免疫组化、原位杂交可检测到Ⅱ型胶原的表达,碱性磷酸酶染色呈弱阳性,但细胞3H-TdR掺入量低于对照组(P<0.05).结论BMSCs在特定的诱导下能向软骨细胞方向分化,但在无血清培养基中无法有效的增殖.     

地塞米松与TGFβ1对骨髓基质细胞增殖、分化及代谢的影响

目的　明确地塞米松与转化生长因子 β1对骨髓基质细胞增殖代谢及向软骨细胞分化的影响 ,为应用骨髓基质细胞构建组织工程化软骨提供技术参数。方法　抽取猪股骨骨髓 ,分离有核细胞 ,体外培养扩增并分别加入地塞米松 (40ng/ml)或地塞米松 (40ng/ml)与转化生长因子β1(10ng/ml)联合诱导。通过细胞计数及MTT法检测不同诱导因子对骨髓基质细胞增殖的影响 ,透射电镜观察不同诱导组细胞代谢功能的变化 ,免疫组化、原位杂交、RT -PCR及Northernblott等检测Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达量的差异。结果　加入地塞米松后细胞增殖能力受到轻度抑制 ,而同时加入地塞米松与转化生长因子 β1后 ,细胞生长明显受抑制。电镜下可见随诱导因子的增加 ,细胞变得肥大 ,细胞器丰富 ,功能活跃。Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达在联合诱导组明显增强 ,且随诱导时间的延长 ,Ⅱ型胶原mRNA表达量也显著增加 (P <0 .0 1)。结论　地塞米松与转化生长因子β1能有效地诱导骨髓基质细胞表达软骨细胞特征性蛋白 ,但对细胞的增殖及代谢也产生明显的影响 ,在骨髓基质细胞构建组织工程化软骨时 ,应充分调整好诱导与增殖的关系     

TGF-β2转染关节软骨细胞的实验研究

目的 观察人关节软骨细胞在体外单层培养过程中的去分化，以及转染TGF-β2在关节软骨细胞内的表达和对去分化的抑制作用。方法 从手术中切除的软骨组织中分离培养成人关节软骨细胞，通过脂质体介导的方法将已构建的pcDNA3.1( )/TGF-β2转染到体外单层培养的软骨细胞中，采用RT-PCR，ELISA、组织学染色、免疫组化和原位杂交的方法．分别对转染组和未转染组的第1、6、9代细胞进行检测，比较目的基因表达、软骨细胞形态以及胶原和多糖生物合成的差异．结果 经多次传代后，未转染软骨细胞在体外单层培养过程中逐渐走向去分化．TGF-β2、Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体的表达逐渐减低．而Ⅰ型胶原的表达增高，目的基因在转染组各代软骨细胞内均得到表达，转染后细胞保持软骨细胞的形态，Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体表达虽有降低．但均高于未转染的同代细胞，而Ⅰ型胶原表达增高的程度低于未转染细胞。结论 人关节软骨细胞在体外单层培养中有去分化趋势；pcDNA3.1( )/TGF-β2真核表达载体转染人关节软骨细胞获得成功．在转染后关节软骨细胞内稳定表达．并对软骨细胞的去分化有抑制作用。     

软骨细胞与骨髓基质细胞共培养裸鼠体内构建软骨组织的实验研究

目的：探讨软骨细胞在裸鼠体内促进骨髓基质细胞（BMSCs）向软骨分化并形成软骨组织的可行性。方法：从SD大鼠中分别分离出BMSC和软骨细胞进行体外培养。收集软骨细胞培养上清液,作为BMSCs诱导液从第2代开始进行诱导分化,7天后取出标本,免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA表达。SD大鼠BMSCs与软骨细胞按一定比例（7：3）混匀,取5.0×107个混合细胞/ml的各组细胞悬液接种至壳聚糖生物材料,体外培养一周后植入裸鼠皮下,相同数量的单纯软骨细胞或BMSCs同样方法植入,分别作为阳性对照及阴性对照,1.5×107个软骨细胞同样植入作为低浓度软骨细胞对照。各组均8周后取材检测。结果：经诱导后的大鼠BMSCs的Ⅱ型胶原免疫组化检测阳性,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecanmRNA呈阳性表达;混合细胞组及阳性对照组均形成了成熟的软骨,组织学可见成熟软骨陷窝、异染基质及Ⅱ型胶原表达;BMSCs组仅形成了纤维性组织;低浓度软骨细胞组在局部形成了少量软骨。结论：软骨细胞能在一定程度上提供软骨形成的微环境,诱导BMSCs在裸鼠体内向软骨组织分化并形成软骨组织。 还原     

骨形态发生蛋白对体外培养胎儿关节软骨细胞胶原基因表达的影响及意义

为了解骨形态发生蛋白对关节软骨细胞的作用特点及意义，本研究用部分纯化的牛骨形态发生蛋白（ｂＢＭＰ）对胎儿关节软骨细胞进行诱导，并用人Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的前胶原ｃＤＮＡ探针对被诱导关节软骨细胞进行原位杂交。结果发现，ｂＢＭＰ可明显增加被诱导软骨细胞中Ⅰ型胶原的表达，中断Ⅱ型胶原的表达，并轻度增加软骨细胞中Ⅲ型胶原的表达，但对Ⅳ型胶原的表达影响不大。本研究认为，ｂＢＭＰ诱导的软骨细胞胶原基因表达的这种改变是软骨细胞在向成骨细胞样细胞方向分化的标志。     

骨髓间质干细胞向软骨细胞表型定向诱导分化的实验研究

目的 研究体外培养的猪骨髓间质干细胞（Bone Marrow Stem Cells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化，探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法 取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓5ml，在低糖DMEM完全培养液培养2周，传代后以高糖DMEM无血清特定培养液诱导（含胰岛素2mg/L、转铁蛋白3mg/L、丙酮酸100mg/L、地塞米松10^-7mol/L、TGF－β1 10ng/ml)，在相关显微镜和电镜下进行观察，免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌，原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果 细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形转变，透视电镜观察见大量扩张粗面内质网、高尔基体、线粒体。诱导培养后第7，14dⅡ型胶原免疫组化阳性，同时原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达呈阳性。结论 MSCs在特定培养液诱导下能向软骨细胞表型转化，并能分泌软膏特异性基质，有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源的应用前景。     

几丁质支架对体外间质干细胞成软骨分化的影响

目的鉴定间充质干细胞诱导分化为软骨细胞后,其在单层培养和几丁质支架上培养的差别。方法密度梯度离心兔股骨骨髓,分离BMSCs,用TGF-β1诱导第3代的BMSCs向软骨方向分化,2周后检测Ⅱ型胶原表达情况。将分化后的软骨样细胞传代,用无TGF-β1的培养基分别进行单层培养和接种在几丁质支架上培养2周,再用免疫组化检测Ⅱ型胶原表达情况。结果BMSCs经TGF-β1诱导后向软骨细胞方向分化,诱导后的细胞在无TGF-β1的培养中,采用单层培养方式的软骨细胞很快出现去分化表型,而接种在几丁质支架上的细胞仍能较好表达Ⅱ型胶原。结论几丁质支架在延缓软骨细胞去分化和老化方面有积极作用。     

两种诱导方法对去分化软骨细胞Ⅱ型胶原的诱导

目的：用两种不同的诱导方法使去分化的永生化软骨细胞第50代重新表达软骨细胞的Ⅱ型胶原标志性表型。方法：利用NA无血清诱导培养法以及离心管聚集体诱导培养法分别诱导培养去分化的永生化人关节软骨细胞第50代，继用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组化染色、Ⅱ型胶原的RT-PCR检测、胶原定量检测该永生化软骨细胞的Ⅱ型胶原表型表达情况。结果：NA无血清诱导培养法和离心管聚集体诱导培养法均能成功诱导去分化永生化人关节软骨细胞的Ⅱ型胶原表达，但二者促进Ⅱ型胶原分泌并无显著差异。结论：去分化永生化人关节软骨细胞可以经不同的诱导方法而重新表达Ⅱ型胶原表型，无血清诱导培养基与离心管聚集体培养法都能使Ⅱ型胶原重新表达。     

脂肪基质干细胞培养及其定向分化为成骨细胞、软骨细胞特性的研究

目的研究脂肪基质干细胞（adipose—derived stem cells，ADSCs）分离培养的方法，探讨大鼠ADSCs在体外向成骨细胞、软骨细胞分化的能力。方法从成年SD大鼠腹股沟处无菌获取脂肪组织，胶原酶消化分离，培养出ADSCs。基础培养基传至第二代时改换诱导培养基，分别诱导向成骨、软骨细胞分化，培养2～4周，碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、Vonkossa染色鉴定向成骨细胞分化能力；阿新蓝染色鉴定向软骨细胞分化能力。RT—PCR检测成骨细胞、软骨细胞标志基因。结果大鼠脂肪能够分离培养出生长旺盛的ADSCs；向成骨细胞诱导，ALP、Vonkossa染色阳性，RT—PCR检测有ALP、Osteocalcin及Osteopontin表达；向软骨细胞诱导，阿新蓝染色阳性，RT—PCR检测有Ⅱ型胶原、X型胶原和Aggreean表达。结论大鼠脂肪组织可以分离培养出ADSCs，生物学特性与骨髓基质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs）相似，能够向成骨细胞、软骨细胞分化，有希望成为组织工程理想的种子细胞来源。     

2015年乳腺癌辅助化疗进展

【摘要】〓乳腺癌是危害我国女性健康的头号杀手,尽管近年来辅助化疗的研究进展突飞猛进,但临床中仍有不少问题未能明确,如辅助化疗的合适人群、化疗的开始时间、蒽环及紫杉类的地位和用法、强化维持治疗的作用、疗效及预后的生物标志物等。本文结合乳腺癌辅助化疗在临床上的常见问题和2015年各大乳腺癌会议阐述乳腺癌辅助化疗的最新进展。     

Alterations in T-Cell Subset Frequency in Peripheral Blood in Obesity

Background: Obesity affects the regulation of immune and inflammatory responses. This study characterizes differences in peripheral blood lymphocyte phenotype in obese humans. Methods: Frequencies of lymphocyte subsets among peripheral blood mononuclear cells were compared between 10 obese (BMI ≥35) and 10 lean subjects, as determined by antibodies directed against cluster differentiation (CD) markers. Results: Obese patients demonstrated an increased frequency of CD3+CD4+ T-cells (mean difference 12%, P=0.004), a decreased frequency of CD3+CD8+ T-cells (mean difference 9.4%, P=0.016) and an increased frequency of CD3+CD8+CD95+ T-cells (mean difference 13.3%, P=0.032). No other differences among T-cell or monocyte subsets were noted. Conclusions: Obesity is associated with alterations in frequencies of peripheral CD4+ and CD8+ T-cells and aberrations in the expression of CD95 among CD8+ T-cells. These data suggest both CD4+ and CD8+ T-cell compartments, as well as the regulation of CD95 expression on CD8+ T-cells, as targets for further study into obesity's effects on the immune system.     

β-半乳糖苷酶在体内外成骨细胞中的表达

目的 研究β—半乳糖苷酶(β—gal)在成骨细胞中的表达状况，为阐明MorquioB综合征的发病机制提供依据。方法 裸鼠各器官和骨组织标本行X-gal染色检测。抽取羊和人骨髓行骨髓基质细胞(BMSCs)培养，分为4组：I：Adv-hBMP-2转染组；Ⅱ：Adv—β—gal转染组；Ⅲ：未转染组；Ⅳ：地塞米松诱导组。分别行X-gal染色和RT-PCR检测β—gal的表达。结果 裸鼠骺板两侧、骨膜内面及松质骨的成骨细胞和破骨细胞可见多量β—gal的表达。未转染BMSCs组有少量β—gal的表达，其他3组细胞的β—gal表达增高。结论成骨细胞和破骨细胞可表达多量β—gal，该两种细胞的β—gal缺乏可能是MorquioB综合征骨骼异常的直接原因。     

西宁地区烧伤病人动脉血气分析观察

对高海拔地区的27例烧伤病人动脉血气变化进行了分析和观察。结果证明:无论是存活病人还是死亡病人伤后均存在有低氧血症问题。并且在死亡病人和烧伤合并吸入性损伤病人其低氧血症的发生早于单纯烧伤病人。提示:吸入性损伤病人应立即行气管切开术以保障氧气供给,单纯烧伤病人可常规吸氧以维持正常血 PaO_2,ARDS 均发生在合并吸入性损伤的病人,高频喷射通气技术对纠正低氧血症有一定效果。     

Controversies in Fistula in Ano

Managing a complex fistula in ano can be a daunting task for most surgeons; largely due to the two major dreaded complications—recurrence & fecal incontinence. It is important to understand the anatomy of the anal sphincters & the aetiopathological process of the disease to provide better patient care. There are quite a few controversies associated with fistula in ano & its management, which compound the difficulty in treating fistula in ano. This article attempts to clear some of those major controversies.     

Single center experience in single-incision laparoscopic surgery in children in Turkey

Purpose

Minimally invasive surgery has evolved into single-incision laparoscopic surgery (SILS) in the recent years. Few reports have addressed the practicality of SILS in children. Our current experience with regard to feasibility and effectiveness of SILS in children is presented.

Methods

A retrospective review of the operative database for patients operated on using SILS in our department from March 2009 to July 2010 was performed. Data regarding the type of the procedure, age, sex, operative performance, hospital stay, and complications were collected.

Main Results

Among 43 patients, cholecystectomy was performed in 11; appendectomy, in 10; unroofing for ovarian cysts, in 5; unroofing for splenic cysts, in 4; oophorectomy, in 6 (ovarian torsion, 2; teratoma, 4); ovary-preserving teratoma excision, in 1; splenectomy, in 1; gonadectomy, in 3; and varicocelectomy, in 2. There were no conversions to standard laparoscopic or open techniques. The only postoperative complication was a wound infection that occurred after an appendectomy.

Conclusion

Although currently more expensive, SILS can be performed in children in almost every pediatric surgical procedure that can be accomplished with conventional laparoscopic techniques. The most significant contribution of SILS procedure is cosmesis. Postoperative pain and length of hospital stay were not improved.     

Changes in alkaline phosphatase activity in periosteal cells in healing fractures

The quantitative changes in alkaline phosphatase activity in the periosteal cells close to the fracture in rat metatarsal bones has been measured during the first 5 days postfracture. This study has been made possible by two technological advances, firstly the development of cryostat microtomy for cutting unfixed, undemineralised bone, and secondly the use of scanning and integrating microdensitometry for quantifying the activity in each periosteal cell. The results showed a loss of alkaline phosphatase activity close to the fracture site, with activity rising to normal values 0.8–1.0 mm from the site. No alkaline phosphatase activity was found in the cells which proliferated from the periosteum. It is suggested that reduced glutathione could cause such inhibition.     

不同体位时健康志愿者脑血液动力学的变化

目的 探讨不同体位时健康志愿者脑血液动力学的变化.方法 60名右利手男性健康志愿者,年龄22～ 26岁,身高167～ 178 cm,体重51～67 kg,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=15):头低15°组(Ⅰ组)、头低30°组(Ⅱ组)、头高15°组(Ⅲ组)和头高30°组(Ⅳ组).采用经颅多普勒技术监测右侧大脑中动脉(MCA)和颈内动脉颅外段(EICA)血流信号,分别于平卧位(基础状态)、体位改变即刻(T1)、10 min(T2)和30 min(T3)时记录收缩期血流速度(Vs)、舒张期血流速度(Vd)、平均血流速度(Vm)、搏动指数(PI)和阻力指数(RI),并计算Lindegaard指数.结果 与基础值比较,Ⅱ组在T2时Lindegaard指数升高,在T2,3时MCA的Vs和Vm降低,Ⅳ组在T2时MCA的Vs降低,在T2,3时MCA的Vd和Vm降低,T2时EICA的PI降低(P＜0.05),其他2组各时点上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 健康成人在头低30°和头高30°时脑血流速度降低,而头低15°和头高15°时脑血流速度没有变化.