洛伐他汀对ADPKD成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因启动子活性的影响

目的观察洛伐他汀对人常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）肾间质成纤维细胞细胞外基质（ECM）表达及Ⅰ型胶原（COLⅠ）α1基因启动子活性的影响。方法用不同浓度的洛伐他汀和香叶基香叶基焦磷酸（GGPP）处理培养的ADPKD肾间质成纤维细胞，24或48h后，用放免法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原，ELⅠSA法检测α1（Ⅰ）胶原基因启动子活性。结果ADPKD肾间质成纤维细胞经1～50μmol／L洛伐他汀处理48h后，Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原分泌受到明显抑制，呈剂量依赖性关系；抑制COLⅠα1基因启动子活性。GGPP能明显逆转洛伐他汀的上述作用。但洛伐他汀对Ⅲ型前胶原分泌无任何作用。结论洛伐他汀可能通过干预甲羟戊酸途径，降低COLⅠα1基因启动子活性，从而减少ECM合成。     

Cyr61在常染色体显性多囊肾病患者肾组织中的表达及其意义

目的 观察富含半胱氨酸61蛋白(Cyr 61)在正常人和常染色体显性多囊肾病(ADPKD)患者肾组织中的不同表达,探讨其在多囊肾病的发病中的作用。方法 采用免疫组化及Western印迹方法分析ADPKD患者肾囊肿组织中Cyr 61的细胞定位及其在体液和细胞中的表达含量。应用荧光定量PCR技术检测Cyr61、Ⅰ型、Ⅳ型胶原(Col Ⅰ、Ⅳ)和层粘连蛋白(LN)的基因表达。结果 Cvr61在正常肾小管上皮细胞中有微弱表达。ADPKD患者肾组织中Cyr61含量明显增高,主要在囊肿衬里上皮细胞和残存的正常肾小管上皮细胞中表达。多囊肾组织中Cyr61与Col Ⅰ、ColⅣ、LN的mRNA表达都明显增高,且ColⅣ明显高于Col Ⅰ。正常人尿液未检测到Cyr61,而ADPKD尿液中可检测到Cyr61,其血清中Cyr61水平约为尿液的2倍。结论 Cyr61在ADPKD囊肿组织过度表达,可能通过促进细胞外基质成分改变参与ADPKD囊肿形成和发展。     

丹参酮ⅡA对肾成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的研究丹参酮ⅡA（TSN）对结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的作用，探讨TSN抗肾纤维化的可能机制。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株NRK／49F，分别以2．5、5．0、10ng／ml CTGF刺激细胞；或先用不同浓度（10^-6、10^-5、10^-4mol／L）TSN预处理再以5ng／ml CTGF刺激细胞。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖情况，酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养液中Ⅰ、Ⅳ型胶原含量。结果CTGF在一定范围内以剂量依赖方式诱导NRK／49F细胞增殖及胶原合成。不同浓度TSN预处理的作用强度有所不同：10^-6mol／LTSN预处理后，细胞增殖和Ⅰ、Ⅳ型胶原合成几乎不受影响；10^-5和10^-4mol／LTSN预处理后，细胞增殖率分别降低31．82％、40．91％，Ⅰ型胶原含量下降36．10％、54．13％，Ⅳ型胶原含量下降29．73％、49．15％。结论TSN抗肾纤维化作用可能与其抑制CTGF诱导的肾间质成纤维细胞增殖和细胞外基质（ECM）的合成有关。     

常染色体显性遗传型多囊肾病肾组织中细胞外基质和多囊蛋白-1的表达

目的：研究常染色体显性遗传型多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）肾组织中细胞外基质和多囊蛋白－１的表达及与囊肿发生的关系。方法采用标准ＥｎＶｉｓｉｏｎ免疫组织化学方法,分别检测了多囊蛋白－１,纤连蛋白、层连蛋白、Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原在正常肾组织、胎肾组织和多囊肾组织中的分布和量的变化。结果在ＡＤＰＫＤ囊肿肾组织中,这４种细胞外基质表达均明显增强,同时可见基底膜明显不规则增厚。纤维蛋白,层连蛋白和Ⅳ型胶原位于囊肿的     

良性前列腺增生组织细胞外基质的研究

利用组织化学和免疫组织化学的方法系统地观察了细胞外基质成分Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和纤维粘连蛋白在正常前列腺和良性前列腺增生组织中的分布情况。结合计算机辅助图像分析方法对其表达量进行定量分析。结果表明，Ⅰ、Ⅲ型胶原主要分布于前列腺组织的间质部分，纤维粘连蛋白（ＦＮ）和Ⅳ型胶原除呈线状分布于基底膜外，间质中亦可见较多的ＦＮ和Ⅳ型胶原的表达。Ⅳ型胶原和ＦＮ在正常前列腺组织中的相对含量分别为０．１０１±０．０３１和０．０８６±０．０２７，它们在ＢＰＨ组织中的相对含量则分别为０．１６５±０．０３４和０．１１０±０．０２２，两组之间有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。     

肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠HGF调节的作用

目的:观察中药复方肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠肾组织肝细胞生长因子(HGF)蛋白表达的调节及其抗肾间质纤维化的机制。方法:将60只小鼠随机分为:假手术组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组、苯那普利组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,术后7d观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化检测肾组织HGF、TGF-β1、MMP-9蛋白,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果:中药高剂量组和苯那普利组较模型组小鼠肾组织HGF、MMP-9蛋白表达均增强,TGF-β1蛋白表达减弱,而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、FN生成减少,两组无统计学差异,而HGF表达与TGF-β1表达呈明显负相关性。结论:肾衰泄浊汤可能是通过诱导HGF表达,抑制TGF-β1表达,促使肾组织分泌更多MMP-9,抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN等ECM的过度沉积,加强肾保护作用,对抗肾间质纤维化。     

和解聚散方对单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠细胞外基质表达的影响

目的:研究和解聚散方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)表达的影响.方法:...     

转化生长因子β1诱导肾间质成纤维细胞表型转化及其对结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）诱导大鼠正常肾间质成纤维细胞（NRK-49F）表型转化过程中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的变化.方法 以不同浓度的TGF-β1（0、0.5、1、2、5、10 ng/ml）刺激NRK-49F细胞,分别应用MTT比色法、Western Blot、Northern Blot方法,检测TGF-β1刺激后肾间质成纤维细胞的增殖、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRAN的表达、细胞表型标志物α-SMA mRNA及蛋白质表达、CTGFmRNA的表达变化.结果 1 ng/ml浓度以上TGF-β1能显著促进NRK-49F细胞增殖,上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平,诱导肌成纤维细胞表型标志α-SMA mRNA及蛋白质的表达,显著上调CTGF mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.05）;以上效应均呈浓度依赖性.同时CTGF mRNA表达水平的增高与细胞表型转化的程度相一致.结论 TGF β1能诱导肾间质成纤维细胞发生表型转化,并促进了细胞增殖及细胞外基质的合成;该效应与TGF β1显著上调CTGF的基因表达一致.     

氧化苦参碱通过TGF-β-Smad信号通路调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及功能

目的 研究氧化苦参碱(OM)对人增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖、α平滑肌肌动蛋白(α-SM-Actin),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,以及对Smad3和Smad7蛋白表达量的影响,探讨OM对HS成纤维细胞抑制作用的可能机制.方法 体外常规培养HS成纤维细胞,CCK-8检测不同浓度OM对细胞增殖的抑制情况;real-time PCR检测α-SM-Actin、Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达;Western blotting检测Smad3和Smad7蛋白量的改变.结果 OM干预后成纤维细胞增殖明显受抑制,抑制率呈现OM浓度依赖性.OM浓度为400 mg/L时,抑制率为53.44%;Ⅰ、Ⅲ型胶原及α-SM-Actin的mRNA相对表达量均明显低于无OM干预组细胞;Smad3蛋白表达下降了48.16%,而Smad7蛋白表达量增加了55.24%.结论 OM作用于HS成纤维细胞可产生抑制效应,其部分机制是通过TGF-β-Smad信号通路的负性调节,实现对细胞的胶原合成及收缩功能的抑制.     

尿Ⅳ型胶原浓度与IgA肾病肾组织损害的关系

目的:观察IgA肾病(IgAN)患者尿Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)浓度及其与肾组织Col-Ⅳ表达和肾脏病理之间的关系,以期寻找一种能反映IgAN肾损害的非创伤性临床检测指标.方法:ELISA法测定IgAN患者血、尿Col-Ⅳ浓度;免疫组化法检测肾组织Col-Ⅳ表达;应用计算机病理图像分析系统对肾小球基质基底膜面密度、小球细胞个数及肾小管间质病变程度进行半定量分析,观察尿Col-Ⅳ浓度与IgAN患者肾组织Col-Ⅳ表达及肾病理损伤的关系.结果:IgAN患者尿Col-Ⅳ浓度、肾组织Col-Ⅳ表达较健康人明显增高,尤其是增生硬化和间质纤维化显著者更为明显;尿Col-Ⅳ浓度与肾组织Col-Ⅳ表达、肾小球基质基底膜面密度、小管间质损害显著正相关,且在轻度细胞外基质积聚和小管间质损害时,尿Col-Ⅳ浓度即增高;与小球内细胞个数呈负相关,而与肾小球系膜区、毛细血管襻区免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和C3沉积的量和沉积范围无关,与血Col-Ⅳ水平无显著相关.结论:IgAN患者尿Col-Ⅳ浓度明显增高,尿Col-Ⅳ水平可作为监测IgAN患者早期肾硬化的一项指标.