阿霉素肾病大鼠尿蛋白质组质谱的检测及中药肾康灵的干预作用

目的：应用尿蛋白质组学筛选阿霉素肾病（AN）大鼠尿液中差异表达的蛋白质,并检测中药肾康灵的干预作用,旨在蛋白质分子水平探索频复发性肾病（FRNS）的诊断标记物及药物治疗的作用靶点。方法：用阿霉素（ADR）5.5mg/kg诱导大鼠复制的阿霉素肾病（AN）模型,即类似于人类微小病变型（MCD）肾病模型。实验共分为5组,分别为正常组（A组）、AN病模组（B组）、泼尼松治疗组（C组）、泼尼松＋肾康灵（低浓度）治疗组（D组）、泼尼松＋肾康灵（高浓度）治疗组（E组）。利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术联合CM10蛋白质芯片技术检测各组大鼠尿蛋白质组质谱的表达,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机自动收集数据,使用Ciphergen Proteinchip Software3.2.1和Biomarker Wizard分析软件筛选出各组大鼠尿液差异表达的蛋白质。并观察各组治疗前后尿蛋白、血清白蛋白（Alb）、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）及肾脏病理形态学等变化。结果：在质荷比值（M/Z）2000～50000范围内（P〈0.05）,芯片共捕获到近40种差异蛋白质,质谱仪筛选出B组与A组比较的38种差异蛋白,其中3种差异蛋白从B组→C组→D、E组→A组呈递减趋势。这3种差异蛋白峰的M/Z值分别为9321.0、9393.1、9477.5。结论：SELDI-TOF-MS能有效分析阿霉素肾病大鼠尿液蛋白质质谱,中药肾康灵干预治疗后蛋白质质谱表达差异有统计学意义,且中药肾康灵联合泼尼松治疗AN大鼠的疗效优于单用泼尼松治疗。     

中药肾康灵干预频复发性肾病患儿与NF-κB关系的临床研究

目的：通过观察中药肾康灵干预治疗小儿频复发性肾病（FRNs）与核因子-κB（NF-κB）的关系，旨在阐明FRNS的发病机制及中药干预治疗的可能机制。方法：选取2003年6月-2006年3月的40例FRNS，采用简单随机法分成治疗组（A组）、西药对照组（B组）。对照组采用泼尼松长程疗法，雷公藤采用24周疗法，环磷酰胺采用口服8周或冲击疗法；治疗组加用肾康灵中药，日1剂，2次／d，疗程1年以上。另设20例为健康对照组（C组）。检测各组外周血中激活的NF-κB。结果用SPSS12．0软件系统进行统计学分析。结果：FRNS患儿外周血中激活的NF-κB均分剐显著高于健康对照组（P〉0．05）；治疗后A组和B组NF-κB活性与C组比较均无统计学差异（P〉0．05）；疗效比较A组和B组之间差异非常显著（P〈0．05）；A组在降低NF-κB活性方面明显优于B组（P〉0．05）。结论：（1）FRNS患儿外周血中激活的NF-κB明显升高，表明患儿免疫功能处于紊乱状态。（2）肾康灵＋西药组能显著降低外周血中激活的NF-κB，提示肾康灵＋西药组能有效改善FRNS患儿免疫功能紊乱状态。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾间质Wnt与NF-κB影响的研究

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾间质Wnt4、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(PGSK-3β)及核因子-κB(NF-κB)表达水平的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠32只,体重(200±20g),随机选取8只作为正常组,其余予腹腔注射链脲佐菌素,制备糖尿病肾病动物模型,造模成功后随机分成4组:模型组(n=8),益肾胶囊组(n=8)和氯沙坦组(n=8)。连续给药12周。12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白定量,血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),取肾组织行HE染色、免疫组化。光镜下观察肾间质病理变化情况,用免疫组化法检测Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平,行实时荧光定量(FQ-PCR)法测定肾组织中Wnt4、NF-κBmRNA的表达。结果:12周末,与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显增加,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显升高,肾组织Wnt4、NF-κBmRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,益肾胶囊治疗组大鼠24h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显减少,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显降低,肾组织Wnt4、NF-κBmRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。氯沙坦治疗组与益肾胶囊治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾胶囊可能通过调节DN肾间质Wnt4、PGSK-3β、NF-κB的表达,影响了NF-κB和Wnt通道的信号转导,延缓了DN的进展。     

阿奇霉素对大鼠阿霉素肾病的干预作用

目的 通过观察阿奇霉素对阿霉素肾病大鼠血、尿生化指标、肾脏组织病理以及细胞间黏附因子1（ICAM-1）、nephrin与podocalyxin在肾组织表达的影响,探讨其在大鼠阿霉素肾病中的干预作用。 方法 建立大鼠阿霉素肾病模型,分为阿奇霉素治疗组、泼尼松治疗组、联合治疗组、模型组及正常对照组。监测实验0、4、8周24 h尿蛋白量（24 h-up）及血生化指标动态变化,计算内生肌酐清除率（Ccr）。观察肾组织病理形态学改变。免疫组化SP法观察肾组织中ICAM-1、nephrin、podocalyxin的表达。 结果 实验4周时尿蛋白及白蛋白指标均达到肾病模型要求,提示模型制作成功。实验8周,与模型组相比,各治疗组大鼠的各项观察指标均有不同程度改善,24 h-up、胆固醇、Scr显著降低（P < 0.05）,总蛋白、Alb及Ccr（除外C组）有所增加（P < 0.05）,肾组织病理改变减轻,肾脏病理积分及细胞外基质/肾小球面积比值降低（P < 0.01）,肾小球及肾小管ICAM-1表达减少（P < 0.01）,nephrin、podocalyxin表达增高。综合比较,其中联合治疗组疗效最好。 结论 阿奇霉素对阿霉素肾病大鼠的干预有类似于泼尼松样的治疗作用,但其对早期肾功能的保护作用逊于泼尼松,而二者联合应用可起到协同治疗的作用,其药效明显优于两药的单独应用。     

黄芪汤通过TLR4/NF-κB信号通路改善糖尿病肾病大鼠炎症反应的研究

目的探讨通过建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的糖尿病肾病大鼠炎症模型,观察黄芪汤能否通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,来改善糖尿病肾病大鼠的炎症因子表达。方法选择48只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,即对照组、对照组+LPS组、模型组、模型+LPS组、黄芪汤干预组、黄芪汤+LPS组,动物造模采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)。检测大鼠病理、TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及其下游的相关蛋白的表达。结果在糖尿病肾病大鼠和LPS+糖尿病肾病大鼠中的TLR4/NF-κB信号通路明显被激活,TLR4、磷酸化IKKα/β、磷酸化NF-κB等蛋白的表达水平明显增高,其下游的炎症因子的表达也随之升高,肾脏病理指标和纤维化加重。黄芪汤可以改善LPS诱导的糖尿病肾病大鼠炎症模型的病理指标,通过降低TLR4的表达,进而减少IKK和NF-κB的磷酸化,达到抑制TLR4/NF-κB信号通路的作用,使得下游的IL-6、TNF-α、IL-1β等炎症因子的表达水平降低。结论黄芪汤通过下调TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的表达水平改善LPS诱导的糖尿病肾病大鼠炎症模型的炎症反应,改善肾脏病理指标,从而减轻糖尿病肾病大鼠的肾损害,起到延缓糖尿病肾病进展的作用。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织炎症因子NF-κB的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）表达的影响。方法：将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（对照组）、DN模型组（模型组）、氯沙坦组、益肾胶囊组,每组10只。利用链脲佐菌素（STZ）诱导右肾切除的大鼠制备DN模型。氯沙坦组灌胃氯沙坦钾20mg·kg-1.d-1,益肾胶囊组灌胃益肾胶囊625mg·kg-1.d-1,对照组及模型组每日给予等量的蒸镏水灌胃,实验周期为12周。实验过程中观察大鼠24h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）变化,光镜下观察肾脏病理变化,采用免疫荧光法检测各组大鼠肾组织NF-κB的表达。结果：12周末,DN模型组大鼠的24h尿蛋白定量、Scr、BUN均高于正常对照组（P〈0.05）,肾组织中NF-κB表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）;益肾胶囊治疗组大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于模型组（P〈0.05）,肾组织NF-κB表达水平明显低于DN模型组（P〈0.05）。结论：益肾胶囊可能通过下调DN大鼠肾脏组织NF-κB的表达,延缓DN的进展。     

肾炎康对阿霉素肾病大鼠结缔组织生长因子和纤维连结蛋白表达的影响

目的观察肾炎康袋泡剂对阿霉素肾病大鼠的治疗作用,并研究其作用机制。方法随机选取10只大鼠为空白对照组,剩余大鼠采用一次性尾静脉注射阿霉素的方法建立阿霉素肾病模型,并随机分为肾病模型组、肾炎康组、泼尼松组,每组10只,肾病模型组予以生理盐水连续灌胃给药8周,肾炎康组和泼尼松组分别予以肾炎康袋泡剂煎液和泼尼松连续灌胃给药8周。收集末次给药后24 h尿液检测尿蛋白水平;取动脉血检测肾功能指标(血清肌酐、尿素和尿酸);取肾脏组织进行病理学染色并计算肾小球硬化指数;采用免疫组织化学染色法检测肾组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和纤维连结蛋白(fibronectin,FN)蛋白表达水平;采用qPCR法检测肾组织中CTGF和FN的mRNA相对表达水平。结果肾炎康干预治疗能够显著降低阿霉素肾病大鼠的血清中肌酐、尿素、尿酸水平和尿蛋白水平(P0.05);肾炎康能够显著改善阿霉素肾病大鼠肾脏的病理结构,抑制肾纤维化水平(P0.05),并显著降低肾病大鼠肾小球硬化指数(P0.05)。此外,肾炎康能够显著抑制肾病大鼠肾脏组织中CTGF、FN蛋白和mRNA表达水平(P0.05)。对于阿霉素肾病大鼠,肾炎康整体改善效果弱于泼尼松,但治疗效果仍然明显。结论肾炎康袋泡剂对阿霉素肾病大鼠有确切的治疗和改善作用,其作用可能是通过调控CTGF和FN表达进而抑制阿霉素肾病大鼠肾纤维化来实现的。     

益肾方与厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠肾脏尾加压素Ⅱ表达及病理改变的影响

目的:探讨益肾方与厄贝沙坦对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,UⅡ)表达和肾脏病理改变的影响及其意义.方法:将SD大鼠以链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病肾病大鼠模型后随机分为糖尿病肾病组(D组)、益肾方治疗组(DZ组)、厄贝沙坦治疗组(DI组),并设正常对照组.治疗8周后取肾组织,免疫组化方法检测肾组织中UⅡ表达水平,光镜及电镜观察肾脏组织结构改变.结果:与正常对照组相比,糖尿病肾病组肾组织中UⅡ表达增高,肾小球肥大,基质增多,足突融合,基底膜增厚;肾组织UⅡ表达与肾小球平均体积及基底膜厚度的关系均呈正相关.益肾方和厄贝沙坦治疗组肾组织UⅡ表达均明显减少,肾脏病理显著改善.结论:益肾方和厄贝沙坦均能减少糖尿病大鼠肾组织UⅡ的表达和改善肾脏病理改变,其保护作用可能与减少UⅡ的产生有关.     

中药益肾活血联合激素治疗中重度IgA肾病53例临床观察

目的:探索中药益肾活血联合激素治疗中重度Ig A肾病的临床疗效。方法:对本院诊断为原发性Ig A肾病LeeⅢ~Ⅳ级的53例患者在基础治疗上采用益肾活血中药联合激素治疗,中药益肾活血组方由生黄芪、当归、干地黄、杭白芍、川芎、桃仁、积雪草等组成;24 h尿蛋白定量≥3.5 g患者口服泼尼松/泼尼松龙每天0.8~1.0 mg/kg,24 h尿蛋白定量<3.5 g患者口服泼尼松/泼尼松龙每天0.4~0.6 mg/kg,2个月减量,总疗程10~12个月;观察评价治疗6个月、12个月的实验室指标、疗效与安全性。结果:纳入研究共有53例患者,治疗6个月完全缓解率52.8%(28/53),总显效(完全缓解+显效)率71.7%(38/53),12个月完全缓解率54.7%(29/53),总显效率77.4%(41/53),中药益肾活血联合激素治疗6、12个月较治疗前的24 h尿蛋白定量(P<0.01)、尿红细胞计数(P<0.01)、血肌酐(P<0.05)均显著下降,肾小球滤过率较治疗前升高(P<0.01);随访一年中无严重不良事件。结论:中药益肾活血联合激素能稳定和改善肾病理较重的原发性Ig A肾病患者肾功能,有效减少其蛋白尿,且具有较好的安全性。     

中药肾康灵干预阿霉素肾病大鼠血蛋白质质谱表达的实验研究

目的：应用血蛋白质组学筛选阿霉素肾病（AN）大鼠血清中差异表达的蛋白质,旨在蛋白质分子水平探索频复发性肾病综合征（FRNS）的诊断标志物及中药肾康灵治疗的作用靶点。方法：利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）联合CM10蛋白质芯片技术检测各组大鼠血蛋白质组质谱的表达,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机自动收集数据,使用Ciphergen Proteinchip Software3.2.1和Biomarker Wizard分析软件筛选出各组大鼠血清差异表达的蛋白质。结果：在质荷比值（M/Z）2000~50000范围内,P〈0.05,芯片共捕获到30种差异蛋白质,质谱仪筛选出B组与A组比较的25种差异蛋白,C组与B组比较筛选出5种差异蛋白,其中3种差异蛋白在B、C、D、E组间差异有统计学意义,且从B组→C组→D、E组→A组呈递减趋势,这3种蛋白峰分别为8837.7、15013.0、15053.2。结论：SELDI-TOF-MS能有效分析阿霉素肾病大鼠血清蛋白质质谱,中药肾康灵干预治疗后蛋白质质谱表达差异有统计学意义。