氯化钆诱导急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞凋亡机制的研究

目的 探讨氯化钆(GdCl3) 诱导急性坏死性胰腺炎(SAP)肺泡巨噬细胞(AM)凋亡的可能机制。方法 48只成年SD大鼠随机分为正常对照组、SAP组、GdCl3治疗组，每组16只。逆行性胰胆管注射5%牛磺胆酸钠建立AP大鼠模型。经支气管肺泡灌洗获取AM。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF α)和白细胞介素1β（IL 1β）含量。 肺脏/胰腺组织HE染色检查，透射电镜观察和流式细胞仪Annexin V/FITC及碘化丙啶(PI)双染色法检测AM凋亡情况，并行AM爬片的FasL免疫组化检查。结果 GdCl3治疗组电镜下可见典型凋亡形态学特征，BALF中TNF α和IL 1β含量［(7.84±0.75)pg/mL，(8.57±5.64) pg/mL］较SAP组明显减低，差异均有显著性(P<0.05)，而AM凋亡率明显增高(22.48±1.44)%，与正常对照组、SAP组相比差异也有显著性(P<0.05)；GdCl3治疗组免疫组化FasL阳性表达较正常组和AP组明显增多(41.67±11.69)%，差异均有显著性(P<0.05)。AM 凋亡率与AM 中FasL 阳性表达率呈明显的线性正相关（r＝0.835，P<0.001）。结论 GdCl3可能通过激活FasL诱导SAP大鼠AM发生凋亡进而减轻肺损伤。     

FasL在重症急性胰腺炎肺泡巨噬细胞凋亡机理中的作用

目的 探讨FasL在重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肺泡巨噬细胞（AM）凋亡机理中的作用。方法 SD大鼠按数字表法随机分为对照组、SAP组及氯化钆（GdCl3）组3组,每组16只。SAP模型制成6 h后,经支气管肺泡灌洗获取AM。取右肺下叶行HE染色检查,透射电镜观察和双染色法检测AM凋亡情况,用蛋白免疫印迹法（Western blot法）检测各组AM中FasL蛋白表达水平。结果 GdCl3组电镜下可见AM典型凋亡形态学特征,AM凋亡率为 （22.48±1.44） %,明显高于对照组 〔（11.28±1.01）%〕 及SAP组 〔（6.86±1.35）%〕 , 其差异有统计学意义 （P＜0.05）;GdCl3组FasL蛋白相对表达量为（1.230±0.041）%,较对照组 〔（0.936±0.024）%〕 和SAP组〔（0.704±0.011）%〕 明显增高 （P＜0.05）。AM 凋亡率与AM中FasL蛋白表达水平呈线性正相关关系（R2=0.766,P＜0.01）。结论 GdCl3可能通过激活FasL蛋白表达诱导SAP大鼠AM发生凋亡。     

氯化钆对急性坏死性胰腺炎肺损伤的防护作用

目的　探讨氯化钆 (GdCl3 )在急性坏死性胰腺炎 (ANP)肺损伤中的作用。方法　将 90只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP组、GdCl3 处理组、ANPGdCl3 预处理组、ANPGdCl3 治疗组。每组 18只。逆行性胰胆管注射 3%牛磺酸钠建立ANP大鼠模型。经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞 (AM ) ,行血气分析 ,检测肺湿 /干重比值、支气管肺泡灌洗液 (BALF)中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)水平、AM分泌肿瘤坏死因子α(TNFα)、一氧化氮 (NO)水平。以琼脂糖凝胶电泳分析、透射电镜观察和流式细胞仪碘化丙啶 (PI)单染色法检测AM凋亡情况。并行肺组织病理学检查。结果　GdCl3 处理组各指标与正常对照组相比差异无显著意义 (P >0 0 5 )。ANPGdCl3 预处理组和ANPGdCl3 治疗组各项指标均升高 ,与正常对照组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,但与ANP组相比升高不明显 ,两组相比差异也有显著意义 (P <0 0 5 )。ANPGdCl3 预处理组和ANPGdCl3 治疗组AM琼脂糖凝胶电泳均可见DNA梯状条带 ,透射电镜观察可见典型凋亡形态学特征 ,流式细胞仪DNA直方图可见G1峰左侧出现典型亚二倍体细胞群峰型 ,而另 3组则均未出现。结论　GdCl3可能通过诱导ANP大鼠AM发生凋亡来减轻ANP所致的肺损伤     

氯化钆预处理对ANP肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中CYLD及NF-κB的影响

目的:观察氯化钆(GdCl3)预处理对性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)肿瘤抑制因子CYLD及NF-κB的影响,探讨CYLD在ANP肺损伤中所起的作用。方法:36只SD大鼠随机分成正常对照组,ANP组,GdCl3预处理组。采用5%牛磺胆酸钠逆行性胰胆管注射制备ANP动物模型,GdCl3预处理组在造模前30 min经尾静脉注射GdCl3(10 mg/kg)。术后6 h处死各组动物,经支气管肺泡灌洗获取肺泡AMs,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量,Western blot检测AMs中NF-κB及CYLD活性水平。检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)的水平变化,并行肺组织病理学检查。结果:假手术组肺组织未见病理改变,ANP组和GdCl3预处理组肺组织均出现充血、水肿、炎性渗出等病理改变,但GdCl3预处理组病变程度轻与ANP组;ANP组肺组织的MPO活性,以及BALF的TNF-α,IL-1β含量较正常对照组明显升高(均P<0.05);正常对照组,ANP组,GdCl3预处理组AMs核蛋白NF-κB的表达量分别为0.08±0.03,0.18±0.06及0.11±0.04,3组AMs的CYLD的表达量分别为0.32±0.09,0.15±0.05和0.27±0.07。ANP组,GdCl3预处理组AMs中NF-κB与CYLD的表达活性均呈负相关(r=-0.708,r=-0.571,均P<0.05)。结论:ANP肺损伤中存在CYLD低表达和NF-κB活化,GdCl3预处理能通过增加CYLD表达,减少NF-κB活化,进而减轻肺损伤。     

氯化钆对急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞分泌炎症介质的影响

目的 ：探讨氯化钆（Gdcl3）对急性坏死性胰腺炎（ANP）肺泡巨噬细胞 (AM)分泌炎症介质的影响。方法 ：90只成年SD大鼠随机分为正常对照组（C组）、ANP组、Gdcl3处理正常对照组（C+Gdcl3组）、ANP Gdcl3预处理组、ANP Gdcl3治疗组。每组18只。各组大鼠均经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞，行支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）水平、AM分泌肿瘤坏死因子α（TNF-a）和一氧化氮（NO）水平分析;行血气分析，检测肺湿/干重比值，并行肺组织病理学检查。结果 ：C+Gdcl3组各指标与正常对照组相比差异无显著性（ P >0.05）。ANP Gdcl3预处理组和ANP Gdcl3治疗组除动脉血氧分压外各项指标显著高于正常对照组，差异有显著性（ P <0.05），但与ANP组相比有降低，差异有显著性（ P <0.05）。结论 ：氯化钆可抑制ANP大鼠AM分泌炎症介质，并减轻ANP所致的肺损伤。     

诱导型一氧化氮合成酶在大鼠坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞的表达

目的通过研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在急性坏死性胰腺炎(ANP)肺泡巨噬细胞(AM)中的表达,明确其在ANP所致肺损伤中的作用。方法72只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP组、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)组,每组24只。逆行性胰胆管注射3%牛磺酸钠建立ANP大鼠模型。经支气管肺泡灌洗获取AM,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,AM分泌iNOS水平及iNOSmRNA表达情况,并行肺组织学检查。结果ANP大鼠AM iNOS的表达随时间进展而增强,同时肺损伤也逐渐加重。L-NAME组则恰好相反,与ANP组相比有显著性差异(P<0.05)。结论ANP发生后,肺泡巨噬细胞iNOS表达增强,并促进肺损伤。     

核因子κB活化对急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞炎症介质表达的影响及意义

目的探讨核因子κB（NF-κB）活化对急性坏死性胰腺炎（ANP）肺泡巨噬细胞（AM）分泌炎症介质的影响和对肺损伤的影响。方法30只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP后1、3、6、12h组，每组6只。逆行性胰胆管注射5％牛磺酸钠建立ANP大鼠模型，正常对照组大鼠自胆胰管内逆行注入生理盐水。经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞，检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）水平、肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNFα），一氧化氮（N0）水平，测定肺泡巨噬细胞TNFαmRNA、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达情况。行肺组织的病理学检查并评分，同时行免疫组化检查肺组织中NF-κB的表达。结果正常肺组织较少见到NFκB活化的AM，ANP各组肺组织均可见到NF-κB活化，并且随时间进展NF-κB逐渐由细胞质更多进入细胞核。ANP大鼠肺损伤随着病情进展而逐渐加重，肺组织MPO及支气管肺泡灌洗液中蛋白含量逐渐升高；肺泡巨噬细胞分泌TNFα，NO水平逐渐升高，至6h达到高峰，12h又回落。ANP发生后，肺泡巨噬细胞TNFαmRNA、iNOSmRNA的表达情况与TNFα，NO的变化趋势相似。ANP大鼠各组指标与正常对照组相比均有统计学差异（P〈0．05）。结论ANP形成后，NF-κB发生活化，使AM炎症介质表达增强，并促进肺损伤。     

腹腔引流灌洗时机对大鼠重症急性胰腺炎的影响及作用机制

目的 拟在大鼠重症急性胰腺炎（SAP）模型中探讨腹腔引流灌洗时机对病程转归的影响并探究其作用机制。方法 清洁级SD大鼠,随机分为SAP模型组、早期引流组、延期引流组、早期灌洗组和延期灌洗组。比较各组24 h后大鼠生存率,检测大鼠血清和腹水中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的浓度。结果 ①与模型组比较,早期引流组和早期灌洗组生存率显著提高（P＜0.01 ）,而延期引流组和延期灌洗组与模型组差异无统计学意义（P＞0.05）。②与模型组比较,早期引流组血清TNF-α浓度显著下降（P＜0.05）;与早期引流组比较,早期灌洗组血清IL-8浓度下降、IL-10浓度升高（P＜0.05）。③与模型组比较,早期引流组和早期灌洗组腹水中IL-1β、IL-6、和TNF-α水平显著降低（P＜0.05）,且早期灌洗组腹水中IL-10浓度升高（P＜0.05）;延期引流组中仅腹水TNF-α水平显著降低（P＜0.0）,但延期灌洗组中细胞因子未见明显变化（P＞0.05）。与早期引流组相比,延期引流组的IL-1β、IL-8浓度升高,IL-10水平下降（P＜0.05）,而早期灌洗组的IL-1β、IL-8浓度降低,IL-10水平升高（P＜0.05）。早期灌洗组与延期灌洗组的腹水中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α浓度均有显著差异（P＜0.05）。结论 在SAP病程早期进行腹腔置管引流灌洗可以提高大鼠生存率。与血清中细胞因子浓度变化相比,腹水中细胞因子浓度的改变更为明显。早期引流灌洗后降低腹水中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8浓度,并使IL-10浓度升高可能是提高大鼠生存率的关键因素。     

大鼠重症胰腺炎肺泡巨噬细胞凋亡与Bax/Bcl-2表达的研究

目的 观察Bax和Bcl-2在肺泡巨噬细胞(AM)中的表达,探讨氯化钆(GdCI_3)诱导重症急性咦腺炎(SAP)大鼠AM凋亡的町能机制.方法 将48只成年SD大鼠随机分为正常对照组(对照组),SAP组,GdCI_3治疗组;每组16只.SAP模型制成6 h后,经支气管肺泡灌洗液获取AM,榆测该灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平;HE染色检查肺脏/胰腺组织;透射电镜观察和流式细胞仪Annexin V/FITC及碘化丙啶舣染色法检测AM凋亡情况;用Westem Blot方法 榆测AM中Bax和Bcl-2的表达.结果 GdCI_3治疗组电镜可见AM典型凋亡形态学特征,肺组织中MPO活性、支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-1β含鼋均较SAP组减低,差异均有统计学意义(P＜0.05);流式细胞仪检测纠AM凋亡率较对照组和SAP组明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05);Western Blot检测剑AM中Bax较对照组和SAP组明显增高,而Bcl-2明显减低,差异亦均有统计学意义.结论 GdCI_3可能通过激活Bax和抑制Bcl-2表达诱导SAP大鼠AM发牛凋亡,进而减轻SAP所致的肺损伤.     

PDTC对急性坏死性胰腺炎大鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨四氢化吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠急性肺损伤的影响。方法:36只成年SD大鼠随机均分为:假手术组,ANP组,PDTC预处理组。ANP模型采用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠的方法,PDTC预处理组在造模前l h腹腔注射PDTC(30 mg/kg)。术后6 h处死动物,经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AMs),用流式细胞仪检测AMs凋亡情况,免疫组化和Western blot法测定AMs中NF-κB和CYLD活性水平;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量;同时行肺组织病理学检查和肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平检测。结果:假手术组肺组织未见病理改变,ANP组和PDTC预处理组肺组织均出现充血、水肿、炎性渗出等病理改变,但PDTC预处理组病变程度轻与ANP组;ANP组肺组织的MPO活性,以及BALF的TNF-α,IL-1β含量较假手术组明显升高(均P<0.05),而PDTC预处理组上述指标的升高被明显抑制,与ANP组比较,差异有统计学意义(均P<0.05);假手术组,ANP组,PDTC预处理组AMs凋亡率分别为(3.47±1.45)%,(1.16±0.31)%,(1.80±0.60)%,各组间差异有统计学意义(均P<0.05);免疫组化显示,AMs中的NF-κB在假手术组、ANP组、PDTC预处理组分别呈弱阳性、强阳性、中等阳性表达;假手术组,ANP组,PDTC预处理组AMs的NF-κB的相对表达量分别为0.08±0.03,0.18±0.06,0.13±0.04,各组间差异均有统计学意义(均P<0.05),3组CYLD的相对表达量分别为0.32±0.09,0.15±0.05,0.26±0.08,假手术组与ANP组间差异有统计学意义(P<0.05),但与PDTC预处理组间差异无统计学意义(P>0.05);ANP组,PDTC预处理组AMs中NF-κB与CYLD的表达活性均呈负相关(r=-0.708,r=-0.481,均P<0.05)。结论:PDTC可能通过抑制NF-κB的活化从而诱导ANP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡,并增强NF-κB负性调控因子CYLD的表达,进而减轻肺损伤。     

ePTFE套管对犬移植静脉动脉化的影响

目的：探讨ePTFE套管对犬移植静脉动脉化的影响。
方法：36只健康犬随机分为2组,对照组移植静脉不加ePTFE套管,实验组移植静脉加ePTFE套管。采用同侧自体颈外静脉重建颈总动脉,术后2,6,10周处死动物,分离移植静脉,灌注固定。将移植静脉从中间剪断,近心端段靠近吻合口为a段,中间为b段,每隔3 mm横切a,b段,观察管壁增厚情况并测量壁厚。
结果：对照组a段外侧壁厚度基础值为（0.46±0.09）mm,2,6,10周显著或极显著增厚,分别为（0.64±0.06）,（2.20±0.51）,（3.23±0.38）mm;b段内侧壁厚度基础值为（0.46±0.09）mm,2,6,8周也显著或极显著增厚,分别为（0.59±0.05）,（2.46±0.41）,（2.01±0.11）mm。实验组a段外侧壁厚度基础值为（0.41±0.09）mm,6,10周显著或极显著增厚,分别为（0.75±0.22）,（1.31±0.21）mm;b段内侧壁厚度基础值为（0.41±0.09）mm,6,10周极显著增厚,分别为（0.70±0.04）,（1.24±0.28）mm。与对照组相比,实验组除2周管壁增厚显著减缓外,6,10周均极显著减缓(P<0.01)。
结论：移植静脉加ePTFE套管能减缓移植静脉的动脉化进程。     

NF-κB诱骗寡核苷酸对内毒素性肝损伤的保护作用和机制

目的探讨NF-κB诱骗寡脱氧核苷酸对大鼠内毒素性肝损伤的保护作用及其机制。方法60只SD大鼠随机分为对照组、内毒素(LPS)组、诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)处理组。取各组大鼠肝组织检测NF-κB蛋白结合活性(EMSA),观察组织病理学改变(光镜)及肝细胞凋亡(TUNEL)。取静脉血检测AST(自动生化仪)以及TNF-α,IL-6的表达水平(ELISA)。结果与对照组相比,内毒素组NF-κB活性明显升高,诱发大量肝细胞凋亡,肝脏损伤明显;同时血清AST,TNF-α及IL-6明显升高(P0.01)。与内毒素组相比,NF-κB诱骗寡核苷酸处理组NF-κB活性受抑制(P0.01)、肝脏组织病理学改变和肝细胞凋亡明显减轻,血清中TNF-α和AST表达水平降低(P0.01),但IL-6表达与内毒素组差异无统计学意义(P0.05)。结论NF-κB诱骗策略能高效抑制NF-κB的活性,抑制其下游有害细胞因子的产生,从而减轻内毒素性肝损伤。     

小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究

目的 了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响。方法 实验分为5组：正常肝细胞（LO2）组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组；细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况；设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin；Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平；MTT法观察各组对阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-FU）、环磷腺苷（VCR）和奥沙利铂（OHP）的敏感性；流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM中抑制效率最高：78.86%（P<0.05），选其为Si-β-catenin；细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强，转染Si-β-catenin后荧光显著减弱；β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高，mRNA表达分别为：0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12（P<0.05），蛋白表达分别为：1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212（P<0.05）；转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中，β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少，mRNA表达分别为：0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03（P<0.05），蛋白表达分别为：0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050（P<0.05）；Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数（RI）分别为0.61、0.55、0.30、0.55，对化疗药物敏感性显著增强（P<0.05）；Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率（28.05±0.35）%，较其他组明显增加（P<0.05）。结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活，其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1，Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路，并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性，增加凋亡。     

小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究

目的 了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响。方法 实验分为5组：正常肝细胞（LO2）组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组;细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况;设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin;Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法观察各组对阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-FU）、环磷腺苷（VCR）和奥沙利铂（OHP）的敏感性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM中抑制效率最高：78.86%（P<0.05）,选其为Si-β-catenin;细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强,转染Si-β-catenin后荧光显著减弱;β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高,mRNA表达分别为：0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12（P<0.05）,蛋白表达分别为：1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212（P<0.05）;转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中,β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少,mRNA表达分别为：0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03（P<0.05）,蛋白表达分别为：0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050（P<0.05）;Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数（RI）分别为0.61、0.55、0.30、0.55,对化疗药物敏感性显著增强（P<0.05）;Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率（28.05±0.35）%,较其他组明显增加（P<0.05）。结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活,其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1,Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路,并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性,增加凋亡。     

孕酮调节创伤性脑损伤后炎症反应及预后的实验研究

目的探索孕酮在创伤性脑损伤(TBI)中是否能调节炎症反应及改善神经功能预后。方法将小鼠随机分为假手术组、孕酮治疗组和对照组。构建TBI模型后,孕酮治疗组给予孕酮治疗,对照组予以等量生理盐水。用mNSS评分检测小鼠神经功能,干湿重法检测脑组织含水量,蛋白印迹及免疫组化法检测脑组织中炎性因子及炎性细胞含量,流式细胞术检测脾脏中调节性T细胞(Treg)的数量。结果我们的实验研究发现孕酮治疗组小鼠mNSS评分在脑创伤后第3、5、7天时明显低于对照组(P0.05);孕酮治疗组脑组织含水量在伤后第1、3、5、7天较对照组相比明显减少(P0.05)。在伤后第1、3天时,与假手术组相比,孕酮治疗组和对照组炎性因子(IL-1β、TNF-α、NF-κB、IL-10)和炎性细胞(GFAP、Iba-1)含量显著增加(P0.05);与对照组相比,孕酮治疗组炎性因子和炎性细胞含量明显下降(P0.05),且脾脏内Treg数量显著增多(P0.05)。在伤后第3天,孕酮治疗组及假手术组脑损伤灶处CD3及MPO细胞数量无显著性差异,均明显低于对照组(P0.05)。结论孕酮治疗可以改善小鼠TBI后的神经功能预后,其机制可能与孕酮在脑创伤后的免疫炎症调节作用有关。     

Effects of metformin on expression of AMP - activated protein kinase in rat glomerular mesangial cells

ObjectiveTo observe the effects of metformin on expression of Adenosine 5’- monophosphate (AMP)-activated protein kinase (AMPK), nuclear factor-κB (NF-κB) and transforming growth factor β1 (TGF - β1) in cultured rat glomerular mesangial cells (MCs), and explore its reno - protective mechanisms. Methods MCs were cultured in the medium with normal glucose (group NG, 5.6 mmol/L), high glucose (group HG, 25mmol/L) and different concentrations of metformin (group M1, M2, M3). After 48 h exposure, the supernatants and MCs were collected. The expression of NF-κB and TGF-β1 mRNA was analyzed by real time-PCR. Total-AMPK, phospho-Thr-172 AMPK (p-AMPK), NF -κB p65 and TGF-β1 were visualized by Western blot. ResultsThe real time-PCR and Western blot result showed MCs could express AMPK, NF-κB and TGF-β1 mRNA and protein. After stimulated by HG, the levels of intracellular NF - κB and TGF - β1 expressions were significantly increased compared with group NG (P＜0.05); The levels of NF-κB and TGF-β1 were significantly decreased in group M1, M2 and group M3 compared with group HG in a dose-dependent manner. After stimulated by HG, the level of intracellular p-AMPK were down-regulated compared with group NG(all P＜0.05); The expression of p-AMPK increased with the rising of metformin concentration, presenting the opposite trend (P＜0.05), while the level of total-AMPK protein was unchanged with exposure to HG or different concentrations of metformin(P＞0.05). ConclusionMetformin can suppress the expression of NF- κB and TGF-β1 of glomerular MCs induced by HG via AMPK activation, which may partly contribute to its reno-protection.     

Hydrogen sulfide reduce renal ischemia/reperfusion injury by NOD-like receptor pathway

Objective To investigate whether the nod-like receptor (NLR) pathway is involved in protection of hydrogen sulfide (H2S) preconditioning during renal ischemia reperfusion. Methods Male Wistar rats were randomly divided into 3 groups: sham operation (Sham) group, renal ischemia/reperfusion (I/R) group subjected to occlusion of left renal pedicle for 45 min then reperfusion for 24 hours, and sodium hydrosulfide (NaHS) preconditioning group with continuous infusion of NaHS (300 nmol/min) by left renal artery for 15 min before I/R treatment. Renal injuries were evaluated by HE staining. The protein levels of NOD1, NOD2, nuclear NF-κB P65 and caspase-1 were analyzed by Western blot assay. The protein level of MCP-1 and IL-1β expressions was determined by immunohistochemical staining assay. Cell apoptosis were evaluated by Tunel staining assay. Results In I/R group, the renal NOD1 and NOD2 protein expressions were upregulated. Moreover, the nuclear NF-κB P65 expression was also elevated with an increase in its target genes-MCP-1 and IL-1β (All P＜0.01). HE staining revealed the existence of acute tubular necrosis in I/R kidney. TUNEL staining revealed more apoptotic cells in risk zone with the activation of caspase-1 of I/R-treated kidney(P＜0.01). NaHS preconditioning reversed I/R-induced increase in the expression of NOD1 and NOD2(P＜0.05). NaHS preconditioning also reduced I/R-induced activation of NF-κB P65 (P＜0.05) and upregulation of MCP-1 and IL-1β (P＜0.01). Moreover, NaHS preconditioning attenuated inflammation, repressed caspase-1 activation and reduced apoptotic cells after I/R. Conclusion Hydrogen sulfide preconditioning can alleviate renal ischemia/reperfusion injury by Nod-like receptor dependent on inflammatory pathway.