心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞后全身细胞的分布

目的 观察经心肌梗死边缘区移植骨髓间充质干细胞(MSCs)24 h和2周后的全身分布.方法 雄性SD大鼠的MSCs用溴脱氧尿苷(BrdU)标记.将雌性SD大鼠经心梗3周后随机分为2组.第1组为标记细胞(3×10,50μl)经心肌注入心梗边缘区(n=12).第2组为等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)经心肌注入心梗边缘区(n=8).移植细胞24 h及2周后,体内细胞的分布情况通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及病理切片免疫组织化学染色来评价.结果 细胞经心梗边缘区移植后可以分布在心脏以及心外脏器脾脏、肺脏和肝脏中.移植24 h后细胞主要在心脏中分布(467 467±191 387),其他脏器中的分布较少,而在2周后移植细胞在包括心脏(112 388±43 751)在内的各个脏器中的分布都很少,病理切片免疫组织化学染色结果显示与RT-PCR结果相符.结论 MSCs经心梗边缘区移植后主要在心脏中分布,同时脾脏、肺脏、肝脏中也有分布,但其分布数量随着移植时间锐减.     

骨髓单个核细胞与骨髓间充质干细胞促进大鼠皮瓣存活率的比较

目的比较来源于等量骨髓的单个核细胞与经扩增的间充质干细胞,促进大鼠随意皮瓣成活率的效果。方法取等质等量的大鼠骨髓,一半直接离心获得骨髓单个核细胞,一半经体外培养获得骨髓间充质干细胞,注射相等数量(n=6)的大鼠随意皮瓣。术后测量并计算皮瓣成活面积,取材,行组织学检测,计数CD31阳性血管数量。结果未经培养的骨髓单个核细胞组皮瓣的平均存活率为(71.6±8.4)%,培养的骨髓间充质干细胞组平均存活率为(66.2±3.1)%,这两组存活率均显著高于注射平衡液的对照组(55.9±3.4)%;注射细胞组之间平均存活率没有统计学差异。组织学血管密度计数显示,骨髓单个核细胞组和骨髓间充质干细胞组的微血管数量分别是(58.2±6.8)和(42.7±5.1),都显著高于PBS对照组(22.8±3.1),而骨髓单个核细胞组也显著高于骨髓间充质干细胞组。结论与不经培养的骨髓单个核细胞相比,通过体外扩增的骨髓间充质细胞,未能显著提高大鼠随意皮瓣的成活率。     

骨髓间充质干细胞自体移植治疗心肌梗死的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)移植至缺血心肌后的增殖分化情况,对缺血心肌细胞的修复重建能力及心功能改善情况。方法将20只新西兰白兔随机分为骨髓间充质干细胞移植组(MSCs组,n=10)和对照组(n=10),采用结扎冠状动脉左前降支(LAD)制备心肌梗死模型,2周后分别将Dil标记的1×106个细胞悬液400μl或等量L-DMEM培养基用微量注射器注入梗死灶边缘,于建模前、建模后2周、细胞移植后2、4周采用多普勒超声心动图检测左心室收缩期末内径(LVESD)、左心室舒张期末内径(LVEDD),计算左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)评价心脏收缩功能,同时进行心肌声学造影评价心肌组织的血流灌注情况。细胞移植后8周处死所有动物,病理学检查移植细胞在梗死区的生长状况。结果多普勒超声心动图检测结果显示:两组动物建模前、建模后2周LVEF、LVFS差异无统计学意义(0.72±0.08vs.0.71±0.04,0.56±0.11vs.0.55±0.09;0.35±0.06vs.0.35±0.04,0.24±0.08vs.0.23±0.03,P>0.05),细胞移植后2、4周MSCs组LVEF、LVFS值均明显高于对照组(0.71±0.05vs.0.60±0.05,0.72±0.07vs.0.62±0.08;0.34±0.03vs.0.29±0.01,0.35±0.06vs.0.27±0.05,P<0.05);病理学检查见自体MSCs移植8周后存活于梗死心肌中,表达肌细胞特异性标志,并且能显著增加瘢痕区毛细血管密度(38.6±7.6/mm2vs.21.4±3.9/mm2,P<0.05),心肌声学造影亦显示梗死局部血流灌注MSCs组较对照组明显改善。结论自体MSCs移植缺血心肌中可向心肌细胞分化,增加心肌血流灌注,改善心脏收缩功能。     

不同剂量的骨髓间充质干细胞移植与改善缺血心脏功能的量效关系

目的探讨不同剂量的骨髓间充质干细胞移植梗死的心肌与改善缺血心脏功能的量效关系。方法结扎F344大鼠的冠状动脉,制作大鼠心肌梗死模型,于模型建立1周后将32只大鼠采用随机数字表法分为4组,每组8只。将经5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记的不同剂量的骨髓间充质干细胞,分别为1×103个(组1)、1×105个(组2)、1×107个(组3)注入心肌缺血区;对照组注射等量的无血清IMDM。于模型建立前、细胞移植前和细胞移植后4周采用超声心动图检测射血分数(EF)。细胞移植后4周行BrdU、闰盘连接蛋白(Connexin43)、肌球蛋白重链β(MHC)、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的免疫组织化学染色。计数α-SMA着色的功能小血管数量。结果细胞移植后4周,组1EF与对照组比较差异无统计学意义(0.34±0.16vs.0.36±0.15,P>0.05),组2EF较组1明显增高(0.54±0.20vs.0.34±0.16,P=0.004),组3EF较组2明显增高(0.71±0.24vs.0.54±0.20,P=0.018)。细胞移植后4周,组2BrdU和MHC双阳性的细胞个数明显多于组1(323.20±91.62个/高倍视野vs.51.75±27.58个/高倍视野,P=0.049),组3的细胞个数明显多于组2(409.75±106.65个/高倍视野vs.323.20±91.62个/高倍视野,P<0.001),对照组为0±0个/高倍视野。组1、组2和组3大部分移植细胞MHC、Connexin43染色呈阳性,心肌缺血区内可见大量α-SMA抗体,部分形态不规则。对照组和组1梗死区域有新生血管形成,组2较组1增多(28.38±12.79个/高倍视野vs.22.75±9.07个/高倍视野,P=0.015),组3较组2增多(35.63±13.27个/高倍视野vs.28.38±12.79个/高倍视野,P=0.002)。结论骨髓间充质干细胞移植能明显改善缺血心脏的功能,且心肌细胞新生和心功能改善的程度均呈现移植细胞剂量依赖性。     

异基因骨髓间充质干细胞移植治疗小鼠前列腺癌的实验研究

目的观察非清髓性异基因骨髓间充质干细胞移植对小鼠前列腺移植瘤的治疗效果。方法应用全骨髓培养法培养BALB/c小鼠骨髓间充质干细胞,通过流式细胞术检测第四代细胞中CD44阳性细胞率,并通过油红染色鉴定由骨髓间充质干细胞分化的脂肪细胞。应用C57小鼠源性前列腺癌株RM-1(2×10~6/只)制成C57BL小鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和异基因骨髓间充质干细胞移植组,每组10只。应用FC方案(氟达拉滨30mg/m~2,-d~(1-5);环磷酰胺300mg/m~2,-d~(1-3))对非对照组小鼠进行非清髓性预处理。异基因干细胞移植组小鼠经尾静脉注入骨髓间充质干细胞1×10~6个/只。记录并比较两组小鼠的肿瘤体积及生存时间。结果全骨髓培养法培养的第四代细胞中CD44阳性率为84.29%,油红染色证实由骨髓间充质干细胞自然分化的脂肪细胞存在。与对照组相比,异基因骨髓间充质干细胞移植显著的抑制了小鼠前列腺癌的生长(P=0.047),并明显延长了异基因骨髓间充质干细胞移植组小鼠的生存时间(P=0.00001)。结论异基因骨髓间充质干细胞移植显著的抑制了小鼠前列腺癌的生长,延长了受体小鼠的生存时间,预示了将骨髓间充质干细胞作为抑癌基因载体的良好前景。     

异源骨髓间充质干细胞抑制树突状细胞活化杀伤细胞的增殖

目的 通过共培养异源的人骨髓间充质干细胞和树突状细胞活化的细胞因子激活的杀伤细胞(DC-CIK细胞),观察DC-CIK细胞的细胞周期,初步探讨骨髓间充质干细胞的免疫调节机制.方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离、培养健康骨髓间充质干细胞和外周血单个核细胞,用多种细胞因子诱导培养外周血单个核细胞中贴壁和悬浮细胞分别为树突状细胞和杀伤细胞.将骨髓间充质干细胞与DC-CIK细胞以1∶5,1∶10,1∶20共培养4 d,采用流式细胞术检测DC-CIK细胞的细胞周期.结果 骨髓间充质干细胞呈长梭形,表达CD+29CD+444双阳性的细胞为93.6%,实验选用第三代后的细胞.在培养第9天树突状细胞表达CD1α人类白细胞Ⅱ类抗原(HLA-DR+)]双阳性细胞数为98.5%.DC-CIK细胞表达CD+3CD+56的细胞数为(29.2±12.2)%.骨髓间充质干细胞使DC-CIK细胞滞留在G0/G1期,且与细胞比例呈正相关.以1∶5,1∶10,1∶20的比例共培养4 d的DC-CIK细胞的G0/G1期和S期分别为(91.0±3.3)%和(2.8±0.6)%,(88.7±3.0)%和(5.1±2.8)%,(83.7±1.7)%和(8.7±3.4)%.对照组(同步化DC-CIK细胞)为(73.4±1.0)%和(17.4±0.6)%.结论 骨髓间充质干细胞可通过抑制DC-CIK细胞的细胞周期而发挥免疫调节作用.     

骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死

目的探讨自体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对急性心肌梗死后心脏功能及结构的影响。方法中国小型猪16头,随机分为对照组(n=6)及移植组(n=10)。建立急性心肌梗死模型后,分别注入BMMNCs/生理盐水。两组动物于术中监测血流动力学指标,术后进行影像学检查。移植组分别于2、4周后获取心脏标本,检测移植细胞标记物Hoechst33342。结果心梗4周后,移植组心梗范围较对照组显著缩小(P<0.01);血流动力学指标较对照组明显改善;局部室壁运动评分优于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。在术后2周获得的心肌标本内,可见多量Hoechst33342和MHC双阳性细胞。结论成体BMMNCs移植后,有可能抑止心室重构的发展,提高心室运动功能。     

浅低温心脏不停跳瓣膜置换手术的生化学研究

目的通过监测分析浅低温体外循环心脏不停跳心内直视手术时，心肌组织中氧自由基和能量代谢情况以及血清中心肌酶学变化探讨更有效的心肌保护方法。方法风湿性心脏瓣膜病患者30例，随机分两组，每组15例。组Ⅰ：中度低温心脏停跳组，组Ⅱ：浅低温心脏不停跳组。各组于转机前、主动脉阻断钳开放即刻及开放后30min(不停跳组取相应时间)取少量右心耳全层心肌置液氮中保留，备测定丙二醛(Ⅷ)A)、ATP和CP；另于术前、术后8h、16h、24h、48h取静脉血查心肌肌钙蛋白Ⅰ(dnd)、CK及CK—MB。结果浅低温心脏不停跳组中各项指标均优于心脏停跳组。结论浅低温心脏不停跳手术由于明显地减轻了低温和缺血-再灌注损伤给心肌带来的损害，具有明确的心肌保护作用。     

骨髓间充质细胞和单个核细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响

目的 比较骨髓间充质细胞移植和单个核细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能影响的差异.方法 建立糖尿病小鼠模型并分成3组:对照组(n=14)通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS);单个核细胞组(n=14)通过尾静脉移植骨髓单个核细胞;间充质细胞组(n=14)通过尾静脉移植骨髓间充质细胞.观察移植后1周(n=6)和移植后6周(n=8),各组小鼠血糖的变化、胰岛数量、胰腺组织形态学特征及相关标记物的表达.结果 移植后1周,间充质细胞组小鼠血糖出现显著下降(16.6±1.6)mmol/L,与对照组(26.3±0.5)mmol/L和单个核细胞移植组(24.4±1.3)mmol/L比较差异有统计学意义(P＜0.05),并一直维持到移植后第6周,血糖下降到(16.5±1.5)mmol/L,与对照组(27.7±0.1)mmol/L比较差异有统计学意义(P＜0.05);移植后1周,间充质细胞组小鼠胰岛数目(21.2±1. 1)和胰岛β细胞数目(415.9±25.4)显著增加,与对照组(11.2±1.3)/(65.9±7.1)和单个核细胞组(12.2±1.3)/(64.1±6.5)比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).单个核细胞组和间充质细胞组小鼠胰岛中均发现BrdU(+)Insulin(+)细胞和BrdU(+)Insulin(-)细胞.结论 骨髓间充质细胞移植改善糖尿病小鼠胰岛功能的效果优于骨髓单个核细胞移植.移植后胰岛的再生既来源于胰岛β细胞的增殖,也可能来源于胰岛干细胞的分化.

Abstract：

Objective To compare the different effects of bone marrow mononuclear cells vs mesenchymal cells transplantation on islets function of diabetic mice. Methods Mouse diabetic models were created by multiply peritoneal injection of low-dose streptozotocin (STZ) and divided into three groups:control group ( n = 14) , bone marrow mononuclear cells group ( n = 14) , and bone marrow mesenchymal cells group (n = 14). Blood glucose was measured weekly after transplantation by glucometer. Histochem istry and immunofluorescence were performed to characterize pancreatic histology, morphology and markers expressed in receipt pancreas. Results Compared with control group and bone marrow mesenchymal cells group, blood glucose levels in bone marrow mesenchymal cells group were significantly reduced at first week after transplantation[( 16. 6 ± 1.6 ) vs ( 26. 3 ± 0. 5 ) / ( 24. 4 ± 1.3 ) mmol/L, P ＜ 0. 05]and sustained to reduce at 6th week after transplantation[( 16. 5 ± 1.5 ) vs ( 27.7 ± 0. 1 ) mmol/L in control group,P＜0. 05]. One week after transplantation, the islets number in bone marrow mesenchymal cells group was larger than in control group ( 21.2 ± 1. 1vs 11.2 ± 1.3, P ＜ 0. 05 ) and bone marrow mononuclear cells group ( 21.2 ± 1. 1vs 12. 2 ± 1.3 ,P ＜0. 05 ). One weeks after transplantation, the beta cell number in bone marrow mesenchymal cells group was larger than in control group (415.9 ± 25.4 vs 65.9 ±7. 1,P＜0.05) and bone marrow mononuclear cells group (415.9 ±25.4 vs 64. 1 ±6.5,P＜0.05). In bone marrow mononuclear cells and bone marrow mesenchymal cells groups, there were several BrdU ( + )Insulin( - ) cells and BrdU( + )Insulin( - ) cells in the islets. Conclusion The effect of bone marrow mesenchymal cells transplantation to improve diabetic islet function is more satisfactory than bone marrow mononuclear cells transplantation. Bone marrow mesenchymal cells transplantation can initiate pancreatic islets β cells regeneration by both proliferation of β cells and differentiation of pancreatic stem cells.     

心脏不停跳与含血停跳对血液动力学影响的比较

目的 通过比较心脏不停跳与含血停跳对血液对力学的影响,评价心脏不停跳的心肌保护效果。方法 选择心功能Ⅲ级的择期二尖瓣膜置换手术患者30例,随机分为Ⅰ组(不停跳组)、Ⅱ组(持续微温血停跳组)和Ⅲ组(间断冷血停跳组),每组10例。于麻醉前、CPB前、停CPB10、30、60min及术毕各时相监测血液动力学指标。结果 停CPB至术毕各时相,Ⅰ、Ⅱ组的CI显著高于麻醉前水平和Ⅲ组的同期水平(P<0.01或P<0.05)。术毕,Ⅰ组和Ⅱ组的LVSWI显著高于麻醉前水平(P<0.05)。从停CPB10min至术毕各时相,Ⅰ、Ⅱ组的SVRI显著低于麻醉前水平(P<0.01),Ⅰ组的SVRI显著低于Ⅲ组的同期水平(P<0.05)。结论 心脏不停跳的心肌保护效果优于间断冷血停跳组,与持续微温血停跳无显著差异。     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。