微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞增殖影响的研究

目的 探讨微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞增殖的影响.方法 将前列腺癌细胞系PC3和DU145分为2组:阴性对照组-转染随机序列(dsCon-trol);实验组-转染miR-370-5p或miR-370-5p+siP21.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞中p21 mRNA的表达及前列腺癌细胞系中miR-370-5p的基础表达情况;蛋白质印迹法检测p21蛋白的表达;集落形成实验检测各组单个细胞克隆增殖情况;细胞增殖实验检测转染后各组细胞的增殖能力.结果 与正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)比较,前列腺癌细胞系PC3和DU145中miR-370-5p表达下降;与阴性对照组相比,实验组PC3和DU145细胞中p21 mRNA的相对表达量分别提高了(2.457±0.392)倍和(1.844±0.295)倍.实验组PC3和DU145细胞中p21蛋白的相对表达分别为(0.52±0.09)和(0.63±0.14),阴性对照组为(0.18±0.06)和(0.24±0.05),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组和实验组中PC3和DU145细胞的集落形成数目分别为(0.281±0.024)、(0.084±0.016)、(0.293±0.017)和(0.310±0.041)、(0.088±0.019)、(0.300±0.032),实验组在转染miR-370-5p后,细胞集落形成数目均较阴性对照组少;而在miR-370-5p+siP21共转染后,与转染miR-370-5p组相比较,PC3和DU145细胞集落形成数目均显著恢复,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞增殖实验结果显示,实验组转染miR-370-5p后,PC3和DU145细胞在48、72、96 h的存活情况(用吸光度OD值表示)分别为(0.395±0.040)、(0.691±0.042)、(0.874±0.045)和(0.437±0.044)、(0.700±0.051)、(0.875±0.052),与阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);miR-370-5p+siP21共转染后48、72、96 h,PC3和DU145细胞的OD值分别为(0.675±0.041)、(1.072±0.124)、(1.323±0.136)和(0.633±0.106)、(1.072±0.167)、(1.337±0.102),与转染miR-370-5p比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-370-5p能够通过上调p21蛋白的表达抑制前列腺癌细胞的增殖.     

miR-363-3p表达异常对人前列腺癌细胞生物学表型的影响

目的 研究微小RNA-363-3p(miR-363-3p)在人前列腺癌细胞和正常前列腺上皮中的表达并探究miR-363-3p对前列腺癌细胞生物学表型的影响。方法 分别提取人前列腺癌细胞DU145、PC3和正常肝细胞RWPE-1的总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测miR-363-3p的表达。运用脂质体介导的方法分别将慢病毒空载体pCDH-vector(简称PCDH)及构建好的慢病毒质粒pCDH-miR-363-3p(简称miR-363-3p质粒)和pCDH-miR-363-3p sponge(miR-363-3p sponge质粒)转染DU145、PC3细胞,利用CCK8和平板克隆实验检测miR-363-3p表达改变后对细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-363-3p表达变化对细胞体外迁移侵袭能力的影响;微管实验检测miR-363-3p表达变化对细胞体外成管能力的改变。结果 miR-363-3p在人前列腺癌细胞与正常前列腺上皮细胞中的表达水平相比,显著上调(P0.05)。体外实验中,过表达miR-363-3p能显著增强人前列腺癌细胞的增殖、迁移侵袭及微管形成能力,下调miR-363-3p后上述生物学表型均受到抑制,且差异显著。结论miR-363-3p在人前列腺癌细胞中表达上调,过表达miR-363-3p可促进人前列腺癌细胞体外增殖、迁移侵袭和微管形成能力。在前列腺癌发病进程中,miR-363-3p可能扮演促癌基因的角色,有望成为前列腺癌治疗的新靶点。     

LncRNA MEG3调控microRNA-181b-5p/TIMP3对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响

目的 探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)调控微小RNA-181b-5p(microRNA-1816-5P,简称miR-181b-5p)/组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。方法 收集2019年12月—2021年12月本院所收治的20例前列腺癌患者前列腺癌组织及其对应癌旁组织；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织MEG3、miR-181b-5p表达；将前列腺癌细胞(PC3细胞)随机分为对照组(未处理)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1-MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG)、pcDNA3.1-MEG3+miR-NC组(pcDNA3.1-MEG3与miR-NC共转染)、pcDNA3.1-MEG3+miR-181b-5p mimic组(pcDNA3.1-MEG3与miR-181b-5p mimic共转染);qRT-PCR检测细胞MEG3、miR-181b-5p表达；MTT实验、Transwell实验、划痕实验分别检测PC3细胞活力、侵袭及迁移能力；Western blot检测PC3...     

hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌进展

目的:研究hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路调控前列腺癌的进展的分子机制。方法:核质分离检测hsa_circ_0005221和miR-339-5p在细胞中的表达定位;Pulldown检测hsa_circ_0005221结合的miRNA;软件预测结合荧光素酶报告基因确定与hsa_circ_0005221结合的RNA是miR-339-5p;定量PCR检测hsa_circ_0005221在前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞的表达量;在前列腺癌细胞分别转染hsa_circ_0005221过表达质粒和siRNA测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及上皮间质转化(EMT)和凋亡水平;在敲低hsa_circ_0005221基础上,转染miR-339-5P mimics和inhibitor测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及EMT标志性蛋白、STAT5A和凋亡水平。结果:hsa_circ_0005221在前列腺癌细胞的表达水平明显高于前列腺上皮细胞。核质分离实验表明hsa_circ_0005221、miR-339-5P均主要在胞质中表达。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221,其增殖、侵袭、迁移及EMT能力明显下降;凋亡水平增加。过表达hsa_circ_0005221则结果相反。在软件预测排名前5的miRNA中,Pulldown实验结果显示与hsa_circ_0005221结合的有miR-339-5P、miR-17、miR-520H;敲低或过表达hsa_circ_0005221,miR-339-5P变化最明显。荧光素酶报告基因结果显示hsa_circ_0005221与miR-339-5P结合。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221基础上转染miR-339-5P mimics,其增殖、侵袭和迁移能力明显下降,凋亡水平增加,E-cad水平增加,N-cad水平下降,STAT5A表达水平增加。敲低hsa_circ_0005221基础上上转染miR-339-5P mimics则结果相反。结论:hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌的进展。     

miR-1249-5p对前列腺癌PC-3细胞增殖、转移和细胞周期的影响

目的探讨miR-1249-5p对前列腺癌PC-3细胞增殖、转移和细胞周期的影响。方法采用OncoMir肿瘤数据库(OMCD)分析miR-1249-5p表达水平与前列腺癌患者总生存期的关系。将人前列腺癌细胞株PC-3分为两组:miR-1249-5p组和阴性对照组。以Lipofectamine 2000为介导,将miR-1249-5p拟似物脂质体复合物或阴性miRNA脂质体复合物转染入对数生长期的PC-3细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组PC-3细胞miR-1249-5p的表达水平,采用集落形成实验检测两组PC-3细胞增殖能力的变化,采用Transwell实验检测两组PC-3细胞侵袭变化,采用流式细胞仪检测两组PC-3细胞周期变化。通过miRNA预测软件miRGator预测miR-1249-5p的靶基因。RT-qPCR和Western blotting法分别检测miR-1249-5p的靶基因表达。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验。结果与miR-1249-5p低表达的前列腺癌患者相比,miR-1249-5p表达水平较高的前列腺癌患者总生存期较长,差异具有统计学意义(P<0.01)。miR-1249-5p组miR-1249-5p表达水平(10.74±1.19)明显高于阴性对照组(1.56±0.27),差异具有统计学意义(P<0.01)。miR-1249-5p组集落形成数[(35.86±6.94)个/孔]明显少于阴性对照组[(88.94±11.66)个/孔],差异具有统计学意义(P<0.01)。miR-1249-5p组穿膜细胞数[(25.01±6.83)个/高倍视野]明显少于阴性对照组[(82.76±8.35)个/高倍视野],差异具有统计学意义(P<0.01)。miR-1249-5p组处于G_(0)~G_(1)期的细胞比例[(50.79±6.61)%]明显高于阴性对照组[(27.09±2.30)%],差异具有统计学意义(P<0.01),PC-3细胞被抑制在G_(0)~G_(1)期。神经前体细胞表达发育调控蛋白9(NEDD9)可能是miR-1249-5p的靶基因。与阴性对照组比较,miR-1249-5p组NEDD9基因表达水平显著低于阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论miR-1249-5p可以抑制前列腺癌PC-3细胞增殖、转移和细胞周期,其可能通过负调控原癌基因NEDD9表达实现。     

miR-105-5p在胃癌中的表达及其意义与生物学功能

目的:探讨miR-105-5p在胃癌(GC)中的表达情况、临床意义及生物学功能及其潜在的作用机制。方法:应用real-time PCR检测miR-105-5p在GC组织与癌旁组织以及不同GC细胞(MGC-803,MKN-1,SGC-7901,BGC-823和AGS)与正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达;分析miR-105-5p的表达与GC临床病理特征及患者预后的关系;采用Transwell迁移和侵袭实验以及MTT实验检测miR-105-5p对GC细胞迁移与侵袭能力以及增殖能力的影响;应用生物信息学工具预测miR-105-5p的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-105-5p对靶点的调节作用。结果:miR-105-5p在GC组织的表达明显高于癌旁组织,在各GC细胞中的表达均明显高于正常胃黏膜细胞(均P0.05)。miR-105-5p的表达水平与肿瘤大小(P=0.020)和远处转移(P=0.004)明显有关;miR-105-5p低表达GC患者的总体生存率明显高于miR-105-5p高表达组的患者(P=0.001 8)。选择miR-105-5p表达量相对较低的BGC-823细胞和相对较高的MKN-1细胞,分别转染miR-105-5p模拟物和miR-105-5p抑制物,转染后结果显示,BGC-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,而MKN-1细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显抑制(均P0.05)。生物信息学分析发现,DIRAS家族GTP结合RAS样3(DIRAS3)可能是miR-105-5p的作用靶点;荧光素酶报告实验显示,miR-105-5p能够负向调节DIRAS3-3'UTR的荧光素酶活性;Western blot显示,转染miR-105-5p模拟物的BGC-823细胞中DIRAS3的表达明显下调,转染miR-105-5p抑制物的MKN-1细胞DIRAS3的表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-105-5p在GC中表达升高,其可能通过靶向作用于DIRAS3增强GC细胞的迁移、侵袭及增殖,进而促进GC的发生发展。     

微小RNA-20b-5p/E2F转录因子5介导转化生长因子-β1调节前列腺癌细胞上皮-间充质转化的作用机制研究

目的探讨前列腺癌细胞中微小RNA(miR)-20b-5p/E2F转录因子5(E2F5)介导转化生长因子-β1(TGF-β1)调节前列腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT), 从而促进前列腺癌发生发展的作用机制。方法分析数据库, 预测miR-20b-5p的靶基因, 双荧光报告基因检测miR-20b-5p对E2F5 mRNA的3’UTR的靶向抑制。E2F5的野生型(WT)及突变型(Mut)的3’端非编码区(3’UTR)分别转染PC3和DU145细胞后, 再做TGF-β处理, 双荧光报告基因检测E2F5是否是TGF-β和miR-20b-5p的共同靶点。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。PC3和DU145细胞分别转染miR-20b-5p抑制剂和模拟物及其对照RNA后, Western blot检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。分别取两组前列腺增生和前列腺癌组织进行mRNA基因测序, 比较两者E2F5的表达。PC3细胞敲低miR-20b-5p的同时也敲低E2F5, Western blot检测EMT相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin...     

miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移

目的探讨miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。方法人工合成miR-21 mimic/inhibitor及其对照组序列,分别转入前列腺癌细胞株C4-2、DU145中,收集细胞行RT-qPCR检测miR-21、FOXO1 mRNA表达,行Western blot检测FOXO1、E-cadherin和N-cadherin表达,行Transwell试验检测转染后前列腺癌细胞侵袭透膜能力变化。结果前列腺癌细胞株C4-2、DU145转染miR-21 mimic/inhibitor及对照序列后,RT-qPCR检测miR-21表达升高/降低明显(P0.05),RT-qPCR检测FOXO1 mRNA表达与miR-21一致。在Western blot结果中,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达高于对照组,E-cadherin表达相反;转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达低于对照组,E-cadherin表达相反。Transwell试验显示,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞侵袭透膜能力较对照组增强(P0.01),转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞侵袭能力较对照组减弱(P0.01)。结论 miR-21通过诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。     

lncRNA NPIPA9靶向miR-210-3p对前列腺癌细胞生长和迁移的影响

目的:分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量，通过过表达lncRNA NPIPA9检测miR-210-3p的相对表达量及对前列腺癌细胞生长和迁移的影响。方法:通过Oncomine数据库分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA NPIPA9在前列腺癌细胞株DU-145、PC-3、C4-2B、22Rv1、LNCaP和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中的相对表达量。体外培养前列腺癌PC-3细胞，分为两组：NPIPA9组和对照组，NPIPA9组转染100 nmol/L lncRNA NPIPA9载体，对照组转染100 nmol/L对照载体。CCK-8法检测PC-3细胞的增殖活力。Transwell实验检测PC-3细胞的迁移能力。生物信息学技术预测lncRNA NPIPA9的潜在靶点。双荧光素酶报告基因实验确定lncRNA NPIPA9和miR-210-3p的靶向结合关系。RT-qPCR检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中miR-210-3p相对表达量的影响。Western blotting法检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中核因子κB(NF-κB)通路蛋白表达量的影响。计量资料以均数±标准差( ± s)表示，两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:前列腺癌组织中lncRNA NPIPA9相对表达量低于癌旁组织，差异具有统计学意义( P<0.01)。前列腺癌细胞株中lncRNA NPIPA9相对表达量均低于RWPE-1细胞，差异具有统计学意义( P<0.01);前列腺癌PC-3细胞中lncRNA NPIPA9相对表达量最低，差异具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比，lncRNA NPIPA9对前列腺癌PC-3细胞活力具有抑制作用，差异具有统计学意义( P<0.05)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞迁移数目分别为(101.70 ± 8.63)、(45.97 ± 8.83)个，lncRNA NPIPA9对PC-3细胞迁移具有抑制作用，差异具有统计学意义( P<0.01)。lncRNA NPIPA9可以直接靶向结合miR-210-3p，差异具有统计学意义( P<0.01)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞中miR-210-3p相对表达量分别为5.32±0.79和1.11±0.56，lncRNA NPIPA9可直接下调PC-3细胞中miR-210-3p表达，差异具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比，lncRNA NPIPA9能够降低PC-3细胞中NF-κB通路蛋白c-Myc、MMP-9、VEGF、p65、p50表达。 结论:lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中表达下调，其通过靶向并负调控miR-210-3p，降低前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移能力。     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

FOXN2在前列腺癌组织的表达及对前列腺癌细胞生物学的影响

探讨双头框蛋白N2（FOXN2）在前列腺癌（PCa）组织中的表达以及对PCa细胞生物学的影响。方法 选取宜宾市第二人民医院50例接受手术治疗的PCa患者的标本及癌旁组织,通过RT-qPCR实验和Western blot实验分别检测PCa组织和癌旁组织中的FOXN2 mRNA及蛋白的表达水平,并分析PCa组织中FOXN2与患者临床病理特征的相关性。通过RT-qPCR实验检测正常前列腺细胞RWPE-1、PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中FOXN2 mRNA的表达水平。选取PC-3细胞为研究对象,分为FOXN2过表达组、空载体对照组以及对照组,分别通过MTT实验、流式细胞实验、Transwell实验以及Western blot实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及相关蛋白Bax、CyclinD1、MMP-2的表达量。结果 与癌旁组织相比,FOXN2的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,与TCGA数据库中结果一致。FOXN2低表达与PCa患者淋巴转移、TNM分期以及Gleason评分有关（P=0.003、0.005、0.002）。与人正常前列腺细胞RWPE-1相比,FOXN2在PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中均呈现低表达（P<0.05）,其中PC-3细胞中表达量最低。与对照组和空载体对照组相比,FOXN2过表达组的PC-3细胞在作用24 、48 、72 h后增殖能力显著下降（F=290.400、57.735、113.014,P<0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著下降（P<0.05）;PC-3细胞的凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;PC-3细胞的迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）,MMP-2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。结论 FOXN2在PCa组织及细胞中低表达,过表达FOXN2可抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

微小RNA-205-5p调控轴抑制蛋白2基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制的临床研究

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-205-5p靶向调节轴抑制蛋白2(AXIN2)基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法收集2017年1月至2019年1月山西省人民医院手术切除结肠癌组织组织标本并购买结肠癌细胞系,分别以距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织和人正常结肠黏膜上皮细胞系为对照。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测分别检测组织和细胞中miR-205-5p和AXIN2表达水平。荧光素酶报告实验验证miR-205-5p与AXIN2的靶向关系。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测各组转染细胞增殖和凋亡变化,两组和多组间比较分别采用t检验和单因素方差分析。结果结肠癌组织及细胞系中miR-205-5p低表达(2.16±0.24比1.00±0.04,t=10.660,P<0.01),AXIN2高表达(mRNA,0.21±0.02比1.00±0.04,t=30.600,P<0.01;蛋白,0.64±0.03比1.44±0.06,t=26.670,P<0.05),差异均有统计学意义。AXIN2是miR-205-5p的靶基因。mimic组AXIN2蛋白表达量显著低于Blank组和NC组,差异有统计学意义(0.33±0.03,t=116.490,P<0.05);miR-205-5p抑制剂(inhibitor)组AXIN2蛋白表达量显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义(1.67±0.11,t=11.270,P<0.05)。miR-205-5p mimic组(增殖,48 h 0.82±0.09,t=5.375,P<0.05;72 h 1.46±0.13,t=3.333,P<0.05;凋亡,28.71±2.27,t=12.350,P<0.05)和AXIN2沉默表达(siRNA-AXIN2)组(增殖,48 h 1.11±0.11,t=2.814,P<0.05;72 h 1.68±0.06,t=4.959,P<0.05;凋亡,4.45±0.64,t=5.090,P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著低于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义;而miR-205-5p inhibitor组(增殖,48 h 2.11±0.18,t=4.386,P<0.05;72 h 2.66±0.19,t=4.898,P<0.05;凋亡,4.71±0.26,t=5.155,P<0.05)和AXIN2过表达(OE-AXIN2)组(增殖,48 h 0.44±0.05,t=0.002,P<0.05;72 h 0.88±0.11,t=7.446,P<0.05;凋亡,25.65±2.12,t=10.900,P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著高于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著低于Blank组和NC组,差异有统计学意义。结论miR-205-5p在结肠癌中异常升表达,AXIN2呈低表达。miR-205-5p抑制表达靶向上调AXIN2表达可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡。     

微小RNA-23a-5p/肿瘤蛋白53诱导的核蛋白1调控胰腺癌细胞吉西他滨耐药的实验研究

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)调控胰腺癌吉西他滨耐药的分子作用机制。方法反转录聚合酶链反应(qPCR)检测来自桂林医学院附属医院2015年1月至2018年12月收治的胰腺癌患者的临床标本miR-23a-5p表达水平,细胞实验检测miR-23a-5p对吉西他滨处理下肿瘤蛋白53诱导的核蛋白1(TP53INP1)及细胞增殖和凋亡相关因子表达的影响,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况。荧光素酶报告实验检测miR-23a-5p和TP53INP1是否直接作用。构建胰腺癌皮下成瘤小鼠模型,检测动物体内miR-23a-5p瘤体大小和吉西他滨耐药性的影响,组间比较采用多重比较检验或t检验。结果耐药组织中miR-23a-5p的表达量显著高于不耐药组(2.267±0.334,t=4.355,P<0.01),miR-23a-5p直接靶向调控TP53INP1降低其表达(0.423±0.095,t=5.649,P<0.01),miR-23a-5p过表达组(IC50=13.23)胰腺癌细胞增殖活性显著高于对照组(IC50=8.32,t=5.119,P<0.01),细胞凋亡比例[(15.080±0.838)%]显著低于对照组[(30.710±0.566)%,t=7.163,P<0.01],TP53INP1和miR-23a-5p共处理组(IC50=7.932)胰腺癌细胞增殖水平显著低于miR-23a-5p单独处理组(IC50=12.570,t=12.57,P<0.01),凋亡水平[(32.350±3.212)%]显著高于miR-23a-5p单独处理组[(15.680±1.358)%,t=6.764,P<0.01],动物实验结果表明敲低miR-23a-5p吉西他滨处理后显著抑制肿瘤生长[(169.090±25.889)cm^3,t=4.351,P<0.01;(0.097±0.031)g,t=3.776,P<0.01],差异均有统计学意义。结论miR-23a-5p介导TP53INP1调控胰腺癌细胞凋亡和吉西他滨耐药。     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导细胞杀伤作用的敏感性

目的:探讨硼替佐米是否能够增强前列腺癌细胞对NK细胞介导杀伤作用的敏感性,以及是否在不同类型的人前列腺癌细胞系中有相似的作用。方法:以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺癌细胞株DU145为模型,不同浓度(0、5、10、15、20、25nmol/L)硼替佐米处理细胞后,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,Annexin V/PI法检测细胞凋亡率。结果:15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞48、72h后,各处理组细胞的增殖率分别为(82.79±2.04)%、(73.59±2.95)%、(74.16±6.16)%和(71.24±5.30)%、(51.20±2.91)%、(38.02±2.67)%,同样处理LNCaP细胞后,各处理组细胞的增殖率分别为(77.04±7.74)%、(42.61±6.62)%、(23.85±6.04)%和(36.45±7.02)%、(14.94±5.76)%、(11.65±5.87)%。与对照组相比,硼替佐米强烈抑制两种细胞系的增殖(P0.05)。15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞24h后,DU145细胞的凋亡率分别为(14.41±1.32)%、(16.13±1.55)%、(14.48±1.42)%,而在LNCaP细胞,20、25nmol/L硼替佐米处理24h后,凋亡率为(12.77±1.28)%和(14.84±1.65)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),DU145细胞对硼替佐米诱导的凋亡作用较LNCaP细胞更加敏感。但是,在短期分析中硼替佐米不能致敏两种细胞系对NK细胞介导的杀伤作用。在长效分析中,用硼替佐米处理肿瘤细胞后,20nmol/L硼替佐米+NK组诱导的DU145细胞和LNCaP细胞凋亡率分别为(41.83±5.06)%和(30.31±3.62)%,较单独应用硼替佐米或者NK细胞更高(P0.05)。结论:硼替佐米能够应用于致敏前列腺癌细胞对NK细胞介导的杀伤作用的敏感性,提高当前前列腺癌的治疗水平。而且此治疗策略对雄激素非依赖性的前列腺癌患者更有效。     

长链非编码RNA反义RNA 1靶向微小RNA-501-3p对食管癌细胞恶性生物学行为影响的实验研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胸腺生成素反义RNA 1(TMPO-AS1)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法2016年6月至2019年12月,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测20例食管癌组织和癌旁组织中lncRNA TMPO-AS1和微小RNA(miR)-501-3p的水平,食管癌Eca109细胞分为lncRNA TMPO-AS1干扰组(转染si-NC和si-TMPO-AS1);miR-501-3p过表达组(转染miR-NC和miR-501-3p);lncRNA TMPO-AS1过表达组(转染pcDNA和pcDNA-TMPO-AS1);lncRNA TMPO-AS1和miR-501-3p共抑制组(转染si-TMPO-AS1+anti-miR-NC和si-TMPO-AS1+anti-miR-501-3p)。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测食管癌Eca109细胞增殖、凋亡率、细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证lncRNA TMPO-AS1与miR-501-3p的调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差进行分析。结果食管癌组织组中的lncRNA TMPO-AS1水平(2.64±0.26)高于癌旁组织(1.00±0.09,t=26.657,P<0.05),miR-501-3p水平(0.44±0.04)低于癌旁组织(1.00±0.07,t=31.063,P<0.05);干扰lncRNA TMPO-AS1的Eca109细胞24 h增殖(0.36±0.03)低于si-NC组(0.39±0.03,t=2.121,P<0.05),48 h增殖(0.45±0.04)低于si-NC组(0.75±0.07,t=11.163,P<0.05),72 h增殖(0.57±0.05)低于si-NC组(1.16±0.09,t=17.191,P<0.05),迁移细胞数[(54.14±5.65)个]低于si-NC组[(113.02±9.87)个,t=15.531,P<0.05],侵袭细胞数[(47.69±5.01)个]低于si-NC组[(96.32±9.88)个,t=13.169,P<0.05],细胞凋亡率[(22.15±2.22)%]高于si-NC组[(6.98±0.69)%,t=19.576,P<0.05];过表达miR-501-3p的Eca109细胞48 h增殖(0.51±0.05)低于miR-NC组(0.77±0.07,t=9.067,P<0.05),72 h增殖(0.65±0.06)低于miR-NC组(1.15±0.09,t=13.867,P<0.05),迁移细胞数[(61.23±6.33)个]低于miR-NC组[(115.25±9.25)个,t=14.458,P<0.05],侵袭细胞数[(53.14±5.33)]低于miR-NC组[(98.32±8.47)个,t=13.543,P<0.05],细胞凋亡[(19.58±1.74)%]高于miR-NC组[(7.23±0.77)%,t=19.471,P<0.05],差异均有统计学意义。结论lncRNA TMPO-AS1通过靶向miR-501-3p促进食管癌细胞的恶性生物学行为,可被视为食管癌患者的潜在治疗靶标。     

长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA通过微小RNA-520g-3p调控胰腺癌细胞增殖、迁移的实验研究

目的:探讨长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA(lncRNA HOTAIR)通过靶向微小RNA-520g-3p(miR-520g-3p)对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞中miR-520g-3p、HOTAIR表达水平;转染HOTAIR小干扰RNA至SW19...     

长链非编码RNA Linc00472靶向微小RNA-381对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的观察长链非编码RNA Linc00472(LncRNA Linc00472)靶向调控微小RNA-381(miR-381)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法收集2017年3月至2018年5月郑州大学第一附属医院收治的骨肉瘤患者29例为研究对象,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨肉瘤组织和瘤旁组织中Linc00472的表达。将骨肉瘤U2OS细胞分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Linc00472组、pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组、pcDNA3.1-Linc00472+miR-381组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭。双荧光素酶报告实验鉴定Linc00472与miR-381的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果Linc00472在骨肉瘤组织中的表达水平低于瘤旁组织(0.31±0.03比1.03±0.10,t=37.138,P<0.05),差异有统计学意义;与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Linc00472组细胞存活率[(100.29±10.12)%比(53.29±5.44)%]低于pcDNA3.1组(t=12.272,P<0.05),差异有统计学意义,迁移细胞数[(266.00±23.61)个比(124.00±12.01)个]与侵袭细胞数[(131.00±13.06)个比(62.00±6.24)个]少于pcDNA3.1组(t=16.082,P<0.05;t=14.301,P<0.05),差异有统计学意义,而细胞凋亡率[(8.58±0.91)%比(26.61±2.64)%]高于pcDNA3.1组(t=19.370,P<0.05),差异有统计学意义;miR-381过表达可抑制野生型载体WT-Linc00472细胞的荧光素酶活性(t=19.827,P<0.05),差异有统计学意义;与pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组比较,pcDNA3.1-Linc00472+miR-381组可增强细胞增殖[(53.17±5.33)%比(85.26±8.62)%]、迁移[(122.00±12.31)个比(223.00±22.18)个]及侵袭[(64.00±6.36)个比(104.00±10.20)个]能力高于pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组(t=9.499,P<0.05;t=11.945,P<0.05;t=9.983,P<0.05),细胞凋亡率[(26.11±2.62)%比(13.11±1.34)%]低于pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组(t=13.253,P<0.05),差异有统计学意义。结论LncRNA Linc00472通过靶向调控miR-381可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭并诱导细胞凋亡。