荧光蛋白表达对小鼠成纤维细胞系NIH3T3体外增殖能力的影响

目的观察不同荧光蛋白表达对体外培养的小鼠成纤维细胞系NIH3T3增殖能力的影响,为细胞示踪技术提供理论依据。方法将体外扩增培养的NIH3T3细胞随机分为对照组、pLEGFP-N1组、pEGFP-N1组、pDsRed2-C1组。对照组不作任何处理,其他3组分别采用逆转录病毒载体pLEGFP-N1和真核表达载体pEGFP-N1、pDsRed2-C1两种转染方式进行增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和红色荧光蛋白(RFP)标记,经G418筛选培养后,观察各组细胞荧光蛋白表达情况,并计算其阳性表达率;观察各组细胞贴壁率,绘制生长曲线并测定倍增时间。结果对照组NIH3T3细胞未见荧光蛋白表达;pLEGFP-N1、pEGFP-N1组均表达EFGP,pDsRed2-C1组表达RFP,而pLEGFP-N1组阳性表达率高于另外两组(P<0.01).各组细胞均有较高的贴壁率。pEGFP-N1组细胞倍增时间为(39.6±0.6)h,pDsRed2-C1组(40.3±0.7)h,pLEGFP-N1组(36.5±0.7)h,均明显晚于对照组(27.9±0.6)h(P<0.01).结论荧光蛋白表达对NIH3T3细胞体外增殖有一定程度的影响,但逆转录病毒载体抑制作用低于普通真核表达载体,可作为细胞移植时荧光蛋白标记的较好选择。     

应用荧光蛋白示踪组织工程骨体外构建的实验研究

目的应用荧光蛋白标记技术对组织工程骨体外构建过程进行细胞示踪。方法采用逆转录病毒pLEGFP-N1对种子细胞进行荧光蛋白标记,以羟基磷灰石为支架材料,体外构建细胞-材料复合体,测定细胞的粘附率。通过倒置荧光显微镜,定期观察种子细胞在支架材料内的分布。结果逆转录病毒载体pLEGFP-N1成功标记人骨髓基质干细胞(BMSCs),并对组织工程骨的体外构建和4周的体外培养进行了良好示踪;标记细胞的粘附率为(90.3±2.1)%,无标记处理细胞的粘附率为(92.0±1.5)%,两组数据差异无显著性意义(P=0.236)。结论采用逆转录病毒介导方式对种子细胞进行荧光蛋白标记后,细胞在材料内仍维持较高的粘附能力,这有利于对体外构建和长期培养组织工程骨时进行种子细胞示踪。     

GFAP启动子与骨髓基质干细胞神经胶质分化的筛选

目的 研究骨髓基质干细胞体外诱导分化，结合特异性GFAP启动子控制的EGFP的表达来筛选诱导的骨髓基质干细胞。方法 构建报告载体pGFAP-EGFP，原代培养的骨髓基质干细胞，在pME、RA、Iorskolin、bFGF、PDGF-AA、HRG-β等复合物的诱导7d后，pGFAP-GFP载体转染，G418抗生索筛选。荧光显微镜下观察存活细胞体内的EGFP表达情况，流式细胞仪测定荧光细胞的比率。结果 报告载体pGFAP-EGFP构建成功，转染骨髓基质干细胞后部分细胞存活，流式细胞仪测定82．74％的细胞表达EGFP。筛选出的细胞GFAP免疫细胞化学鉴定阳性。体外扩增后可以得到大量的目的细胞。结论 特异性GFAP启动子控制的EGFP的表达可以在体外有效的进行骨髓基质干细胞的筛选和扩增。筛选后的细胞具有胶质细胞表型，可提供足够的胶质细胞进行神经系统的细胞替代治疗。     

应用荧光蛋白标记技术对体外构建组织工程软骨的监测

目的: 应用荧光蛋白标记细胞的技术, 对组织工程软骨体外构建过程进行活细胞的实时示踪。方法: 采用逆转录病毒载体pLEGFP N1对人间充质干细胞进行荧光蛋白标记, 以同期培养未标记细胞为对照组, 体外构建细胞 材料复合体, 通过倒置荧光显微镜和扫描电镜观测种子细胞在支架材料内的分布与数量, 并对培养 7d的两组复合体进行细胞数量比较。结果: 逆转录病毒载体pLEGFP N1成功标记间充质干细胞, 并应用于工程化组织体外构建的示踪; 第 7d标记组细胞数 (3. 4±0. 1)×106 /个复合体, 未标记组细胞数 (3. 6±0. 1)×106 /个复合体, 两组数据无统计学差异(P=0. 339)。结论: 采用逆转录病毒介导方式对种子细胞进行荧光蛋白标记, 不影响细胞在材料内的增殖, 对体外构建组织工程软骨具有良好的示踪作用。     

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染对人骨髓基质细胞体外成骨诱导的影响

目的 研究增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染人骨髓基质细胞(MSC)，对其体外诱导后表达成骨表型的影响，探讨EGFP作为骨组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法 构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)重组逆转录病毒载体，并转染骨髓基质细胞，G418进行筛选。将转染后稳定表达绿色荧光蛋白的骨髓基质细胞(MSC-EGFP)进行成骨诱导扩增，以未转染的MSC为对照组，分别检测成骨诱导后碱性磷酸酶(AKP)活性，骨钙蛋白(OCN)含量和成骨细胞转录因子(Cbfal)的表达。结果 构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)重组逆转录病毒载体，转染后获得稳定表达绿色荧光蛋白的MSC-GFP，其体外经成骨诱导后，同样能表达成骨特征性表型，AKP，OCN，Cbfal表达和未转染组无明显差别。结论 MSC转染EGFP后，不影响其体外成骨诱导后成骨表型的表达，EGFP可作为骨组织工程种子细胞(MSC)良好的示踪剂。     

血管内皮生长因子基因稳定转染兔骨髓基质干细胞的研究

目的 检测人血管内皮生长因子(VEGF)基因稳定转染对兔骨髓基质干细胞(BM-SC)VEGF表达的影响.方法 分离并培养兔骨髓基质干细胞,利用脂质体介导pcDNA3.1-VEGF165转染兔BMSC,G418筛选稳定表达pcDNA3.1-VEGFl65的细胞克隆,RT-PCR、Western blot法检测转染前后细胞中VEGF165 mRNA和蛋白的表达.结果 通过筛选获得了稳定表达pcDNA3.1-VEGF165的细胞克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot结果显示:稳定转染组BMSC中可检测到VEGF165 mRNA和蛋白的表达,空白和空载体组未见VEGF表达.结论 pcDNA3.1-VEGF165载体转染的兔BMSC可稳定表达外源性VEGF165 mRNA和蛋白,可作为治疗骨缺损和骨缺血性坏死研究的种子细胞.     

绿色荧光蛋白基因逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞及表达的研究

目的　绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞(MSCs)及其表达情况。方法　pEGFP与逆转录病毒载体经过酶切、连接等构建重组的EGFP 逆转录病毒载体 ,转染PA3 17细胞 ,用G418筛选出抗性克隆 ,获病毒上清 (滴度达到 8.5× 10 5cfu/ml)并感染人MSCs。流式细胞仪测定转染效率后加入成骨细胞分化培养夜 (地塞米松 (10 -7mol/L)、β 甘油磷酸钠 (10mmol/L)、维生素C(5 0mg/L ) ) ,2周后观察转染细胞的分化情况。 结果　 48h后细胞转染效率为 7% ,G418筛选 2周后约 97%细胞出现抗性克隆 ,表达维持 4周。基因转染细胞能够分化为成骨细胞。结论　重组EGFP逆转录病毒载体能转染MSCs ,且不影响细胞的功能。     

体外转染牛碱性成纤维细胞生长因子对骨髓基质干细胞增殖的影响

目的：观察牛碱性成纤维细胞生长因子（bbFGF）基因体外转染兔骨髓基质干细胞（BMSC）的生长特性。方法：用脂质体法把pHβ-bbFGF7质粒导入体外分离培养的BMSC，G418筛选出阳性克隆，建立TBMSC系，体外连续传代培养TBMSC，观察生长特性。结果：在无血清Dulbecco改良基础培养基（DMEM)培养下，空白对照（BMSC）、阴性对照（BMSC／pHβ0)，第1、2天细胞分裂指数为5‰，第3天后细胞生长停滞。处理组细胞倍增时间为26．0h，分裂指数为40‰，差异有非常显著性（P＜0．01）。结论：将pHβ-bbGFF质粒体外转染兔骨髓基质干细胞可明显促进骨髓基质干细胞增殖，为组织工程化软骨的研究提供了依据。     

纤维蛋白凝胶种植技术在组织工程软骨体外构建中的应用

目的探讨纤维蛋白凝胶种植技术应用于体外构建组织工程软骨,从而改善目前常规构建技术的缺陷。方法首先采用逆转录病毒pLEGFP-N1对人间充质干细胞进行荧光蛋白标记,然后分别应用纤维蛋白凝胶种植技术(A组)和沉淀种植技术(B组),体外构建细胞-材料复合体,通过倒置荧光显微镜和扫描电镜等观测种子细胞在支架材料内的分布与数量。结果逆转录病毒载体pLEGFP-N1成功标记间充质干细胞,并应用于工程化组织体外构建的示踪;A组细胞在材料内分布更均匀、数量更多,构建第2天细胞数量为(3·53±0·18)×106/个复合体,而B组细胞为(0·88±0·13)×106/个复合体,两组数据差异非常显著(P<0·01)。结论纤维蛋白凝胶种植技术简单易行,可以改善种子细胞在软骨支架材料内的分布,并提高细胞密度,为体外高效构建组织工程软骨创造了条件。     

绿色荧光蛋白标记神经干细胞的体外研究

目的　构建携带绿色荧光蛋白 (GFP)基因的逆转录病毒载体pLNCX2 GFP ,用GFP对神经干细胞进行标记示踪。方法　应用基因克隆的方法 ,制备 pLNCX2 GFP ,借助阳离子脂质体转染包装细胞PA3 17,G418筛选阳性克隆 ,获取病毒上清 ;从胚胎大鼠脑中解剖分离和培养神经干细胞 ,用病毒上清感染大鼠胚胎神经干细胞。结果　经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了重组GFP逆转录病毒 ,pLNCX2 GFP转染包装细胞后可以产生GFP逆转录病毒 ,病毒感染大鼠胚胎神经干细胞可以长期表达绿色荧光。结论　逆转录病毒能够快速、稳定、长期地将GFP基因转入神经干细胞 ,这种标记方法非常有利于神经干细胞移植后结构和功能的研究     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7–, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20–, MUC2–). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

复合小剂量阿曲库铵对顺苯磺酸阿曲库铵起效时间的影响

目的观察顺苯磺酸阿曲库铵同时复合阿曲库铵用于全凭静脉诱导的起效时间。方法择期全麻手术患者80例,随机均分为A、B、C、D四组。A组单用3ED95(0.15 mg/kg)顺苯磺酸阿曲库铵作为对照组;另三组分别用3ED95顺苯磺酸阿曲库铵复合阿曲库铵0.05 mg/kg(B组)、0.10 mg/kg(C组)或0.15 mg/kg(D组)。采用TOF-Watch SX肌松监测。静注咪唑安定0.05mg/kg、芬太尼5μg/kg、依托咪酯0.3 mg/kg及相应剂量肌松药,记录起效时间,进行气管插管条件评级。结果B、C、D组肌松起效时间依次加快,均明显短于A组(P<0.01),但B、C、D组之间差异无统计学意义。结论复合小剂量阿曲库铵能缩短3ED95顺苯磺酸阿曲库铵的起效时间。     

胰头癌63例临床病理分析

目的:探讨接受外科治疗的胰头癌患者的临床病理特点。方法:回顾性将根治性切除与姑息性切除手术病例进行对照,对其年龄、性别、症状、体征、围手术期情况、肿瘤标记物检查、临床病理、手术并发症、手术切除率、生存率及其影响因素进行分析。结果:63例中,52例(91.2%)获得随访,根治组中位生存时间(13.8个月)明显高于姑息组(6.2个月)(P0.05),姑息组(6.2个月)与非手术组(5.4个月)无明显差异(P0.05);根治组患者导管腺癌发生率与姑息组比较有显著差异(P0.05);T1期患者切除率高于T4期(P0.01),CA19-9数值与胰头癌可切除率无明显相关(P0.05)。结论:手术是提高胰头癌患者生存率的重要手段,具有不同临床分期的胰头癌病人手术切除率及术后生存期具有显著差异。CA19-9可作为胰头癌常规的筛查方法,但与疾病进展程度无关。     

胰十二指肠切除术治疗胰头及壶腹部癌（附97例临床分析）

为提高胰头及壶腹部癌的疗效，总结９７例胰十二指肠切除术（ＰＤ）治疗胰头及壶腹部癌的诊治经验。癌肿切除率为３４．４％，手术并发症发生率为３８．４％，手术死亡率为１１．３％，术后１、３和５年生存率分别为６８．８％、４３．１％和３０．０％。认为要提高本病早期诊断率，必须对可疑高危病人提高警惕，首选Ｂ超检查，Ｂ超和ＥＲＣＰ两项联合检查可提高本病早期诊断。     

静脉皮瓣成活过程的实验研究

我们以兔为实验动物，通过微循环观察及血管内灌注填充剂，研究静脉皮瓣的成活过程。这一过程可分为２个阶段。第一阶段（术后７２小时内）为静脉血营养期：静脉血由静脉干通过小静脉吻合支、微静脉干间吻合支及终末微静脉吻合支回流至另一静脉。术后４８小时内毛细血管内无血液运动。第二阶段（术后７２小时～６周）为动脉血营养及血管改造期：术后７２小时新生血管开始向皮瓣内生长。术后７２无皮瓣动脉同主要来自皮瓣周围正常组织内的新生血管吻合使动脉血分布于整个皮瓣，这是静脉皮瓣成活的关键     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

Catamnestic study of childless patients of the Department of Andrology of Hamburg-Eppendorf University Hosptal

By means of a questionnaire, we carried out a catamnestic study of 1419 patients with a complaint of infertility. 27 per cent of the replying patients reported about the birth of children. 343 patients (38%) reported about one or more conceptions. Compared with previous studies, this investigation shows better results of therapies. We interprete this to be caused in better possibilities of therapy, esp. the Kallikrein therapy.     

An evaluation of quality of life of mothers of children with enuresis nocturna

The aim of this study was to evaluate the impact of enuresis nocturna on quality of life of the mothers. Mothers who have a child with monosymptomatic nocturnal enuresis (n = 28) and mothers who have a child without any health problems (n = 38) were enrolled in the study. Groups were in balance for background variables (child’s age, gender, and number of siblings; mother’s age, marital status, highest year of education completed, and occupation; presence of health insurance; and type of residence). Short-Form Health Survey (SF-36) Questionnaire, the Beck Depression Inventory (BDI), and Spielberg’s State-Trait Anxiety Inventory (STAI) were applied to all mothers. The mothers of children with enuresis had significantly lower quality-of-life scores in the SF-36 for the bodily pain (p = 0.015) and role emotional (p = 0.014) subscales. We observed significant difference between groups according to BDI; mean score was higher in mothers who have a child with enuresis nocturna (p = 0.017). There was no significant difference between groups according to the STAI. Significant differences according to bodily pain and role emotional subscales of SF-36, and the BDI scores, show that the mothers were negatively affected by having a child with monosymptomatic nocturnal enuresis.