脑损伤的修复与神经干细胞移植

概述大鼠中枢神经系统在脑损伤时的自我修复过程,包括其增殖、迁移、分化的时程;神经干细胞移植治疗脑损伤的效果;神经干细胞移植目前存在的问题.     

神经干细胞经枕大池移植后在损伤脑组织中的表达及分化

目的本实验将神经干细胞经枕大池移植到创伤性脑损伤模型大鼠蛛网膜下腔中，观察其向损伤脑组织迁移、存活及分化能力，探讨神经干细胞更安全、便捷及经济的移植途径。方法体外培养的神经干细胞（NSCS）取自胎鼠皮层，并用5-溴脱氧尿嘧啶（Brdu）标记。采用Feeney＇s自由落体脑创伤模型制成大鼠脑损伤模型，伤后24h将神经干细胞经枕大池移植到蛛网膜下腔，分别于移植后第1、2周处死取脑，行免疫组织化学染色检测BrdU、微管相关蛋白2（MAP2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结果免疫组织化学染色表明，BrdU（＋）神经干细胞迁移到脑内损伤灶，并分化成煳（＋）神经元或GFAP（＋）胶质细胞。结论神经干细胞具有从蛛网膜下腔迁移入脑内损伤组织、分化为神经元及神经胶质细胞。     

胶质细胞源性神经营养因子和肿瘤坏死因子可溶性受体基因修饰的神经干细胞联合移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）和肿瘤坏死因子可溶性受体（sTNFR）腺病毒感染的人神经干细胞移植治疗脊髓损伤模型的可行性。方法先包装和扩增含GDNF和sTNFR基因的重组腺病毒，然后用该腺病毒感染人神经干细胞，再将这些神经干细胞移植到脊髓损伤局部。实验动物与分组：雄性sD大鼠，A组：hGDNF和sTNFR转基因神经干细胞移植组；B组：空病毒转基因神经干细胞移植组；c组：神经干细胞移植组；D组：只横断脊髓，不作移植；E组：对照组，只咬除棘突和椎板，不横断脊髓，不做其他处理；F组：不作任何处理。免疫组化检测外源基因的局部表达，最后进行组织学检查和BBB功能评分。结果免疫组化显示局部有外源基因表达，A组BBB功能评分优于C组，但组织学结果未见明显优势；这两组BBB评分显著优于阴性对照组，组织形态也有明显改善。结论腺病毒介导的GDNF和sTNFR基因修饰的神经干细胞移植是一种较好的脊髓损伤治疗方法。     

转基因神经干细胞移植在缓解脑缺血性神经血管损害中的作用

目的 评价转染血管内皮生长因子(VEGF)基因的神经干细胞脑内移植后在宿主缺血区的神经血管保护作用。方法 建立大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型(tMCAO)并将其随机分成：(1)对照组；(2)细胞悬液磷酸盐缓冲液(PBS)移植组；(3)神经干细胞移植组；(4)转基因神经干细胞移植组，每组10例。立体定向法将BrdU标记的转基因神经干细胞移植到tMCAO大鼠的纹状体缺血半暗区。移植后2～12周进行神经损害严重程度评分(NSS)并与其他3组比较。移植后12周，免疫荧光染色观察转基因神经干细胞在脑内的分化、迁徙情况；免疫组织化学染色观察各组移植区毛细血管结构，并计每例动物以移植点为中心的一个100倍视野下内皮细胞数。结果移植后2～12周(4)组NSS评分均数分别为5，8、5．0、4．6、4．0、4．0、3．8，均低于其他3组。其中第8周显著低于(1)、(2)组(P=0．008)，第12周显著低于(1)、(2)、(3)组(P=0．000)。移植后12周，转基因神经干细胞在宿主脑内存活、迁徙，部分分化成神经元。转基因神经干细胞移植组移植区毛细血管结构相对完整。血管内皮细胞数显著多于其他3组。结论 转染VEGF基因的神经干细胞移植后对宿主局部血管和神经结构具有保护作用。     

高压氧早期干预神经干细胞移植治疗脑损伤的疗效观察

目的:观察在高压氧早期干预下,神经干细胞脑内移植治疗后脑损伤恢复的情况。方法:回顾26例创伤性颅脑损伤患者的临床资料,应用人胚胎培养增殖神经干细胞,向脑内病灶部位定植,并于神经干细胞移植术后第二天开始行高压氧治疗。结果:根据语言、肌张力、肌力、智力4个方面的观察指标,经术后3～19个月的随访观察,发现高压氧早期干预下的移植患者,病情恢复较同期手术的移植后患者在语言肢体功能改善程度大。其中以语言功能和肌张力改善最为明显,部分患者效果显著。结论:移植后及早进入高压氧舱行高压氧早期干预治疗,能够促进移植的神经干细胞成活,减少其凋亡,减轻损伤易感区组织水肿程度,改善损伤部位病理状态,促使神经干细胞增殖并游离到受损区域。联合应用高压氧对移植后患者的早期干预,在神经损伤患者的治疗上发挥了很好的作用。     

神经干细胞和施万细胞共移植治疗大鼠脊髓损伤

目的 观察神经干细胞和和施万细胞共移植治疗脊髓损伤的可行性。方法 体外培养胚胎脊髓源神经干细胞和施万细胞，将两种细胞共同移植到大鼠脊髓损伤部位，免疫组织化学染色鉴定神经干细胞在脊髓内的分化情况并观察记录大鼠行为学功能的恢复程度。结果 神经干细胞体外培养血清诱导分化可见大量具有少突胶质细胞特征的分化细胞，与施万细胞共培养则可促进神经干细胞向神经元方向分化。两种细胞共移植至脊髓损伤部位后，施万细胞可以促进神经干细胞的分化和成熟；共移植可以促进脊髓功能的恢复。结论 神经干细胞在体内和体外都具有多向分化能力，且其分化方向和成熟程度可以被多种环境因子所调控。神经干细胞和施万细胞共移植可以促进脊髓功能恢复。     

异体和自体骨髓源神经干细胞周围神经移植实验研究

[目的]研究异体和自体骨髓源性神经十细胞移植于周围神经后神经修复情况，以及所移植神经干细胞能否以分化神经元的形式存活。[方法]取新西兰人白兔骨髓基质细胞(BMSCS)体外培养及诱导分化为神经干细胞，采用Brdu标记细胞和免疫细胞化学SABC法检测观察培养细胞：随机选择同种异体BMSCS移植、自体BMSCS移植和未移植组。[结果]异体和处自体移植区生K的神经纤维均显波纹状排列，神经纤维密度比正常神经低但形态近似，可见有髓神经纤维的郎飞氏结，可见到神经纤维间隙的黏液基质及少量成纤维细胞，但均未见分化神经元样的细胞存在；未移植侧生K的神经纤维稀疏，可见到比较多的断裂和不连续，基质黏液变明显；异体移植组神经纤维生K的走行序列比自体移植组神经纤维紊乱，可见到反应性增生。[结论]异体和白体骨髓源性神经干细胞周围神经缺损区移植均有利于神经纤维的修复，异体比自体移植后神经纤生长较差但差别较小；本方法神经干细胞朱见以分化神经元的形式存活。     

新生鼠缺血性脑损伤行人脐血间充质干细胞移植两种注射途径比较

目的 比较颈外静脉注射、腹腔注射途径用于人脐带间充质干细胞在缺氧缺血性脑损伤鼠的移植效能.方法 选取38只SD新生大鼠制备缺血性脑损伤动物模型,采用颈外静脉注射、腹腔注射途径行人脐带间充质干细胞移植,选用Morris水迷宫测试方法,了解干细胞干预后鼠学习记忆力改善情况,采用免疫组化方法,了解干细胞在鼠脑组织内的定植.结果 Morris水迷宫测试,颈外静脉注射组潜伏逃避时间较腹腔注射组缩短;脑片单位面积内DiI阳性细胞数,颈外静脉注射组较腹腔注射组增多.结论 颈外静脉途径移植人脐带间充质干细胞进入缺氧缺血性脑损伤鼠脑内的效能明显高于腹腔途径移植.     

新生鼠缺血性脑损伤行人脐血间充质干细胞移植两种注射途径比较

目的比较颈外静脉注射、腹腔注射途径用于人脐带间充质干细胞在缺氧缺血性脑损伤鼠的移植效能。方法选取38只SD新生大鼠制备缺血性脑损伤动物模型,采用颈外静脉注射、腹腔注射途径行人脐带间充质干细胞移植,选用Morris水迷宫测试方法,了解干细胞干预后鼠学习记忆力改善情况,采用免疫组化方法,了解干细胞在鼠脑组织内的定植。结果 Morris水迷宫测试,颈外静脉注射组潜伏逃避时间较腹腔注射组缩短;脑片单位面积内DiI阳性细胞数,颈外静脉注射组较腹腔注射组增多。结论颈外静脉途径移植人脐带间充质干细胞进入缺氧缺血性脑损伤鼠脑内的效能明显高于腹腔途径移植。     

脑出血后成年大鼠神经干细胞移植的研究

近年来，胚胎来源的神经干细胞移植治疗脑出血的研究已有报道，我们通过对大鼠脑出血模型进行成年神经干细胞移植治疗，观察出血部位移植神经干细胞的生长情况。