血管内皮生长因子在骨形态发生蛋白-2诱导成骨过程中的表达

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导成骨过程中的表达。方法采用昆明鼠20只，外科手术建立股部肌袋诱导成骨模型，以左侧为实验组，右侧为对照组。实验组肌袋内植入以明胶和羟基磷灰石复合物为载体的重组人骨形态发生蛋白（rh-BMP）-20．25mg；对照组仅植入空白载体。分别于术后3、7、14和21d取材，采用免疫组织化学和Western blot法检测VEGF的表达情况。结果术后3d可见大量问充质细胞聚集，胞质出现VEGF的表达（Western blot IA=4221．323±178．672），但随着间充质细胞分化为前软骨细胞并不断成熟，VEGF在间充质细胞内的表达逐渐消失，而在成软骨细胞和软骨细胞内的表达水平迅速提高（Western blot IA=7139．558±289．347），VEGF在成熟软骨细胞中的表达最为活跃（Western blot IA=15849．848±137．462），至到新骨形成，在成骨细胞和骨细胞中仍可检测到VEGF的强烈表达（Westernbid IA=9463．268±548．453）；而对照组则未检测到VEGF的表达。结论VEGF的表达贯穿BMP-2诱导成骨的全过程，并在成熟软骨细胞和成骨细胞呈现强烈表达；BMP-2具有促进VEGF合成与分泌的作用．rhBMP-2对成骨细胞VEGF表达的促进作用。     

血管内皮生长因子及骨形态发生蛋白2对成骨细胞生长的促进作用

目的研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）以及骨形态发生蛋白2（bone morphogendtic protein 2,BMP-2）对成骨细胞增殖的调节作用。方法提取人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）并使其分化为成骨细胞,分别添加不同浓度的VEGF和BMP-2进行药物干预,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法研究成骨细胞的增殖率。结果两组干预组的吸光度（A）值与对照组的A值相比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,对成骨细胞增殖的调节作用均随剂量和时间变化而改变,两组调节作用的最佳时间均为72 h左右。两组最佳作用浓度分别为：BMP-2为1.8×10-9 mol/L,对成骨细胞的增殖率达179.59%;VEGF为1×10^-8 mol/L,其增殖率达189.80%。结论 VEGF对成骨细胞增殖的促进作用不亚于BMP-2。     

血管内皮生长因子与骨形态发生蛋白促进牵引成骨的研究进展

牵引成骨技术（distraction osteogenesis，DO）因其能在原位快速成骨而被称为是一种内源性组织工程技术（endogenous tissue engineer）。自1992年McCarthy首次将D0技术用于下颌骨畸形患者的治疗以来，经过十多年的基础研究与临床实践，DO在颅颌面外科骨缺损修复重建中的临床应用越来越受到重视。在临床应用中发现，尽管D0为许多常规外科手术难以矫治的颅颌面骨严重发育不足、畸形及骨缺损的修复提供了一种新的矫治方法，然而，D0的某些并发症（如骨再生不良、延迟愈合、不愈合），     

碱性成纤维细胞生长因子增强重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨能力的剂量依赖性

目的 对碱性成纤维细胞生长因子（basic　fibroblast growth factor,bFGF）增强重组人骨形态发生蛋白-2（recombinant human bone　morphogenetic protein-2,rhBMP-2）诱导成骨能力的剂量依赖性进行研究。方法280只BALB/c小鼠随机分为8组,每组35只,实验组rhBMP-2的剂量均为0.5mg,bFGF的剂量分别为0、2、10、40、80、300、500活性单位（IU）;设立单纯牛松质骨载体组为对照组。按实验设计,分别将rhBMP-2混悬液及bFGF-PVP溶液与牛松质骨载体充分混匀,负压下真空抽吸,冻干。将复合植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋内,各组分别于术后第3、5、7、9、14、21d六个时间点取材,进行组织学、X线分析以及钙含量测定,观察各组的诱导成骨情况。结果（1）bFGF剂量为10～80IU时,间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成均早于其它各组,成骨量多于其它各组,组织钙含量明显高于其它各组（P<0.05）,提示此剂量bFGF使rhBMP-2的诱导成骨能力明显增强。（2）bFGF剂量为0.2、300 IU时,各组在间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成以及组织钙含量方面差异均无显著性意义（P>0.05）,提示此剂量bhBMP-2的诱导成骨能力无明显影响。（3）bFGF剂量为500IU时,术后第21d,仅1例标本可见散在的极少量新骨形成,其组织钙含量明显低于其     

血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-2在糖尿病病人骨组织内表达水平的研究

目的 探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2, BMP-2）在糖尿病病人胫骨组织内的表达水平。方法 在胫骨高位截骨术中,分别获取糖尿病病人（8例）和非糖尿病病人（8例）术部骨组织,从骨组织中提取总蛋白及RNA,用Western blot、RT-PCR检测骨组织中VEGF、BMP-2的表达水平。结果 糖尿病病人骨组织中VEGF、BMP-2蛋白和mRNA表达水平均明显低于非糖尿病病人。结论 糖尿病病人骨组织中VEGF、BMP-2因子表达低于正常水平,VEGF、BMP-2因子可能是影响糖尿病病人骨质及骨愈合的重要因素之一。     

骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体在成骨过程中与血管内皮细胞生长因子关系

[目的]探讨骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体(A recombinant adenoviral vector carrying the human BMP-2 gene,Ad-BMP-2)在成骨过程中和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)相互关系。[方法]应用人骨形态发生蛋白-2腺病毒载体体外感染兔骨髓间质干细胞(bone marrow stem cells,BMSC),感染后观察BMP-2、VEGF和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达及钙结节形成。同时将30μl Ad-BMP-2行裸鼠左后肢肌组织内注射,术后20 d取材,免疫组化和原位杂交法观察BMP-2与VEGF体内表达情况。30μlβ半乳糖苷酶腺病毒载体(Adβgal)右后肢肌内注射作为对照。[结果]BMSC被Ad-BMP-2感染后,向成骨细胞分化,上调VEGF的表达。在体内成骨过程中,BMP-2在软骨细胞、成骨细胞和再生骨组织周围单核细胞表达阳性,VEGF在软骨细胞、成骨细胞和血管内皮细胞均表达阳性。[结论]BMP-2和VEGF两者协调一致,互为促进,完成了骨组织的发生。     

成纤维细胞生长因子增强骨形态发生蛋白在小鼠体内骨诱导作用

在啮类动物体内植入骨形态发生蛋白后，引起细胞内一系列生化和形态学变化，在植入物内和其周转形成新骨。这过程受多因素影响。本实验将重组人成纤维细胞生长因子与部分纯化的ＢＭＰ悬液混合后注入小鼠肌肉，观察成骨反应。单独注射牛骨ＢＭＰ组和ｂＦＧＦ组为对照。     

血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白7在细胞分化中的协同作用

目的：研究rhVEGF和rhBMP-7对成骨细胞分化能力的影响.方法：取大鼠颅盖骨组织块,采用改良组织块混合酶消化法培养成骨细胞,将不同浓度的rhVEGF和rhBMP-7加入第四代成骨细胞的培养基继续进行细胞培养,用碱性磷酸酶试剂盒检测定细胞在第1、3、5天的磷酸酶的活性,分析不同浓度的rhVEGF和rhBMP-7对成骨细胞分化的影响.结果：rhVEGF和rhBMP-7能促进成骨细胞的分化,其中,3.125ng/mlrhVEGF和50.000ng/ml rhBMP-7单独或者两者联合作用并于第3天时,对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响最明显.结论：一定剂量的rhVEGF和rhBMP-7可明显促进成骨细胞的分化.     

血管内皮生长因子及其对成骨的影响

血管内皮生长因子(VECF)是20世纪80年代早期由Senger发现的,因具有促进血管渗透的作用,又被称为血管渗透因子(VPF)。目前认为VECF家族包括VECFA、VECFB、VECFC、VECFD、VECFE。血小板源生长因子(PDGF)和胎盘生长因子(PLGF)分别与VECF有20％和53％的同源序列。由于血管生成作用主要与VECFA有关,故下述内容以VECFA为主。     

骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子激发纤维环细胞成骨的潜能

目的研究联合使用重组人骨形态发生蛋白（recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）椎间盘纤维环细胞成骨潜能的激发作用。方法向体外培养的纤维环细胞中分别及联合加入rhBMP-2和bFGF,观察纤维环细胞的表型表达特点。结果联合使用rh-BMP-2和bFGF能够明显促进椎间盘细胞增殖,提高细胞内碱性磷酸酶活力,增加I型胶原分泌,提高钙盐沉积程度,提高骨钙素的表达水平。结论联用rhBMP-2和bFGF能够诱导纤维环细胞向成骨细胞方向分化,分泌钙盐并形成钙结节。     

巨噬细胞移动抑制因子过表达对成骨细胞骨形态蛋白-2和血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在成骨细胞中的表达及其对成骨细胞骨形态蛋白-2(BMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 提取5例人髂骨成骨细胞,PcDNA3.0构建MIF过表达系统导入成骨细胞中,检测MIF、BMP-2和VEGF的表达.结果 MIF的稳定转染使成骨细胞的MIF过表达(P＜0.05).MIF基因mRNA和蛋白表达在转染组的表达量显著高于对照组中的表达量(P＜0.05);VEGF和BMP-2的mRNA和蛋白的表达量在转染组也明显增高(P＜0.05).结论 MIF过表达在成骨细胞中上调VEGF和BMP-2的表达.     

股骨头缺血性坏死骨质含量与VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达的相关性研究

目的坏死骨的血管再生及骨修复能力与VEGF、bFGF与BMP-2多种生长因子关系密切,通过观察股骨颈骨折、创伤性及非创伤性股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的股骨头局部上述因子的表达变化,并与其组织病理学的骨质含量指标进行相关性分析,为进一步探讨ANFH的发病机制及临床针对不同病因进行个性化治疗提供实验依据。方法取59例人工全髋关节置换术患者自愿捐赠的股骨头标本进行观察。创伤性ANFH 22例(A组),Ficat分期:Ⅲ期13例,Ⅳ期9例。非创伤性ANFH 19例(B组),Ficat分期:Ⅲ期11例,Ⅳ期8例;其中激素性10例,酒精性7例,原因不明2例。新鲜股骨颈骨折18例(C组)。3组患者性别、年龄等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。采用双能X线骨密度仪测量股骨头负重区骨密度;大体观察组织病理学改变,HE染色光镜及扫描电镜下观察其病理变化,计算空骨陷窝百分比及骨小梁面积百分比,并采用原位杂交技术分别对其VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达进行检测。结果 A、B组骨密度均低于C组,B组低于A组,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B组股骨头形态不规则,光镜下见坏死区骨小梁稀疏、不完整,有大量空骨陷窝;健存区A组有较多纤维组织增生,B组髓腔内脂肪细胞增生、肥大。扫描电镜示A、B组大多骨细胞脂肪变性、坏死,骨基质内见脂肪细胞增生。C组均呈正常股骨头结构。A、B组空骨陷窝百分比均高于C组,骨小梁面积百分比均低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);A、B组间仅空骨陷窝百分比差异有统计学意义(P<0.05)。A组与B组VEGF、BMP-2、bFGF mRNA阳性染色面积百分比及吸光度(A)值均明显低于C组(P<0.05);A组BMP-2、bFGF mRNA两指标均较B组高(P<0.05),但VEGF mRNA A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。上述各因子表达强度与骨密度、骨小梁面积百分比成正相关,而与空骨陷窝百分比成负相关。结论创伤性ANFH的股骨头修复能力强于非创伤性ANFH,创伤性与非创伤性ANFH股骨头局部VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达均降低。     

骨形态发生蛋白-2对原代鼠胚成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的通过不同剂量重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)刺激原代培养的小鼠胚胎成骨细胞,探讨BMP-2对成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及规律。方法取19 d胎龄的小鼠胚胎颅骨成骨细胞进行体外培养,采用RT-PCR法或Western blot法染色法检测不同浓度rhBMP-2、不同作用时间下对成骨细胞VEGF mRNA表达的影响及规律。结果RT-PCR法检测到VEGF mRNA在原代成骨细胞内稳定表达；半定量分析表明,随着rhBMP-2浓度的升高,VEGF mRNA的表达量逐渐增加,当rhBMP-2浓度为300 ng/mL左右时,VEGF mRNA的表达量最高,超过此浓度,VEGF的表达则有下降趋势；应用终浓度rhBMP-2(300 ng/mL)刺激成骨细胞时,不同作用时间下VEGF mRNA的表达量呈双时相,分别在3 h和24 h时出现高峰,48 h时VEGF mRNA的表达仍保持较高水平。除去各自对照组的影响,各时间点VEGF表达的相对值[(rhBMP-2组/对照组)比值]亦呈时间依赖性关系,6 h时明显升高为对照组的2．5倍(P＜0．05),36 h时约升高为对照组的2倍。结论VEGF可在原代鼠胚成骨细胞内稳定表达；rhBMP-2在体外可刺激原代骨细胞VEGF的表达,并呈一定的浓度和时间依赖性关系。     

负载骨形态发生蛋白与血管内皮生长因子的超聚消旋乳酸修复兔桡骨缺损的实验研究

[目的] 探讨同时负载BMP、VEGF的PDLLA材料的体内成骨能力,以得到一种较好的可吸收骨构建材料.[方法] 成骨细胞分离培养后负载到PDLLA材料中进行兔桡骨缺损修复实验,术后4、8、12 周行X线、组织学及扫描电镜观察骨生成状况, 12周行生物力学测试(三点折弯强度).[结果] 术后实验组各观察阶段骨形成明显高于对照组,第12周三点折弯强度与对照组相比差异有显著性(P<0.01).[结论] 负载BMP及VEGF两种细胞因子PDLLA支架材料修复兔桡骨缺损效果明显优于负载单一细胞因子PDLLA支架材料, 是一种有临床应用前景的骨移植材料.     

神经切除对骨形态发生蛋白异位诱导成骨的影响

[目的]通过rhBMP-2异位诱导成骨模型，观察坐骨神经和股神经切除对骨再生的影响，探讨神经支配在骨再生中的作用以及失神经所致骨折骨痂增大的部分机制。[方法]1CR小鼠36只随机分为实验组和对照组。行右侧股后部肌袋模型，实验组行右侧坐骨神经和股神经切除后植入含0．125mgrhBMP-2胶原复合物。对照组仅进行神经暴露后植入等量rhBMP-2胶原复合物。于术后7、14、21d取材，行湿重测量、放射学、生化检测、组织学观察和形态计量分析以及破骨细胞TRAP染色。[结果]湿重检测显示实验组组织块湿重明显大于对照组。X线检测实验组成骨范围较对照组明显增大，成骨组织密度不及对照组。生化检测结果显示术后第7d实验组AKP含量明显高于对照组，术后第14d，实验组钙含量高于对照组，术后21d，实验组钙、磷含量均低于对照组。组织学观察显示实验组成骨范围大于对照组，成骨后期破骨细胞活跃，骨小梁稀疏。组织形态计量分析显示实验组术后21d破骨细胞相对数增多，骨小梁体积密度、平均宽度均低于对照组。TRAP染色显示实验组破骨细胞明显较对照组活跃。[结论]在外源性BMP-2异位诱导过程中，神经切除引起骨诱导早期成骨活动的增加，在成骨中后期失神经导致破骨细胞活动增强引起骨小梁的稀疏和骨密度的降低，提示神经支配可能通过直接或间接的方式影响骨再生活动。     

血管内皮生长因子对骨折愈合相关因子表达的调控

目的探讨应用和拮抗血管内皮生长因子(VEGF）对骨折愈骨相关因子表达的影响，并观察骨折愈台过程中的病理改变。方法用105只天上I=白兔制作骨折模型．随机分为对照组、应用VECF组和拮抗vEGF组，分别于伤后8、24、72b和1．3、5、8周测定各组动物骨折端相关因子的表达变化、同时取骨折端标本脱钙进行兜镜观察。结果应甩VEGF使骨折端埘BMP的表达时同提前和延良，拈抗VEGF抑制rBMP的表达，应用VEGF组伤后3J嗣时骨折端充填有纤维性骨痴，软骨骨痂和骨性骨痂．5周时新生骨以编织骨为主，8周时骨折正常愈合；括抗VH押导受伤后初期骨细胞坏死增多，1～5周各时相点骨折端均有灶性坏死出现，3同时骨折部位血管生成明显减少。结论骨折愈台过程需要多因子参与、协调，VEGF有可能是作为骨折愈台过程中的一种重要因子在发挥作用     

Relationship of bone morphogenetic protein expression during osteoblast differentiation to wild type p53

We have previously shown p53 to have a specific role in osteoblast differentiation by its ability to regulate expression of certain bone specific proteins. In this study, we show mineralized matrix formation in vivo to be directly related to the presence of wild type p53 in osteoblastic osteosarcoma cells. In order to further understand the importance of p53 in differentiation, we investigated the relationship between p53 and Bone Morphogenetic Proteins (BMPs) (BMP 1, 2, 3A, 3B (GDF-10), 4, 5, 6, 7, 8A and 8B) during osteoblast differentiation. The expression of several BMPs were tested using RNase Protection Assay in differentiating ROS17/2.8 osteoblastic osteosarcoma cells. The expression of BMPs 1, 2, 3a, 3b and 7 showed time dependent modulation during in vitro differentiation. In order to determine if p53 has a role in this process, we used a murine osteosarcoma cell line stably expressing a temperature sensitive p53. Cells were exposed to ascorbic acid and glycerophosphates to hasten in vitro osteoblast differentiation and maintained either at 32 or 37 degrees C for expression of the wild type or mutant p53 phenotype. The expression of BMP-2, BMP-4 and BMP-7 were modulated in a p53 dependent fashion. We were able to confirm the p53 dependency of BMP-2 independently by RT-PCR. While BMP-2 expression was evident in the presence of both wild type and mutant p53, regulated expression was seen only in cells expressing wild type p53. Transient over expression of wild type p53 did not result in the same BMP-2 response as stable expression showing that the presence of p53 may be important for an orderly development of osteoblast differentiation rather than a direct effect on gene expression. The functional relationship between p53 and these bone specific markers is discussed.