核转录活性测定法研究黄芪当归及单组分对肾病鼠白蛋白基因的调控机制

目的 探讨黄芪当归的治疗机理,并试图寻找黄芪的有效作用组分。方法 采用核转录活性测定(nuclear run-on assay)和分子杂交的方法观察了肾病综合征大鼠肝脏白蛋白基因的转录活性和白蛋白mRNA的表达水平。结果 肾病组转录活性高于对照组,而黄芪当归治疗组又高于肾病组。白蛋白mRNA的表达水平的变化趋势与之相吻合。用单味黄芪或黄芪的三个单组分治疗的各组大鼠白蛋白基因转录活性及mRNA表达水平与肾病组比无显著差异,但在血浆白蛋白水平有显著差异,且黄芪多糖Ⅱ的作用效果最强。结论 黄芪当归合剂能促进白蛋白基因转录活性,而单味黄芪和黄芪的三个组分改善肾病鼠蛋白质代谢紊乱不通过该机制。     

黄芪当归合剂降低肾病综合征大鼠血脂机制的探讨

目的　探讨黄芪当归合剂降低肾病综合征（ＮＳ）大鼠血脂的机制。方法　采用加速型肾毒血清肾炎致ＮＳ模型。治疗组灌服黄芪当归合剂,正常组和肾病对照组灌水。检测各组血清脂谱,以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交检测肝脏羧甲基戊二酰辅酶Ａ（ＨＭＧＣｏＡ） 还原酶和低密度脂蛋白受体（ＬＤＬＲ）ｍＲＮＡ表达。结果　肾病大鼠呈高脂蛋白血症,该组肝脏ＨＭＧＣｏＡ还原酶的ｍＲＮＡ在早期呈短暂上调（ Ｐ ＜ ０－００１） ,ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达随病程逐渐下调（ Ｐ ＜ ０－００１）;黄芪当归治疗组,血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白低于肾病对照组,虽肝脏ＨＭＧＣｏＡ 还原酶ｍＲＮＡ 无明显变化,但ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ表达较肾病对照组显著上调（ Ｐ＜ ０－０１） 。结论　黄芪当归组显著降低ＮＳ大鼠血脂水平,这一改善脂代谢紊乱的作用可能部份是通过肝脏ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达上调而实现。     

黄芪当归合剂对肾病综合征鼠肾转化生长因子β1的影响

目的探讨黄芪当归合剂降脂及减少肾小球细胞外基质沉积的作用是否与肾脏转化生长因子（ＴＧＦ）β１表达的改变有关。方法用嘌呤霉素致肾病综合征大鼠，随机分肾病对照、中药、西药治疗三组。用免疫组化及原位杂交观察肾脏ＴＧＦβ１表达及细胞外基质（ＥＣＭ）沉积。以计算机图象分析进行半定量比较。结果正常组，可见ＴＧＦβ１蛋白及ｍＲＮＡ于肾小管上皮细胞微弱表达，肾小球系膜区ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ弱表达。其余各组ＴＧＦβ１蛋白表达位于肾小管上皮细胞，ｍＲＮＡ表达位于肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞，而后者表达更明显。两治疗组ＴＧＦβ１表达较肾病组明显降低（Ｐ＜０．００１），两治疗组间比较，无显著性差异。两治疗组细胞外基质沉积均明显少于肾病对照组。结论黄芪当归合剂及ＨＭＧＣｏＡ还原酶抑制剂对肾病综合征鼠能明显减少肾小球细胞外基质沉积，同时使ＴＧＦβ１表达的下调。提示黄芪当归合剂可能通过这一下调作用减少肾小球细胞外基质的沉积     

腹腔感染后低白蛋白血症的分子机理和防治实验研究

腹腔感染常伴有低白蛋白血症，为探讨其发生机理和防治方法，作者应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，在大鼠体内体外进行了实验研究。结果显示：（１）腹腔感染后白蛋白ｍＲＮＡ显著下降，是发生低白蛋白血症的重要原因，而内毒素是重要的介导因素。（２）内毒素在体内显著抑制白蛋白ｍＲＮＡ表达，其机理系通过剌激非实质细胞产生ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－６而起作用。（３）ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－６显著抑制肝细胞白蛋白ｍＲ－ＮＡ表达，但以局部作用为主。（４）代谢激素对白蛋白合成有重要的调节，但在感染时它们的变化并非导致低白蛋白血症的原因。（５）生长激素和黄芪多糖在体外可明显减轻内毒素对白蛋白合成的抑制，并显著提高腹腔感染大鼠血浆白蛋白水平。作者认为，本研究结果表明，低白蛋白血症的发生机理是：腹腔感染引起内毒素吸收，内毒素刺激ｋｕｐｆｅｒ细胞等非实质细胞，产生ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－６等介质，它们作用于肝细胞抑制白蛋白ｍＲＮＡ表达，最终导致低白蛋白血症。减少内毒素吸收是重要防治环节，重组生长激素和黄芪多糖有明显的防治效果。     

鱼油对大鼠腹腔感染早期肝脏肿瘤坏死因子信使核糖核酸表达…

目的：了解鱼油对大鼠腹腔感染早期 脏肿瘤坏死因子信使核糖核酸（ＴＮＦｍＲＮＡ）表达的影响。方法：给大鼠口服鱼油，用反义差别ＰＣＲ方法检测腹腔感染早期肝组织ＴＮＦｍＲＮＡ表达水平的变化。结果：鱼油饮食后腹腔感染大鼠各时相点内血浆ＴＮＦ水平及肝脏ＴＮＦｍＲＮＡ表达量均显著低于单纯腹腔感染组（Ｐ〈０．０５）。结论：鱼油饮食能减少腹腔感染大鼠肝脏分泌ＴＮＦ的能力，且可能发生在转录水平上的调节。     

内毒素诱生大鼠腹腔巨噬细胞IL-12 mRNA表达调控及大黄酸对其作用研究

应用ＲＴＰＣＲ及荧光探针标记技术观察大鼠腹腔巨噬细胞经内毒素活化后ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平及细胞内信号传递系统和大黄酸对其调控作用。结果表明，内毒素能活化大鼠腹腔巨噬细胞使［Ｃａ２＋］ｉ水平及ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平明显升高，并呈剂量依赖相关关系，随着ＬＰＳ剌激浓度的增加，ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平及细胞内游离钙离子浓度逐渐增加。大黄酸能显著抑制ＬＰＳ活化的大鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平及［Ｃａ２＋］ｉ的升高，亦呈剂量依赖相关关系，随着大黄酸浓度的增加ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平及［Ｃａ２＋］ｉ逐渐降低。ＰＫＣ活化剂ＰＭＡ及Ａ２３１８７能显著提高ＩＬ１２ｍＲＮＡ的表达水平（与对照比较Ｐ＜０．００１，与ＬＰＳ组比较Ｐ＜０．０５）而ＰＫＣ抑制剂Ｃａｌ及ＳＰ能使经ＬＰＳ活化的大鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平明显降低（与ＬＰＳ组比较Ｐ＜０．０１），大黄酸亦能显著抑制ＬＰＳ所至ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平的升高。表明大鼠腹腔巨噬细胞经ＬＰＳ活化后其ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达需经细胞内信号传递系统调控，大黄酸通过降低［Ｃａ２＋］ｉ使ＩＬ１２ｍＲＮＡ表达水平降低。     

黄芪对高糖作用下肾间质成纤维细胞表达HGF的影响

目的：在体外研究高糖刺激人肾脏间质成纤维细胞时，ＨＧＦ、ＴＧＦ－β的表达以及黄芪延缓糖尿病肾病与其的相关性。方法：将人肾脏间质成纤维细胞分别培养于不同浓度的葡萄糖中，于 ２４ ｈ后用 ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＨＧＦ ｍＲＮＡ的转录水平，继而用不同浓度的 ＨＧＦ刺激细胞来现察 ＴＧＦ－βｍＲＮＡ的表达。随即用黄芪药物血清刺激细胞，观察ＨＧＦ的表达情况。结果：高浓度葡萄糖培养的细胞早期就有ＨＧＦ表达，之后表达逐渐下降，而ＴＧＦ－β在此之后出现表达上升。同时外源性ＨＧＦ可以抑制ＴＧＦ－βｍＲＮＡ的表达。黄芪含药血清可以显著刺激细胞表达ＨＧＦ。结论：高糖刺激后可以诱导ＨＧＦ表达，该表达的上升是一种有益的防御反应。此外，外源性加入ＨＧＦ可以降低ＴＧＦ－β的表达，从而促进细胞外基质的降解。黄芪通过诱导ＨＧＦ的产生，起到抗纤维化的作用，从而延缓糖尿病肾病的进展。     

腹腔感染后白蛋白mRNA表达的变化及相关因素的作用

目的 探讨腹腔感染病人合并低白蛋白血症的机理。方法 以大鼠盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）为模型，观察ＣＬＰ后白蛋白ｍＲＮＡ表达的变化，并应用回归和相关方法，分析激素、细胞因子和内毒素的作用。结果 ＣＬＰ后白蛋白ｍＲＮＡ表达显著下降，并与血浆白蛋白浓度的变化密切相关，白蛋白ｍＲＮＡ的变化与门脉血内毒素明显相关，而与血中胰岛素、胰高糖素、胰高糖素／胰岛素比值、皮质醇、ＴＮＦ、ＩＬ－１和ＩＬ－６浓度的变化无明显     

大鼠间质细胞中11β-羟类固醇脱氢酶mRNA的表达

间质细胞中１１β－羟类固醇脱氢酶（１１β－ＨＳＤ）通过控制细胞内糖皮质激素（大鼠体内是皮质酮）浓度调节睾酮合成。大鼠出生后２６天内，其未成熟间质细胞不含１１β－ＨＳＤ，随着间质细胞成熟，１１β－ＨＳＤ逐渐产生，成年大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性最高。１１β－ＨＳＤ控制着间质细胞中糖皮质激素浓度，生理浓度糖皮质激素同样调节着１１β－ＨＳＤ活性水平。本研究观察了三个不同年龄组大鼠和切除肾上腺后及切除后补充皮质酮大鼠，间质细胞中１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达情况，发现：出生２１天大鼠间质细胞中无１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ的表达，４５天大鼠有１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达，９０天大鼠表达量最大，切除肾上腺后大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达降低，切除后经皮质酮补充大鼠１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达量回复到对照组水平。结果表明三个不同年龄组大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达情况和以往采用免疫组织化学及生物化学方法测定抗原含量或酶活性的结果是一致的。内源性及生理浓度的皮质酮对１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达的调节也表现出类似的一致性     

黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织COX-2和NF-κB表达的影响

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）和核转录因子κB（NF-κB）在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及黄芪对其的影响。方法：将大鼠分成正常对照组、糖尿病肾病组、黄芪干预组。12周周末检测血肌酐、尿素氮、尿蛋白定量;应用免疫组化、Western印迹和聚合酶链式反应方法分别检测大鼠肾组织COX-2和NF-κB的表达。结果：与正常对照组相比,糖尿病肾病组大鼠COX-2和NF-κB的基因及蛋白表达升高（均P〈0.01）。黄芪干预组大鼠肾组织COX-2和NF-κB的基因及蛋白表达较糖尿病肾病组下调（均P〈0.01）。结论：COX-2参与了糖尿病肾病发生发展的病理过程,黄芪治疗糖尿病肾病的作用机制之一是通过下调COX-2的表达从而发挥肾脏保护作用。