磷酸核糖焦磷酸合成酶2在人睾丸组织中的表达

目的:探讨磷酸核糖焦磷酸合成酶2(PRPS2)在人睾丸组织中的表达及其临床意义。方法:qRTPCR定量检测PRPS2 mRNA在生精功能正常,轻度、中度及重度生精功能障碍睾丸组织中的表达;免疫组化检测PRPS2蛋白在67例成年男性睾丸活检组织中的表达,并探讨其表达与睾丸组织学类型及临床参数的关系。结果:qRT-PCR检测结果显示,PRPS2 mRNA在生精功能正常睾丸组织中的表达水平明显高于中度及重度生精功能障碍睾丸组织(P <0. 01);免疫组化检测结果显示,PRPS2阳性表达于生精功能正常及轻度生精功能障碍睾丸组织,而在中度及重度生精功能障碍睾丸组织中的表达明显减弱,其在生精功能正常、轻度生精功能障碍、中度生精功能障碍及重度生精功能障碍睾丸组织中的阳性表达率分别为70. 0%、66. 7%、50. 0%、23. 8%,差异具有统计学意义(P=0. 031)。PRPS2表达与临床参数未见明显相关(P> 0. 05)。结论:PRPS2低表达于生精功能障碍的睾丸组织,其表达水平的检测有助男性不育的诊断及睾丸生精功能的预测。     

通精灵对实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的：探讨实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡状况及通精灵对精索静脉曲张大鼠睾丸生精功能的保护作用。方法：成年清洁级雄性Wistar大鼠50只,按Sapyol法制作左精索静脉曲张大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、通精灵低剂量组、通精灵中剂量组、通精灵高剂量组各10只。造模1个月后,各组予以不同药物灌胃1次／d。2个月后处死,用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测睾丸生精细胞凋亡,免疫组化法检测睾丸组织Bcl-2表达。结果：模型组大鼠左睾丸凋亡指数明显高于假手术组及通精灵各组（P〈0．01）,通精灵各组左睾丸凋亡指数显著低于模型组（P〈0．05）。与假手术组比较,模型组大鼠睾丸组织Bcl-2蛋白表达下降（P〈0．05）,与模型组比较,通精灵中、高剂量组睾丸组织Bcl-2蛋白表达显著上升（P〈0．05）。结论：通精灵能降低实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,减轻实验性精索静脉曲张大鼠睾丸组织的病理损害,上调凋亡抑制基因Bcl-2表达。     

精索静脉曲张大鼠睾丸自噬对生精细胞的影响

目的:研究精索静脉曲张(VC)大鼠模型中睾丸不同水平自噬对生精细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠54只随机分为6组:空白对照组、雷帕霉素对照组、氯喹对照组各6只,VC组、VC+雷帕霉素组、VC+氯喹组各12只。采用HE染色观察睾丸、附睾组织形态学变化,并对睾丸及附睾中精子形成情况进行评分,TUNEL染色检测生精细胞凋亡指数(AI),Western印迹检测LC3、p62、Bax、Bcl-2的表达。结果:空白对照组、雷帕霉素对照组、氯喹对照组大鼠睾丸及附睾组织均未发生明显形态学变化,精子形成情况评分及AI亦无显著差异(P>0.05);VC组大鼠睾丸及附睾组织发生明显病理损伤,精子形成情况评分显著降低(P<0.01),AI显著升高(P<0.01),但VC+雷帕霉素组较VC组明显改善,而VC+氯喹组较VC组轻度加重。此外,与空白对照组比较,VC组自噬相关蛋白LC3(包括LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值)和促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抑凋亡蛋白Bcl-2表达则显著降低(P<0.01);且VC+雷帕霉素组LC3与Bcl-2表达显著高于VC组(P<0.01),p62和Bax表达则显著低于VC组(P<0.01);而VC+氯喹组LC3与Bcl-2表达显著低于VC组(P<0.01),p62和Bax的表达则显著高于VC组(P<0.01)。结论:VC可诱导大鼠睾丸自噬和生精细胞凋亡,上调自噬可抑制生精细胞凋亡,阻滞自噬则可促进生精细胞凋亡。     

转录因子E2F1在非梗阻性无精症睾丸组织中的表达

目的旨在探讨E2F1核转录因子在人类睾丸组织中的表达与生精功能的关系。方法选取32例人类非梗阻性无精子症睾丸组织石蜡标本，采用HE染色观察曲细精管病理变化，同时用免疫组化SP法检测睾丸组织中核转录因子E2F1的表达;对照组选取13例人类正常睾丸组织。通过分析病理组HE染色，比较E2F1阳性染色范围及程度，评价E2F1核转录因子与生精功能的关系。结果非梗阻性无精子症睾丸组织HE染色显示精曲小管中无或仅少量精子，精曲小管的生精上皮脱落、排列紊乱，精曲小管壁部分有玻变、纤维变，生精细胞萎缩。32例非梗阻性无精子症睾丸组织中E2F1阳性表达8例，阴性表达24例，阳性率25%;13例正常睾丸组织中E2F1的阳性表达9例，阴性表达4例，阳性率69.23%;x2=7.694，差异有显著性（P〈0.01）。结论（1）E2F1核转录因子表达缺失与睾丸生精功能障碍密切相关;（2）非梗阻性无精子症睾丸组织精曲小管的生精上皮脱落、排列紊乱，生精阻滞。     

精索静脉曲张大鼠睾丸低氧与生精细胞凋亡的研究

目的 观察实验精静索静咏曲张(varicocele,VC)大鼠睾丸低氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达与睾丸生精细胞凋亡的关系,探讨VC导致不育的病理生理机制.方法 40只大鼠,随机分为3组.建立模型49d后,取其左侧睾丸组织,检测睾丸组织的HIF-1α的表达和生精细胞的凋亡率.结果 westernblot和免疫组化检测的实验组睾丸HIF-1α的表达(2.529±1847,78.57%)显著高于对照组(0.308±0.165,14.29%)和假手术组(0.309±0.164,0.00%)(P<0.05),差异均具统计学意义;实验组睾丸细胞凋亡指数(20.79±5.70)显著低于对照组(0.6±1.4)和假手术组(0.36±0.71)(P<0.001),差异均具统计学意义;实验组睾丸HIF-1α的表达与其细胞凋亡指数呈正相关(r=0.844,P=0.017).结论 VC可引起睾丸低氧,而低氧可以通过诱导生精细胞凋亡来引起睾丸功能的改变.同时,HIF-1α是一种预测生精细胞凋亡程度的有用指标.     

隐睾及睾丸固定术后对大鼠生精能力的影响

目的 观察隐睾及睾丸固定术后对睾丸生精能力的影响.方法 通过手术方法对80只SD大鼠制作单侧隐睾模型,随机分为10组,其中4组(每组10只)于隐睾术后7、14 d切取患侧睾丸组织,6组于隐睾术后7、14d行睾丸固定术,分别于术后2、4、6周取材.将所取得的睾丸组织称重后行流式细胞仪检测其细胞凋亡率和各生精细胞百分比以及组织中B淋巴细胞/白血病-2( bcl-2)和bax基因表达量.结果 隐睾睾丸重量明显下降,隐睾组1C细胞(7d组:10.61 ±1.10,14d组:11.79 ±0.91)较对照组降低(16.48±1.60,P＜0.05)、4C细胞也明显降低,而2C细胞(7d组:40.41±2.93,14 d组:51.41±6.45)较对照组增加(30.17±3.24,P＜0.05).隐睾各组生精细胞凋亡率(7d组:14.9±1.26,14 d组:6.90±0.96)高于正常对照组(2.50±0.44,P＜0.01),而睾丸复位固定术后各组生精细胞凋亡率均下降(P＜0.05).隐睾7、14 d睾丸中bc1-2蛋白表达量(7d组:4.68±0.47;14 d组:5.66 ±0.71)较对照组(7.47±1.01)降低而bax蛋白表达量(7d组:8.27±1.08;14 d组:6.26±0.21)较对照组(5.82 ±0.47,P＜0.05)升高,睾丸固定术后各组bcl-2蛋白表达量升高而bax蛋白表达量降低(P＜0.01).结论 隐睾可以使睾丸生精细胞凋亡增加,睾丸复位固定术后,睾丸生精功能可部分或全部恢复,其恢复程度和隐睾时间长短有关;bcl-2和bax表达在生精细胞凋亡的调控中起重要作用.     

环孢素对大鼠睾丸缺血-再灌注损伤后生精细胞凋亡的影响

目的探讨环孢素对大鼠单侧睾丸缺血-再灌注损伤后生精细胞凋亡的影响,研究其保护性作用。方法雄性SD大鼠24只,随机分成假手术组、扭转组和环孢素组,每组8只,建立720°2h单侧睾丸扭转动物模型。扭转组和环孢素组于复位前15min分别腹腔注射生理盐水和环孢素,术后24h留取手术侧睾丸。应用流式细胞术检测各组患侧睾丸组织生精细胞凋亡;Quantitative Real-time PCR技术对Fas、FasL和Bax mRNA进行定量分析;Western-blot技术检测细胞色素C含量。结果与假手术组相比,扭转组患侧睾丸组织早期凋亡生精细胞百分比明显增多,Fas、FasL和Bax mRNA表达上调,同时胞质中细胞色素C含量显著升高,其差异均有显著性(P均<0.05)。环孢素干预能显著减轻上述变化,患侧睾丸组织正常细胞群百分比升高,Fas、FasL和Bax mRNA表达下调,同时胞质中细胞色素C含量显著降低,其差异均有显著性(P均<0.05)。结论环孢素可能参与调控生精细胞凋亡的分子途径,对睾丸扭转术后的生精功能具有明显的保护性效果。     

大鼠脊髓损伤急性期睾丸生精细胞凋亡及Fas和Bcl-2蛋白表达的改变

目的 研究脊髓损伤急性期对成年大鼠睾丸生精功能障碍的影响及其机制.方法 80只SD雄性大鼠随机分为脊髓损伤组(40只)和脊髓非损伤组(40只),采用原位细胞凋亡TUNEL法检测脊髓损伤后第1、2、4、8、1 6天睾丸生精细胞的形态及数量变化.采用免疫组化SABC法检测大鼠脊髓损伤后第1、2、4、8、16天睾丸生精细胞Fas、Bcl-2表达情况.结果 大鼠脊髓损伤后睾丸TUNEL标记阳性凋亡细胞第4天开始出现,多表达于初级、次级精母细胞及精原细胞,至第16d,随时间点推移阳性凋亡细胞数逐渐增多.脊髓损伤后第4～16d损伤组睾丸生精细胞Fas表达与非损伤组比较显著增强(P＜0.05),Bcl-2表达损伤组与非损伤组差别无显著性(P＞0.05).结论 大鼠脊髓损伤急性期存在睾丸生精细胞凋亡现象,睾丸生精功能障碍与Fas高表达密切相关,和Bcl-2表达无明显相关性.     

大鼠精索静脉曲张模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及其IL-1和NO含量的变化

目的:研究大鼠左侧精索静脉曲张(VC)模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及白细胞介素-1(IL-1)和一氧化氮(NO)含量的变化。方法:选用雄性SD大鼠60只,均选择左侧精索静脉作为研究对象,建立VC模型。将大鼠随机分为3组:假手术组(SO)15只,VC后高位结扎组(VCT)组15只和VC模型对照组30只。模型对照组中随机选取15只大鼠作为VC1组,余下15只大鼠作为VC2组,分别测定VC1组和SO组、VC2组和VCT组大鼠精液质量及睾丸组织中IL-1和NO的含量并加以比较,采用TUNEL检测睾丸生精细胞凋亡情况。结果:所有大鼠均建模成功,VC1组精子浓度[(1.54±1.16)×10~6/ml]和精子活力[(44.23±15.46)%]均显著低于SO组[2.80±1.62)×10~6/ml、(72.34±12.62)%](P0.05),VCT组精子浓度[1.82±1.34)×10~6/ml]和精子活力[(51.21±12.62)%]较VC2组有显著提高[(1.04±1.21)×10~6/ml、(39.23±13.21)%](P0.05)。大鼠左侧睾丸NO[(0.172±0.030)ng/ml]、IL-1[(1.468±0.080)mg/ml]含量VC1组明显高于SO组[(0.134±0.021)ng/ml、(0.782±0.079)mg/ml](P0.05),VC2组左侧睾丸NO[(0.198±0.020)ng/ml]、IL-1[(1.994±0.090)mg/ml]含量明显高于VCT组[(0.141±0.010)ng/ml、(0.781±0.036)mg/ml](P0.05),而右侧睾丸2组比较差异无显著性(P0.05),而且NO与IL-1含量之间呈正相关关系(r=0.492,P0.01)。VC1组大鼠双侧睾丸生精细胞大量凋亡,左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),SO组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01);VCT组大鼠左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05);VC2组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05);2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。VC2组、VCT组组内同侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),但VC2组、VCT组2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。结论:VC致睾丸组织中NO和IL-1含量升高,并加重睾丸生精细胞凋亡,可能是其致睾丸损伤、影响睾丸生精功能障碍的原因之一。     

抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子表达的影响分析

目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对雄性大鼠睾丸、精原干细胞及相关因子八聚体结核转录因子4(OCT-4)、胶质细胞源神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响.方法 选取16只8周龄Wister雄性大鼠采用随机数字表法分为CTX组和对照组各8只,CTX组采取连续3d腹腔注射CTX(50 mg/kg),对照组采取等量生理盐水,对比两组大鼠给药后1、2、4周的精子细胞凋亡数及S期细胞所占比例的变化;对比两组大鼠给药4周后的睾丸、附睾重量、生精小管直径差异;采用免疫组化染色检测两组睾丸OCT-4、GDNF蛋白的表达情况.结果 CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞凋亡数均显著的高于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞S期所占细胞比例均显著的低于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药4周的睾丸、附睾重量显著地低于同期的对照组(P＜0.05);两组大鼠的生精小管直径差异无统计学意义(P＞0.05);CTX组大鼠睾丸组织中GDNF蛋白阳性表达显著地低于对照组大鼠(P＜0.05);两组大鼠的OCT-4蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CTX具有诱导精原细胞凋亡的作用,干扰精原细胞增殖分化功能,可能与下调睾丸组织中GDNF有关.     

Soluble Fas and Fas-ligand in bladder cancer in vitro and in vivo

Circulating soluble Fas (sFas) and expression of Fas-ligand on cancer cells are mechanisms of immune escape. The aim of the present study was to investigate expression and production of Fas and Fas-ligand on bladder cancer cell lines of different grade as a basic mechanism of their secretion in vivo. sFas and sFas-ligand serum levels of patients with different stage of bladder cancer were examined to determine the possible clinical use of these molecules as tumor markers. Bladder cancer cell lines RT4 (G1), RT112 (G1), T24 (G3) and SUP (G4) were analyzed by flowcytometry for Fas and Fas-ligand expression. To determine if the Fas-ligand gene is transcribed in these bladder cancer cell lines, RT-PCR was performed on mRNA extracted from these cell lines. Production of sFas and sFas-ligand was examined in cell culture supernatants of the cancer cells as well as in the serum of 62 patients with bladder cancer by a specific ELISA test. We demonstrate that Fas is expressed in similar levels on all human bladder carcinoma cell lines. In T24 (G3) and SUP (G4) cell lines we were able to detect the Fas-ligand protein, whereas no Fas-ligand protein could be found in RT4 and RT112 (G1) cells. Fas-ligand mRNA was expressed in all bladder cancer cell lines. Furthermore, all bladder cancer cell lines produce sFas but no sFas-ligand in spite of mRNA expression. The range of sFas levels in the serum of all patients with bladder cancer was large and did not show a correlation to the histopathological stage of bladder cancer. Although there is in vitro evidence that sFas and Fas-ligand play a role in bladder cancer, no correlation between the sFas and s Fas-ligand serum levels and the histopathological stage of bladder cancer could be found. Therefore, serum sFas and sFas-ligand have to date limited clinical relevance.     

Overweight in childhood and bone density and size in adulthood

Summary  

We evaluated the adult bone structural traits in relation to childhood overweight in 832 men and women. Childhood overweight was associated with larger cross-sections at long bones in both sexes. Excess weight in childhood may also lead to higher trabecular density in females and somewhat lower cortical density in men.