裸鼠肝部分切除术后肝癌血管内皮生长因子及微血管密度变化的研究

目的研究肝部分切除后裸鼠肝癌组织微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,以探讨其促进肿瘤生长的机制.方法采用切除裸鼠肝左叶和中叶观察肝肿瘤生长情况,以免疫组化和图像分析检测肝癌组织MVD、VEGF的表达.结果肝部分切除后,肿瘤组织MVD和VEGF表达明显增强,肿瘤组织重量和体积明显增加.结论肝部分切除后肿瘤组织VEGF表达增强,肿瘤新生血管形成增多可能为其促进肿瘤生长的机制.     

生长抑素对裸鼠肝部分切除后肝癌组织基质金属蛋白酶-2及其抑制剂表达的影响

目的观察生长抑素 (SST)对肝部分切除后裸鼠肝癌组织基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )及其抑制剂 (TIMP 2 )表达的影响。方法 30只裸鼠随机分成 3组 :A组 (对照组 )仅将人肝癌组织种植于右肝叶 ,B组 (肝部分切除组 )和C组 (SST治疗组 ) ,切除肝左叶和中叶后于右肝叶种植人肝癌组织 ,C组术后第 1天开始腹腔注射SST(2 5 0 μg/kg ,2次 /d)B组和A组腹腔注射等量的生理盐水 ,3组动物于 35d后处死 ,检测癌体大小和重量 ,采用免疫组织化学和图像分析法检测肝癌组织微血管密度 (MVD)值、MMP 2和TIMP 2的表达。结果B组癌体重量和体积、MVD和MMP 2表达较A组明显增加 (P <0 0 5 ) ,TIMP 2则明显减低 (P <0 0 5 ) ;C组癌体重量和体积较B组和A组明显减低 (P <0 0 5 ) ,MVD和MMP 2表达较B组和A组明显减低 (P <0 0 5 ) ,TIMP 2表达则较B组和A组明显增加 (P <0 0 5 )结论MMP 2表达上调和TIMP 2表达下调可能为肝部分切除后癌灶新生血管形成增多的原因 ,SST可以通过抑制MMP 2的表达 ,上调TIMP 2的表达 ,从而抑制癌灶新生血管形成而减轻肝部分切除促癌灶生长的作用。     

甲泼尼龙对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨甲泼尼龙(MP)对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型20只,随机分为对照组、MP小剂量组、MP大剂量组。用药4周后观察裸鼠重量、肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片透射电镜检查、放射免疫法测定血AFP浓度、荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果MP大剂量组肿瘤重量(1.62±0.12)Vs(1.33±0.19)g、体积(0.63±0.05)Vs (0.56±0.05)cm3大于对照组,该组裸鼠血AFP浓度高于对照组(7.5±1.14 Vs(5.98±0.78)μg/L,VEGF mRNA、MMP-2 mRNA表达显著增加。结论MP大剂量可以上调VEGF mRNA、MMP- 2 mRNA的表达,促进肝癌细胞生长、转移,小剂量无影响。     

赛来昔布对人骨肉瘤类肿瘤干细胞移植瘤微血管生成的影响

[目的] 探讨cox-2抑制剂赛来昔布(Celecoxib)对骨肉瘤类肿瘤干细胞裸鼠移植瘤生长及微血管生成的影响.[方法] 无血清堵养法从骨肉瘤细胞株MG-3中分离出类肿瘤干细胞建立裸鼠移植瘤模型.30只成瘤裸鼠随机分 Celecoxib 组和对照组,Celcoxib:25 mg/ (kg·d),用药15 d,第27 d处死裸鼠,观察肿瘤体积、抑瘤率,免疫组化技术检测VEGF表达及CD34标记的MVD值.[结果] 分离的骨肉瘤类肿瘤干细胞有致瘤性,可以建立动物模型.Celecoxib抑瘤率为23.2%,Celecoxib组裸鼠移植瘤的体积、VEGF的表达、MVD值均显著低于对照组(P＜0.05).[结论] 骨肉瘤类肿瘤下细胞可以建立裸鼠骨肉瘤移植瘤模型.Celeeoxib可以抑制肿瘤生长,减少移植瘤组织VEGF的表达,减少微血管生成,具有抗血管生成作用.     

雷帕霉素在人肝癌裸鼠肝移植瘤血管形成和肿瘤进展中的作用

目的 探讨雷帕霉素(RPM)在人肝癌裸鼠肝移植瘤血管形成和肿瘤发展中的作用.方法 建立人肝癌裸鼠肝移植瘤模型,使用RPM、环孢素A(CsA)进行干预治疗,采用实时定量PCR法检测移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的表达,免疫组织化学方法和图像分析技术检测移植瘤VEGF蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和微血管密度(MVD),ELISA法检测外周血VEGF蛋白水平的变化.结果 (1)RPM、CsA和对照组移植瘤重量分别为(372±35)mg、(769±39)mg、(751±42)mg;RPM组移植瘤重量较对照组显著减少(P<0.01);CsA组和对照组比较无明显变化(P>0.05).(2)RPM组移植瘤VEGF mRNA、蛋白和PCNA的表达及外周血中VEGF蛋白水平较对照组显著下调(P<0.05),CsA组和对照组比较无明显差异(P>0.05).(3)RPM组移植瘤MVD较对照组显著减少(P<0.01);CsA组和对照组相比无明显变化(P>0.05).结论 RPM通过阻止肿瘤增殖,下调VEGF的表达,抑制肝癌血管形成和肿瘤进展.     

环氧合酶2对胰腺癌新生血管生成的调节作用及其机制

目的　探讨环氧合酶 2 (COX 2 )在胰腺癌新生血管生成中的调节作用及其作用机制。方法　应用免疫组织化学染色研究人胰腺癌组织COX 2、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达 ;同时标记肿瘤新生血管内皮细胞vWF和血管壁Ⅳ型胶原 ,计算肿瘤组织微血管密度 (MVD)。建立裸鼠胰腺癌细胞株PC 3移植瘤 ,观察选择性COX 2抑制剂Celebrex对肿瘤组织MVD的影响 ,并应用免疫组织化学染色和逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)研究裸鼠移植瘤组织VEGF表达变化。结果　COX 2在人胰腺癌组织中表达阳性率为 87 5 % ,VEGF阳性率为 5 8 3%。COX 2强阳性组MVD平均值显著高于COX 2弱阳性 +阴性组 ,P <0 0 1。VEGF阳性组MVD平均值高于VEGF阴性组 ,但无统计学差异 ,P >0 0 5 ;Pearson相关性检验结果表明COX 2与vWF和Ⅳ胶原标记的MVD均有明显的相关性 (相关系数分别为 0 5 99和 0 6 ) ,P <0 0 5。在裸鼠移植瘤的体内实验中 ,与对照组MVD(6 3 89± 13 6 7)相比 ,Celebrex处理组MVD为 32 2 5± 12 99,两者差异显著 ,P <0 0 1。免疫组织化学染色和RT PCR结果表明Celebrex处理组肿瘤组织VEGF表达较对照组明显下调。结论　COX 2与胰腺癌新生血管生成密切相关 ,其高表达促进了胰腺癌新生血管生成 ;可能作用机制是上调促血管生成因子VEGF     

Angiostatin基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的:研究Angiostatin基因治疗对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其相关机理。方法:使用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。将荷瘤裸鼠随机分为两组,分别注射质粒PcDNA3、Angiostatin/PcDNA3,观察两组动物的肿瘤生长曲线,检测肿瘤的Angiostatin、VEGF、HIF-1α表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果:Angiostatin基因治疗在早期具有抑制肿瘤生长的作用,大约1周后肿瘤以更快的速度生长并迅速赶上空质粒对照组肿瘤;Angiostatin基因治疗组的肿瘤组织中有An-giostatin的局部高表达,MVD(24.8±2.8)低于空质粒对照组(30.2±4.1)(P〈0.05)。肿瘤组织中HIF-1α蛋白局部高表达,VEGF表达高于空质粒对照组,细胞凋亡指数(2.87±0.48)高于空质粒对照组(1.55±0.43)(P〈0.01)。结论:Angiostatin基因治疗对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的生长具有一定的抑制作用,肿瘤对Angiostatin基因治疗可以产生耐受性。     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制.方法 建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、RAPA小剂量组(每日1 mg/kg体重)、RAPA大剂量组(每日5 mg/kg体重).用药4周后观察肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片行透射电镜检查、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定裸鼠血VEGF、MMP-2浓度.结果 与对照组比较,雷帕霉素小剂量组和大剂量组均能抑制肿瘤生长[(0.42±0.17)cm3和(0.38±0.21)cm3比(0.78±0.25)cm3,P＜0.05];VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录和翻译显著减少(P＜0.01).结论 雷帕霉素可以通过抑制肝癌细胞VEGF和MMP-2的mRNA转录和蛋白表达,抑制肿瘤生长,但不呈剂量依赖性.     

靶向抑制survivin基因对肝细胞癌血管生成的影响

目的研究靶向抑制survivin基因对肝细胞癌血管生成的影响,探讨survivin在血管生成中的作用机制。方法采用脂质体介导survivin ASODN体外转染人肝癌细胞株HepG2,Western blot检测细胞中survivin蛋白的表达;RT-PCR检测细胞中VEGF mRNA的表达;FCM检测细胞的凋亡率;利用皮下注射法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型;采用脂质体包裹survivin ASODN直接瘤内注射,观察其对移植瘤生长情况的影响;SABC法检测移植瘤组织MVD。结果400 nmol/L survivin ASODN转染可明显下调HepG2细胞survivin蛋白表达,但不影响VEGF mRNA表达;ASODN组HepG2细胞凋亡率显著高于空白对照组和SODN组(F=428.19,P<0.01);ASODN组瘤体生长速度较空白对照组和SODN组明显减慢(F=12.63,P<0.01);ASODN组瘤体重量较空白对照组和SODN组明显减轻(F=5.90,P<0.05);ASODN组MVD较空白对照组和SODN组明显降低(F=34.29,P<0.01)。结论survivin ASODN可以抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长,其机理可能是诱导HepG2细胞自发性凋亡和抑制肿瘤血管生成。     

肝动脉结扎对转移性人肝癌裸鼠原位移植瘤乏氧的影响

目的 观察肝动脉结扎(HAL)对转移性人肝癌裸鼠原位移植瘤乏氧的影响.方法 采用24只BALB/C-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植模型;随机分为2组,A组于移植瘤术后2周进行HAL(n=12),B组假手术(Sham)作为对照(n=12).分别于干预术后2 d和4周各随机处死每组中6只荷瘤裸鼠,利用免疫组织化学显色(SP法)和Western blot检测移植瘤内哌莫硝唑(Pimonidazole)和缺氧诱导因子(HIF)-1α的阳性表达和染色强度,以及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平和肿瘤组织微血管密度(MVD),并用肺连续切片法计数4周时荷瘤裸鼠肺转移灶.结果 与Sham组比较,HAL组移植瘤内Pimonidazole阳性细胞及HIF-1α表达水平在术后2 d显著增加(P<0.05),并且肿瘤组织和血清内VEGF水平[(922.5±59.3)比(349.6±46.5)ng/L,P<0.01]明显增加.术后4周,荷瘤裸鼠肺转移率较对照组增加(6/6比1/6,P<0.05),但此时乏氧细胞,VEGF表达和MVD则与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HAL促进转移性人肝癌裸鼠原位移植瘤短期乏氧及VEGF表达,但不影响移植瘤长期乏氧效应.     

Faculty of Anaesthetists of the Royal College of Surgeons of Ireland

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