大鼠离体肝脏保存再灌注后肝脏中ICAM-1mRNA的表达及丹参对其表达的影响

目的探讨大鼠离体肝脏保存再灌注后肝脏组织中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达变化及丹参对其表达的影响。方法选取健康Wistar雄性大鼠54只,用完全随机方法选6只大鼠作为正常组,切除肝脏后立即灌注;随机选24只大鼠作为对照组,切除肝脏后置入4℃UW液中分别保存8、16、24、32 h后再行肝脏循环再灌注;余下的24只作为实验组,切除肝脏后置入含丹参的4℃UW液中分别保存8、16、24、32 h后再行肝脏循环再灌注。应用RT-PCR方法检测各组大鼠离体肝脏保存再灌注后肝脏组织中ICAM-1 mRNA表达。结果正常组肝脏中的ICAM-1 mRNA表达为3.61±1.56,对照组和实验组8、16、24、32 h时肝脏中ICAM-1 mRNA表达分别为15.71±1.78、33.70±3.35、45.83±4.37、66.98±5.89和11.69±1.25、16.55±1.37、24.73±2.74、32.65±3.39,对照组和实验组各时相均分别明显低于正常组（P〈0.05）,且均随保存时间延长,ICAM-1 mRNA表达逐渐增加（P〈0.05）,实验组16 h后ICAM-1 mRNA表达均分别明显低于对照组相应时相（P〈0.05）。结论丹参能够降低离体肝脏保存再灌注后肝脏组织中ICAM-1 mRNA表达,对肝脏保存再灌注损伤可能具有防护作用。     

FK506对大鼠离体肝脏保存再灌注IL-10 mRNA表达的影响

IL-10是一种抗炎细胞因子,在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用越来越多的引起重视.我们建立大鼠离体肝脏保存再灌注模型,观察肝脏保存再灌注中IL-10 mRNA表达变化和FK506对IL-10 mRNA表达的影响,为临床肝移植围手术期供肝保护探讨新的方法和理论依据.     

FK506对离体肝再灌注后TNF-α mRNA表达的影响

目的探讨 FK506 对肝脏保存再灌注中TNF-α mRNA表达的影响 .方法建立离体大鼠肝脏再灌注模型,应用RT-PCR方法检测TNF-α mRNA的表达,观察FK506对不同时间保存的肝脏TNF-α mRNA表达的影响. 结果 FK506组保存16,24和32h 再灌注,TNF-α mRNA表达分别为0.83±0.07,0.91±0.06和1.32±0.08, 明显低于对照组的0.98±0.05,1.42±0.09和1.86±0.16. 结论 FK506能抑制肝脏保存再灌注中TNF-α mRNA的表达,对离体肝的再灌注损伤可能具有保护作用.     

丹参对肝脏保存再灌注时Bcl-2、 Bax表达和肝细胞凋亡的影响

目的探讨丹参对肝脏保存再灌注时Bcl-2、Bax表达和肝细胞凋亡的作用.方法建立离体大鼠肝脏保存再灌注模型,分别采用流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)技术,观察Bcl-2、Bax表达和肝细胞凋亡以及丹参对上述指标的影响.结果丹参组保存16、24、32     

两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏保护作用的比较

目的探讨两种不同的肝脏灌注方法对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的差异,为后期离体大鼠肝脏保存实验提供简单而有效的方法。方法制备两种不同的单纯冷保存的离体大鼠肝脏灌注模型,分为实验组（经门静脉和腹主动脉灌注法,10只）;对照组（经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,10只）,灌注后取出肝脏置于4℃威斯康星大学保存液保存,12h后切取肝组织。行苏木素-伊红（HE）染色,观察肝组织病理损伤情况,并且用免疫组织化学染色法检测核因子（NF）-κB（SABC法）的表达情况。结果经12h冷保存后,两组大鼠肝脏组织病理示：肝脏小叶结构紊乱,肝细胞变性、肿胀及空泡形成,肝血窦和中央静脉有不同程度的淤血,部分肝窦内皮细胞坏死并脱落,但两组之间无明显差别。两组之间NF-κB阳性表达率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论经门静脉和腹主动脉灌注法与经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,对离体大鼠肝脏的保护作用无差异,但前者操作相对简单,更容易在今后研究大鼠离体肝脏的实验中应用。     

FKS06对离体肝再灌注后TNF—α mRNA表达的影响

目的　探讨FK 5 0 6对肝脏保存再灌注中TNF αmRNA表达的影响。方法　建立离体大鼠肝脏再灌注模型 ,应用RT PCR方法检测TNF αmRNA的表达 ,观察FK 5 0 6对不同时间保存的肝脏TNF αmRNA表达的影响。结果　FK 5 0 6组保存 16,2 4和 3 2h再灌注 ,TNF αmRNA表达分别为0 .83± 0 .0 7,0 .91± 0 .0 6和 1.3 2± 0 .0 8,明显低于对照组的 0 .98± 0 .0 5 ,1.42± 0 .0 9和 1.86± 0 .16。结论　FK 5 0 6能抑制肝脏保存再灌注中TNF αmRNA的表达 ,对离体肝的再灌注损伤可能具有保护作用。     

大鼠肝脏保存再灌注时氧自由基与细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达的关系

近年研究表明,细胞凋亡参与组织缺血再灌注损伤。本实验动态观察大鼠肝脏保存再灌注时氧自由基（·ＯＨ）与细胞凋亡及Ｂｃｌ２蛋白表达的变化,并探讨它们相互关系。１．材料与方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只。以大鼠肝脏离体非循环灌注（ＩＰＲＬ）为肝脏保存再灌注模...     

大鼠肝脏低温保存方法的改进

我们改进了传统低温保存肝脏的方法，旨在探讨此改良方法对鼠肝低温保存的影响。一、材料与方法1动物模型Wistar大鼠40只，体重250±20g。以大鼠离体肝脏灌注（IPRL）为肝脏保存再灌注模型：分别分离胆管、门静脉后，插入导管并迅速固定，立即开始灌注0℃自制灌洗保存液（HYD液：组氨酸90mmol／L，蔗糖120mmol／L，甘露醇30mmol／L，KH2PO435mmo／L，H600mg／L，Y400mg／L，D40mp／L）20ml，切取肝脏后置于0℃HYD液中保存。24小时后，将肝脏经门静脉恒温对℃行再灌注30分钟。再灌注液为Kreb．Henseleit液。2实验分组切取肝脏后，…     

FK506对肝脏保存再灌注中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达及肝细胞凋亡的影响

目的探讨肝脏保存再灌注中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达,肝细胞凋亡以及FK506的作用.方法建立离体大鼠肝脏保存再灌注模型,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和细胞凋亡原位末端标记技术(TUNEL),分别检测肝脏保存0、8、16、24、32 h组Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达,肝细胞凋亡以及FK506对上述指标的影响.结果 FK506保存组16、24、32 h Bcl-2 mRNA表达明显高于对照组(P<0.05); Bax mRNA表达明显低于对照组(P<0.05);FK506保存组肝细胞凋亡指数明显低于对照组(P<0.05).结论 FK506能使肝脏保存再灌注中Bcl-2 mRNA表达增强,Bax mRNA表达减低,肝细胞凋亡减少.FK506对肝脏保存再灌注损伤具有防治作用.     

FK506对肝脏保存再灌注中肝窦内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨他克莫司（FK506）对肝脏低温保存再灌注中肝窦内皮细胞损伤的保护作用。方法 应用离体鼠肝脏保存再灌注模型,测定保存不同的时间后肝脏灌注流出液中内皮素（ET）及丙氨酸转氨酶（ALT）的含量以及透明质酸（HA）的摄取量,光镜及电镜下观察肝窦内皮细胞的形态学改变,比较分析FK506对上述指标的影响。结果 对照组随肝脏保存再灌注时间延长,灌注流出液中ET含量明显升高（P＜0．05）,HA摄取明显降低（P＜0．05）,并伴随ALT活性显著增高（P＜0．05）和肝窦内皮细胞形态学的异常改变;保存液和灌注液中均加入FK506后,上述指标异常变化均明显减轻,其差异有显著性（P＜0．05）。结论 FK506对离体大鼠肝脏肝窦内皮细胞的再灌注损伤有保护作用。     

乌司他丁对脂多糖诱导大鼠腹膜间皮细胞IL-15、IL-6表达的影响

目的：观察乌司他丁（UTI）对脂多糖（LPS）作用下大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）白细胞介素-15（IL-15）、白细胞介素-6（IL-6）表达的影响。方法：行RPMC的原代和传代培养,经鉴定后第3代用于实验。随机分组（1）正常对照组;（2）不同浓度脂多糖组（1、10、100mg/L）;（3）不同时间组：10mg/LLPS作用于RPMC3、6、12、24h;（4）10mg/LLPS＋乌司他丁组（160、320、640U/ml）作用12h;实时定量PCR法测IL-15mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-15、IL-6的表达。结果：脂多糖可刺激RPMC的IL-15mRNA及蛋白的表达增高且在12h内呈时间剂量依赖性（P〈0.05）;脂多糖诱导RPMCIL-6的蛋白表达增高,在12h内呈时间剂量依赖性（P〈0.05）;乌司他丁能显著降低脂多糖所致的腹膜间皮细胞IL-15、IL-6的表达（P〈0.05）。结论：脂多糖可上调PMCIL-15、IL-6的表达,乌司他丁可抑制脂多糖所致的IL-15、IL-6过度表达,以预防或延缓腹膜炎的发生与发展。     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞延长异种肝移植大鼠存活时间

目的 探讨人白细胞介素10(hlL-10)修饰的豚鼠骨髓间充质干细胞(hIL-10-MSCs)输注对异种肝移植大鼠存活的影响及其可能机制.方法 以携带hIL-10基因的慢病毒(hIL-10/LOX-ewGFP)为载体构建hIL-10-MSCs.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,制作非协调性异种原位肝移植模型,将受者随机分成3组,每组60只:空白对照组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射生理盐水和地塞米松1次;MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射MSCs和地塞米松1次;hIL-10-MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射hIL-10-MSCs和地塞米松1次.记录供者手术时间、供肝冷缺血时间、受者手术时间、肝上下腔静脉(SVC)吻合时间、无肝期及受者存活时间,测定术后各组受者血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,酶联免疫吸附试验法测定各组受者移植肝组织中自细胞介素2(IL-2)、IL-4、hIL-10、IL-12、IL-15、IL-18和TGF-β1的含量,逆转录聚合酶链反应法检测各组受者移植肝组织中上述各细胞因子mRNA的表达.结果 hIL-10-MSCs组受者存活时间为(72.0±5.5)h,空白对照组和MSCs组受者的存活时间分别为(29.0±2.2)h和(48.0±4.6)h,前者明显长于后二者,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05).hIL-10-MSCs组移植肝组织中IL-4和TGF-β1mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),而IL-2、IL-12、IL-15、IL-18 mRNA的表达明显低于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),hIL-10-MSCs组肝组织中hIL-10 mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组.结论 静脉输注hIL-10-MSCs可延长异种肝移植大鼠的存活时间,其机制可能与hIL-10-MSCs抑制IL-2、IL-12、IL-15、IL-18等细胞因子的表达,促进IL-4和TGF-β1的表达有关.     

TLR4表达在大鼠小肠缺血再灌注损伤中的改变及意义

目的:观察大鼠小肠缺血再灌注（I/R）损伤后小肠组织TLR4的表达及其与炎症因子水平变化的关系。方法:雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照（N）组、假手术（S）组、小肠部分缺血/再灌注损伤（肠I/R）组。分别于缺血再灌注后6，12，24,48 h检测各组小肠组织TLR4mRNA的表达，门静脉血清中TNF-α和IL-6水平，并进行相关性分析。用免疫组化法观察TLR4在小肠组织中的表达和分布。结果:（1）肠I/R组TLR4mRNA表达上调,于I/R12 h最强,阳性细胞主要是小肠黏膜细胞;（2）I/R组门静脉血清中IL-6及TNF-α浓度与N组相比各时点均明显增高（P<0.01）;在I/R24 h后达到峰值，与S组比较差异亦有显著性 (P< 0.01);（3） 肠I/R组门静脉IL-6及TNF-α浓度的增高与小肠TLR4mRNA表达的上调呈正相关（r=0.752，r=0.812;均P<0.01）;（4）免疫组化法显示小肠黏膜细胞表面TLR4表达明显增强。结论:大鼠小肠I/R损伤后,小肠组织TLR4的表达上调可能是导致肠黏膜免疫屏障功能下降的机制之一，也可能是系统性炎症反应的始动环节。     

RNA干扰Caspase-3基因抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰(RNAi)Caspase-3基因对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用.方法 构建针对大鼠Caspase-3基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)或Caspase-3 shRNA,实验随机分为3组,假手术组、PBS组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6,12,24 h,3,5,7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3 mRNA的表达,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组比较,shRNA组再灌注6,12,24 h血清ALT和AST水平显著降低(P<0.05),shRNA组大鼠肝组织的Caspase-3 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(25.21%±3.18%vs 35.24%±2.33%,P<0.05)和肝组织中MDA含量[(96.3±12.8)nmol/mg vs(133.5±12.4)nmol/mg,(P<0.05)]显著降低,SOD活性显著升高[(22.5±3.4)U/mg vs(12.2±3.1)U/mg,(P<0.05)].结论 RNA干扰Caspase-3基因可以抑制细胞凋亡的发生,保护肝脏缺血再灌注损伤.     

槲皮素对缺血再灌注大鼠离体心脏的作用

目的 观察槲皮素(Quercetin)对缺血再灌注损伤(IRI)离体大鼠心脏的作用.方法 将32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组(Control);给药对照组(Control+Que);缺血再灌注组(I/R);缺血再灌注给药组(I/R+Que),行Langendorff心脏灌注,给药组预防性给予槲皮素(5 μmol/L).监测各组心功能(±dp/dtmax),比较再灌注1 h心肌尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX2)、一氧化氮合酶(iNOS、eNOS)表达和超微结构的变化.结果 I/R组与Control组比较心功能显著降低(分别为18.91±3.38、-22.43±8.84和60.65±11.65、-56.62±8.49,P＜0.01),NOX2、iNOS、eNOS mRNA(分别为0.1590±0.0539、0.0897±0.0236、0.0154±0.0061和0.0247±0.0070、0.0377±0.0135、0.0091±0.0033,P＜0.05)和蛋白的表达均显著增加,心肌超微结构严重损伤;与I/R比较I/R+Que组(45.77±8.05,-42.10±8.71)显著增强心功能(P＜0.01),显著降低NOX2、iNOS、eNOS mRNA(分别为0.0864±0.0358、0.0445±0.0104、0.0085±0.0032,P＜0.05)和蛋白的表达,明显减轻心肌超微结构的损伤.结论 在离体水平预防性给予槲皮素能够显著减轻缺血再灌注对大鼠心肌造成的损伤,保护心脏.

Abstract：

Objective To observe the effect of quercetin (Que) on isolated rat hearts after ischemia-reperfusion injury (IRI). Methods Thirty-two SD rats were divided randomly into 4 groups with 8 in each group: ( 1 ) Control group, isolated hearts contiuosly peffused without ischemia; (2) Control + Que group: isolated hearts contiuosly perfused without ischemia but the adminstration of Que (5 μmol/L) 5 min after perfusion; (3) I/R group: isolated hearts perfused with 30 min global ischemia followed by reperfusion; (4) I/R + Que group: isolated hearts perfused with 30 min global ischemia followed by reperfusion and the adminstration of Que (5 μmol/L) 10 min before ischemia. Hemodynamic parameters ( ± dp/dtmax),myocardial ultrastructure, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidases 2 ( NOX2),inducible nitric oxide synthase (iNOS) and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) mRNA and protein expression after reperfusion were compared among the four groups. Results As compared with control group, hemodynamic parameters were greatly decreased after reperfusion ( 18.91 ± 3. 38, - 22. 43 ± 8. 84vs 60. 65 ± 11.65, - 56. 62 ± 8. 49 ,P ＜ 0. 01 ), myocardial ultrastructures were significantly destroyed and the expression levels of NOX2, iNOS, eNOS mRNA and protein were significantly increased after 60-min reperfusion (0. 1590 ±0.0539, 0.0897 ±0.0236, 0.0154 ±0.0061 vs 0.0247 ±0.0070, 0.0377 ±0. 0135, 0. 0091 ± 0. 0033, P ＜ 0. 05 ) in I/R group. As compared with I/R group, hemodynamic parameters were significantly recovered (45.77 ± 8.05, - 42. 10 ± 8. 71, P ＜ 0. 01 ), myocardial ultrastructures were well protected and the expression levels of NOX2, iNOS, eNOS were significantly decreased (0. 0864± 0. 0358, 0. 0445 ± 0. 0104, 0. 0085 ± 0. 0032, P ＜ 0. 05 ) in I/R + Que group, but there was no significant difference between control group and control + Que group ( P ＞ 0. 05 ). Conclusion Que can protect isolated perfused rat hearts from IRI by its antioxidative effect.     

频谱多普勒超声检测大鼠肝缺血/再灌注后入肝血流量变化与血清TNF-α及IL-1β水平变化之间的关系

目的探讨频谱多普勒超声检测大鼠肝缺血/再灌注（I/R）后入肝血流量变化与血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-1β（IL-1β）水平变化之间的关系。方法 Pringle法建立肝脏缺血15 min再灌注模型,应用频谱多普勒超声检测再灌注后1、6及24 h不同时间点肝动脉及门静脉的入肝血流量,计算总血流量（FV）,观测肝I/R后入肝血流量的变化情况。检测各时间点血清TNF-α及IL-1β水平的变化,分析FV与TNF-α及IL-1β之间的相关性。结果 I/R组再灌注后1及6 h的FV分别为（52.08±11.88）mL/min及（44.69±8.75）mL/min,较假手术组术后1及6 h的（85.32±29.85）mL/min和（81.41±28.67）mL/min明显减少（P〈0.05）;再灌注后24 h FV 2组间的差异无统计学意义（P〉0.05）。I/R组再灌注后1 h血清TNF-α含量为（310.52±39.83）pg/mL,较假手术组术后1 h的（240.74±31.65）pg/mL高（P〈0.05）;再灌注或手术后6及24 h的TNF-α含量2组间差异无统计学意义（P〉0.05）。I/R组再灌注后1及6 h血清IL-1β含量分别为（38.08±3.73）pg/mL和（27.44±6.11）pg/mL,较假手术组术后1和6 h组的（22.03±0.79）pg/mL及（21.78±0.71）pg/mL高（P〈0.01,P〈0.05）;再灌注后24 h的血清IL-1β含量2组间差异无统计学意义（P〉0.05）。FV与TNF-α及IL-1β之间存在负相关关系（r=-0.43,P〈0.05;r=-0.46,P〈0.05）。结论频谱多普勒超声能够通过检测入肝血流量的变化间接判断肝脏微循环状态,肝I/R后入肝血流量减少,且血流量的减少可能与TNF-α和IL-1β的过表达有关。     

去铁胺对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(deferoxamine,D组),注射用水对照组(control group,C组)和假手术模型(shsm operation,S组)各32只.分别于术后0.5 h、2 h、6 h、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平和肝组织SOD活性与MDA含量;做病理组织学检查,免疫组化检测HIF-1α、TNF-α及IL-1蛋白的表达.结果 在30 min、2 h、6 h及24 h各个时间点,D组大鼠血清ALT及AST水平、肝组织MDA含量及IL-1、TNF-α蛋白表达量明显低于C组,再灌注后2 h、6 h、24 h,D组大鼠肝组织SOD含量(411±70;384±53;379±46)和各时间点HIF-1α蛋白表达量(0.0413±0.0040;0.0684±0.0032;0.0583±0.0032;0.0491±0.0026)明显高于C组[SOD(341±21;323±25;303±25)和HIF-1α(0.0254±0.0024;0.0312±0.0022;0.0381±0.0022;0.0257±0.0015)](F>59.881;P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与促进HIF-1α表达上调,减轻氧化损伤和降低炎性因子水平有关.     

汉防己甲素对马兜铃酸A致肾小管上皮细胞Bcl-2/Bax的表达及细胞内钙离子的影响

目的：观察汉防己甲素（Tet）对马兜铃酸AⅠ（AAⅠ）诱导的肾小管上皮细胞Bcl-2/Bax表达及细胞内钙离子影响。方法：将人近端肾小管上皮细胞株（HK-2）,随机分为正常组、模型组、汉防己甲素高、中、低浓度组和泼尼松龙组共6组。除正常组外,余5组用AAⅠ（10μg/ml）刺激体外培养的HK-2;Tet高、中、低浓度组和泼尼松龙组分别加入500ng/ml、100ng/ml、20ng/ml的Tet及500ng/ml的泼尼松龙。细胞培养36h后,观察其形态;用RT-PCR法检测各组Bcl-2、BaxmRNA表达水平;用Western-blotting法检测各组Bcl-2、Bax蛋白表达水平;激光共聚焦显微镜检测各组细胞内钙离子浓度变化。结果：经AAⅠ刺激后,模型组的细胞形态、排列、数目与正常组比较均有明显的变化,表现为HK-2明显拉长梭形变,细胞间排列明显松散,细胞数目明显减少,Tet及泼尼松龙干预组细胞的改变明显轻于模型组,尤其是Tet各组;与模型组相比,Tet高、中浓度组及泼尼松龙组均能显著升高Bcl-2mRNA表达（1.20±0.18、1.03±0.14和1.01±0.13比0.59±0.04,均P〈0.05）,Bcl-2蛋白表达（1.00±0.01、0.86±0.07和0.93±0.07比0.28±0.19,均P〈0.05）;降低BaxmRNA表达（0.74±0.19、0.88±0.11和0.82±0.03比1.15±0.10,均P〈0.05）和Bax蛋白表达（0.80±0.07、0.81±0.03和0.82±0.03比0.97±0.05,均P〈0.05）;Tet各组呈现浓度相关性,即高浓度Tet组疗效好于中、低浓度Tet组,且P〈0.05。激光共聚焦显微镜检测显示：细胞内平均钙离子荧光强度与模型组对照,Tet高、中浓度组及泼尼松龙显著降低,差异有统计学意义（12.301±0.858、20.159±0.725和11.983±0.460比33.082±1.006,均P〈0.05）。结论：Tet对AAⅠ诱导的肾小管上皮细胞有保护作用,其机制可能与调控Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白,阻滞细胞内钙离子浓度的升高有关。     

抑制Caspase-8基因表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用

目的 观察抑制半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶8(Caspase-8)基因的表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用.方法 构建针对大鼠Caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.将Lewis大鼠随机分为3组,每组8只.(1)假手术组:麻醉后,取腹部正中切口,缝合关腹;(2)磷酸盐缓冲液(PBS液)组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射PBS液1 ml,然后行肝脏缺血再灌注;(3)shRNA组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射Caspase-8 shRNA 50 μg(总体积为1 ml),然后行肝脏缺血再灌注.肝脏缺血再灌注的方法为阻断大鼠70%入肝血流40min.于再灌注6 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d时检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;检测肝组织中Caspase-8 mRNA的表达、细胞凋亡情况、丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS液组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h,血清中ALT和AST水平显著降低(P<0.05);肝组织中Caspase-8 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(shRNA组和PBS液组分别为22.33%±4.28%和35.24%±2.33%)以及肝组织中MDA含量[shRNA组和PBS液组分别为(94.5±11.2)nmol/mg和(133.5±12.4)nmol/mg]均显著降低(P<0.05),而肝组织中SOD活性显著升高[shRNA组和PBS液组分别为(21.6±3.7)U/mg和(12.2±3.1)U/mg,P<0.05].结论 通过RNA干扰Caspase-8基因的表达可以抑制肝细胞凋亡的发生,减轻肝脏缺血再灌注损伤.     

低浓度一氧化碳通气减轻无心跳供体肺的热缺血损伤

目的 探讨低浓度一氧化碳通气对无心跳供体(NHBD)移植肺组织的热缺血损伤保护机制.方法 对供体大鼠NHBD给予低浓度CO机械通气,利用大鼠左肺移植动物模型进行研究;再灌注后测定动脉血气分析、移植肺组织湿/干(W/D)重量比、髓过氧化物酶(MPO)活性和支气管肺泡灌洗液(BAL)中中性粒细胞计数等参数,同时检测移植肺组织中前炎症因子IL-1β和凋亡相关基因caspase 3的表达量.结果 移植肺再灌注后1、2和4 h CO组的动脉血氧分压均显著大于对照组.再灌注4 h后,对照组的W/D重量比值、MPO活性值以及BAL中性粒细胞计数均明显大于CO组.CO组移植左肺组织的IL-1β和caspase 3基因的mRNA相对表达量均显著低于对照组IL-1β和caspase 3基因的mRNA相对表达量.结论 低浓度CO机械通气可以通过抑制前炎症因子IL-1β和凋亡相关基因caspase 3表达的机制减轻NHBD供肺的热缺血损伤.