表阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究表阿霉素对肝癌细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的肝癌细胞中加入不同浓度的表阿霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.细胞凋亡百分率及细胞周期的变化.结果 在表阿霉素作用下,凋亡的肝癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞术测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高和作用时间的延长而明显升高;同时,G_(1/0)期和S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升.非凋亡细胞则无此表现.结论 表阿霉素可诱导肝癌细胞发生凋亡,并可使肝癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制.     

多西紫杉醇诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨多西紫杉醇(docetaxel,DTX)对人肝癌细胞诱导凋亡的作用及其机制.方法 人肝癌细胞株HepG2和Huh7用于实验.通过WST-1细胞增殖实验观察DTX对细胞生长的抑制作用,采用Hoechst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况,采用Western印迹法检测DTX对Caspase-3和Caspase-9酶原的激活作用.结果 DTX对HepGZ和Huh7的生长有明显的抑制作用;经Hoeehst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测发现DTX可诱导HepG2和Huh7细胞凋亡;在DTX诱导肝癌细胞凋亡的过程中.凋亡效应分子Caspase-3和Caspase-9酶原被剪切激活;Caspase3抑制剂Z-VAD-FMK抑制DTX诱导的肝癌细胞凋亡.结论 DTX对肝癌细胞具有较强的增殖抑制作用,凋亡是其抑瘤的机制之一.DTX导致肝癌细胞凋亡程序依赖于激活Caspase-3酶原途径.     

聚酯型儿茶素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨聚酯型儿茶素（ＴＳ）的抗癌作用机制。方法 应用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法,透视电镜,琼脂糖凝胶电泳,流式细胞术等方法研究ＴＳ诱导体外培养的人肝癌细胞凋亡。结果 ５０－８００ｍｇ／Ｌ ＴＳ对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长有明显的抑制作用,且量效关系明显。４００ｍｇ／Ｌ ＴＳ作用于ＳＭＭＣ－７７２１细胞２４ｈ后,透射电镜观察到凋亡小体;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳上可见典型的“阶梯状”：     

IGF-Ⅱ对阿霉素诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的拮抗作用研究

目的 研究胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor Ⅱ,IGF-Ⅱ)对阿霉素(adriamycin,ADM)诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及其与凋亡抑制蛋白survivin表达的关系.方法 实验分组:A组:空白对照组;B组:200 ng/ml ADM组;C组:2 n/ml IGF-Ⅱ+200 ng/ml ADM组;D组:20 ng/ml IGF-Ⅱ+200 ng/ml ADM组;E组:200 ng/ml IGF-Ⅱ+200 ng/ml ADM组,分别处理HepG2细胞48 h后,应用MTF检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western blot检测细胞中survivin蛋白的表达.结果 A、B、C、D、E组的HepG2细胞活力分别为:0.568±0.025、0.201±0.020、0.232±0.027、0.268±0.013、0.304±0.019,凋亡率分别为:6.9%±1.3%、35.4%±2.1%、31.2%±2.2%、26.4%±1.7%、21.7%±1.9%,survivin与β-actin的比值分别为:0.527±0.039、0.147±0.081、0.311±0.069、0.421±0.033、0.469±0.031,结果显示IGF-Ⅱ+ADM组的HepG2细胞活力较ADM组明显好转(P＜0.01),凋亡率显著降低(P＜0.01),IGF-Ⅱ+ADM组的HepG2细胞中survivin蛋白的表达较ADM组明显增高(P＜0.01),且IGF-Ⅱ的上述作用随IGF-Ⅱ浓度的增高而增强(P＜0.05).结论 IGF-Ⅱ能够上调HepG2细胞中survivin蛋白的表达,拮抗ADM诱导的HepG2细胞凋亡.     

mda-7/IL-24联合阿霉素诱导裸鼠肝癌凋亡的初步研究

目的:探讨重组腺病毒介导的mda-7/IL-24基因联合阿霉素（ADM）治疗裸鼠肝癌的作用及机制。方法:采用mda-7/IL-24的重组腺病毒载体（Ad-mda-7）和/或ADM治疗实验性肝癌裸鼠，观察各组裸鼠生长时间及肿瘤体积变化，并对各组瘤体组织进行TUNEL检测。结果:成功构建了重组腺病毒mda-7/IL-24基因载体。Ad-mda-7＋ADM联合治疗组裸鼠平均生存时间为（83.8±4.82）d，明显长于其他3组（P<0.01）;Ad-mda-7＋ADM组肝癌体积明显缩小，抑癌率为79.78%，与单独用药组和对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;联合组癌组织凋亡增加，凋亡指数为38.1%±4.2%，与其余3组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论:重组腺病毒介导mda-7/IL-24联合阿霉素有明显的协同抗肿瘤作用，效果优于单独治疗组，主要作用机制与促进癌组织凋亡有关。     

L-精氨酸诱导人肝癌细胞凋亡的作用

目的 探讨L-精氨酸诱导人肝癌细胞凋亡的作用及机制。方法 采用倒置显微镜、透射电镜和流式细胞仪，观察和分析不同浓度L-精氨酸作用下体外培养人肝癌细胞株QGY-7703的增殖和凋亡情况。结果（1）低浓度L-精氨酸对肝癌细胞生长和细胞大体形态无明显影响。高浓度的L-精氨酸引起肝癌细胞形态变圆、体积变小，细胞皱缩，细胞核固缩，核碎裂，染色质边聚，凋亡小体形成。（2）低浓度L-精氨酸对肝癌细胞生长周期和增殖指数无影响；而高浓度的L-精氨酸引起G0／G1期较对照组显著升高，S期显著降低，细胞增殖指数显著下降（P〈0．05），而G2／M无明显变化。（3）低浓度L-精氨酸（1mmol／L）和对照组细胞未见凋亡峰（亚G1峰），凋亡率分别为2．1％和2．5％；而16mmol／L和64mmol／L浓度组则出现典型的凋亡峰，凋亡率分别为12．4％和30．8％，较对照组显著增高（P〈0．05）。结论 高浓度的L-精氨酸通过合成NO，诱导肝癌细胞凋亡。     

携带mda-7基因的复制缺陷性腺病毒联合阿霉素致肝癌细胞HepG2凋亡机制的研究

目的 探讨黑色素瘤分化相关基因-7/白介素-24(MDA-7/IL-24)基因联合阿霉素杀伤肝癌细胞HepG2,并逆转HepG2多药耐药的机制.方法 以人肝癌细胞系HepG2为实验对象,使用MTT法和流式细胞仪比较Ad.mda-7联合阿霉素处理组与阿霉素组、Ad.mda-7组对肝癌细胞HepG2的作用差异.阐明MDA-7/IL-24对多药耐药的逆转作用的机制.实时定量PCR检测MDR-1、STAT-3、BCL-2、BAXmRNA的变化.Western blot检测gp-170、stat3、P-stat-3、PKB、bcl-2、hax蛋白的表达的变化.结果 低浓度的Ad.mda-7联合正常肝细胞半抑制浓度浓度的阿霉素(1.5 mg/L)使得细胞抑制率从阿霉素组的17.46%上升到79.5%,生长抑制逆转4.55倍(P＜0.05).联合化疗组MDR-1mRNA相对表达量从16.49±0.11下降至5.48±0.05.STAT-3 mRNA相对表达量从13.17±0.08上升至21.57±0.11.BCL-2及BAX表达与其他实验组相比较差异均有显著统计学意义(P＜0.05).联合实验组P-170蛋白的表达量较其他组明显降低,PKB蛋白表达量明显降低,磷酸化stat-3蛋白的表达量增加.结论 Ad.mda-7具有逆转肝癌细胞HepG2多药耐药的作用.其在下调MDR-1mRNA表达的同时,通过抑制PKB蛋白和活化STAT-3信号通路的表达降低促进肝癌细胞凋亡.     

阿霉素协同TRAIL真核表达载体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨阿霉素与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）真核表达载体诱导前列腺癌细胞凋亡的协同作用.方法 RT-PCR方法克隆人TRAIL全长基因,并插入真核表达载体pLXIN多克隆位点,经酶切和测序鉴定.将pLXIN-TRAIL质粒转染PC3-M细胞,RT-PCR方法检测外源性TRAIL表达率,TUNEL染色和流式细胞术比较单独表达TRAIL和联合应用阿霉素对PC3-M细胞凋亡率的影响,Western blot法检测经阿霉素诱导前后PC-3M细胞死亡受体-5（DR5）的表达变化.结果成功构建pLXIN-TRAIL真核表达载体,外源性TRAIL表达可以诱导PC-3M细胞凋亡,阿霉素能够增强TRAIL的凋亡诱导效应,6μg pLXIN-TRAIL质粒DNA组,加入1 mg/L阿霉素前后平均凋亡率分别为11.8%和20.7%,同时可提高PC-3M细胞DR5的表达. 结论 TRAIL真核表达载体介导的细胞凋亡是治疗前列腺癌的新途径,阿霉素可以通过提高DR5表达而增强PC-3M细胞对TRAIL诱导的凋亡敏感性.     

热疗诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制的研究

目的探讨不同温度热疗对人肝癌细胞Hep G2的凋亡作用。方法人肝癌Hep G2细胞常规方法培养,采用水浴加热法对实验组(41℃,42℃,43℃)和对照组(37℃)细胞进行加温(0.5 h)处理,处理后继续培养24 h。采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,免疫组织化学技术检测细胞凋亡相关蛋白P53的水平,实时荧光定量PCR法检测热疗作用后生存素(Survivin),caspase-9基因mRNA的表达变化。应用SPSS16.0软件进行统计学分析。凋亡率、P53蛋白值、caspase-9 mRNA表达水平等计量资料采用均数±标准差表示,组间比较采用t检验或方差分析。P0.05差异有统计学意义。结果在37℃,41℃,42℃,43℃,细胞凋亡率分别为(9.58±1.22)%、(16.47±3.41)%、(20.07±1.85)%和(23.42±1.93)%;P53蛋白表达OD值分别为(0.083±0.015)、(0.145±0.024)、(0.267±0.031)、(0.389±0.019)。与对照组比较,survivin基因mRNA的表达量下降(P0.05),caspase-9基因mRNA的表达显著增加(P0.05)。不同温度热疗后,随着加热温度的增高,细胞凋亡率增加,促进了基因p53及caspase-9的表达,凋亡抑制基因survivin的表达量下降。结论通过热疗可以增加p53及caspase-9基因的表达,抑制survivin基因的表达,从而诱导肝癌Hep G2细胞凋亡。     

低剂量阿霉素联合TRAIL诱导人前列腺癌细胞LNCAP凋亡的实验研究

目的 研究低剂量阿霉素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人前列腺癌细胞LNCAP凋亡的作用和机制,为提高肿瘤治疗效果提供理论依据.方法 采用蛋白印迹、流式细胞术、MTT等实验技术,检测TRAIL和低剂量阿霉素分别或者联合处理LNCAP细胞后细胞的生存率变化、相关受体及其配体系统、凋亡相关蛋白(c-FLIP,BCL-2,XIAP)的变化.结果 低剂量阿霉素(0.86 μmol/L)可以增加细胞表面DR4和DR5的表达,同时减少凋亡抑制蛋白c-FLIP的表达,增强TRAIL诱导LNCAP细胞凋亡的敏感性.结论 低剂量阿霉素(0.86 μmol/L)可以增强TRAIL对LNCAP细胞的凋亡诱导效应.     

载阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒对L-02细胞的毒性研究

目的:检验载阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(ADM-PBCA-NP)对人肝细胞株L-02细胞的毒性。方法:体外培养人肝细胞株L-02，检测各组不同纳米粒浓度培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性；用噻唑蓝（MTT）法检测L-02在与ADM-PBCA-NP，阿霉素（ADM）和空白纳米粒(PBCA-NP)共同培养的条件下对肝细胞的毒性，通过对不同浓度PBCA-NP的溶血试验测定其生物相容性。结果:MTT结果显示，ADM组，ADM-NP组，PBCA-NP组在 10-6 mol/L的浓度范围内，细胞毒性均为1级，即对细胞无害。各组肝细胞L-02培养上清液中LDH活性的测定无统计学差异。结论:在10-6 mol/L浓度范围内，ADM-NP和PBCA-NP对肝细胞L-02无明显毒性作用；在一定的浓度范围内细胞相容性良好，不会引起溶血。     

三氧化二砷与阿霉素对人肝癌细胞株HepG2中survivin表达的影响

目的探讨三氧化二砷与阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的可能机制。方法用不同浓度的As2O3或／和ADM干预人肝癌细胞株HepG2不同时间，以免疫细胞化学和RT—PCR方法检测HepG2细胞中survivin表达的改变。结果(1)未加药物干预之前，HepG2细胞中可见survivin强烈表达；(2)不同浓度的As2O3或ADM均可降低HepG2细胞survivin表达程度，并且随药物浓度的增加或作用时相的延长，降低程度更明显；浓度与时相之间存在交互作用；(3)ADM降低HepG2细胞survivin表达的作用比As2O3更明显，两者联用后，作用进一步增强。结论(1)单用As2O3或ADM均可降低HepG2细胞中survivin表达，并呈浓度和时间依赖性；(2)相同浓度下，ADM对HepG2细胞中survivin表达的减弱作用较As2O3更强，但两者的联用较单用者能更显著降低survivin表达；(3)As2O3和ADM可能通过下调survivin表达而参与诱导癌细胞凋亡，从而发挥其抗癌作用；两者联用有叠加抗癌作用，从而可降低各自的临床使用剂量。     

主肝静脉和肝短静脉的解剖学研究及其临床意义

目的:探讨主肝静脉和肝短静脉（SHVs）的数量、位置、分型、口径等参数。方法:取60具成人尸体标本, 测量肝左、中、右静脉的肝外长度、注入下腔静脉（IVC）管径;按其SHVs汇入下腔静脉左侧壁、前壁和右侧壁分为左、中、右3排，测量SHVs的数量、位置、口径及其与主肝静脉的关系。结果:肝左、中、右静脉开口于IVC肝后段上l/4段，其中肝左、中静脉共干者73.3%（44例），肝左、中、右静脉共开口者1.7%（1例），3支分别汇入者25.0%（15例），SHVs直径为1.5～17.8（5.4±1.4）mm,3～35支SHV从不同方向和节段注入下腔静脉。肝右静脉直径与SHVs直径呈负相关（r=-0.34，P＜0.05);肝左静脉直径与SHVs数目呈负相关（r=0.24， P＜0.05)。肝右后下静脉（IRHV）出现率为83.3%，平均直径为2.6～8.0（4.3±1.2）mm。结论:SHVs变异较大，管径粗者数量少。SHVs的口径、数目与主肝静脉口径、数目呈相互消长。肝右静脉直径愈大，SHVs直径愈小;反之SHVs直径愈大。肝左静脉直径愈大，SHVs数量愈少;反之SHVs数量愈多。     

PcDNA3.1/hTM质粒对真核细胞转染表达的实验研究

目的： 探讨含有人血栓调节蛋白（hTM）基因的真核表达质粒pcDNA3.1/hTM转染脐静脉内皮细胞（HUVECs）的抗凝效应。方法：由阳离子脂质体介导将pcDNA3.1/hTM质粒转入内皮细胞中，以RT-PCR法检测hTMmRNA的表达;免疫组化法检测hTM分子的表达。结果：转染重组质粒的HUVECs表达的hTMmRNA约为载体质粒组及未转染组的1.7倍。免疫组化显示有平均10%的HUVECs获得转染，阳性细胞较阴性细胞hTM的表达强度有明显提高。结论：pcDNA3.1/hTM质粒能被导入 HUVECs中表达，而且外源性hTM分子具有完全的抗凝生物学活性。     

雷公藤内脂醇对脓毒症大鼠免疫平衡的调节作用

目的：探讨雷公藤内脂醇对脓毒症大鼠血清促炎与抗炎介质的调节作用。方法：90只SD大鼠随机分为3组,每组30只;假手术组（A组），脓毒症模型组（B组）和雷公藤内脂醇治疗组（C组）。A组除不结扎也不刺穿盲肠外，余操作同B组。B组开腹后显露盲肠,根部结扎并刺穿肠壁2次,然后关腹，B组成功后不做任何处理。C组在盲肠结扎和穿孔后立即用雷公藤内脂醇(0.05mg/mL)腹腔注射0.2mg/kg,每隔8ｈ追加1次。各组大鼠在术后6，12，24ｈ分批处死,每批10只。取下腔静脉血检测血清中TNF-α，IL-1，IL-10和TGF-β的水平，并取肝、肾组织行HE及电镜检查。 结果：A组血清中炎症介质水平各时点无明显差异，肝肾功能与形态的变化不明显。B，C组炎症介质水平和抗炎介质水平均显著升高,肝肾功能与形态出现损伤性变化;C组较B组血中两者水平明显降低, 肝肾功能与形态损伤减轻。 结论：雷公藤内脂醇能降低脓毒症大鼠炎症介质水平，即对免疫平衡有调节作用，并减轻肝肾损伤。     

年轻女性甲状腺癌的临床分析

目的探讨年轻女性甲状腺癌的临床特点,以期提高对该疾病的诊治水平。方法回顾性分析近10年连续收治的74例年轻甲状腺癌患者的临床资料,术前体检大多数甲状腺结节无质硬和固定的表现。术前患者均行B超检查,其中有61例患者(82.43%)B超示多发性结节;43例行同位素检查,有41例发现甲状腺结节,其中冷、凉和温结节分别为14,18,9例;11例行细针穿刺细胞活检,2例阴性,1例提示细胞有异型,3例提示癌疑,5例提示乳头状癌。结果病理检查70例为甲状腺乳头状癌,3例为滤泡状癌,1例为髓样癌,且大多数患者同时伴有其他甲状腺良性疾病;有28例(37.84%)出现颈部淋巴结转移,与同期中老年女性甲状腺癌颈淋巴结转移率16.46%(27/164)相比,差异有显著性(P<0.05)。有2例于术后3年内因远处转移而死亡。结论年轻女性甲状腺癌患者易发生淋巴结转移;结节的质地和活动度不应作为判断其良恶性的手段;应对B超发现的结节进行细化,对直径>1.0cm的实质性结节建议行手术治疗,对直径>2.0cm的混合性结节须行同位素和细针穿刺细胞活检检查,以免漏诊。     

肝动脉缺血对犬肝细胞损害的实验研究

摘要：目的:探讨肝动脉缺血对犬肝细胞的损害。方法:对２０只犬进行肝动脉阻断，不阻断门静脉，分别于阻断前、阻断后２０，４０，６０min取肝组织进行活检，用常规ＨＥ染色和ＢＣＬ-２免疫组化染色并进行灰度测定。结果:肝动脉阻断２０min，肝细胞已有明显损害，阻断６０min有不可逆性严重损害，ＢＣＬ-２免疫组化灰度测定，阻断前与阻断后各时点差异均有高度显著性（P<0.0001），其中２０min和４０min与６０min之间差异有高度显著性(P<0.001)。结论:肝动脉阻断20min，肝细胞有明显损害，肝动脉阻断60 min，肝细胞有不可逆性损害。     

尿多酸肽对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤细胞分化诱导剂尿多酸肽（CDA—Ⅱ）对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法将CDA—Ⅱ与不同生物学特性的乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行体外培养，同时以维甲酸为阳性对照，观察CDA—Ⅱ对乳腺癌细胞生长曲线、细胞凋亡及形态学等方面的影响。结果CDA—Ⅱ可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，诱导乳腺癌细胞凋亡。结论CDA—Ⅱ可抑制MCF-7和MDA-MB-231两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，诱导乳腺癌细胞凋亡．本研究为CDA-Ⅱ治疗乳腺痛提供了实验依据。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的抗胰腺癌细胞的作用

目的 ：探讨腺病毒介导的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对人胰腺癌株Panc-1细胞的抑制作用及其机制。方法 ：利用腺病毒载体Ad-TRAIL将人类TRAIL全长cDNA转染导入Panc-1细胞。分别利用RT-PCR和Western blot检测TRAIL在mRNA 水平及蛋白水平的表达。利用MTT法测定细胞增殖活性及TRAIL基因的旁观效应。利用流式细胞仪检测胰腺癌细胞的凋亡率，并用Western blot检测procaspase-8和procaspase-3蛋白的表达。结果 ：Panc-1细胞感染Ad-TRAIL腺病毒后，可稳定地高表达TRAIL。Ad-TRAIL能显著抑制Panc-1细胞的生长。高表达TRAIL的转染细胞能通过旁观效应导致未转染细胞的生长抑制。Ad-TRAIL实验组的凋亡率显著高于对照组（ P <0.01），且Ad-TRAIL能使procaspase-8和procaspase-3蛋白表达下降。结论 ：Ad-TRAIL对胰腺癌Panc-1细胞具有明显的抑制作用，其机制可能与促凋亡和旁观效应有关。     

HGF下调Skp2表达抑制人肝癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子(HGF)对人肝癌细胞增殖的作用及其机制。方法：人肝癌细胞株HepG2用于实验。通过BrdU细胞增殖酶联免疫实验观察HGF对细胞增殖的作用,采用Western印迹和RT-PCR法检测HGF对S期激酶结合蛋白2(Skp2)表达的影响。将Skp2真核细胞重组表达质粒转染HepG2细胞并获得稳定转染的过表达Skp2的HepG2细胞,观察HGF对该转染细胞增殖的影响。结果： HGF对HepG2细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性的抑制作用;HGF明显抑制HepG2细胞表达Skp2蛋白和mRNA。但HGF对过表达Skp2的HepG2细胞无增殖抑制作用。结论：HGF对HepG2细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与下调Skp2表达密切相关。