基因工程Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

目的 探讨输注慢病毒载体介导的小鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)效应的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将小鼠叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因转导入Balb/c小鼠的CD4+CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者.C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,移植当天受者接受X线直线加速器全身照射.用随机数字表法将受者分为5组,每组10只.(1)单纯照射组:经受者尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 ml;(2)白血病对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+C57BL/6小鼠T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞株(EL4细胞)500个;(3)移植对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个;(4)工程Treg组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个+基因工程Treg细胞5×106个;(5)空载体对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个+空载体转导的CD4+CD25-T淋巴细胞5×106个.每天观察受者存活情况;记录GVHD及白血病的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤、脾脏等组织,进行病理学观察;取长期存活(超过60 d)受者的骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、白血病对照组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(10.3±1.5)d、(20.7±1.9)d、(26.0±4.3)d、(49.0±17.7)d和(24.4±4.1)d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05).白血病对照组小鼠肝、脾组织病理切片均存在白血病细胞浸润表现,移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片存在GVHD病理改变,而工程Treg组长期存活小鼠各组织病理切片结构基本正常,未见GVHD及白血病细胞浸润病理表现,该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可有效减少GVHD的发生并保留GVL效应.     

Ly49A转基因淋巴细胞对异基因骨髓移植后GVHD和GVL的影响

目的　观察Ly49A基因转染淋巴细胞对异基因骨髓移植后移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病效应 (GVL)的影响。方法　经逆转录病毒介导将Ly49A基因转染至C57BL/ 6小鼠的淋巴细胞 ,以C57BL/ 6(H 2 b)小鼠为供者 ,以接种EL961 1红白血病细胞的BALB/c(H 2 d)小鼠为受者 ,进行脾淋巴细胞和骨髓细胞联合移植 ,建立异基因急性GVHD模型 ,观察Ly49A基因转染的淋巴细胞对GVHD和GVL的影响。结果　在未进行移植的单纯照射组 ,小鼠的存活时间为 (6 .50±2 .41 )d ;仅以环磷酰胺治疗的小鼠存活时间为 (2 0 .90± 2 .88)d ;非转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (1 7.1 0± 4 .65)d ;空载体转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为(1 7.40± 5 .32 )d ;Ly49A转染淋巴细胞与骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (35 .2 0± 1 2 .52 )d ,较上述各组明显延长 (P =0 .0 0 0 )。结论　Ly49A基因转染的淋巴细胞在异基因骨髓移植模型上具有一定程度的降低GVHD并保留GVL的作用     

单倍体异基因淋巴细胞输注在小鼠移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤效应中的意义

目的建立小鼠免疫耐受模型,探讨单倍体异基因淋巴细胞输注在小鼠移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗肿瘤（GVT）效应中的意义。方法64只BALB／C雌性小鼠按随机数字表法分为4组,每组16只。对照组：实验第4天接种肿瘤细胞（小鼠大肠癌CT26细胞株配制成1×10^7／mL的瘤细胞悬液,接种到雌性小鼠右腋皮下）后不予任何特殊处理;化疗组：实验第4天接种肿瘤细胞,第7天开始化疗;供体淋巴细胞输注（DLI）组：实验开始时进行预处理,第4天接种肿瘤细胞,第13、15、17天输注单倍体异基因淋巴细胞（雄性BALB／C小鼠制备的脾淋巴细胞）;化疗＋DLI组：实验开始时进行预处理,第4天接种肿瘤细胞,第7天开始化疗,第13、15、17天输注单倍体异基因淋巴细胞。预处理方案为输注单倍体异基因淋巴细胞＋环磷酰胺＋输注单倍体异基因淋巴细胞。化疗方案为小鼠接种肿瘤细胞后第3天给予环磷酰胺腹腔化疗。每日观察各组小鼠临床GVHD的指标,并给予临床评分。观察荷瘤鼠肿瘤生长情况,计算接种成功后首日到小鼠死亡的时间和肿瘤质量,计算抑瘤率。应用流式细胞仪检测各组小鼠外周静脉血中T细胞数量,接种后15d各组处死3只小鼠取瘤体制作成观察切片,HE染色后光镜观察。多组比较采用方差分析,组间比较采用LSD—t检验。结果化疗＋DLI组的小鼠GVHD临床表现轻于其他组小鼠。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组GVHD评分分别为（2．3±0．6）分、（1．5±1．1）分、（6．7±0．9）分、（3．4±0．5）分,4组比较,差异有统计学意义（F=148．68,P〈0．05）。4组小鼠全部接种CT26细胞成功。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组小鼠肿瘤质量分别为（3．40±0．20）g、（0．80±0．10）g、（2．20±0．20）g、（0．50±0．30）g,4组比较,差异有统计学意义（F=149．17,P〈0．05）;4组小鼠抑瘤率分别为0、77％±9％、35％±3％、85％±44％;4组小鼠CD3’分别为52．3％±2．9％、44．8％±3．1％、62．9％±3．5％、65．9％±3．3％,4组比较,差异有统计学意义（F：28．04,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD4＋分别为32．1％±2．6％、27．1％±1．1％、42．6％±1．8％、41．7％±2．4％,4组比较,差异有统计学意义（F=40．29,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD8＋分别为22．7％±2．2％、20．7％±1．8％、26．7％±0．8％、26．1％±0．7％,4组比较,差异有统计学意义（F=10．74,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD＋CD25＋分别为8．7％±0．6％、6．6％±0．6％、11．2％±0．4％、13．3％±0．7％,4组比较,差异有统计学意义（F=82．88,P〈0．05）。4组小鼠的肿瘤组织均有不同程度的坏死、出血,其中DLI组和化疗＋DLI组肿瘤组织大片坏死,瘤细胞变小,间质内有大量炎性细胞浸润,化疗＋DLI组还可见大量增生的淋巴滤泡。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组小鼠生存时间分别为（16．8±2．5）d、（26．3±2．9）d、（23．4±2．5）d、（33．7±4．6）d,4组比较,差异有统计学意义（F=46．45,P〈0．05）。结论（1）预处理方案可以诱导小鼠的特异性免疫耐受。（2）单倍体异基因淋巴细胞输注与化疗具有协同作用,联合应用可以抑制小鼠皮下移植瘤瘤体的生长以及延长小鼠的生存时间。（3）化疗可降低供体淋巴细胞输注后诱发的GVHD效应并且提高了GVT效果。（4）CD3＋CIN＋CD25＋T淋巴细胞在降低GVHD反应中起着重要的作用。     

白细胞介素11对小鼠骨髓移植后GVHD及GVL的影响

目的　探讨白细胞介素11(IL 11)对急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)的影响及其可能的相关机制。方法　随机将 20 只裸鼠(免疫缺陷鼠)及20只BABL/c小鼠分别等分为 2 组,共计 4 组。A组:裸鼠对照组;B组:裸鼠实验组;C组:BABL/c小鼠对照组;D组:BABL/c小鼠实验组。实验组在移植前2 d至移植后7 d皮下注射 IL 11,对照组不注射 IL 11。用流式细胞术检测 IL 11对移植前后ALL小鼠 CD4 、CD8 T细胞亚群的影响;记录ALL小鼠骨髓移植后的存活时间;观察移植后 ALL小鼠肝、肠、脾的 GVHD病理变化;ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF α)的水平。结果　D组在显著降低CD4 T细胞亚群的同时,增加CD8 T细胞亚群的数量;明显提高ALL小鼠的生存时间;病理观察发生 GVHD的时间推迟,且程度较轻。D组TNF α测定结果明显低于C组;D组与其他各组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论　ALL小鼠骨髓移植后皮下注射 IL 11,具有降低GVHD并且保留了GVL的作用。     

异基因骨髓移植174例报告

异基因骨髓移植１７４例报告北京医科大学人民医院血液病研究所（１０００４４）郭乃榄，陆道培，郑缓，范蕴明，黄晓军，张耀臣，卢锡京，史琪，吴彤，许兰萍，邓星明，陈欢异基因骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ）在医学中的地位已被公认，但某些严重合并症如移植物抗宿主病...     

异基因骨髓移植后合并感染30例临床分析

目的：分析异基因骨髓移植（allo-BMT）后感染的发生情况.方法：回顾性分析2008年6月-2009年6月30例allo-BMT患者的临床资料.患者均经过移植前预处理、移植物抗宿主病（GVHD）和感染的预防性治疗.移植后感染患者经验性给予抗细菌、抗真菌、抗病毒及抗结核治疗.结果：30例患者发生感染并发症33例次.由一种病原菌引起的感染21例次,其中细菌性感染10例次,间质性肺炎2例次,真菌感染5例次,肺结核1例次,带状疱疹3例次;≥2种病原所致的感染并发症12例次.患者均伴有不同程度的GVHD.3例GVHDⅢ～Ⅳ级患者因肺部混合感染导致死亡,其余治疗后好转.结论：混合感染仍是骨髓移植最常见的并发症,并与GVHD的发生相关.     

供者淋巴细胞输注在恶性血液病非清髓性骨髓移植中的应用

目的探讨供者淋巴细胞输注(DLI)治疗非清髓性异基因造血干细胞移植后血液病复发的疗效。方法5例恶性血液病患者接受非清髓性造血干细胞移植,在形成混合性嵌合体和血液学部分缓解(例1～4)或进步(例5)后,进行DLI。移植后的4～5周进行第1次DLI,首次输注T淋巴细胞数量为(0.5～1.0)×105/kg,以后每隔3～4周逐渐增加输注的淋巴细胞数量,至(0.5～2.0)×108/kg,平均行DLI4.6次(3～8次)。结果例1～4分别经过7、3、2、3次DLI后,性染色体及DNA指纹图由混合性嵌合体转变为完全性嵌合体;例2、3经过DLI后消除了微小残留病,除例5仍然为混合性嵌合体和进步状态外,4例均达血液学完全缓解。例1、2和例3、4分别出现Ⅰ/Ⅱ度急性移植物抗宿主病和广泛/局限型慢性移植物抗宿主病,例2、4出现骨髓抑制。结论DLI可使异基因造血干细胞移植后短暂的混合性嵌合体向完全性嵌合体转变,并可清除微小残留病。     

延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻移植物抗宿主病的探讨

目的 探讨延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻急性移植物抗宿主病(aGVHD)的作用及其机制.方法 选择BALB/c(H-2d)/b鼠为受者,C57BL/6(H-2b)小鼠为供者.受者接受60Coγ射线全身照射(TBI)后,建立骨髓移植模型.实验分为5组.对照组:TBI后4 h经受者尾静脉输注RPMI 1640液0.4 ml;经典移植组:TBI后4 h经受者尾静脉输注供者的骨髓细胞(BMC)和脾细胞(SC)各1×107个/0.2 ml;连续移植组:TBI后4 h、1 d、2 d和3 d分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5 × 106个/0.05 ml;延迟移植组:TBI后第4天经受者尾静脉输注供者的BMC和SC各1× 107个/0.2 ml;延迟并连续移植组:TBI后第4、5、6和7天分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5×106个/0.05 ml.移植后观察受者的临床表现、病理学改变及存活时间,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定受者外周血中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10及γ干扰素(IFN-γ)的水平,应用流式细胞仪测定受者H-2b细胞、T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的百分率.结果 对照组和经典移植组受者均在TBI后3周内因造血功能衰竭和/或aGVHD死亡;连续移植组和延迟移植组受者TBI后60 d存活率分别为30%和50%;延迟并连续移植组受者TBI后60 d的存活率为70%,高于其它4组(P＜0.05).延迟并连续移植组IL-4、IL-10的表达高于经典移植组(P＜0.05);IL-2和IFN-γ的表达低于经典移植组(P＜0.05).延迟并连续移植组TBI后20 d时外周血白细胞计数恢复正常,30 d时外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的表达恢复正常,60 d时H-2b细胞的百分率为(98.13±1.11)%.结论 延迟并连续小鼠异基因骨髓移植能减轻移植后的aGVHD.其作用机制主要是避开了TBI后炎症冈子表达的高峰期,下调了炎症因子和Th1类细胞因子的表达,促进了Th2类细胞因子的表达.     

致敏供者淋巴细胞输注对受者免疫功能重建及移植物抗宿主病发生率的影响

目的探讨非清髓异基因外周血造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注(DLI)对受者免疫重建及移植物抗宿主病(GVHD)发生率的影响。方法以C57BL/6小鼠(H-2b)为受鼠, BALB/c小鼠(H-2d)为供鼠,建立异基因外周血造血干细胞移植模型(实验组),移植当天受者接受60Coγ射线全身照射,移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200 mg/kg。以不行造血干细胞移植,仅行γ射线全身照射和环磷酰胺腹腔注射的正常C57BL/6小鼠为对照。实验组存活小鼠在移植后第28天分别接受致敏供鼠淋巴细胞输注(n=8)、未致敏供鼠淋巴细胞输注(n=8),另有6只不输注供鼠淋巴细胞。移植后检测受者异基因嵌合率,观察GVHD的发生情况以及T淋巴细胞亚群变化,并行供受者间以及供受者与第三方小鼠(昆明鼠)间的单向混合淋巴细胞反应。结果实验组受鼠SRY基因均为阳性,嵌合率为(30.881±3.962)%。DLI后,接受未致敏DLI者均出现不同程度的GVHD,死亡3只(7.5%,3/8),而接受致敏DLI者无明显GVHD及死亡者。移植后45 d,接受致敏DLI者的CD8 T淋巴细胞明显高于正常C57BL/6小鼠(P<0.05),而接受未致敏DLI者的CD8 T淋巴细胞与正常对照的差异无统计学意义(P>0.05),至移植后60 d,接受DLI者的T淋巴细胞亚群接近正常(P>0.05);对照组T淋巴细胞亚群持续低于正常对照(P<0.05)。实验组小鼠淋巴细胞对供者淋巴细胞刺激的反应性均下降(P<0.01),以接受致敏DLI者最明显,而对昆明鼠淋巴细胞刺激的反应性维持正常水平。结论造血干细胞移植后输注致敏供者的淋巴细胞能促进受者的免疫功能重建,并可减少GVHD的发生。     

H-2半相合小鼠非清髓性骨髓移植模型的建立

目的　建立H 2半相合小鼠非清髓性骨髓移植模型。方法　用氟达拉滨、阿糖胞苷、环磷酰胺联合60 Co 2Gy全身照射组成预处理方案 ,以C5 7BL/ 6J(H 2 b)为供鼠 ,以C5 7BL/ 6J×BALB/c杂交F1代小鼠为受鼠 ,进行H 2半相合骨髓移植 ,采用环孢素A联合甲氨蝶呤预防急性移植物抗宿主病 (aGVHD)。观察移植后小鼠造血恢复、aGVHD发生率及死亡率 ,5 0d内存活率。结果　移植小鼠平均在 (1 2 .0± 1 .6 )d造血恢复 ,仅接受预处理而不输注供鼠细胞的小鼠在 (1 3.5± 2 .0 )d恢复自身造血 ;移植小鼠移植后 7d到 45d内均可检测到供、受者混合造血细胞嵌合体 ;移植后 2 2d～ 2 5d小鼠出现典型的aGVHD症状。环孢素A联合甲氨蝶呤预防方案可有效降低aGVHD的发生率 ,并减轻其严重程度 ;aGVHD死亡率为 6 0 %,5 0d内存活率为 70 %。结论　以氟达拉滨、阿糖胞苷、环磷酰胺联合全身照射组成的非清髓性预处理方案 ,可在H 2半相合小鼠间进行成功的骨髓移植 ,并可产生稳定的供、受者混合造血细胞嵌合体。     

肝移植后发生移植物抗宿主病受者的骨髓象特征

目的 探讨原位肝移植术后发生移植物抗宿主病(GVHD)受者的骨髓象特征.方法 回顾性分析3例原位肝移植术后发生GVHD受者的临床资料.对3例受者的骨髓细胞学、血常规及血液生化等进行了检查,并对受者骨髓象及造血系统功能的改变进行了分析;采用聚合酶链(PCR)技术检测供、受者16个位点的短串联重复序列(STR),对1例受者的嵌合体状况进行了分析.结果 3例受者均出现发热、皮疹、腹泻等典型的GVHD临床表现;全血细胞进行性减少,骨髓增生低下,造血功能发生严重衰竭;血常规及血液生化检查显示,受者的白细胞、血小板和网织红细胞等大量减少;1例受者在移植术后第35天被证实存在供、受者问的D8S1179、D21S11两位点的嵌合体.最终1例受者经及时治疗后恢复造血功能,另2例受者死亡.结论 肝移植术后发生移植物抗宿主病可诱导受者骨髓造血功能衰竭.     

非清髓性造血干细胞移植后并发移植物抗宿主病的相关因素分析

目的 探讨和分析非清髓性造血干细胞移植(NST)后并发移植物抗宿主病(GVHD)的相关因素.方法 选择34例血液病患者,其中重型再生障碍性贫血(SAA)15例,重型β-地中海贫血(TM)1例,肿瘤性血液病18例;进行无关供者脐带血造血干细胞移植(UCBT)11例,同胞供者骨髓联合外周血干细胞移植7例,外周血造血干细胞移植(PBSCT)16例.移植前采用以抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗淋巴细胞球蛋白(ALG)或者氟达拉滨强效免疫抑制为基础的非清髓性预处理方案.GVHD的预防采用短程的甲氨蝶呤(MTX)联合环孢素A(CsA).观察非清髓性造血干细胞移植后的临床特点以及急、慢性移植物抗宿主病的发生情况;分析发生慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的相关因素.结果 NST的植入率为91.2%.移植后7例肿瘤性血液病患者形成了供、受者造血细胞混合嵌合体(MC),给予供者淋巴细胞输注(DLI)2～9次后,例由MC转变为供者造血细胞完全嵌合体(FDC).随访12(3～96)个月,共发生Ⅰ～Ⅱ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)5例,GVHD 15例.经统计学分析,发现年龄大的肿瘤性血液病患者经以ATG为基础的NST后,再给予DLI,其cGVHD的发生率高,且合并感染,对治疗的反应差;而以氟达拉滨为基础的NST患者发生cGVHD后治疗反应较好.移植100 d前后患者分别死亡3例和5例,其中3例死于广泛性cGVHD.结论 患者的年龄大、有合并症、以ATG为基础的预处理方案、肿瘤性血液病是NST后患者并发cGVHD的危险因素.     

巴利昔单克隆抗体预防HLA不相合骨髓移植中移植物抗宿主病

目的研究巴利昔(商品名:舒莱)单克隆抗体体外对异基因反应T细胞和造血祖细胞的作用;探讨该抗体在预防HLA不相合骨髓移植中移植物抗宿主病(GVHD)的疗效。方法实验观察分两组。(1)巴利昔组:白血病患者72例,接受单倍型相合未去T细胞的骨髓移植,用巴利昔单克隆抗体预防GVHD;(2)对照组:2000年11月前进行上述相同骨髓移植的白血病患者15例,未用巴利昔单克隆抗体预防GVHD。用有限稀释方法检测巴利昔单抗对细胞毒介导的靶细胞前体(CTLp)的反应能力,在半固体造血祖细胞培养体系中检测巴利昔单抗对粒巨噬系祖细胞(CFUGM)、红系祖细胞(CFUE)及巨核系祖细胞(CFUMK)集落增殖的影响。结果巴利昔组72例骨髓移植后均取得造血重建,骨髓植活直接证据检测证实为完全供者造血,与对照组比较,差异无统计学意义。巴利昔组和对照组移植后急性Ⅱ～Ⅳ度GVHD发生率分别为12.5%(9例)和33.3%(5例),差异有统计学意义(P=0.045);两组的慢性广泛型GVHD发生率比较,差异无统计学意义。移植后18个月内动态观察免疫细胞重建,CD3、CD8、CD19、NK细胞及CD56细胞在12个月内可恢复至正常水平,CD4细胞在移植后18个月内恢复。随访中位数时间22个月,无病生存42例,KaplanMeier生存曲线分析,估计2年无病生存达58.3%。巴利昔组和对照组比较,无病存活和复发率差异无统计学意义。采用供者骨髓单个核细胞进行实验,显示巴利昔单抗能明显降低CTLp细胞生成,降低的数量在10～100倍,但不影响正常造血祖细胞CFUGM、BFUE和CFUMK集落的增殖。结论巴利昔单抗可选择性的限制和减少异基因反应T细胞,从而减少严重急性GVHD的发生率;白血病患者骨髓移植后造血重建未受影响,不增加复发率和感染率。     

巴利昔单抗在骨髓移植中防治急性移植物抗宿主病和免疫功能重建中的作用

目的 探讨抗CD25单克隆抗体（巴利昔单抗）在单倍体未去除T细胞的骨髓移植中防治重度急性移植物抗宿主病（aGVHD）的作用以及对免疫重建的影响。方法 1999年2月至2004年3月，对87例白血病患者进行了HLA单倍体未去T细胞的亲缘骨髓移植，其中2000年9月以前移植的15例受者预处理没有使用巴利昔单抗（对照组），2000年11月以后的72例预处理中加用巴利昔单抗（单抗组）。用流式细胞分析仪对受者移植术后1、3、6、9、12、18、24个月的外周血淋巴细胞亚群进行动态测定，对两组的结果进行比较。结果 移植后单抗组和对照组Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的发生率分别为12．5％和33．3％（P=0.045）；与aGVHD相关的死亡率分别为6．9％和20％，两组差异有统计学意义。单抗组中9例临床诊断为Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的患者因激素耐药再次使用巴利昔单抗治疗，缓解6例（66．7％），部分缓解2例，无效1例。移植后两组CD4^＋ T细胞的恢复均迟缓。单抗组CD4^＋ T细胞＞200个／μ1的时间为移植后6个月，在移植后18个月绝对数恢复正常。CD3^＋、CD8^＋和CDl9^＋ B细胞在9～12个月恢复正常水平，两组淋巴细胞亚群的恢复情况差异无统计学意义。结论 使用抗CD25单克隆抗体预防和治疗受者严重的aGVHD有一定疗效；受者白血病的复发率和移植后的感染率无明显增加；对骨髓移植后淋巴细胞亚群数量的重建无明显的影响。     

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病的临床分析

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后慢性移植物抗宿主病（cGVHD）的临床特点、相关危险因素及治疗效果。方法：回顾性分析69例allo-HSCT患者的临床资料。根据供、受者的关系以及配型情况，将患者分为三组：A组为亲缘全相合异基因骨髓移植，22例；B组为亲缘全相合异基因外周血干细胞移植，37例；C组为非血缘移植和不全相合移植，10例。术前均采用化疗预处理，术后采用短程甲氨蝶呤联合环孢素A（CsA）预防移植物抗宿主病（GVHD）。局限性cGVHD患者多采用单一免疫抑制剂（CsA或糖皮质激素）治疗，病情进展者采用标准方案（CsA联合糖皮质激素）治疗；广泛性cGVHD患者则需用标准方案治疗（一线治疗方案）。一线治疗无效、病情进展者，对一线治疗依赖不能停药，或停药后病情反复者，需用他克莫司、霉酚酸酯及硫唑嘌呤治疗（二线治疗方案）。结果：移植后随访6～120个月，中位时间为43个月，39例诊断为cGVHD，其中局限性cGVHD13例（33．3％，13／39），广泛性cGVHD26例（66．7％，26／39），7例死于cGVHD或与之相关的并发症。B组cGVHD发生率较A组显著升高（P〈0．05），B组和C组的广泛性cGVHD发生率显著高于A组（P〈O．05）。外周血干细胞移植和病程中发生2～4度急性GVHD是cGVHD发生的主要危险因素。局限性cGVHD患者采用一线方案治疗的有效率显著高于广泛性cGVHD患者（P〈0．05），标准危险度cGVHD者的治疗有效率显著优于高危险度cGVHD者（P〈0．05）。结论：eGVHD是allo-HSCT后常见并发症和致死原因；广泛性cGVHD多发生于异基因外周血干细胞移植、HLA配型不全相合移植和非血缘移植，且临床治疗效果不佳。     

Tju103和CTLA4-Ig联合诱导主要组织相容复合物半相合小鼠骨髓移植耐受

目的观察吲哚亚甲基异烟腙(Tju103)和细胞毒性T淋巴细胞相关性抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)联合应用，对主要组织相容复合物(MHC)半相合小鼠骨髓移植的植入以及移植后移植物抗宿主病(GVHD)、移植物抗白血病(GVL)和抗感染的影响；探索一条既能降低GVHD能保留GVL和抗感染能力的移植途径。方法体外以受者(正常CB6F1鼠，H-2^bd)抗原为特异性免疫耐受诱导原，MHC半相合的供者(C57BL／6鼠，H-2^b)T淋巴细胞经和Tju103、CTLA4-Ig共育后，与供者骨髓细胞混合输入经预处理的受者体内。观察Tju103和CTLA4-Ig联合作用对移植后造血重建、GVHD、GVL和抗感染的影响。结果单纯照射组(A组)：全部(10只)白血病小鼠于照射后11d内死于造血功能衰竭，大部分(8只)死于照射后4～7d。环磷酰胺(CTX)治疗组(B组)：全部(10只)小鼠于接种白血病细胞后16～23d(移植后11～18d)死于白血病，但CTX治疗延长了白血病小鼠存活期。单纯移植组(C组)：全部(10只)小鼠于移植后21d内死亡，均死于GVHD。CsA预防组(D组)：4只小鼠于移植后8～22d内死亡，其中1只死于白血病，2只死于感染，1只死于GVHD；6只存活超过30d。Tju103处理组(E组)：4只小鼠于移植后9～26d内死亡，其中1只死于白血病，1只死于感染，2只死于GVHD；6只存活超过30d。CTLA4-Ig处理组(F组)：3只小鼠于移植后14～23d内死亡，其中1只死于感染，2只死于GVHD；7只存活超过30d。Tju103 CTLA4-Ig处理组(G组)：仅1只小鼠于移植后第19d死于GVHD；9只存活超过30d。结论CsA、Tju103或CTLA4-Ig单独处理均可以明显延长小鼠移植后生存期，降低GVHD的发生和程度；CTLA4-Ig有抗感染和GVL作用，而Tju103和CsA则没有此作用；CTLA4-Ig和Tju103两者联合处理供者T淋巴细胞对延长受者生存期和降低GVHD作用更明显。     

输注鼠基因工程Treg细胞抑制小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病

目的 探讨输注慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠又状头螺旋转录因子(Foxp3)基因转导入Balb/c小鼠的CD4~+ CD25~-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,实验分4组进行:(1)工程Treg组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个+基因工程Treg细胞5×10~6个;(2)移植对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5x10~6;(3)单纯照射组经受鼠尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2ml;(4)空载体对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个十空载体转导的CD4~+ CD25~-T 淋巴细胞5×10~6个.每天观察受鼠存活情况;记录GVHD的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤等组织,进行病理学观察;取长期存活(超过60d)的受鼠骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(8.8±0.6)d、(36.7±2.5)d、(51.6±4.0)d和(34.1±2.3)d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05).移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变,工程Treg组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常,未见GVHD病理表现,该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可有效减少GVHD的发生,减轻其严重程度.