Runx2在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞中的表达及意义

目的：从骨髓间质干细胞（MSCs）水平探讨青少年特发性脊柱侧凸（AIS）发病的机制。方法：40例12～18岁志愿者，AIS患者20例，先天性脊柱侧凸（CS）患者10例，正常对照组10例。分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓，肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离MSCs，体外培养并传至P3代时行表型鉴定，采用RT-PCR法检测3组MSCs中核心结合因子α1（Runx2）mRNA的表达强度。结果：分离所得单个核细胞传至P3代经流式细胞仪鉴定表型与MSCs表面标记相符。AIS组Runx2的mRNA表达强度与CS组及正常对照组相比有显著统计学差异（P〈0．01），CS组与正常对照组相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：转录因子Runx2在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS发病有关。     

Smad1在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞中的表达及意义

目的:探讨Smad1在青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨髓间质干细胞(MSCs)中的表达及其在发病机制中的作用。方法:30例12～18岁志愿者分为两组:AIS组20例,同年龄正常对照组10例。分别从髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离MSCs,体外培养并传至P2代行表型鉴定,分别采用RT-PCR及免疫蛋白印记法检测两组患者MSCs中Smad1的表达情况。结果:AIS组与对照组Smad1mRNA水平的平均表达率分别为4.48±0.58和1.03±0.22,蛋白水平的平均表达率分别为2.62±0.55和0.84±0.22。不论是核酸水平还是蛋白水平AIS组Smad1的表达均高于对照组(P<0.01)。结论:Smad1在AIS患者MSCs中表达强度异常,可能与AIS发病的分子机制相关。     

RANKL/QPG在青少年特发性脊柱侧凸患者低骨量发生机制中的作用

目的从骨髓间质干细胞（MSCs）水平探讨RANKL及OPG与青少年特发性脊柱侧凸（AIS）患者骨量降低的关系。方法46例12-17岁志愿者分为2组,其中AIS组30例,年龄12-17岁,平均14.1岁。正常对照组16例,年龄12-17岁,平均14.7岁。AIS组Lenke1型14例,2型2例,3型6例,5型8例。2组均采用双能X线吸收测量仪测量BMD,测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。分别从2组志愿者髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。体外密度梯度离心法分离培养MSCs,扩增至P3代行表型鉴定,RT-PCR法检测2组MSCs中RANKL及OPG的 mRNA表达强度。结果AIS组腰椎（L2-L4）及股骨近端的BMD值明显低于正常对照组。AIS组RANKL的 mRNA表达显著强于对照组（P〈0.01）,而OPG的 mRNA表达显著低于对照组（P〈0.01）。结论RANKL及OPG在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。     

SOX9、L—SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原在青少年特发性脊柱侧凸患者顶椎终板软骨的共表达及意义

目的：观测SOX9、L—SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原在青少年特发性脊柱侧凸（adolescent idiopathic scoliosis，AIS）患者顶椎终板软骨中的表达，探讨其与AIS发生、发展的关系。方法：12例AIS患者，每例在前路手术时截取顶椎终板软骨1份，每份标本均包含凸侧与凹侧。切片行HE染色观察其组织细胞形态；行免疫组织化学染色，应用病理图像分析系统观测凸侧与凹侧的SOX9、L—SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原表达的阳性细胞数和累积光密度（IOD），并计算这4个因子表达的相关性。结果：HE染色显示终板软骨有类似四肢长骨骺板样软骨内成骨组织形态．与凹侧比较凸侧显示了更强的软骨细胞活性。凸侧SOX9、L—SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原表达的阳性细胞数和前三者的IOD值均明显大于凹侧，差异均有显著性（P〈0．05），凸侧Ⅱ型胶原表达的IOD值与凹侧比较无显著性差异（P〉0．05），4个因子表达的阳性细胞数之间的相关系数为0．46-0.91（P〈0．05），IOD之间为0．64～0．98（P〈0．05），均呈正性相关。结论：AIS患者顶椎凸侧与凹侧终板软骨的组织形态学及SOX9、L—SOX5、SOX6和Ⅱ型胶原的表达均存在差异，其可能是脊柱不同部位间机械应力差异下的继发性变化：4个因子的共表达异常触发AIS的可能性小。     

可注射性纤维蛋白胶对兔骨髓基质细胞增殖和分化的影响

目的观察纤维蛋白胶（Fs）对体外培养的兔骨髓基质细胞（MSCs）增殖和分化的影响。方法实验分两组：含有Fs的实验组和不加任何材料的对照组。采用细胞培养、组织化学及电镜等方法对两组MSC的增殖活性、贴壁率、碱性磷酸酶（ALP）表达、Ⅰ型胶原表达、超微结构及细胞在材料中的生长情况进行研究。结果①实验组MSCs的增殖活性和贴壁率明显高于对照组（P〈0．05）。②实验组MSCs的ALP活性显著高于对照组（P〈0．05）。实验组第7天时的ALP活性显著高于第5天时本组的ALP活性（P〈0．05）。实验组MSCs的Ⅰ型胶原表达水平显著高于对照组（P〈0．05）。③扫描电镜观察：实验组MSCs与材料融合生长。透射电镜观察：实验组的MSCs细胞增殖活性好，向成骨细胞方向分化水平高，而对照组MSCs的细胞增殖活性相对较低，分化相对较差。结论FS生物相容性好，对MSCs增殖和向成骨细胞方向的分化均有明显促进作用，可作为骨组织工程材料的注射型载体进行进一步研究。     

骨髓间充质干细胞经脾移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）经脾移植治疗急性肝功能衰竭的疗效，并观察MSCs在体内的迁徙情况。方法 收集1只SD雄性大鼠胫骨及股骨的骨髓，采用密度梯度离心联合贴壁培养法分离、纯化及扩增雄性SD大鼠的骨髓MSCs，再行免疫组化染色以观察第4代骨髓MSCs的表面标志物。联合应用D-氨基半乳糖和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）建立24只雌性大鼠急性肝功能衰竭模型，将其随机分为2组：实验组（n=12）大鼠于造模后24 h行骨髓MSCs脾内移植；空白对照组（n=12）仅于脾内注射0.5 mL生理盐水。2组大鼠于移植后均取血检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）及白蛋白（ALB）水平，采用PCR法检测大鼠肝脏组织中Y性别决定区基因（SRY基因）的表达，并行HE染色观察肝脏组织的病理学改变。结果 第4代MSCs表达CD44和CD29，但不表达CD34。MSCs移植72 h及以后，实验组存活5只大鼠（41.7%），空白对照组存活3只大鼠（25.0%），2组大鼠的存活率比较差异有统计学意义（P＜0.05），实验组较高。将雄性大鼠的骨髓MSCs移植于雌性大鼠的脾内后，在雌性大鼠肝脏中能检测到SRY基因的表达；且HE染色结果显示，实验组大鼠的肝功能在移植后4周明显改善。移植后与空白对照组比较，实验组各时点的ALT和TBIL水平均较低（P＜0.05）；移植后1周和2周，实验组的ALB水平均高于空白对照组（P＜0.05）。结论 骨髓MSCs经脾内移植后迁徙并定居于受损的肝脏内，可替代肝细胞的功能。     

SOX9和CDX2在结直肠癌中的表达

目的：探讨Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9（SOX9）和尾型同源盒转录因子2（CDX2）在结直肠癌（colorectalcancer,CRC）中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学Envision法检测68例结直肠癌和20例正常结直肠黏膜组织中SOX9和CDX2的表达。结果：SOX9、CDX2在结直肠癌组织中表达的阳性率分别为70.59%和72.06%,在正常结直肠黏膜组织中表达的阳性率分别为10%和100%,差异有统计学意义（P〈0.01和P〈0.05）。SOX9的高表达和CDX2的低表达与结直肠癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,SOX9的高表达与结直肠癌患者的肿瘤大小有关,CDX2的低表达与远处转移有关。结直肠癌中SOX9与CDX2的阳性表达负相关（P〈0.05）。结论：SOX9和CDX2在结直肠癌的发生、发展、转移中起着重要作用,两者联合检测可作为判断结直肠癌恶性程度和预后的有效指标。     

SOX7与SOX9在鉴别前列腺癌与前列腺增生中的作用

目的 探讨SOX7和SOX9在鉴别前列腺癌与前列腺增生中的临床意义。方法 收集147例前列腺癌与28例前列腺增生患者病理组织及临床资料,运用免疫组化实验分析SOX7与SOX9的表达及其作用。结果 SOX7在前列腺癌组织中表现为低表达（P=0.025）,而SOX9为高表达（P=0.043）,SOX7与SOX9呈负相关（r=-0.263,P=0.001）。将SOX7与SOX9免疫组化评分与前列腺癌病理参数相结合进行分析,发现SOX7在血清PSA水平〈10ng/ml（P=0.048）、Gleason评分〈7（P=0.018）、肿瘤TNM分期〈T2a（P〈0.001）和病理分期T2a~T2c（P=0.002）前列腺癌患者中有较高的表达,而SOX9在Gleason评分≥7（P=0.001）和肿瘤TNM分期≥T2a（P=0.005）的前列腺癌患者中有较高的表达,差异有统计学意义。结论 通过检测SOX7和SOX9的水平可鉴别前列腺癌与前列腺增生,并可以初步判断前列腺癌的恶性程度。 更多还原     

M-CSF在青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中的表达及意义

目的从成骨细胞（osteoblast,OB）水平探讨巨噬细胞集落因子（macrophage colony stimulating factor,MCSF）与青少年特发性脊柱侧凸（adolescent idiopathic scoliosis,AIS）患者骨量降低的关系。方法AIS患者27例,其中男25例,女2例;年龄12～18岁,平均14.9岁;Cobb角40°～94°,平均57.3°。将所有AIS患者分为两组：A组14例,为骨量正常患者;B组13例,为骨量减低患者。正常对照组8例（定为C组）,年龄12～18岁,平均15.3岁。3组均采用双能X线吸收测量仪（dual-energy X-ray absorptiometry,DEXA）测量骨密度（bone mineral density,BMD）,测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂前上嵴的松质骨,运用植块法培养成骨细胞。培养至P3代后行表型鉴定,用RT-PCR检测AIS组和正常对照组中M-CSF mRNA的表达水平。结果B组中M-CSFmRNA的表达量均较A组（P〈0.05）和C组高（P〈0.05）,A组与C组M-CSFmRNA的表达量无显著统计学差异（P〉0.05）。结论M-CSF在OB水平mRNA表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。     

MicroRNA-129促进骨髓间充质干细胞向心肌分化的实验研究

摘要：目的研究microRNA．129（mir．129）对骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,BM．MSCs）向心肌分化过程中的促进作用及其机制。方法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,通过慢病毒转染使细胞获得过表达基因分为4组：对照组（MSCs）;慢病毒空转组（Lentiviralvectors＋MSCs,Lv—MSCs）;mir-129单转染组（mir-129-MSCs）;mir-129＋糖原合成酶激酶（GSK-3p）双转染组（mir。129＋GSK-3p—MSCs）。以10gmol／L浓度的5-氮杂胞苷（5-Aza）诱导MSCs向心肌细胞分化后,分别以第1d、5d、10d、15d和20d为时间点,采用real—time—PCR检测GATA．4、NKx2．5、MEF-2C的mRNA水平,以第10d、15d、20d为时间点,用蛋白质印迹法（Westernblotting）检测肌钙蛋白I（cTnI）、结蛋白（Desmin）、GSK-3B以及磷酸化3-catenin与非磷酸化13-catenin的表达量。结果与对照组比较,随着研究时间点的推移,mir-129单转染组反映心肌分化的相关标记物基[夭I和蛋白水平明显升高,GSK-3B的表达水平则显著降低,非磷酸化13-catenin／磷酸化13-catenin比值升高;当MSCs同时过表达mir。129和GSK-3B时,相关的心肌标记物基因和蛋白均低于mir-129单转染组,非磷酸化13-catenin／磷酸化13-catenin比值明显降低。结论过表达mir．129能够促进MSCs向心肌细胞分化,可能的机制是通过抑制GSK-3B的生成,从而削弱了对13-catenin的磷酸化抑制,后者游离入核开启调控干细胞下游的心肌分化途径。     

软骨寡聚基质蛋白对BMP 2诱导骨髓间质干细胞分化的影响

 目的 探讨过表达软骨寡聚基质蛋白（cartilage oligomeric matrix protein,COMP）对BMP-2诱导骨髓间质干细胞成骨及成软骨分化的影响。方法 用BMP-2诱导骨髓间质干细胞分化,通过脂质体转染含人COMP基因的质粒使骨髓间质干细胞过表达COMP,空载质粒作为对照。以RT-PCR检测成骨相关基因Ⅰ型胶原、RUNX2、骨桥蛋白、骨钙蛋白以及成软骨相关基因Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖的表达变化;通过碱性磷酸酶染色观察成骨过程中的碱性磷酸酶活性,茜素红染色观察成骨终末阶段矿化结节的生成情况,阿利新蓝染色观察细胞基质蛋白多糖的合成情况。结果 COMP组目的基因COMP mRNA的表达显著升高;骨桥蛋白mRNA表达水平较对照组低,呈现出一致的下调趋势（P<0.05）;Ⅰ型胶原、RUNX2、骨钙蛋白mRNA表达水平在诱导早期均高于对照组（P<0.05）,但在诱导晚期均明显低于对照组（P<0.05）;成软骨指标（Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖）的基因表达水平强于对照组,呈一致的上调趋势（P<0.05）;SOX9 mRNA表达水平高于对照组,仅在第7天时差异具有统计学意义（P<0.05）;细胞成骨染色（碱性磷酸酶染色、茜素红染色）均弱于对照组,而阿利新蓝染色强于对照组。结论 COMP能抑制BMP-2诱导骨髓间质干细胞成骨分化,促进BMP-2诱导骨髓间质干细胞成软骨分化。     

SOX5对骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 观察Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(sex determining region Y-box protein 5,SOX5)对骨肉瘤细胞MG63迁移和侵袭能力的影响,探讨其在骨肉瘤发病和转移中的作用.方法 本研究为前瞻性研究,通过脂质体介导的基因转染技术将SOX5的三个不同的siRNA(siSOX5-1、siSOX5-2和siSOX5-3)瞬时转染骨肉瘤细胞MG63,转染后48 h检测SOX5的mRNA和蛋白表达,从中挑选出干扰效果最明显的siRNA.进而采用博伊登室实验方法分别对干扰前后的骨肉瘤细胞MG63进行体外细胞迁移和侵袭测定,采用免疫印迹(Western blot)检测迁移和侵袭相关蛋白[基质金属蛋白酶(matrix metallproteinase,MMP)-2、MMP-9、Twist1和Snail1)]的表达水平.结果 3条针对人的siRNA(siSOX5-1、siSOX5-2、siSOX5-3)均能够降低SOX5 mRNA及蛋白水平表达,其中siSOX5-3干扰效果最明显.siSOX5-3干扰组的迁移细胞数为(52±5)较对照组的(107±9)显著减少(P<0.05),siSOX5-3干扰组的侵袭细胞数为(27±4)较对照组的(71±2)显著减少(P<0.05).Western blot结果显示siSOX5-3干扰组的侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9、Twist1和Snail1)的表达均较对照组显著降低(P<0.05).结论SOX5 RNA干扰能显著降低骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力,SOX5能促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭.     

富血小板血浆对体外培养骨髓间充质干细胞增殖及成骨活性的作用

目的　观察富血小板血浆 (platelet- rich plasma,PRP)在体外培养骨髓间充质干细胞 (marrowmesenchymal stem cells,MSCs)的增殖及成骨作用 ,探讨 PRP促进骨修复的细胞和分子机制。　方法　体外培养人MSCs,分为实验组 (n=9)与对照组 (n=9) ,实验组进行 PRP干预 (10μl/ ml培养液 )。于不同时间点收集两组细胞 ,以流式细胞仪检测 S期比例 ,MTT法检测细胞增殖活性 ,碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,AL P)测定和四环素荧光法检测细胞成骨活性 ,逆转录 PCR检测成骨启动基因 cbfa1的表达。　结果　 PRP作用于 MSCs,可刺激细胞增殖 ,流式细胞仪检测 PRP加入后 2 4 h S期比例由对照组 7.2± 0 .5至 14 .5± 0 .4具有统计学意义 (P<0 .0 1) ,MTT法显示 PRP作用后细胞增殖加速 ,第 4天达到平台期。而 AL P活性在作用后 3、6和 9d达到 7.79± 1.98、9.5 1± 2 .31和 14 .0 3± 3.0 2 ,与对照组 2 .0 6± 0 .77、2 .84± 0 .82和 2 .5 8± 0 .84组间比较差异有统计学意义 (P<0 .0 5 )。矿化结节形成增多 ,逆转录 PCR显示 cbfa1的表达在 PRP加入 2、4和 8h逐渐加强。　结论　 PRP对骨修复的促进作用与其促进 MSCs增殖、加强成骨启动基因的表达、增强成骨活性的作用有关。     

High glucose induces endothelial-to-chondrocyte transition in human aortic endothelial cells

Objective To explore whether high glucose (HG)-induced endothelial-to-mesenchymal transition (EndMT) could be transitioned into mesenchymal stem cells (MSCs) and further differentiated into chondrocytes. Methods Human aortic endothelial cells (HAECs) were divided into three groups: normal glucose (NG,5.5 mmol/L glucose) group, HG (30 mmol/L glucose) group, and mannitol (5.5 mmol/L glucose＋24.5 mmol/L mannitol) group, and were cultured for 48 h. Immunofluorescence staining was performed to detect the co-expression of CD31 (endothelial markers), and fibroblast-specific protein 1 (FSP1, fibroblast markers). The expression of CD31 and FSP1 mRNA and protein was detected by real-time PCR and Western blotting. When endothelial-derived MSCs were grown in MSC medium for one week, the expression of the MSCs markers CD44, CD10 and the chondrocyte marker SOX9 was detected by Western blotting and RT-PCR. Chondrocyte expression was detected by alcian blue staining. Calcium deposit was analyzed by alizarin red staining. Pathological changes were investigated using electron microscopy. Results The expression of FSP1 mRNA and protein was significantly increased, but the expression of CD31 mRNA and protein was decreased (P＜0.01), and the cells undergoing EndMT also significantly expressed CD10, CD44 and SOX9 in the HG group compared with those in normal glucose group (P＜0.01). The incubation of HAECs exposed to HG resulted in a fibroblast-like phenotype, wherein increased microfilamentation and a roughened endoplasmic reticulum structure were observed in the cytoplasm. Double staining of the HAECs indicated a co-localization of CD31 and FSP1. After one week culture for chondrocyte medium, the expression of MSCs marker STRO-1 was significantly increased by immunofluorescence staining. Additionally, alcian blue staining in the HG group was positive compared to the NG group. Consistent with the elevation of SOX9 expression, calcium deposit also enhanced in the HG group. Conclusion HG can induce endothelial cells transdifferentiation into chondrocyte-like cells via the EndMT.     

Mesenchymal stem cell transplantation attenuates cardiac fibrosis associated with isoproterenol‐induced global heart failure

We aimed to examine the ability of transplanted mesenchymal stem cells (MSCs) to attenuate cardiac fibrosis caused by global heart failure, and investigate the mechanisms that are possibly mediating this effect. Global heart failure was induced in Wistar rats by isoproterenol injection. Four weeks later, MSCs were transplanted by intramyocardial injection, while control groups were treated by injection of cell culture medium alone. Four weeks after transplantation, heart function was assessed, and histologic and molecular analyses conducted. Compared with the medium‐treated group, MSC transplantation significantly decreased the expression of collagens I and III, and matrix metalloproteinase 2 and 9, but heart function was improved in MSC‐treated animals. In addition, expression of antifibrotic factor, hepatocyte growth factor (HGF), was detected in cultured MSCs, suggesting a possible mechanism underlying antifibrotic effects. Importantly, HGF expression levels were higher in MSC‐treated hearts, compared with medium‐treated hearts. Therefore, we could conclude that MSC transplantation can attenuate myocardial fibrosis in a rat model of global heart failure, and this may be at least partially mediated by paracrine signaling from MSCs via antifibrotic factors such as HGF.     

静脉移植骨髓间充质干细胞促进脊髓损伤后GDNF基因的表达

[目的]探讨经静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。[方法]MSCs提取自成年Wistar大鼠的股骨干骨髓,经原代培养、鉴定及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)核标记。以改良Allen′s打击装置制作大鼠T10节段脊髓损伤(SCl)模型,于伤后立即缝合切口并经尾静脉注射移植MSCs。实验共分为3组MSCs尾静脉移植组(A组)、生理盐水注射组(B组)、正常对照组(C组)。术后不同时间点应用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察MSCs移植后的存活状态以及不同时间点GDNF基因的表达变化。[结果]免疫组化结果MSCs经尾静脉移植后在损伤脊髓平面可以检测到迁移及存活,标记细胞呈棕黄色的核标记,以损伤区域为多并向周围迁移,移植术后第14d,A组Brdu阳性细胞较多,最远于距离损伤区2.5cm处可检测到。B及C组则均未检测到阳性细胞。RT-PCR结果移植术后第1、3、5d,A组表达量呈逐渐升高趋势,B组呈一过性表达升高,C组无变化。各时间点A组GDNFmRNA的表达量明显高于B组,P<0.05。免疫组化结果移植术后第7、14、28dGDNF的表达量明显高于B组,P<0.05。[结论]骨髓间充质干细胞经尾静脉移植后可迁移至脊髓损伤区域,并上调胶质细胞源性神经营养因子基因的表达,是该移植方式修复大鼠脊髓损伤的机制之一。     

特发性脊柱侧凸双侧椎旁肌褪黑素受体含量的差异性比较研究

目的研究特发性脊柱侧凸椎旁肌中褪黑素受体含量的变化,并探讨其与特发性脊柱侧凸病因学的关系。方法本实验共分3组:特发性脊柱侧凸组:20例,平均Cobb角56°±16°,顶椎位于T6-11。其中Cobb角>50°10例,Cobb角≤50°10例。先天性脊柱侧凸组:12例,平均Cobb角59°±33°,顶椎位于T7-12。对照组:取10例非脊柱侧凸病例作为对照。采用RT-PCR方法检测所有病例两侧椎旁肌中褪黑素受体两种亚型MT1、MT2mRNA的表达量。结果特发性脊柱侧凸和先天性脊柱侧凸组顶椎区凹侧椎旁肌MT2mRNA的表达量明显小于凸侧(P<0·05),MT1mRNA的表达量两侧无显著差异(P>0·05)。特发性脊柱侧凸组中Cobb角>50°的病例顶椎区凹凸侧椎旁肌MT2mRNA表达量的比值与Cobb角≤50°的病例无显著差异(P>0·05)。对照组两侧椎旁肌MT1、MT2mRNA的表达量无显著差异(P>0·05)。结论特发性脊柱侧凸患者两侧椎旁肌MT2mRNA的表达量存在差异,这种差异可能为继发性改变,在特发性脊柱侧凸的发病中不起主要作用。     

重组人促红细胞生成素促进体外培养的人骨髓间充质干细胞增殖

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对人骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响,并探讨其可能机制.方法 抽取健康志愿者的骨髓液,采用贴壁培养法获取第3代MSCs(P3-MSCs),通过细胞形态特征观察、细胞免疫表型检测以及诱导分化的方法 鉴定MSCs.取经过鉴定的P3-MSCs,分别与不同浓度(0.5、1、5、10、50 IU/ml)rhEPO共培养,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;以过量特异性抗体封闭EPO受体(EPOR),再用MTT法观察P3-MSCs增殖情况;采用免疫荧光细胞化学染色法检测P3-MSCs的EPOR表达,用Western印迹检测增殖信号通路蛋白表达.结果 贴壁培养获取的P3-MSCs同时高表达CD105和CD90,低表达CD34和CD45,并可被诱导分化为脂肪、成骨及软骨细胞.MTT结果 显示,给予EPO后,MSCs的增殖明显增强,以浓度为10 IU/ml者的作用最为显著;同时加入抗EPOR抗体封闭EPOR后,MSCs的增殖率明显降低(P<0.01).P3-MSCs的EPOR表达阳性;用10 IU/ml EPO刺激4 d后,EPOR、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(pJAK2)及磷酸化信号转导和转录因子-5(pSTAT-5)的表达均明显上调.结论 EPO能促进体外培养的骨髓MSCs增殖,该效应经EPOR介导,并与JAK2-STAT-5信号途径有关.     

IFN-γ和TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞的免疫抑制作用及环孢素A对其的影响

目的 观察γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的骨髓问充质干细胞(MSC)的免疫抑制作用及环孢素A(CsA)对其的影响.方法 取Balb/c小鼠骨髓,分离、培养、纯化及扩增MSC,分别以IFN-γ、TNF-α和IFN-γ+TNF-α(终浓度均为20 ng/ml)预处理MSC 12 h,然后与Balb/c小鼠脾细胞共培养,脾细胞以刀豆蛋白A激活72 h.混合细胞培养实验分8组进行:(1)脾细胞组;(2)MSC组,MSC+脾细胞;(3)IFN-γ处理组,IFN-γ预处理的MSC+脾细胞;(4)TNF-α处理组,TNF-α预处理的MSC+脾细胞;(5)联合处理组,IFN-γ与TNF-α联合预处理的MSC+脾细胞;(6)CsA组,CsA+脾细胞;(7)CsA联合预处理组:IFN-γ与TNF-α联合预处理的MSC+CsA+脾细胞;(8)1400W组,IFN-γ与TNF-α联合预处理的MSC+脾细胞+1400W[诱导型-氧化氮合酶(iNOS)抑制剂].各组脾细胞数量均为5000个,MSC与脾细胞按1:10混合,CsA浓度为10μg/ml.培养72 h后,以四甲基偶氮唑盐法检测脾细胞增殖情况,同时以碘化丙啶和Annexin-V凋亡双染试剂盒检测脾细胞的凋亡情况;以实时聚合酶链反应法检测经炎症因子处理的MSC的iNOS mRNA表达情况,观察CsA对MSC的iNOS mRNA表达的影响.结果 MSC组、IFN-γ处理组和TNF-α处理组的MSC对脾细胞的增殖无明显抑制作用(P>0.05),而联合处理组的脾细胞增殖明显受到抑制,CsA组的脾细胞增殖同样受到抑制,但IFN-γ与TNF-α联合预处理MSC产生的这种免疫抑制作用却可以被CsA所抑制(CsA联合预处理组,P<0.05).联合处理组、CsA组和CsA联合预处理组的脾细胞凋亡率明显高于脾细胞组、MSC组、IFN-γ处理组和TNF-α处理组(P<0.05),而联合处理组和CsA组的脾细胞凋亡率又明显高于csA联合预处理组(P<0.05).野生型MSC、分别以IFN-γ或TNF-α单独刺激的MSC均不表达iNOS mRNA,而以IFN-γ和TNF-a联合处理的MSC则高表达iNOS mRNA,但这种高表达可被CsA所抑制(P<0.05).1400W组的脾细胞增殖受到明显抑制(P<0.05).结论 IFN-γ和TNF-α联合预处理的MSC在体外可抑制脾细胞的增殖,促进脾细胞凋亡,CsA可抑制该种MSC的这一作用,其机制可能与CsA下调lFN-7和TNF-α联合预处理的MSC的iNOS表达有关.