胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生基因在不同发育阶段小鼠睾丸和附睾中的表达

目的 :研究胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生 (Cres)基因在生后不同发育阶段小鼠睾丸及附睾中的表达规律。　方法 :采用半定量RT PCR方法检测CresmRNA在生后 14、2 0、2 2、2 8、35、4 9、70、4 0 0d小鼠睾丸及附睾中的表达变化。　结果 :Cres基因在 14d小鼠睾丸和附睾中呈低水平表达 ,随着小鼠的生长发育 ,CresmRNA的表达量逐渐升高。在 70d小鼠睾丸和 4 0 0d小鼠附睾中 ,CresmRNA的表达量达到峰值。　结论 :Cres基因在生后不同发育阶段小鼠睾丸及附睾中呈现明显的规律性表达 ,可能参与精子发生、成熟过程的调控。     

附睾相关WFDC型丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

精子在附睾中的成熟是通过管腔离子浓度的改变及许多糖苷酶和蛋白酶对精子表面膜的修饰过程来调控的,而这些蛋白酶的活动是受存在于附睾特定区域的蛋白酶抑制剂控制的。其中WFDC型丝氨酸蛋白酶抑制剂是一种在附睾中高度表达的蛋白,它在天然免疫与男性生育方面发挥重要作用。本文就该蛋白的结构、功能特征及其在开发男性抗生殖道感染药物、免疫避孕药物等方面的应用前景进行了综述。     

附睾蛋白酶抑制剂Eppin的研究进展

附睾蛋白酶抑制剂Eppin是一种睾丸和附睾特异性分泌的蛋白质,精液中含量极为丰富,精子表面大量存在,用重组Eppin免疫的猴子出现不育,Eppin有望成为人类有效的可逆性的免疫避孕疫苗。现就Eppin基因及其蛋白质结构功能特点,Eppin引起免疫性不育的分子机制以及Eppin调控PSA水解精囊蛋白Semenogelin的研究进展进行了综述。     

附睾蛋白酶抑制剂对前列腺特异性抗原活性的抑制作用

目的 观察附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)是否抑制前列腺特异性抗原(PSA)酶活性.方法 利用分子克隆技术体外构建、表达、纯化重组Eppin和PSA.利用PSA水解变色底物S-2586的颜色变化,于分光光度计下测定其吸光度值,代表PSA酶反应速度,反应体系是在缓冲液0.1 mol/LTris-HCl,pH8.3,1.0 mol/L NaCl中进行,观察不同浓度Eppin的加入对PSA酶反应速度的影响.结果通过体外重组技术获得较高纯度和生理活性的Eppin和PSA,通过PSA水解变色底物S-2586的检测,重组PSA具有酶活性,0.3 μmol/L PSA与底物S-2586反应的饱和曲线分析显示Km(反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度)值是0.5 μmol,底物饱和浓度0.2 mmol/L,分别加入4中不同浓度的重组Eppin 0、0.56、1.16、2.32 μmol/L,随着Eppin浓度的增加,PSA水解其变色底物S-2586速度明显减慢,PSA活性越来越受到抑制.结论 附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)是前列腺特异性抗原(PSA)一种新的特异性抑制剂.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effects of the epididymal protease inhibitor (Eppin) on the activity of prostate specific antigen (PSA).Methods Recombinant Eppin and recombinant PSA were produced by molecular cloning technique in vitro.The enzymatical analysis of Eppin inhibiting PSA was done in the reaction buffer 0.1 mol/L Tris-HC1,pH 8.3,1.0 mol/L NaCl.The hydrolysis of velocity of PSA to the chromogenic substrate S-2586 was detected by spectrometer.Results Recombinant Eppin and PSA with high purity were produced by molecular cloning technique.The recombinant PSA had the enzymatical activity by hydrolyzing its substrate S-2586.0.3μmol/L PSA and the substate S-2586 reaction to the saturation curve analysis showed that Km( response rate of half the maximum reaction rate when the substrate concentration) value was 0.5μmol,and substrate saturated concentration was 0.2 mmol/L.With the increases of Eppin (0,0.56,1.16,2.32μmol/L),the hydrolysis velocity of PSA to S-2586 was slowed down.Conclusion Eppin,as a new inhibitor,specifically inhibits the activity of PSA.     

血清胱蛋白酶抑制剂C测定的临床意义

测定血清胱蛋白酶抑制剂C(SCystC)来评估肾功能是一种特异性高、准确性好的新方法 ,可检出轻度肾功能损害 ,从而对及早防治或延缓慢性肾脏病的进展有意义。本文对血清CystC生化、生物学特征和在肾脏疾病及其它疾病早期肾功能检测的临床意义和存在的问题作一综述。     

Age-dependent expression of the cystatin-related epididymal spermatogenic （Cres） gene in mouse testis and epididymis

Aim： To investigate the spatial and temporal expression of the cystatin-related epididymal spermatogenic （Cres） gene in mouse testis and epididymis during postnatal development. Methods： The QuantiGene assay and indirect immunofluorescence technique were used to examine the Cres mRNA and Cres protein level in mouse testis and epididymis on postnatal days 14, 20, 22, 28, 35, 49, 70 and 420. Results： （1） In both the testis and epididymis, Cres mRNA was fast detected on day 20, then it increased gradually from day 20 to day 70, and the high expression level maintained till day 420. （2） In the testis, the Cres protein was exclusively localized to the elongating spermatids and was first detected on day 22. The number of Cres-positive spermatids increased progressively till day 49. From day 49 to day 420, the number of Cres-positive cells was almost stable. （3） The Cres protein was first detected on day 20 in the proximal caput epididymal epithelium. By day 35, the expression level of the Cres protein increased dramatically and the high level was maintained till day 420. Moreover, the luminal fluid of the midcaput epididymis was also stained Cres-positive from day 35 on. No Cres-positive staining was observed in distal caput, corpus and cauda epididymis throughout. Conclusion： The Cres gene displays a specific age-dependent expression pattern in mouse testis and epididymis on both the mRNA and protein level.     

血清胱蛋白酶抑制剂C测定的临床意义

测定血清胱蛋白酶抑制剂C（SCyst C)来评估肾功能是一种特异性高，准确性好的新方法，可检出轻度肾功能损害，从而对及早防治或延缓慢性肾脏病的进展有意义。本文对血清CyastC生化，生物学特征和在肾脏疾病及其它疾病早期肾功能检测的临床意义和存在的问题作一综述。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响

目的:研究青春期大鼠实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对睾丸和附睾中胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(CRES)蛋白表达的影响,探索精索静脉曲张导致不育的机制。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化及蛋白印迹方法检测CRES蛋白在ELV 2周组(n=8)、4周组(n=8)及其相应的对照组(n均=5)大鼠睾丸和附睾头、体、尾中的表达变化。结果:免疫组化显示,CRES蛋白在ELV实验组和对照组大鼠睾丸和附睾中均有表达。在睾丸中,CRES蛋白主要定位于圆形和长形精子细胞的胞质、精子的顶体以及残余体中,其表达与生精周期密切相关,Ⅰ~Ⅲ和Ⅸ~ⅩⅣ期表达最强,Ⅶ~Ⅷ期表达次之,Ⅳ~Ⅵ期表达减弱。在附睾中,CRES蛋白主要表达于从附睾起始段到尾部的上皮主细胞的胞质中,且以体、尾部表达最强,头部次之,管腔分泌物也呈阳性表达。实验组比对照组CRES蛋白表达增强。W estern印迹显示:实验组和对照组大鼠睾丸和附睾在相对分子质量(Mr)为19 000和14 000处均可见CRES蛋白条带,其中以Mr19 000处表达更为明显。实验组CRES蛋白的表达比对照组明显增强。对免疫组化和W estern印迹结果进行灰度值和积分吸光度值(IA)测定,并经统计学分析显示:ELV 2周组和4周组比其相对应的对照组表达增强且差异有显著性(P<0.05或P<0.01),而ELV各组间未见CRES蛋白表达有明显差异(P>0.05)。结论:CRES蛋白在大鼠睾丸和附睾中均有表达,睾丸中表达呈现生精周期特异性和细胞特异性,附睾中表达呈现附睾上皮区段和细胞特异性;CRES蛋白在青春期ELV大鼠睾丸和附睾中的表达比对照组明显增强。这些结果提示CRES蛋白在精子发生和精子成熟过程中可能起着重要的作用,并且可能与ELV引起的不育或生育力低下有关。     

附睾精子受精能力的获得和发育及其基因调控

一、附睾精子成熟的一般概念作为雄性配子的精子是在睾丸曲细精管中产生 ,并经直细精管、睾丸网及睾丸输出小管 ,进入一个由高度盘曲的管道系统组成的器官———附睾 ,循附睾头 体 尾运行 ,达到附睾精子成熟 ,并暂贮存于附睾尾部。从生殖生物学角度讲 ,贮存在附睾的精子 ,在射精时进入阴道 ,通过宫颈、宫腔 ,到达输卵管壶腹部 ,与卵子相遇并结合 ,最终完成受精过程。这一过程的完成需要精子具有运动能力 ,特别是快速前向运动的能力 ,这一过程的完成需要精子具有固着于透明带的能力 ,需要精卵识别能力和结合卵子的能力。睾丸中产生的精子从…     

附睾功能基因的研究方法及进展

精子的成熟不是靠自身来完成，而是通过与附睾管腔中的微环境相互作用而取得。搞清精子成熟的机制和调控，将为新的男性避孕药、诊断和治疗男性不育症、性传播疾病的防治等方面提供一系列新的靶位点。本文分别从基因、蛋白、基因组与蛋白质组三个方面综述了附睾功能基因的研究方法及进展。     

生精细胞凋亡的基因调控

睾丸生精细胞凋亡是维持精子发生动态平衡,限制生精上皮生精细胞数量的一个重要生理机制,受多种因素调控。本文就基因等对精子发生过程中生精细胞凋亡调控的研究近况进行综述。     

毛囊干细胞定向分化过程中Wnt信号通路介导的基因调控

皮肤的毛囊干细胞具有自我复制以及多向分化潜能,在毛囊形态发育和定向分化过程中,Wnt信号通路起决定性作用。参与这条信号通路的重要蛋白质,如Wnt蛋白、Frizzled、B—catenin、GSK313、APC、Axin等研究相对较早,且颇为深入。但对于这条通路下游的调节因子,尤其是细胞核内关键性转录因子Tcf3、Lef1,以及它们所调控的一些重要基因c—myc、eyelinDl等的研究仍处于起步阶段。本文就Wnt信号通路介导的基因调节毛囊干细胞定向分化的研究现状进行综述．为构建组织工程皮肤提供理论参考。     

附睾特异性基因的表达与调控

哺乳动物的附睾是一条高度卷曲的管道系统,附睾上皮是执行附睾功能的重要组成部分。附睾上皮蛋白质的合成与分泌,为精子提供了一个特殊的、不断改变的管腔液体环境,使其在附睾内运行过程中获得运动能力并最终达到功能成熟。附睾特异性表达的基因具有高度区域化的特征,受雄激素和(或)睾丸因子的调控,在出生后发育中呈现时空特异性的表达模式,这些都提示它们在附睾中发挥着重要而独特的作用。     

从大鼠不同生精细胞筛选精子发生过程中阶段特异表达基因

目的 :从大鼠精原细胞、粗线期精母细胞和圆形精子细胞筛选精子发生过程中阶段特异表达基因。　方法 :用牛血清白蛋白梯度沉降法 (STAPUT法 ) ,分别从 9d龄和成年大鼠睾丸中 ,分离出处于减数分裂前、中、后的 3种生精细胞 ,即精原细胞、粗线期精母细胞和圆形精子细胞。运用RNA差异显示方法筛选差示cDNA。　结果 :本实验获得 19个cDNA差示片段 ,并克隆和测序出其中 6个cDNA序列 ,通过非重复序列 (nr)和EST序列同源比较 ,发现 5条cDNA分别与小鼠睾丸、附睾、乳腺、早期胚胎和大鼠卵巢基因高度同源 (88%～ 98% ) ,有一条未知新EST。结论 :差异显示技术是分离与精子发生有关基因的强有力工具。     

原癌基因在生精细胞中的表达及其作用

睾丸生精细胞中有许多原癌基因特异表达。在正常睾丸生精过程中,原癌基因的正常表达对精原细胞的有丝分裂、精母细胞的减数分裂及精子变形、成熟有重要的调控作用。     

多菌灵对大鼠睾丸发育和生精功能影响的研究

目的:探讨多菌灵对雄性大鼠睾丸发育和生精功能的影响及其作用机制。方法:40只清洁级未成年Wistar雄性大鼠随机分为4组(对照组,低、中、高剂量组,每组10只),低、中、高剂量组经口灌胃不同浓度的多菌灵溶液(分别为20、100、200mg/kg体重),对照组给予吐温80溶液,1次/d,连续80d。染毒结束后,立即取睾丸和附睾,观察其形态。测定各组大鼠体重及右侧睾丸和附睾重量;取左侧附睾尾测定精子活率和精子数量;采用HE染色法、原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化SABC法观察大鼠睾丸组织的病理学变化、细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达情况。结果:中、高剂量组大鼠睾丸和附睾均明显萎缩、右侧睾丸和附睾重量减轻,左侧附睾尾精子活率和精子数量均低于对照组(P<0.01);中、高剂量组睾丸组织病理学检查可见明显异常;随多菌灵染毒浓度的增加,各剂量组生精细胞凋亡率逐渐升高,Bcl-2表达下降,Bax表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:多菌灵可影响雄性大鼠的睾丸发育和生精功能,可能与下调Bcl-2和上调Bax致细胞凋亡增加有关。     

DEAD box家族蛋白与精子生成的研究进展

精子的发生和成熟过程不但需要多种相关基因正确表达,而且还需要多种RNA的参与.因此,这些RNA需要较好的稳定性以保证其功能的正确执行.DEAD-box家族蛋白是一个ATP依赖的RNA解旋酶家族,参与RNA的各种代谢过程如RNA二级结构变换,转录起始,线粒体RNA剪接,核糖体和剪接体装配、mRNA降解以及维持mRNA的稳定性等.最近的一些研究显示这个家族的一些成员如DDX3,DDX4,DDX25等与精子生成有着密切的关系.