不同培养基对白念珠菌生物被膜产生法尼醇的影响

目的:检测不同培养基对白念珠菌生物被膜产生法尼醇的影响。方法:白念珠菌标准株SC5314分别接种到含有RP-MI1640、YPD、RPMI1640+10%胎牛血清(fetal calf serum,FCS)培养基的培养皿中,形成白念珠菌生物被膜。在接种1.5～48h内,使用气相色谱-质谱联用法检测法尼醇产生的情况。结果:在RPMI1640、YPD培养基中,法尼醇分泌量随生物被膜的成熟而逐渐增加,在生物被膜形成后期至成熟期达到高峰;在RPMI1640+10%FCS培养基中,法尼醇的产生在48h内呈增长趋势。12h时,YPD培养基中法尼醇的分泌量高于其它两组(P<0.05);48h时,RPMI1640+10%FCS培养基中法尼醇分泌量最高(P<0.05)。结论:白念珠菌生物被膜法尼醇分泌量与培养基种类存在相关性。     

BGL2和XOG1与白念珠菌生物被膜耐药性的研究

目的:研究白念珠菌生物被膜耐药性与BGL2和XOG1基因表达之间的关联。方法:利用浓度梯度递增法诱导构建白念珠菌氟康唑耐药株,采用KONT真菌显色MIC药敏系统鉴定耐药株模型。构建耐药株和对照株生物被膜,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测白念珠菌耐药株和对照株生物被膜细胞中葡聚糖相关基因BGL2和XOG1,并比较耐药株和对照株中BGL2和XOG1表达的差异。结果:KONT真菌显色MIC药敏系统证实耐药株最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)≥128μg/ml。与对照株相比,耐药株XOG1的表达明显降低(P<0.05),BGL2的表达则没有明显差异。结论:葡聚糖相关基因XOG1与白念珠菌生物被膜耐药性相关。     

XTT减低法检测法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用

目的：体外研究法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用。方法：采用微量平板法制备12和24 h白念株菌生物被膜,每组膜分别加入不同浓度法尼醇（100～900μmol/L）培养24 h,甲基四氮盐（XTT）减低法检测法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用效果,倒置显微镜下观察生物被膜形态。结果：不同浓度的法尼醇对白念珠菌生物被膜均有抑制作用（P＜0．05）,法尼醇浓度增加,抑制强度呈上升趋势。培养12 h,抑制白念株菌生物被膜50％活性的最低药物浓度（sessile minimal inhibitory concentration 50％,SMIC50）为600μmol/L;培养24 h,SMIC50为200μmol/L。结论：法尼醇对白念珠菌生物被膜生长具有明显抑制作用。法尼醇对白念珠菌生物被膜抑制强度与法尼醇浓度和生物被膜时相相关,高浓度法尼醇的抑制效果高于低浓度法尼醇。     

人牙周膜成纤维细胞对盐酸林可霉素跨膜转运的研究

目的:研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对盐酸林可霉素的跨膜转运,为根管牙周局部及全身给药提供实验依据.方法:盐酸林可霉素溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞,超声破碎细胞后,HPLC测定不同时间点的胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果:10 μg/ml的盐酸林可霉素孵育HPDLF及MC3T3-E1 细胞 1 min、5 min、10 min时均无法检测出胞内药物的存在,20 μg/ml的药物作用5 min、1O min,同样无法检测.结论:HPLC可以用于盐酸林可霉素的测定.本实验条件下不能检测出HPDLF以及MC3T3-E1细胞对盐酸林可霉素的跨膜转运.     

大鼠牙槽骨成骨细胞对硝苯地平跨膜转运的实验研究

目的：研究成年大鼠牙槽骨成骨细胞对硝苯地平的跨膜转运，为人工种植体给药系统以及牙根管给药系统的设计提供实验依据。方法：将大鼠牙槽骨成骨细胞及MC3T3-E1细胞与含有药物（20ug／ml、100ug／ml的硝苯地平）的磷酸盐缓冲液（PBS）共同孵育1、3、5、10、15、20min后，收集各时间点细胞，用高效液相色谱法测定细胞内药物含量，考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。用细胞内药物含量与细胞蛋白的比值作为观察药物转运量的检测指标。结果：硝苯地平可以被成骨细胞及MC3T3-E1细胞转运至细胞内。（1）转运量与细胞种类有关。浓度相同时，成骨细胞在各时间点的转运量明显均大于MC3T3-E1细胞的转运量（P〈0．01）。（2）转运量与药物浓度有关。药物浓度增高，转运量越大（P〈0．05）。（3）转运量与时间有关。结论：大鼠牙槽骨来源成骨细胞及MC3T3-E1细胞可以跨膜转运硝苯地平。转运量与药物浓度、细胞种类、孵育时间有关。从而初步验证了人工种植牙全身给药系统的可行性。     

饥饿状态对白念菌生物膜及滞留菌形成的影响

目的:探讨饥饿环境对白念菌生物膜形成以及其中耐药滞留菌形成的影响。方法:体外分别构建对数期、稳定期和饥饿态白念菌24 h生物膜,两性霉素B(Amphotericin B)冲击24 h,冲击前、后行活菌菌落计数(CFU),计算得出滞留菌比例并进行统计学分析,同时以共聚焦显微镜观察和分析各组生物膜形成状况。采用SPSS11.70软件包对数据进行统计学分析。结果:对数期、稳定期和饥饿态白念菌生物膜形成能力依次下降 (P<0.05),具有显著差异,前2组形成菌丝相生物膜,而饥饿态菌形成酵母相生物膜。药物作用后,滞留菌比例依次升高(P<0.05),具有显著差异。结论:营养状态对白念菌滞留菌的产生有影响,饥饿状态能够提高滞留菌的产生比例。     

浮游状态和生物膜状态白念珠菌总RNA提取方法的比较研究

目的 本研究通过比较不同方法提取生物膜和浮游状态白念珠菌总RNA,以提供一种优化提取白念珠菌总RNA的有效方法。方法 将白念珠菌标准株SC5314在生物膜和浮游状态下培养24 h后,分别采用改良Trizol法和改良热酸酶酚法提取白念珠菌总RNA,用紫外分光光度计检测其纯度和浓度,琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,通过逆转录PCR反应验证总RNA的完整性及质量。结果 与改良热酸酶酚法相比,采用改良Trizol法提取白念珠菌总RNA操作时间较少(P＜0.000 5),提取的总RNA纯度较高(P＜0.05)。琼脂糖凝胶电泳显示两种方法提取的白念珠菌总RNA均呈现28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA共3条清晰的条带,逆转录PCR反应也都获得清晰的目的条带。结论 改良Trizol法提取白念珠菌成熟期生物膜和浮游状态白念珠菌总RNA的纯度稳定,目前是一种高效、快捷、易于掌握的提取方法。     

Prevalence of fluconazole-resistant strains of Candida albicans in otherwise healthy outpatients

BACKGROUND: In contrast to the immunosuppressed patient population, the prevalence of fluconazole-resistant strains of Candida albicans among healthy individuals has not been extensively studied. METHODS: Candida species were cultured form 50 healthy outpatients with clinical signs of oral candidiasis. Following one week of the recommended fluconazole regimen, post-treatment cultures were obtained. Both pre- and post-treatment yeasts were identified and in vitro susceptibility testing was performed using the NCCLS M-27A method. Strains were further differentiated using established cDNA probes. RESULTS: Forty-four patients (88%) had positive C.albicans cultures prior to treatment. Antifungal susceptibility testing of these strains demonstrated no in vitro resistance to fluconazole. At post-treatment evaluation, eight patients (18%) had persistent signs of infection and 10 patients (23%) had positive Candida sp. cultures despite no clinical signs of infection. DNA analysis confirmed that the same C. albicans strain was present both in the pre-treatment and the post-treatment cultures. CONCLUSIONS: Our results showed that the presence of fluconazole-resistant strains of C.albicans does not appear to be prevalent among healthy outpatients furthermore, in vitro antifungal susceptibility testing does not always predict successful therapy in these patients.     

新生儿口腔中白色念珠菌来源的分子遗传学初探

目的 :比较新生儿口腔中与其母亲口腔和阴道白色念珠菌基因型的差异 ,探讨新生儿口腔中白色念珠菌的来源。方法 :采集 2 0 8例产妇产前 48h以内的口腔含漱液标本和阴道拭子标本及其足月新生儿 1、3、5d和 1月的口腔拭子标本 ,进行白色念珠菌的培养和鉴定。再选取母子均分离出白色念珠菌的标本进行DNA提取和随机引物扩增DNA多态性分析法 (RAPD)分析 ,比较基因型是否具有差异。结果 :产后 5d内仅有不到 1%的新生儿口腔中检出了念珠菌 ,产后 1月新生儿口腔中白色念珠菌的检出率增高为 2 1.3 9%。并且 ,从新生儿分离得到的白色念珠菌的基因型与从其母亲口腔或阴道分离得到的白色念珠菌的基因型均不相同。结论 :母婴垂直传播可能并非新生儿口腔中的白色念珠菌的主要定植来源     

不同清洗方式对义齿白色假丝酵母菌生物膜清除效果的影响

目的比较不同清洁方式对义齿白色假丝酵母菌生物膜的清除能力。方法制作并消毒树脂片,在其表面培养白色假丝酵母菌生物膜,分别以化学(浸泡)、机械(刷洗)和复合(浸泡与刷洗并用)等方式处理覆有白色假丝酵母菌生物膜的树脂片,再将其浸入新鲜培养液进行残留生物膜的恢复培养,分别在0、6、24h后利用菌落计数进行效果评价。结果机械清除效果与牙膏种类密切相关,单纯的化学处理没有明显的清除作用,保丽净义齿清洁片复合处理清除白色假丝酵母菌生物膜的效果最佳,其处理后的树脂片培养24h仍未检出白色假丝酵母菌。结论不同的义齿清洗方法对附着在义齿表面的白色假丝酵母菌生物膜的清除能力有差异。其中,以保丽净义齿清洁片复合效果最好且能够持续地发挥抑菌作用。     

白色念珠菌对铸钛、Co-Cr合金、Ni-Cr合金修复体失泽腐蚀的影响

研究口腔白色念珠菌对铸钛（Ｇｒ２）、Ｃｏ－Ｃｒ合金、Ｎｉ－Ｃｒ合金修复体的失泽影响,方法：将Ｃｏ－Ｃｒ合金,Ｎｉ－Ｃｒ合金、纯钛分别铸造制备成１０ｍｍ＊１０ｍｍ＊１ｍｍ板片,将每组３０片随机分空白对照组、培养基对照组、实验组各１０片。需氧环境将白色念珠菌接种到沙保罗葡萄糖琼脂培养基后,将试件贴附其表面每周转换传递１次,共周。０．５ｇ／Ｌ戊二醛消灭细菌清洗,２周后,用ＭｉｎｏｌｔａＣＲ－１００型色度     

Distribution and hydrolytic enzyme characteristics of Candida albicans strains isolated from diabetic patients and their non-diabetic consorts

Introduction:  The aim of this study was to investigate the oral colonization profile of Candida albicans strains isolated from diabetic patients and their non-diabetic consorts. In addition hydrolytic enzyme activity of these isolates was analysed.
Methods:  The genetic diversity of C. albicans oral isolates from 52 couples was established using isoenzyme marker and cluster analysis. Hydrolytic enzyme characteristics, namely secreted aspartyl proteinases (SAPs) and phospholipases (PLs) were also analysed.
Results:  Simultaneous colonization by C. albicans was observed in the consorts of 12 couples (23.1%). Patterns of monoclonal and polyclonal oral colonization by C. albicans strains were identified and the coexistence of identical or highly related strains was observed in both members of eight couples. The genetic diversity observed in the total yeast population revealed four large, genetically distinct groups (A to D) and the coexistence of strains in couples or consorts conjugally unrelated. SAP and PL activity was observed in the majority of C. albicans isolates without any association to particular strain, strain clusters (highly related isolates), or clinical characteristics of the consorts (diabetic, non-diabetic, and gender).
Conclusion:  Possible sources of transmission and oral propagation of groups (clusters) of strains of C. albicans can occur between diabetic and non-diabetic consorts. A conjugal genotypic identity exists in most C. albicans -positive couples, that is, both consorts share identical or highly related strains; however, this identity is not couple-specific as seen by the coexistence of clusters in couples and unrelated consorts.     

法尼醇对不同状态白念珠菌氟康唑药物敏感性作用的比较研究

目的:探讨法尼醇处理对不同生长状态白念珠菌的氟康唑药物敏感性的影响。方法:体外构建浮游状态白念珠菌和成熟生物膜状态白念珠菌;法尼醇处理后,用甲基四氮盐(XTT)法检测浮游状态和生物膜状态白念珠菌细胞活性的改变。结果:与对照组比较,法尼醇处理后的浮游状态白念珠菌对氟康唑的敏感性无明显改变(P>0.05),而生物膜状态白念珠菌对氟康唑的敏感性增高(P<0.05)。结论:法尼醇可以增加白念珠菌生物膜对药物的敏感性。