热休克蛋白在人舌癌细胞株和癌前病变细胞株的差异表达

目的 检测热休克蛋白(HSPs)27、70、90α在舌癌细胞株及癌前细胞株的表达情况.方法 体外培养人舌癌细胞株SCC-15,SCC-6和癌前细胞株DOK.采用RT-PCR测定人舌癌细胞株SCC-15、SCC-6及癌前细胞株DOK中HSP27、HSP70、HSP90α的mRNA表达情况,并作对比分析.采用Western...     

永生化细胞株的建立

建立永生化细胞株是细胞生物学的新进展。除了自发性永生化,人们通常将外源性永生化基因,包括病毒、原癌基因和p53突变体,通过基因转染技术导入目的细胞内,建立永生化细胞株。永生化的机理基于细胞的M1/M2期模式。目前已建立起十余种口腔医学相关永生化细胞株,但它们具有一定的局限性。     

永生化细胞株的建立

建立永生化细胞株是细胞生物学的新进展。除了自发性永生化。人们通常将外源性永生化基因。包括病毒，原癌基因和p53突变体，通过基因转染技术导入目的细胞内，建立永生化细胞株，永生化的机理基于细胞的M/M2期模式。目前已建立起十余种口腔医学相关永生化细胞株，但它们具有一定的局限性。     

聚己内酯电纺纤维支架培养人牙周膜细胞的体外研究

目的：研究聚己内酯（PCL）电纺纤维支架上人牙周膜细胞的生物学行为，初步探讨PCL电纺纤维支架材料应用于牙齿再生和牙周组织工程研究的可行性。方法：采用静电纺丝法制备PCL电纺纤维支架。组织块法培养人牙周膜细胞（PDLC），传代扩增后接种于PCL电纺纤维支架上。激光共聚焦显微镜、扫描电镜观察人PDLC在支架材料上的黏附、生长情况，MTT法检测PCL电纺纤维支架对PDLC增殖的影响。结果：PCL电纺纤维支架呈无纺多孔网状结构，直径范围为338～424nm，纤维形态光滑均一。激光共聚焦显微镜、扫描电镜显示PDLC在支架上贴附牢固，伸展充分，增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质。MTT法检测显示：PCL电纺纤维支架材料对PDLC生长增殖的影响与对照组培养板相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：PCL电纺纤维支架具有良好的生物相容性，有望作为一种新型的支架材料应用于牙周组织工程。     

田基黄对人舌癌细胞株TSCCa细胞毒作用的研究

本实验采用体外细胞毒试验（MTT法）和电镜观察，研究了田基黄对人舌癌细胞株TSCCa的细胞毒作用。结果表明：田基黄对人舌癌细胞株TSCCa的生长有明显的抑制作用，其抑制率随浓度的增加而提高。电镜下见田基黄对癌细胞内线粒体和粗面内质网有损伤作用。结果提示中药田基黄对口腔鳞癌有较好的治疗作用。     

永生化成釉细胞瘤细胞株TAM-1的建立

目的：建立永生化的成釉细胞瘤细胞株。方法：应用基因转染方法将SV40Tag整合到体外培养的成釉细胞瘤细胞基因组中，用PCR和RT－PCR检测SV40Tag的表达，单克隆培养筛选出永生化的成釉细胞瘤细胞株。结果：未转染细胞体外存活51d。转染SV40Tag的肿瘤细胞的寿命延长，克隆细胞生长良好，呈小多边形，传代25次后仍保持生长旺盛，命名为TAM－1。结论：SV40Tag可整合到釉细胞瘤细胞基因组中，并获得稳定表达，转染SV40Tag的成釉细胞 瘤细胞株TAM－1获得了永生性。     

体外短期化疗诱导Tca8113细胞株产生耐药性的研究

目的　探讨短期接触化疗药物后肿瘤细胞耐药性的产生情况及与化疗药物的关系。方法　将Tca8113 细胞株在体外与化疗药物短期接触后,采用RT-PCR法检测其在mRNA水平上多药耐药基因(MDR1)及多药耐药相关蛋白基因(MRP)的表达情况,采用荧光分光光度计检测细胞内药物浓度的变化,以耐药的白血病细胞株K562/ADM作为对照。结果　化疗对敏感的Tca8113细胞株有明显的抑制作用,而对K562/ADM抑制作用不明显;Tca8113细胞株短期接触化疗药物后,在mRNA水平可检测到微量的MDR1和MRP的表达;耐药的K562/ADM细胞内药物浓度明显低于敏感的Tca8113细胞株。结论　耐药性的产生与MDR1和MRP表达水平密切相关。Tca8113细胞株短期接触化疗后即有微量的MDR1 mRNA和MRP mRNA的表达,证实了药物对继发性多药耐药的诱导作用。     

人成骨样细胞株对持续性压缩力的反应

本文介绍了一种受持续性压缩力的细胞培养系统,该系统可使受压侧产生正畸力效应。本研究采用该系统,观察了人成骨样细胞株(HOS)细胞受持续压缩的效应。 结果如下:①在分别受到0,1,5,10,20g/cm~2持续压缩力的作用下,测量HOS细胞碱性磷酸酶的活性,当受力为10g/cm~2时,活性最高.②受10g/cm~2的持续压缩力,培养时间分别为1,3,6,12,24h,测得HOS细胞碱性磷酸酶的活性随时问的延长而增强。在每个时间点上,受压组的活性明显高于对照组。③HOS细胞的形态学显示持续受压可引起细胞变性。④持续受压     

静电纺壳聚糖-聚己内酯纳米纤维膜引导骨再生的体外研究

目的 探讨静电纺壳聚糖（CHS）-聚己内酯(PCL)纳米纤维膜对骨缺损再生作用。方法通过静电纺丝技术制备壳聚糖-聚己内酯纳米纤维膜,以纤维膜作为载体,根据碱性磷酸酶活性和Western 免疫印迹实验结果,探讨纤维膜对细胞成骨分化能力的影响。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果静电纺壳聚糖-聚己内酯纳米纤维膜对细胞成骨分化能力的作用显著高于对照组（不含材料组）（P<0.05）。结论静电纺聚己内酯-壳聚糖纳米纤维膜在体外能够促进细胞的成骨分化,为骨缺损及再生修复提供了科学依据。     

人粘液表皮样癌高转移细胞株对足叶乙甙的敏感性

目的：观察足叶乙甙（ＶＰ１６）对人粘液表皮样癌高转移细胞株（Ｍｃ３）抑制作用。方法：采用ＭＴＴ及软琼脂克隆形成法观察ＶＰ１６对Ｍｃ３的药敏性。结果：ＶＰ１６对Ｍｃ３细胞的生长及克隆形成有明显的抑制作用，且呈显著的剂量依赖性。ＭＴＴ药物敏感性试验ＶＰ１６对Ｍｃ３细胞作用ＩＣ５０值为１４１２μｇ／Ｌ，ＲＡＡ值为５．９；克隆形成法ＩＣ５０值为１２６μｇ／Ｌ，ＲＡＡ值为９３．４。结论：Ｍｃ３细胞对ＶＰ１６有较高的敏感性。ＶＰ１６在人粘液表皮样癌的治疗，特别是肿瘤转移的防治方面可能有一定意义。     

构建EIF5 A2基因敲除Cal27细胞株及功能分析

目的运用CRISPR/Cas9技术构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞系,观察EIF5A2在口腔鳞状细胞癌增殖与迁移中的作用。方法根据EIF5A2基因结构域,设计2个CRISPR靶向位点,利用pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin构建2个导向RNA(sgRNA)质粒。将sgRNA质粒与pST1374-NLS-flag-linker-Cas9共转染至Cal27细胞中,用嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选,并挑取单克隆。将单克隆细胞的DNA进行目的片段扩增,经凝胶电泳及测序鉴定后筛选出大片段敲除细胞株Cal27-2C5及碱基突变株Cal27-2D1。real time PCR及WesternBlot鉴定两株细胞系中EIF5A2的表达情况。用Transwell实验及CCK8分别检测EIF5A2敲除对Cal27细胞的体外迁移能力及体外增殖能力的影响。结果与对照组相比,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2在mRNA水平上表达均明显降低。在蛋白水平上,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2蛋白均基本不表达。敲除EIF5A2可明显降低Cal27细胞的体外迁移能力,而对Cal27细胞体外增殖能力没有明显影响。结论成功构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞株Cal27-2C5和Cal27-2D1,并初步验证EIF5A2可以影响Cal27细胞的体外迁移能力。     

快速成型技术构建聚己内酯支架作为骨支架材料的研究

目的：运用快速成型技术（RP）构建聚己内酯（PCL）支架,检测其生物相容性,探讨成为组织工程骨支架的潜力。方法：以聚己内酯为原料利用熔融沉积成型法（FDM）制备无孔隙及孔径300μm、500μm 3种PCL支架,比重瓶法测孔隙率。利用MTT法检测支架材料对细胞增殖的影响。倒置荧光显微镜、扫描电子显微镜观察聚己内酯支架上的细胞粘附情况及细胞形态。结果：肉眼观察可见300μm及500μm孔径支架材料孔隙大小均匀,排列规整,层次分明,两种孔径支架都具有良好的孔隙连通率。MTT检测结果显示1d、2d、3d各时间点均无明显细胞毒性,细胞毒性为1级。荧光倒置显微镜下观察发现细胞粘附数量由无孔隙组、500μm孔径组、300μm孔径组依次增加。扫描电子显微镜下观察细胞紧密粘附于支架。结论：用快速成型技术制备的聚己内酯支架具有较高的孔隙率,孔隙之间连通率良好,生物相容性良好,细胞粘附良好,有望成为骨组织工程支架。     

三羟基异黄酮对ACC2及ACCM细胞株侵袭能力的影响

目的:观察4,5,7-三羟基异黄酮(Genistein)对腺样囊性癌细胞株(ACC2)及腺样囊性癌肺转移株(ACCM)的侵袭能力,和对两细胞株金属基质蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法:采用细胞划痕实验及Transwell小室侵袭实验,检测Genistein对ACC2和ACCM细胞侵袭能力的影响;采用明胶酶谱法及流式细胞术分别检测Genistein对两种细胞株MMP-2蛋白胞外分泌及胞内表达的影响。结果:Genistein能显著抑制ACC2及ACCM两种细胞株的侵袭能力(P<0.01),但两细胞株之间不存在差异(P>0.05)。同时,Genistein可使两细胞株细胞外分泌MMP-2蛋白的水平下调,及胞内MMP-2蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:Genistein可对ACC2及ACCM的侵袭产生明显的抑制作用,该作用可能与诱导胞内外侵袭相关蛋白MMP-2的表达降低有关。     

病毒介导IL-24基因对口腔鳞癌耐药细胞株凋亡的影响

目的:研究杂合病毒介导的IL-24基因对口腔鳞状细胞癌耐药细胞的凋亡诱导作用,探讨其治疗耐药口腔癌的可能性。方法:通过MTT细胞活力测定鉴定口腔鳞状细胞癌细胞株KB和其耐药细胞株KBV。利用杂合病毒Ad LTR2EF1α搭载EGFP和IL-24转染KB细胞,确定最佳转染浓度,荧光倒置显微镜及RT-PCR鉴定EGFP或IL-24基因表达。以人永生化上皮细胞Ha Ca T细胞作为对照,使用Ad LTR2EF1α-IL-24转染KB、KBV及Ha Ca T细胞后,MMT法检测细胞活力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞凋亡形态。结果:KBV细胞对长春新碱的耐受性明显高于KB细胞。Ad LTR2EF1α-IL-24搭载的IL-24基因可以在KB及KBV细胞内过表达。IL-24基因在KB和KBV细胞中的过表达,有明显抑制细胞生长和促凋亡作用,而在Ha Ca T细胞中没有类似的作用。结论 :杂合病毒介导的IL-24对口腔鳞状细胞癌耐药细胞有较强的细胞毒性和诱导凋亡作用,并且对正常组织细胞没有影响。具有治疗耐药口腔癌的潜在价值。     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的：探讨舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞对放疗的敏感性及放疗对其耐药性的影响.方法：应用MTT法测定Tca 8113和Tca 8113/CBDEA细胞的放疗成活曲线,实时定量逆转录PCR（real-time quantitative PCR,RT-PCR）检测放疗对多药耐药基因1（mdr1）、多药耐药相关蛋白1基因（mrp1 ）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（gst-π）表达的影响和对细胞内阿霉素浓度的影响.结果：Tca 8113/CBDEA对放疗的ID50是Tca 8113的1.24 倍（P＜0.01）.Tca 8113/CBDEA细胞在放疗后4 h mdr1,mrp1,gst-π耐药基因表达无明显上升,24 h耐药基因的表达明显升高（P＜0.01）,Tca 8113细胞的耐药基因表达在4 h和24 h时均有明显上升（P＜0.01）.放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降.结论：耐药的舌鳞癌细胞表现放疗耐受性,放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药.对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点.     

辛伐他汀/聚己内酯静电纺丝膜的制备及其生物相容性评价

目的：制备辛伐他汀（simvastatin）/聚己内酯（Polycaprolactone,PCL）静电纺丝膜,评价其生物相容性.方法：制备PCL静电纺丝膜和simvastatin/PCL静电纺丝膜,通过扫描电镜观察两种膜片的形貌特征.选择人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）与膜片浸提液共培养,检测细胞增殖情况,评价材料毒性;PDLFs接种于膜片共培养7d,扫描电镜观察细胞生长情况,以直接接触法检测膜片的细胞毒性.将PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜植入大鼠皮下,术后14d取出标本,HE和Masson染色法进行组织学观察.结果：成功制备出纤维直径为纳米级别的simvastatin/PCL静电纺丝膜.细胞增殖试验和直接接触试验结果显示,PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜的浸提液细胞毒性试验均合格,细胞在材料上伸展充分,连接成片.PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜植入皮下2周后均有包膜形成;与PCL静电纺丝膜相比,simvastatin/PCL静电纺丝膜与周围组织界限较明显,反应层炎症细胞较少.结论：simvastatin/PCL静电纺丝膜的生物相容性良好,细胞毒性和组织相容性均符合生物支架材料的要求.     

猪骨羟基磷灰石对MG63细胞株生物学行为影响的实验研究

目的:检测猪骨羟基磷灰石(Porcine hydroxyapatite,PHA)对MG63细胞株增殖、分化的影响,探讨PHA的体外生物学性能。方法:取猪骨松质用高温烧结的方法制备PHA压片并在其上接种MG63细胞株,分别在3、7、10 d用CCK-8(Cell counting kit-8)实验和碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)实验检测细胞的增殖及体外矿化能力。结果:相较于阴性对照,PHA组明显促进了MG63细胞的增殖,但对其ALP活性无显著影响。结论:PHA作为一种潜在的骨替代材料,有良好的生物相容性。     

选择性激光烧结技术构建HA/PCL骨组织工程支架的研究

目的：应用选择性激光烧结技术构建3D支架,探讨其作为骨组织工程支架的可行性。方法以羟基磷灰石（HA）和聚己内酯（PCL）为原材料,运用选择性激光烧结技术,制备纯PCL支架以及HA质量比为5wt.%和10wt.%的HA/PCL支架,通过扫描电镜观察支架微观形貌,测定各组支架的孔隙率、抗压强度及亲水性,MTT法检测10wt.% HA/PCL支架浸提液的细胞毒性。结果扫描电镜显示：支架具有相互连通的三维孔隙结构,5wt.%和10wt.%的HA/PCL支架孔隙率分别达到78.20%和80.75%。随着羟基磷灰石含量增高,抗压强度略有下降,但支架亲水性提高。MTT的结果显示：10wt.% HA/PCL支架表现出良好的细胞相容性。结论选择性激光烧结技术制备的HA/PCL支架具有外形可塑性及良好的孔隙结构,其力学性能和细胞相容性可支持作为骨组织工程支架应用。     

聚己内酯静电纺丝支架与人牙周膜干细胞的生物相容性

目的：观察荧光标记的人牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上的生长情况,评价聚己内酯静电纺丝支架与人牙周膜干细胞的生物相容性.方法：采用有限稀释法,体外分离培养人牙周膜干细胞.用荧光染料对牙周膜干细胞进行标记,检测细胞增殖情况,评价荧光标记对细胞生长特性的影响.制备聚己内酯静电纺丝支架,与牙周膜干细胞直接接触共培养7d,激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的黏附和增殖情况,扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状态.结果：成功分离培养人牙周膜干细胞;荧光染料标记后细胞发红色荧光,标记对细胞形态和生长特性无显著影响.激光共聚焦显微镜观察,可见牙周膜干细胞能够在聚己内酯静电纺丝支架上黏附增殖,局部细胞生长融合.扫描电镜观察,可见牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上黏附牢固,可进入支架内部复层生长.结论：荧光标记的牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上生长良好,聚己内酯静电纺丝支架与牙周膜干细胞具有良好的生物相容性,有望作为牙周组织工程的载体材料.     

β-榄香烯对Tca8113细胞株诱导分化的研究

目的：研究β-榄香烯对Tca8113（口腔舌鳞癌细胞株）细胞株诱导调亡机制。方法：应用MTT比色法和流式细胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后的亚细胞结构。结果：β-榄香烯对Tca8113细胞株有明显的抑制作用。流式细胞仪分析不同的药物浓度、不同的作用时间细胞凋亡的发生均有显著意义，Gl期细胞减少，S期细胞增多。亚细胞结构细胞线粒体肿胀变性，核固缩。结论：β-榄香烯能抑制Tca8113细胞增殖，促进细胞凋亡，阻止S期细胞过程。