丹参对大鼠正畸牙牙周组织TGF-β1表达的影响

目的:观察丹参注射液对大鼠正畸牙牙周组织TGF-β₁蛋白的表达变化。方法:选取SD雄性大鼠192只,随机分为丹参+加力组(A)、单纯加力组(B)、丹参对照组(C)和空白对照组(D)。A、B 2组再根据加力时间点建立正畸牙移动模型。A、C 2组与B、D 2组隔天于左侧上颌第一磨牙颊侧黏膜下分别注射丹参注射液及生理盐水。于加力后l、3、5、7、10、14 d分批处死大鼠,收集标本。体式显微镜测量大鼠正畸牙移动距离的改变,H-E染色观察牙周组织变化,免疫组织化学染色检测TGF-β₁蛋白的表达变化,采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:除第1天外,A组TGF-β₁的表达均高于其余组别,3 d时TGF-β₁染色显著增强,5 d达高峰;与B组相比,第3、5、7天时间点TGF-β₁平均吸光度值分别为0.5181±0.0037、0.5857±0.0023和0.4363±0.0021,均具有显著差异（P<0.01）;与C组及D组相比,任何时间点均有显著差异（P<0.05）。结论:丹参注射液可通过改善牙周组织微循环,进而促进TGF-β₁蛋白的表达,可能是加速正畸牙移动的作用机制之一。     

不同质量浓度氟对大鼠切牙成釉细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的研究不同质量浓度氟对大鼠切牙生长过程中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。3组分别为低剂量氟组（F-质量浓度60 mg·L-1,13只）、高剂量氟组（F-质量浓度120 mg·L-1,13只）和对照组（蒸馏水,14只）。10周后取材,采用苏木精-伊红（HE）染色和免疫组织化学染色的方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞的形态及TGF-β1表达的影响。结果实验组大鼠切牙均出现典型的氟斑牙症状,牙面出现白垩色改变,釉质表面有横纹。HE染色结果显示成釉细胞形态发生改变,细胞排列紊乱,甚至成灶性堆积,可见空泡性变。免疫组织化学染色结果显示TGF-β1在分泌期和成熟期成釉细胞均为强阳性表达,在星网状层、中间层均为阳性表达,在新形成的釉基质中呈阳性表达。2个实验组TGF-β1的表达强度明显低于对照组（P<0.01）,2个实验组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论氟可能通过抑制TGF-β1的表达而干扰了成釉细胞的分化和基质分泌,造成釉质发育障碍。     

过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响

目的：研究过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响，探讨氟斑牙的发病机制。方法：选择20只Wistar大鼠，随机分成2组：Ⅰ组（蒸馏水组）和Ⅱ组（0．1g／L F^-）。饲养8周处死动物，利用免疫组化染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3表达的影响。结果：免疫组化结果经图像分析显示实验组大鼠切牙成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3的表达均低于对照组（P〈0．01），存在显著性差异。结论：过量氟可能通过抑制Smad3的表达来干扰上皮和间充质之间正常的信号转导，进而使釉质的分化发育受到影响。这有可能是氟牙症发生的细胞内机制之一。     

姜黄素对环孢素A诱导激活的大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的抑制作用

目的：体外实验研究姜黄素（curcumin,Cur）对环孢素A（cyclosporine A,CsA）作用大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的影响,为进一步探讨Cur抑制CsA所致药物性牙龈增生的发生机制提供理论依据。方法：使用CCK-8法观察0、5、10、20、30 μmol/L Cur对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响, 20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,牙龈成纤维细胞中转化生长因子TGF-β1、Smad3、平滑肌肌动蛋白α-SMA和I型胶原蛋白COL-I的mRNA表达变化;蛋白免疫印迹实验检测TGF-β1、Smad3、p-Smad3、α-SMA和COL-I的蛋白表达变化。细胞划痕实验观察20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA 对牙龈成纤维细胞迁移能力的影响。采用SPSS 23.0 软件包对数据进行统计学分析。结果：大鼠牙龈成纤维细胞在20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,细胞增殖和迁移能力明显降低;20 μmol/L Cur显著下调了牙龈成纤维细胞中TGF-β1、α-SMA 和COL-I的mRNA 表达,蛋白免疫印迹实验提示,TGF-β1、p-Smad3、α-SMA 和COL-I的表达同样显著下调。结论：Cur可能通过抑制CsA激活的牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3 信号通路,从而降低牙龈成纤维细胞增殖、迁移、平滑肌肌动蛋白和胶原分泌,改善牙龈增生。     

缺氧诱导因子1α在成釉细胞瘤中的表达及意义

目的:检测缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）在成釉细胞瘤中的表达,并探讨其与成釉细胞瘤侵袭和复发的相关性。方法:对5对成釉细胞瘤及对应正常瘤旁组织进行转录组测序,并对60例原发及60例复发患者第1次手术标本行免疫组织化学染色,检测2组患者中HIF-1α蛋白的表达。采用SAS9.3软件包对数据进行统计学分析。结果:5对新鲜标本转录组测序发现,3对标本中HIF-1α及其相关分子转录水平呈明显一致性改变。免疫组织化学染色发现,复发组成釉细胞瘤中,40%的肿瘤HIF-1α染色高于未复发组;复发组中,48.33%的肿瘤slug染色高于未复发组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:成釉细胞瘤复发与HIF-1α相关,HIF-1α表达高的患者较表达低的患者更容易复发。HIF-1α可能通过调控slug的表达,影响成釉细胞瘤的局部复发。     

不同浓度氟对大鼠切牙成釉细胞Smad2/3表达的影响

目的:研究不同浓度氟对大鼠切牙生长过程中成釉细胞内信号转导分子Smad2/3表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法:40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。用HE染色和免疫组化方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞形态及Smad2/3表达的影响,采用MetaMorph显微图像分析系统和SPSS12.0软件包分别进行图像和数据分析。结果:给氟组大鼠切牙出现典型氟斑牙症状。给氟组Smad2/3的表达显著低于对照组(P<0.01),但低氟组和高氟组间未见显著差异(P>0.05)。结论:过量氟可能通过抑制Smad2/3的表达来影响釉质的分化和发育,导致氟牙症的发生。     

分泌型卷曲相关蛋白1及β-连环蛋白在慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达

目的 检测分泌型卷曲相关蛋白1（SFRP1）及β-连环蛋白（β-catenin）在慢性牙周炎（CP）患者牙龈组织中的表达及相关性,探讨经典Wnt/β-catenin信号通路在牙周炎发生发展中的作用。方法 选取CP患者28例（CP组）,其中中度CP16例,重度CP12例,健康对照者12例（正常组）,收集牙龈组织并记录探诊深度、出血指数及临床附着丧失水平。采用免疫组织化学技术检测SFRP1及β-catenin的表达,双评分法评价阳性染色强度,SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 正常组SFRP1及β-catenin的着色强度积分值分别为2.16±0.65、1.12±0.51,CP组为3.57±0.45、2.36±0.49,其中中度CP组为3.61±0.40、2.30±0.44,重度CP组为3.52±0.52、2.45±0.55。CP组中SFRP1及β-catenin的表达较正常组升高,差异有统计学意义（P<0.01）。进一步比较,正常组与中度、重度CP组间差异均有统计学意义（P<0.01）,但中度与重度CP组间差异无统计学意义（P>0.05）。SFRP1与β-catenin着色强度的相关系数r=0.657（P<0.01）。两者的表达均与牙周临床指数相关,其中SFRP1与探诊深度的相关性最明显（r=0.723,P<0.01）;β-catenin与出血指数的相关性最强（r=0.697,P<0.01）。结论 SFRP1及β-catenin在CP患者牙龈组织中的表达升高且与牙周破坏相关,两者的异常表达可能促进牙周炎的发生发展。     

过量氟对大鼠切牙基质金属蛋白酶-20及其组织抑制剂表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙生长过程中基质金属蛋白酶-20（MMP-20）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响，探讨氟斑牙的发病机制。方法 选择20只Wistar大鼠，随机分为对照组和给氟组。8 周后处死动物，获取切牙标本，免疫组化染色观察MMP-20和TIMP-2在大鼠切牙中的表达定位和氟对二者表达的影响。结果 MMP-20和TIMP-2 在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞以及成釉器均有阳性表达，给氟组MMP-20的表达明显弱于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）；TIMP-2在两组的表达无显著性差异（P>0.05）。结论 过量氟可抑制MMP-20的表达, MMP-20和TIMP-2表达失衡，TIMP-2的抑制作用加强，致使釉基质蛋白清除延迟，导致矿化不全和釉质缺损。     

过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。饲养8周后处死,利用HE染色和免疫组织化学染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞形态及釉蛋白表达的影响。结果 实验组大鼠下切牙成釉细胞由原有的高柱状结构变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,成釉细胞和成牙本质细胞中釉蛋白表达明显低于对照组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论 过量氟可抑制釉蛋白表达,影响釉质发育。     

程序性死亡受体1及其配体在大鼠牙周炎发展中的时序性表达及意义

目的 研究程序性死亡受体1（programmed death-1,PD-1）及其配体（programmed death ligand 1,PD-L1）在大鼠牙周炎发展中的时序性表达及意义。方法 SD大鼠随机分为对照组和模型组,按照测定时间不同随机分为4个亚组,分别为A组（造模1周）、B组（造模2周）、C组（造模3周）和D组（造模4周）,每个亚组各8只大鼠。对各模型组大鼠采用“丝线结扎+接种牙龈卟啉单胞菌脂多糖”的方法建立大鼠上颌实验性牙周炎模型,对各组大鼠牙周进行组织病理检查和骨吸收面积测定,采用RT-PCR法对各组大鼠牙周组织中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin-1, IL-1β）、白细胞介素6（interleukin 6, IL-6）及转化生长因子β（transforming growth factor beta, TGF-β）mRNA进行测定,采用Western免疫印迹法对各组大鼠牙周组织PD-1和PD-L1蛋白表达水平进行测定。采用SPSS 22.0 软件包对数据进行统计学分析。结果 建模期间,模型组大鼠第一磨牙釉-牙骨质界到牙槽嵴顶(amelocemental junction-alveolar crest, ACJ-AC)距离和根分叉区骨吸收面积逐渐增加（P<0.05）,与相应时间点对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。建模期间,模型组大鼠牙周组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平持续升高（P<0.05）,TGF-β mRNA表达水平持续降低（P<0.05）,并且与相应时间点对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。建模期间,模型组大鼠牙周组织中PD-1和PD-L1蛋白表达水平持续升高（P<0.05）,与相应时间点对照组相比,差异显著（P<0.01）。疾病发展过程中,大鼠牙周组织中PD-1和PD-L1蛋白表达水平与牙周组织炎症介质TNF-α和IL-6 mRNA表达水平持续正相关（P<0.05）。结论 PD-1作为免疫抑制分子与其受体PD-L1可促进牙周炎症进展,其作用可能通过调节TNF-α和IL-6的表达来实现。调节PD-1和PD-L1的表达,可作为治疗牙周炎症相关性疾病的新靶点。     

巨噬细胞在β-TCP支架修复牙槽突裂中成骨作用的探讨

目的： 评价使用3D打印β磷酸三钙（β-TCP）支架复合骨髓干细胞（bone marrow stem cell, BMSC）修复牙槽突裂的成骨效果以及巨噬细胞在成骨中的作用。方法： 将16只大鼠随机分为2组,将第1组8只大鼠双侧上颌第一磨牙拔除,形成4 mm×4 mm×3 mm的箱状骨缺损。8周后,一侧植入3D打印β-TCP复合干细胞支架,另一侧植入同样载有干细胞的空白支架。将第2组8只大鼠以相同方式造裂,两侧同时放置3D打印β-TCP复合干细胞支架,一侧注射氯膦酸盐脂质体清除巨噬细胞,另一侧注射对照脂质体。术后8周进行显微CT扫描和组织学分析,检测成骨效果。采用 SAS 8.0 软件包对数据进行统计学处理。结果： β-TCP支架移植侧BV/TV为(41.38±3.33)%,空白支架放置侧为(30.42±2.97)%,两者之间差异显著（P<0.05）。去除巨噬细胞后,BV/TV下降至(18.71±2.19)%,对照脂质体注射侧为(39.81±2.68)%,β-TCP支架放置侧和对照脂质体注射侧结果无统计学差异。结论： 3D打印β-TCP支架复合骨髓干细胞有较好的成骨效果,巨噬细胞在β-TCP介导成骨过程中起到重要作用,去除巨噬细胞阻碍新骨形成。     

慢性睡眠剥夺对大鼠髁突软骨的影响

目的： 建立大鼠慢性睡眠剥夺模型,观察大鼠颞下颌关节髁突软骨形态变化和软骨中IL-1β、TNF-α、IGF-1和VEGF的表达变化。方法： 将60只大鼠随机分为实验组、对照组和恢复组。利用改良多平台法（modified multiple platform method,MMPM）对实验组和恢复组大鼠进行1、2、3、4周的慢性睡眠剥夺。恢复组大鼠睡眠剥夺后正常笼养1周。利用H-E染色观察颞下颌关节髁突的组织结构变化,免疫组织化学法检测IL-1β、TNF-α、IGF-1和VEGF在髁突软骨内的表达水平。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 改良水平台法可以成功建立大鼠慢性睡眠剥夺模型。H-E染色观察到实验组髁突软骨出现纤维带分裂、细胞界限模糊,恢复组纤维裂隙减小或被纤维样组织占据。免疫组织化学结果显示,IL-1β、TNF-α在实验组中的阳性表达显著高于对照组（P<0.05）,恢复组表达显著低于实验组（P<0.05）。IGF-1和VEGF在实验组中的表达显著高于对照组（P<0.05）,恢复组1、2、3周IGF-1和VEGF的阳性表达显著下降（P<0.05）。结论： 慢性睡眠剥夺可引起髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达增加,加重炎症表现。慢性睡眠剥夺可导致髁突软骨内IGF-1表达增加,发挥保护和促进软骨改建的作用。慢性睡眠剥夺停止1周后,各因子表达有所下降,髁突进行恢复性改建。     

TGF-β3转染脂肪干细胞复合OGP-HA-ChS支架对兔髁突受损软骨的修复作用

目的: 探讨TGF-β3转染脂肪干细胞ADSCs复合OGP（成骨多肽）-HA（透明质酸）-ChS（硫酸软骨素）支架修复兔髁突受损软骨的可行性。方法: 分离培养兔ADSCs,利用重组腺病毒构建携带TGF-β3基因表达载体,并转染至兔ADSCs。14 d后,观察细胞荧光表达情况并计算病毒转染效率,Western 印迹检测TGF-β3蛋白表达。50只大白兔随机分为5组,A组为空白组,B组为TGF-β3转染ADSCs组,C组为OGP-HA-ChS支架组,D组为ADSCs复合OGP-HA-ChS组。E组为TGF-β3转染ADSCs复合OGP-HA-ChS组,兔颞下颌关节骨关节病模型制备完成后,按照实验分组进行材料移植。各组动物分别于材料移植第3、9周后取材,制备标本并行髁突软骨扫描电镜、组织学观察及实时荧光定量PCR检测。采用SPSS17.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 扫描电镜与组织学观察可见,D、E组软骨病变修复改善情况优于B、C组。与模型组比较,实时定量 PCR结果显示,E组MMP-3 表达与A组相对持平但低于C、D组,差异有显著性（P<0.05);E组 TIMP-1 表达与A组相对持平但高于C、D组,差异有显著性（P<0.05)。结论: TGF-β3转染ADSCs复合OGP-HA-ChS支架对兔髁突受损软骨具有修复作用。     

减阻牵张快速牙移动中TGF-β1表达变化对牙周组织改建的影响

目的 探讨减阻牵张快速牙移动中转化生长因子β1（TGF-β1）在牙周组织改建中的作用。方法 20 只 Beagle 犬随机均分为加力 5、10、15 d、加力 15 d 保持 10、90 d 5组。于下颌骨两侧随机分别采用减阻牵张（实验组）和常规正畸方法（对照组）移动第一前磨牙。各组犬分别于预定时间测量牙移动距离并获取第一前磨牙牙周组织块,进行 H-E、苦味酸-天狼星红、免疫组化染色观察。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果 实验组牙移动及牙周改建速度显著快于对照组;2组TGF-β1阳性表达分布区域相似,均于15 d骨生成最活跃阶段达到峰值,但加力各阶段实验组阳性表达显著高于对照组（P<0.05）。结论 与常规正畸方法相比,减阻牵张能明显增加移动牙张力侧牙周组织TGF-β1的表达,加速牙周组织改建。     

眶下孔周围注射滑石粉制作新型大鼠三叉神经痛动物模型的实验研究

目的: 应用滑石粉悬液进行眶下孔周围注射,建立一种新型大鼠三叉神经痛（trigeminal neuralgia,TN）动物模型。方法: 选取Wistar雄性大鼠30只,随机分为2组,一组在眶下神经孔周围注射30%滑石粉混悬液0.3 mL,另一组注射同等剂量的生理盐水,于术前3 d、术后3 d及术后1、2、3、4、6、8、12周分别进行行为学观察,Von Frey纤维测定大鼠机械性刺激反应阈值,利用方差分析对机械刺激阈值进行统计学分析。于术后3 d及术后4、8、12周取眶下孔周围组织作组织病理学观察,应用免疫组织化学的方法检测眶下区组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达,采用SPSS16.0软件包对各检测值进行分组t检验。结果: 实验组大鼠术后3 d眶下神经支配区域机械痛反应阈值与术前及对照组相比显著降低（P<0.01),大鼠易激惹,具有搔抓面部或攻击行为。直到术后12周,机械痛阈值仍然显著低于对照组。实验组术后3 d组织病理学观察主要呈炎症表现,炎性因子表达减少;术后1周炎症更剧烈,炎性因子表达。术后4周,局部出现炎性肉芽组织增生,炎性因子表达最高;4~12周炎性反应逐渐减轻,炎性因子表达逐渐减少,局部瘢痕形成并逐渐加重,可见瘢痕压迫眶下神经。结论: 眶下孔周围注射滑石粉悬液可以建立稳定的TN动物模型,该造模方法简单易行,为进一步研究TN发病机制和模拟临床治疗提供了一种可靠、有效的动物模型。     

TGF-β1信号通路相关的microRNA在唾液腺腺样囊性癌侵袭转移中的作用

目的 探讨TGF-β1/MAPKs/MMPs信号通路相关的microRNA (miRNA)在唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma, SACC)侵袭、转移中的作用。方法：采用 miRNA 芯片检测TGF-β1 刺激腺样囊性癌细胞（SACC-83、SACC-LM）前、后的miRNA表达谱;对 miRNA 表达谱进行差异分析;然后挑选几个显著差异表达的miRNA,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）进一步加以验证,同时运用miRNA 靶基因预测软件预测其可能调控的靶基因。结果：芯片结果显示,与低转移株SACC-83相比,高转移株SACC-LM中的miRNA上调表达40个,下调表达 101个;经TGF-β1处理后,进一步显著上调的miRNA 1个,下调12个;qRT-PCR 验证结果与 miRNAs 芯片相符。对显著差异表达的miRNAs进行靶基因预测,共筛选出与 TGF-β1/MAPKs/MMPs信号通路相关的5个miRNAs（miR-125a-5p、miR-181d、mir-145-3p、mir-126-3p和mir-320d）,其对应的靶基因有P38(MAPK14)、MMP2、ERK1/2和SMADs。结论：不同转移能力的SACC存在差异表达的 miRNAs;TGF-β1能够影响SACC细胞miRNAs 的表达;miR-125a-5p、miR-34a、mir-145-3p、mir-126-3p和mir-195可能在SACC转移相关信号调节通路TGF-β1/MAPKs/MMPs中起着重要的调控作用。     

爱维治对放疗所致急性口腔黏膜炎的疗效观察

目的:探讨爱维治对放疗患者急性口腔黏膜炎的临床效果及对炎性因子水平的影响。方法:选取青海省第五人民医院肿瘤科2015年7月—2017年9月收治的113例鼻咽癌放疗所致急性口腔黏膜炎患者,采用随机数字表法分为实验组（57例）、对照组（56例）,实验组采用爱维治治疗。对照组采用康复新治疗,对比2组患者治疗前、后疼痛程度（VAS评分）,口腔黏膜炎分级,血清C反应蛋白（c-reactiveprotein,CRP）,白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）,转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的变化。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:治疗前,2组患者的VAS评分差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后1周、2周,2组患者的VAS评分较治疗前均显著降低（P<0.05）,实验组患者的VAS评分显著低于对照组（P<0.05）;治疗后2周,实验组患者的口腔黏膜炎分级显著低于对照组（P<0.05）;治疗前,2组患者血清CRP、IL-6、TGF-β1、TNF-α水平差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后2周,2组患者血清CRP、IL-6、TGF-β1、TNF-α水平较治疗前均显著降低（P<0.05）,实验组患者血清CRP、IL-6、TGF-β1、TNF-α水平显著低于对照组（P<0.05）。结论:爱维治对放疗患者急性口腔黏膜炎临床效果确切,能显著缓解患者的疼痛感、降低血清炎性因子水平。