人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)增殖分化的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:建立人PBMCs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果:3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为4.5×104及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组HPLFs细胞计数有显著性差异(P<0.05)。transwell共培养组与对照组相比,在3 d时,两组HPLFs分泌型ALP活性有显著性差异(P<0.05),5 d及7 d时差异尤其显著(P<0.01),tran-swell共培养组HPLFs分泌型ALP活性低于对照组。结论:人PBMCs能促进HPLFs的增殖,但抑制HPLFs分泌型ALP活性。     

高浓度葡萄糖对人牙周膜成纤维细胞成骨分化能力的影响

目的：??研究高葡萄糖浓度刺激下牙周膜成纤维细胞（PDLC）的增殖能力和成骨分化能力。方法???体外组织块法培养非糖尿病患者PDLC,分别用0?mg·L-1（C组）、1?100?mg·L-1（L组）、4?500?mg·L-1（H组）浓度葡萄糖刺激PDLC,噻唑蓝（MTT）法检测PDLC增殖能力,矿化诱导后茜素红染色观察矿化结节的形成情况,碱性磷酸酶（ALP）活性检测和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测成骨相关基因表达。结果???MTT检测结果显示,H组OD值较L组和C组低（P<0.05）;成骨诱导21?d后,H组矿化结节面积较L组和C组少（P<0.05）;成骨诱导期间, H组ALP活性较L组和C组明显偏低（P<0.05）;H组早期成骨基因Runt相关转录因子2、ALP和Ⅰ型胶原诱导前后相对倍增数较L组和C组低（P<0.05）。结论???高浓度葡萄糖能够抑制PDLC增殖能力和成骨分化能力。     

成骨细胞和牙周膜成纤维细胞交互作用的初探

目的　了解牙周组织再生中两种重要的细胞(成骨细胞和牙周膜成纤维细胞)之间的相互调控作用,以探讨牙周膜形成和维持的相关因素及其对牙种植体周围结构的影响机制。方法　采用原代培养法获取同一SD大鼠的成骨细胞和牙周膜成纤维细胞,将两种细胞分别接种于培养板上,再置于细胞培养池中以建立体外共同培养模型,分别测试两种细胞的碱性磷酸酶(ALP)及Ⅰ型胶原表达。结果　两种细胞在共同培养后,其ALP活性都发生显著变化,牙周膜成纤维细胞ALP表达明显提高,而成骨细胞ALP则降低;Ⅰ型胶原未发生显著变化。结论　当两种细胞在体外共同培养时,牙周膜成纤维细胞能抑制成骨细胞的成骨作用,而成骨细胞则能诱导牙周膜成纤维细胞向成骨样细胞分化。     

内毒素对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

具核梭杆菌和牙髓类杆菌100μg/ml浓度可使体外培养的人牙周膜成纤维细胞线粒体膜破裂、溶酶体膜受损、细胞出现大量空泡表明细胞功能受损。     

丹参对人牙周膜成纤维细胞骨保护素表达的影响

目的:研究丹参对体外培养的人牙周膜成纤维细胞骨保护索(OPG)表达的影响.方法:原代培养人牙周膜成纤维细胞,传代至第5代,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA),分别检测不同浓度丹参对体外培养的人牙周膜成纤维细胞OPG mRNA表达及上清中OPG蛋白含量改变的影响,采用SPSS15.0软件包对数据进行统计学分析.结果:不同浓度丹参作用1h后,丹参处理组人牙周膜成纤维细胞OPG mRNA表达均较对照组增强(P<0.05);不同浓度丹参作用12h后,丹参处理组上清液中OPG蛋白质含量显著高于对照组(P<0.05).结论:丹参能够促进体外培养的人牙周膜成纤维细胞合成并分泌OPG.     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞生长的影响

目的 探讨在碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)作用下,人牙周膜细胞（PDLC）的增殖、DNA合成状况的变化。方法 以常规体外组织块细胞培养法获得PDLC,采用MTTI地和^3H-TdR掺入法测定bFGF对PDLC的影响,实验结果A值和CPM值经方差分析。结果 各实验组与对照组之间均有显著性差异,bFGF能显著提高PDLC的增殖活性及DNA合成,其效应随bFGF浓度增大而增大,1000ng/ml范围内未见抑制现象,最大效应一半的浓度约为100ng/ml。结论 bFGF能促进PDLC增殖及DNA合成,可望在牙周再生治疗中起到重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响

目的　明确碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响,以 探讨在牙种植体组织界面局部应用bFGF诱导类牙周膜形成的可行性。方法　同一只SD大鼠来源的成骨细胞和 牙周膜成纤维细胞经传代培养至第4代,建立体外创伤模型,分别在普通培养基和含bFGF的培养基中培养,观察 细胞迁移情况,四唑盐比色实验(MTT)测定细胞的增殖速度。结果　普通培养基中,成骨细胞迁移速度快于成纤维 细胞。加bFGF培养基中牙周膜成纤维细胞迁移速度明显快于其他各组,同时MTT结果显示加入bFGF能明显促进 两种细胞的增殖。结论　bFGF能明显促进牙周膜成纤维细胞的增殖、移行。     

咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其凋亡相关基因表达的影响

目的观察咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其相关基因表达的影响。方法拔除健康雄性SD大鼠右上颌第一、二、三磨牙建立右下颌磨牙咬合力改变动物模型,分别于拔牙后6、12h及1、2、3、5、7、14、28d处死大鼠(n=6),取右下颌磨牙区牙槽骨组织,进行H-E染色和透射电镜观察;免疫组化染色检测牙周膜成纤维细胞Bcl-2和Bax表达。另设正常咬合力大鼠作为对照组(n=6)。免疫组化染色结果采用二级计分法,根据染色强度及阳性细胞的数目进行计分取平均值。结果成功建立咬合力改变SD大鼠模型。H-E染色结果显示实验组牙周膜结构疏松,纤维排列无序,牙槽骨骨壁凹凸不平;透射电镜结果显示实验组牙周膜成纤维细胞出现核固缩、核染色质浓缩、边集。免疫组化染色表明拔牙后12h牙周膜成纤维细胞Bax表达最高(216.83±6.34),而Bcl-2的表达在3d时达峰值(219.33±10.25),此后二者均开始下降,至28d基本恢复正常(7.00±2.37,5.67±2.16,P<0.01)。结论细胞凋亡及其相关基因Bcl-2和Bax参与了牙周膜的改建过程。     

胰岛素样生长因子-Ⅱ对培养人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的：研究ＩＧＦ－ＩＩ对培养人牙周膜成纤维细胞（ＰＤＬＦ）生物学活性的影响,方法：接种一定量培养至第５代的人ＰＤＬＦ,用ＭＴＴ法和碱性磷酸酶比色法观察ＩＧＦ－ＩＩ作用下,ＰＤＬＦ的增殖和碱性磷酸酶活性的变化。结果：ＩＧＦ－ＩＩ在实验浓度范围内,对ＰＤＬＦ有较明显的促增殖作用,对ＰＤＬＦ的ＡＬＰ活性具有较强的促进作用。结论：ＩＧＦ－ＩＩ对ＰＤＬＦ的生物学活性有一定的影响,揭示其可能通过ＰＤＬＦ发挥其     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。     

尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的实验研究

目的：了解在体外培养环境中,尼古丁对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响。方法：将尼古丁作用于培养至第6代的人牙周膜成纤维细胞后,通过四唑盐比色法、流式细胞仪研究尼古丁能否诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡。结果：四唑盐比色法证实当尼古丁浓度在0.05～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的抑制呈浓度依赖性,流式细胞仪分析提示,当尼古丁浓度在0.5～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的凋亡率呈浓度依赖性。结论：尼古丁对人牙周膜成纤维细胞有一定的毒性作用,通过抑制牙周膜成纤维细胞增殖和诱导凋亡加重对周膜的破坏。     

共培养诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向牙周膜细胞(hPDLs)分化的体外实验研究

目的:研究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向人牙周膜细胞(hPDLs)分化的可能性。方法:原代培养获得hUCMSCs和hPDLs;应用Transwell小室将两种细胞进行非接触式共培养;使用流式细胞仪检测共培养过程中hUCMSCs干细胞标记物CD146、SOX2、SSEA和Stro-1的变化情况;通过免疫荧光技术和Western Blot技术检测共培养过程中波形蛋白(Vimentin)在hUCMSCs中的变化情况。结果:共培养过程中hUCMSCs中的CD146、SOX2、SSEA和Stro-1持续降低;而Vimentin持续增高。结论:通过与hPDLs共培养,可以成功地将hUCMSCs诱导分化成为牙周膜样细胞,进一步证明了hUCMSCs可用于牙周损伤修复的可能。     

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况。方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘。经3～4代传代培养后,对细胞加载1%～20%的牵张应变,加载时间分别为30min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V-FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定。结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢。人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30min组低于对照组,但两者间无统计学差异。在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P<0.05)。在12h时所有组的细胞凋亡均减少。结论:人牙周膜成纤维细胞的使用最好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好。牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡。     

体外培养人牙周膜成纤维细胞及其成骨表型特征检测

目的　探讨牙周膜成纤维细胞作为牙周组织工程种子细胞的可行性。方法　采用酶消化法体外培养人牙周膜成纤维细胞 ,以人胎儿皮肤成纤维细胞为对照检测细胞碱性磷酸酶表达及矿化能力。结果　体外培养人牙周膜成纤维细胞与人胎儿皮肤成纤维细胞相比表达更高水平的碱性磷酸酶 (P <0 .0 5 ) ,矿化诱导液连续培养 30d均可观察到矿化结节形成。结论　采用酶消化法可快速简便地获取原代人牙周膜成纤维细胞。体外培养牙周膜成纤维细胞具有成骨样细胞表型特征 ,与人胎儿皮肤成纤维细胞相比更具分化潜能 ,可作为牙周组织工程种子细胞来源     

犬牙周膜干细胞的分化能力研究

目的：体外扩增已鉴定的犬牙周膜干细胞（dog periodontal ligament stem cells,dPDLSCs）,研究其生物学特性。方法：取已鉴定的dPDLSCs细胞株复苏,倒置相差显微镜下观察细胞形态学及数量改变,平板培养并用吉姆萨染色计数克隆形成能力、体外诱导并用Von kossa染色观察体外分化特性,dPDLSCs与陶瓷化骨复合胶原凝胶载体三维培养条件下移植入免疫缺陷（BALB/C）小鼠皮下,分别4周、6周、8周取材,HE染色进行组织学观察。结果：dPDLSCs可在体外培养扩增,克隆形成能力为0.91%,体外矿化液诱导条件下,可向成骨方向分化,形成Von kossa染色阳性的矿化结节。体内实验证实,高密度接种时,dPDLSCs与陶瓷化骨复合胶原凝胶载体三维培养条件下移植入免疫缺陷（BALB/C）小鼠皮下,8周形成牙周膜纤维及牙骨质样复合体结构。结论：dPDLSCs具有很强的增殖能力、分化潜能和自我更新能力,其在适宜培养条件下可向牙周膜和牙骨质分化。     

尼古丁对人牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响

目的：体外研究尼古丁对人牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响。方法：用不同浓度的尼古丁与体外培养的人牙周膜成纤维细胞作用不同时间,用MTT比色法测定细胞的生长情况,流式细胞分析法测定尼古丁对细胞周期的影响。结果：各浓度的尼古丁组均能抑制人牙周膜成纤维细胞的生长,但不同浓度尼古丁对牙周膜细胞的抑制作用无明显差异;各浓度组尼古丁均能降低G1的比例,高浓度尼古丁（5×10^-1g/L）组G1期比例降至84.62%,G2/M期升高至12.83%。结论：尼古丁能抑制人牙周膜成纤维细胞的生长,并影响其细胞周期的进程。     

人牙周膜细胞在矿化液作用下的增殖、成骨分化与相关基因表达

目的：分离培养人牙周膜细胞（PDLCs）,观察矿化液对PDI。Cs细胞增殖和成骨分化的影响。方法：酶解组织块后获得人PDLCs,矿化液处理后观察对细胞影响。采用MTT法检测对细胞增殖;流式细胞分析细胞周期改变;分别通过碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色,RT—PCR观察矿化液诱导成骨分化的效果。结果：矿化液对人PDI．Cs的增殖无显著影响,高浓度地塞米松（Dex）的矿化液有一定抑制作用。含Dex的矿化液可促进成骨分化,包括ALP活性提高,矿化结节形成,以及成骨基因的表达上调。$100A4和PLAP-1是相对特异的牙周膜标志,也参与矿化液诱导的成骨分化的调控过程。结论：含地塞米松的矿化液可有效促进人PDLCs的成骨分化,对细胞增殖影响较小。PDI,Cs是一种新型的种子细胞,可应用于骨组织工程。     

bFGF与米贝拉地尔对人牙周膜成纤维细胞增殖的调节

目的:研究成纤维细胞生长因子(bFGF,以下用B代表)与米贝拉地尔(Mibefradil,以下用M代表)这两种药物对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)增殖的调节作用。方法:B分10.0、20.0、30.0 μg/L 3种浓度(分别为B1、B2、B3),M分2.5、5.0、10.0 μmol/L 3种浓度(分别为M1、M2、M3),再按加药时间分为1 d组、2 d组和3 d组,用WST法检测两种药物单独使用和按先后不同顺序联合使用后HPLFs的增殖率。结果:两种药物单独使用可分别起到促进和阻滞细胞增殖的效果,但是B作用时间过长细胞表现为增殖受阻滞。其中,B3作用1 d组细胞增殖率最高(P<0.05),M2作用1 d组细胞增殖率最低(P<0.05)。M仅对加用B3的细胞有明显阻滞作用,与单独使用B3的细胞增殖率有显著性差异(P<0.05)。另外,只有B1不能改变细胞加用M后增殖受阻滞的现象。所有联合用药后的细胞增殖率均与正常细胞增殖率无统计学差异。结论:bFGF与Mibefradil单独使用有各自的最佳作用浓度和作用时间。除过度增殖状态外,HPLFs增殖状态很难受到阻滞,并且处于增殖受阻滞状态的细胞很容易恢复增殖状态,以维持HPLFs不断处于增殖平衡状态。     

贫血小板血浆和根面脱矿对人牙周膜成纤维细胞在病变牙根面附着和增殖的影响

目的：观察贫血小板血浆和根面脱矿单独及联合应用对人牙周膜成纤维细胞在病变牙根面的附着及增殖的影响,探讨PPP和根面脱矿处理在促牙周组织再生中的可能作用。方法：实验分4组,经PPP、EDTA和两者联合处理的病变根片的3组作为实验组,未处理的病变根片作对照组。分别通过细胞计数法、四唑盐比色法[MTT]和扫描电镜检测人牙周膜成纤维细胞在不同处理病变牙根表面的附着、增殖和形态。结果：与未处理组相比,PPP组及根面脱矿组均能促进人牙周膜成纤维细胞对病变根面的附着（P〈0.05）,二者联合处理促细胞附着效果明显增强（P〈0.01）;未处理组中人牙周膜成纤维细胞体外培养48h与培养24h相比,细胞在病变根片上的无增殖（P〈0.05）;单独PPP或脱矿处理组中人牙周膜成纤维细胞体外培养48h与培养24h相比,细胞在病变根片上的附着及增殖增加,但无统计学意义,PPP和根面脱矿联合处理组中细胞在病变根片上的附着及增殖明显增加（P〈0.05）。结论：PPP能牢固地附着于病变根面,PPP和根面脱矿单独和联合处理病变根片能明显加强人牙周膜成纤维细胞的附着和增殖,而PPP和根面脱矿联合处理还有显著的促细胞增值效应。     

茶多酚对内毒素作用下人牙周膜细胞分泌和表达Toll样受体4的影响

目的:观察茶多酚(tea polyphenol,TP)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)分泌和表达Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)的影响。方法:体外分离及培养PDLCs,实验组分别为LPS和不同质量浓度的TP的不同组合,对照组为仅含1% FBS的DMEM培养液。培养24 h、48 h和72 h后,通过酶联免疫吸附测定法检测TLR4的分泌量,荧光实时定量PCR法检测TLR4的表达。结果:100 mg/L LPS组PDLCs TLR4分泌量显著高于其它各组(P<0.05),加入TP进行干预后实验组与对照组TLR4的分泌量和表达量无显著差异(P>0.05)。结论:TP对LPS作用下PDLCs TLR4的分泌和表达有一定的抑制作用。