纳米壳聚糖骨形成蛋白水凝胶修复下颌骨缺损实验研究

目的：观察可注射性纳米壳聚糖骨形成蛋白水凝胶修复颌骨缺损的效果。方法：以纳米壳聚糖为载体,加入重组人骨形成蛋白-2制备成可注射性纳米壳聚糖骨形成蛋白水凝胶（NCS／BMP-2 Gel）。取9只SD大鼠,在双侧背部皮下分别注射200μl（100μg／ml）NCS／BMP-2 Gel及单纯纳米壳聚糖水凝胶（NCS Gel）。于术后10、20、30 d分别处死3只,取材进行大体及常规病理学观察;选取54只SD大鼠,随机均分为3组（n＝18）制备下颌骨缺损模型,实验组骨缺损中注入NCS／BMP-2 Gel、对照组注入NCS Gel、空白组不注射。术后3、6、9周各组处死6只大鼠。分离下颌骨,用钼靶扫描图像,Image Pro-Plus软件比较其颌骨缺损面积;常规病理观察颌骨成骨情况。结果：实验侧、对照侧均形成皮下结节,实验侧30 d结节内可见类骨样结构;钼靶扫描检查：植入后3、6、9周时,实验组剩余骨缺损面积均低于对照组及空白组（P＜0．05）;组织学观察显示,实验组下颌骨成骨情况优于对照组及空白组。结论：NCS／BMP-2水凝胶有良好的生物相容性,能促进颌骨缺损修复。     

负载纳米羟磷灰石的结冷胶修复大鼠下颌骨缺损的效果评价

目的: 观察负载纳米羟磷灰石的结冷胶（GG/nHA）修复大鼠下颌骨缺损的效果。方法: 于16只SD大鼠下颌骨制备直径为5 mm的临界骨缺损,随机分为2组,实验组骨缺损区注入GG/nHA,对照组骨缺损区填充可吸收性明胶海绵。术后4周、8周处死大鼠,以Micro-CT定量分析骨组织愈合情况。苏木精-伊红（H-E）染色和马松（Masson）染色定性评估骨组织修复情况。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 制备的GG/nHA具有良好的可注射性,可经注射器推出至骨缺损区。术后4周和8周,实验组缺损区的骨生成量及骨体积分数（BV/TV）均显著高于对照组（P<0.05）。H-E染色和Masson染色均见实验组较对照组有更多新骨形成。结论: GG/nHA可以注射形式注入下颌骨缺损区,促进其愈合,有望成为微创修复口腔颌面部骨缺损的新型材料。     

BMP-9/EPO双基因共转染ADSCs复合nHAC/PLA支架修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的：探讨腺病毒介导BMP-9/EPO双基因共转染脂肪干细胞（ADSCs）复合nHAC/PLA支架材料促进体内成骨的可行性。方法：分离培养兔ADSCs,利用重组腺病毒构建携带BMP-9、EPO、BMP-9/EPO基因的表达载体,并转染至兔ADSCs。14 d后,在荧光显微镜下观察各组细胞荧光表达情况,计算病毒转染效率,采用Western免疫印迹检测各组细胞 BMP-9及EPO蛋白的表达。50只大白兔随机分为5组,A组为空白组,B组为单纯材料组,C组为BMP-9/nHAC/PLA组,D组为EPO/nHAC/PLA组,E组为BMP-9/EPO/nHAC/PLA组。制备兔双侧下颌骨缺损模型,按照实验分组,将转染组细胞分别与nHAC/PLA支架复合培养后植入兔下颌骨缺损处,于4、8、12周在缺损处取材进行影像学、组织学检测及扫描电镜观察,比较各组动物下颌骨缺损修复情况。采用 SPSS17.0软件包对结果进行统计学分析。结果：荧光显微镜下观察,BMP-9、EPO及BMP-9/EPO重组腺病毒均能稳定转染 ADSCs,转染效率为 80%～93%。转染后,BMP-9、EPO及BMP-9/EPO基因和蛋白均能稳定表达。转染后的ADSCs与nHAC/PLA支架复合,其骨缺损区修复情况优于对照组,且BMP-9/EPO/nHAC/PLA组成骨情况优于其他各组。扫描电镜下见转染组骨缺损与材料结合修复情况优于对照组,BMP-9/EPO/nHAC/PLA组修复最明显。结论：BMP-9、EPO均可转染ADSCs并稳定表达。与nHAC/PLA支架材料复合后,可显著促进下颌骨缺损的修复,为骨组织修复工程提供了新的选择。     

淫羊藿与nHAC/PLA促进兔颌骨缺损修复的实验研究

目的 动态观察补肾中药淫羊藿与纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)以及两者共同作用在兔下颌骨缺损修复中的作用.方法 制备16只兔双侧下颌骨10mm×8mm贯穿性骨缺损模型,随机分为对照组与淫羊藿组,两组左侧缺损区不添加材料,右侧缺损处添加活性材料(nHAC/PLA),术后2、4、8、12周处死动物,分别从大体、影像学、扫描电镜、组织学方面进行观察.结果 影像学观察淫羊藿组双侧、对照组右侧2、4、8、12周缺损区密度均高于对照组左侧.电镜观察可见淫羊藿组右侧、对照组右侧各时间点骨缺损区边界新骨形成均优于左侧,淫羊藿组成骨量较对照组多.组织学观察可见淫羊藿组左侧、对照组右侧、淫羊藿组右侧各时间点骨缺损区新骨形成均优于对照组左侧,新生骨及新生血管的量增多,骨成熟度高.随着时间延长,淫羊藿组右侧、对照组右侧有大量骨样组织长入活性材料,残留材料逐渐被活跃生长的骨组织包围并替代.结论 淫羊藿在骨缺损修复期间有良好的成骨作用,nHAC/PLA复合材料在体内试验过程中,具有良好的生物相容性和骨传导性,作为框架材料可以引导再生骨向缺损内生长,两者复合有望应用于临床骨缺损修复.     

NPP/C-HA/rhBMP-2复合支架修复兔股骨缺损的实验研究

目的: 探讨NPP/C-HA/rhBMP-2人工骨在实验兔体内的成骨效果。方法: 在兔股骨远端做直径7 mm、深10 mm的骨缺损模型,根据缺损形状,制作含有rhBMP-2的NPP/C-HA人工骨,缺损处不植入材料作为空白组,植入NPP/C-HA人工骨为对照组,植入NPP/C-HA/rhBMP-2人工骨为实验组。第4、8、12周时,通过锥形束CT（CBCT）、H-E染色及Masson染色,观察各组成骨效应;检测各组血清中碱性磷酸酶（ALP）活性及组织中OCN阳性染色,确定缺损处成骨分化及骨成熟程度。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 大体标本显示,实验组12周时缺损处修复完全,未见炎症、排斥等免疫反应。CBCT显示,12周时,对照组从骨缺损边缘到中心处骨密度增高,但边界仍在;加入rhBMP-2后的实验组效果更加明显,新生骨与周围宿主骨基本一致,边界消失。第8、12周时,实验组HU值显著高于对照组及空白组（P<0.05）。H-E染色及Masson染色显示,第8、12周时,实验组较对照组及空白组有明显的新生骨形成。第8周时,各组血清ALP活性升高,实验组ALP水平显著高于其他组（P<0.05）。OCN免疫组织化学IHC阳性染色显示,实验组较对照组、空白组更明显（P<0.05）。结论: NPP/C-HA/rhBMP-2具有良好的组织相容性、骨诱导性、骨传导性和成骨性,有望成为骨缺损修复良好材料。     

bFGF-胶原蛋白缓释系统促进兔下颌骨缺损修复的研究

目的 观察评估bFGF-胶原蛋白缓释系统作为骨修复材料的可能性。 方法 60只日本大耳白兔随机分成3组：bFGF胶原海绵组,胶原海绵组及空白对照组。手术建立兔双侧下颌骨洞穿性骨缺损模型并植入相应生物材料。分别在2、6、8、12周对造模部位取材,行大体观察、CT影像学检测和组织学观察。 结果 大体观察和CT影像学检测显示实验组骨创愈合速度较快。组织学观察可见实验组成骨情况优于同期对照组,胶原蛋白在体内作用时间持续至6周以前,其持续释放的bFGF颗粒对骨缺损修复有明显的促进作用,但发挥作用时间主要在12周前。 结论 bFGF-胶原蛋白缓释系统对兔下颌骨缺损具有良好的修复效果,其发挥作用时间主要在骨缺损修复早期。此外,胶原蛋白海绵本身对骨缺损修复早期亦具有一定促进作用。     

自体骨髓基质干细胞-珊瑚羟基磷灰石修复下颌骨节段缺损的实验研究

目的应用骨髓基质干细胞（BMSCs）复合珊瑚羟基磷灰石（CHA）构建组织工程化骨，修复犬下颌骨节段性缺损。方法体外分离培养，成骨诱导扩增犬BMSCs，将第2代细胞复合CHA后修复5只犬自体下颌骨右侧3cm的节段缺损；6只犬植入单纯CHA作为对照，术后12、26、32周通过影像学、大体形态、组织学和生物力学的方法检测骨缺损的修复效果。结果BMSCs-CHA复合物生长良好。随时间延长，X线片和CT显示实验组连接处骨痂形成，实验对照组连接处始终愈合较差；32周大体观察实验组骨修复较好，组织学显示有板层骨形成，连接处骨性愈合，实验对照组有编织骨形成，连接处纤维愈合。实验组与正常对照组下颌骨力学强度差异无统计学意义。结论自体成骨诱导BMSCs复合CHA形成的组织工程化骨可修复犬下颌骨节段缺损。     

脂肪干细胞复合载淫羊藿苷支架材料对兔下颌骨缺损的修复

目的:研究脂肪干细胞(ADSCs)作为种子细胞复合淫羊藿苷支架材料修复兔下颌骨缺损的效果.方法:体外培养ADSCs,茜素红染色检测骨向分化.实验组在骨缺损处植入ADSCs复合载淫羊藿苷支架材料;对照组2植入单纯纳米羟基磷灰石(n-HA)材料;对照组2植入淫羊藿苷/n-HA复合材料;空白组不植入任何材料.应用X线、组织学、扫描电镜观察并比较植入物与骨组织交界处的成骨修复情况.结果:实验组骨缺损区完全被骨组织修复,边界已融合;对照组1部分修复,有少量炎性渗出;对照组2大部分已修复,边界模糊;空白组基本未见修复.结论:ADSCs复合载淫羊藿苷支架材料具有骨缺损修复能力,其效果优于淫羊藿苷/n-HA材料及单纯n-HA材料.     

负载BMP-2的形状记忆支架修复兔下颌骨缺损的研究

目的:新型形状记忆聚合物(SMP)支架用于组织工程修复骨缺损的可行性研究。方法:通过热压成形术合成具有形状记忆功能的支架,应用体视显微镜和扫描电镜观察支架材料形状记忆能力及塑形前后的孔隙变化。建立兔下颌骨骨缺损模型,将塑形后的形状记忆支架材料(SMP支架、BMP-2-SMP支架,并设立空白缺损对照组)植入骨缺损区。通过大体标本观察、Micro-CT检测及HE染色,对比3组骨缺损区域的成骨差异。结果:体视显微镜及扫描电镜结果示,材料塑形后孔径变小,结构更加致密;支架材料在37℃下逐渐恢复到初始形状,具有形状记忆功能。Micro-CT及HE染色显示植入SMP支架后骨缺损区有明显成骨,而支架携带BMP-2后缺损区新生骨量更多,骨质更加成熟。结论:SMP支架可以促进骨缺损的修复,而携载BMP-2可进一步提高该支架对骨缺损区的成骨修复能力,这在组织工程学修复骨缺损中具有巨大的临床应用前景。     

可降解新型聚乳酸膜在引导骨组织再生中的应用

目的 探索一种可降解新型聚乳酸膜（PDLLA/PLLA）在引导骨组织再生中的应用效果。方法 新西兰大白兔24只,体重2.5～3.0 kg,在动物一侧下颌骨体部近下颌骨下缘处制备10 mm×5 mm×3 mm箱状骨缺损,然后将动物随机分为实验组、对照组和空白组,每组8只。实验组动物骨缺损处填Bio-oss骨粉后将PDLLA/PLLA覆盖于缺损表面,对照组动物骨缺损处填Bio-oss骨粉后将Guidor聚乳酸可吸收膜覆盖于缺损表面,空白组动物不作处理。术后8、12周采集缺损处标本,进行大体观察、Micro-CT检查和组织病理学观察。结果 实验期间各组实验动物均未发生炎症和排异反应,各组创口愈合良好,成骨活跃。大体观察显示,术后8周实验组动物成骨量较多,材料降解较少,对照组动物成骨量较实验组少,材料降解完全;术后12周实验组动物和对照组动物成骨量相当,实验组材料进一步降解,空白组动物成骨量少于实验组和对照组。术后8、12周,Micro-CT可以观察到实验组和对照组缺损区域新生骨明显多于空白组。术后8、12周,实验组动物和对照组动物新生骨相对骨体积分数（BV/TV）、骨密度（BMD）和骨小梁数...     

载辛伐他汀PCL-Gt/PCL屏障膜对兔颅骨缺损修复作用的研究

目的　采用同轴静电纺丝技术制备载有辛伐他汀的PCL-Gt/PCL膜修复兔颅骨缺损,观察PCL-Gt/PCL-辛伐他汀膜修复兔骨缺损的作用。方法：制备PCL-Gt/PCL-辛伐他汀膜,扫描电镜观察表面形态,检测辛伐他汀缓释量。选取18只雄性新西兰大白兔随机分为3组,每组6只,制备兔颅骨临界骨缺损模型。空白组缺损区不放置生物膜,阴性对照组缺损区植入PCL-Gt/PCL膜,实验组缺损区植入PCL-Gt/PCL-辛伐他汀膜。分别于术后4、12周处死各组动物,行Micro-CT、HE染色等检测。结果：扫描电镜结果提示所获得的PCL-Gt/PCL-辛伐他汀电纺膜呈多层纤维交错结构,不同组织面具有不同的孔径,所载的辛伐他汀能够稳定、缓慢释放长达28天。Micro-CT检测及HE染色结果显示,实验组新生骨形成及骨缺损愈合情况显著优于阴性对照组及空白组(P<0．05)。结论：实验表明PCL-Gt/PCL-辛伐他汀膜具有明显的促进成骨能力,防止纤维细胞长入缺损区,可加速骨缺损的修复效果,提高修复质量。     

hBMP-2基因修饰的组织工程化骨修复兔下颌骨正中缝的实验研究

目的:评价腺病毒介导的人骨形成蛋白-2(Ad-hBMP-2)基因转染的组织工程化人工骨对兔下颌骨正中缝的修复效果。方法:健康成年新西兰大白兔45只,随机分为5组,去除下颌骨正中缝的软组织,分别植入如下人工骨:Ⅰ组,Ad-hBMP-2转染的成骨细胞复合倍骼生(Bioglass)(10只);Ⅱ组,腺病毒介导的增强型绿色荧光蛋白(Ad-EGFP)基因转染的成骨细胞复合倍骼生(10只);Ⅲ组,未转染的成骨细胞复合倍骼生(10只);Ⅳ组,单纯倍骼生(10只);Ⅴ组,空白对照(5只)。于术后第2、4、8、12周末行大体观察、X线检查、组织学检查、新生骨量分析和生物力学测定。应用单因素方差分析和多样本均数两两比较的q(Newman-Keuls)检验对实验结果进行统计学分析。结果:大体观察见,4周时,Ⅰ组的兔下颌骨正中缝被新生骨组织代替,表面有皮质骨生成。X线检查,第4、8周,Ⅰ组的下颌骨正中缝内有明显骨痂形成。新生骨量分析显示,与其他组相比,Ⅰ组的新生骨量最多(P<0.01)。Ⅰ组移植骨的最大抗弯曲负荷、弯曲刚度值显著大于其他各组(P<0.01)。结论:hBMP-2基因修饰的组织工程化人工骨可以较好地修复兔下颌骨正中缝,有可能用于牙槽突裂的骨性修复。     

BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的：探讨BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究的可行性。方法：36只新西兰大白兔随机分为3组,每组12只,双侧下颌骨制备缺损模型。A组植入BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料;B组植入BMSCs复合载蛇床子素支架材料,C组单植入纳米羟基磷灰石支架材料。分别于术后2、4、8、12周处死实验动物,制备组织标本,行大体观察、影像学分析、HE染色、扫描电镜检测,并对影像学分析值及成骨情况加以评价,对分析数据结果使用SPSS17.0统计软件进行分析,P〈0.05有统计意义。结果：影像学检查及组织学染色显示A组骨缺损处愈合程度,成骨速度及其质量明显优于B组C组;扫描电镜显示A组该复合材料与组织相容性好,无炎症刺激反应;统计牙CT分析数据及新生骨面积,A组的成骨情况明显优于B组与C组（P〈0.05）。结论：BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料有明显骨诱导作用,是一种新型复合材料,可望成为临床应用中修复颌骨缺损的新型材料。     

牙髓干细胞修复即刻种植周围骨缺损

目的：建立兔下颌骨前牙区即刻种植种植体周围骨缺损的动物实验模型,并观察牙髓干细胞在种植体周围骨缺损中骨再生能力。方法：将实验兔分为2组,分别拔除兔双侧下颌前牙,并在拔牙窝颊侧建立2 mm ×3 mm大小骨缺损区,即刻植入种植体。对照组植入Bio-oss骨粉,实验组植入Bio-oss骨粉与牙髓干细胞（ Dental Pulp Stem Cells,DPSCs）,通过扫描电镜和HE染色观察评价植入后4周种植体-骨结合状况。结果：扫描电镜观察见实验组种植体周围骨缺损处可见编织骨及骨小梁形成,种植体与牙槽窝间隙基本消失且与龈方间隙减小,周围松质骨密度增高。实验组HE染色切片见种植体周围骨缺损处牙槽骨部分胞质呈空泡状,成骨细胞与破骨细胞分布于骨小梁上,骨小梁致密且排列规则。结论：建立的兔下颌骨前牙区即刻种植的种植体周围骨缺损动物实验模型,可为即刻种植方向的相关研究提供重要参考。     

下颌骨缺损牵张成骨动物模型的建立

目的建立兔下颌骨缺损牵张成骨动物模型,为进一步研究牵张成骨奠定实验基础。方法25只健康成年兔随机分成6组,实验组5组,每组4只,对照组1组共5只。25只兔均行一侧下颌骨切开截骨术,实验组安置自行设计的下颌骨牵张器,经6 d间歇期后,以每天2次,每次0.4 mm的速度牵张8 d进入固定期,于牵张中期(牵张第4天)、牵张末期(牵张第8天),固定期第2、4、6周分别处死4只动物;对照组术后仅保持缺隙而不牵张,与实验组对应的每个时间点处死1只动物,取下颌骨观察骨愈合情况。结果牵张器牵张效率好,固位稳定,实验组动物的下颌骨被成功牵张,牵张区可见新骨形成。实验对照组表现为不同程度的骨不连及骨缺损。结论本研究建立的兔下颌骨缺损牵张成骨模型是较理想的动物模型。     

脱钙牙本质基质及其复合物整复节段性骨缺损的组织学观察

采用随机同期对照方法对成年家兔桡骨节段性缺损模型，分别植入自制脱钙牙本质基质、生物活性玻璃陶瓷加脱钙牙本质基质的复合物、脱钙骨基质整复骨缺损，行大体及组织学观察。结果发现，用脱钙牙本质基质整复的骨缺损区在术后８周即可以达到骨愈合，髓腔再通，整复节段性骨缺损的速度和质量与脱钙骨基质相似，而生物活性玻璃陶瓷加脱钙牙本质基质复合物整复区在８周时达到骨性愈合，但髓腔未能再通。空白对照在术后８周至１２周未达到骨性愈合，仅见缺损区有断续的小梁样骨形成。本实验提示脱钙牙本质基质及其与生物活性玻璃陶瓷的复合物有良好的临床应用前景     

组织工程骨修复颅骨极限缺损种子细胞归宿的探讨

目的：检测纳米羟基磷灰石复合胶原／聚乳酸材料（nHAC／PLA，nano-hydroxyapatite／collagen／Polyacticacid）与骨髓基质细胞（BMSCs，bone marrow stroma cells）在体外复合构建的组织工程骨修复兔颅骨极限缺损的能力，并探讨种子细胞的归宿。方法：将圆盘状nHAC／PLA与BrdU标记的自体BMSCs复合后，植入新西兰大白兔颅骨直径1．5cm全层缺损中。设自体髂骨组、空白对照组及nHAC／PLA组，术后8w、16w通过X线片、HE染色、Masson’s三色法染色、荧光组织学和免疫组织化学染色，观察比较颅骨缺损的修复情况及种子细胞的归宿。结果：nHAC／PLA＋自体BMSCs组修复颅骨缺损的能力强，与自体髂骨组类似，nHAC／PLA组材料修复骨缺损的能力较弱，但强于空白对照组，组织工程骨的成骨细胞由植入的种子细胞演化而来。结论：nHAC／PLA复合自体BMSCs具有良好的修复骨缺损能力。     

Bio-Oss骨复合富血小板纤维蛋白修复兔牙周骨缺损

目的探讨组织工程骨Bio-Oss骨复合富血小板纤维蛋白（PRF）修复牙周骨缺损中骨形成蛋白2（BMP-2）、骨保护素（OPG）和核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的表达及意义。 方法3月龄雄性新西兰大白兔36只,采用随机数表法分为4组,每组9只,制备单侧牙周骨缺损模型,于骨缺损处分别植入Bio-Oss骨（Bio-Oss组）、PRF（PRF组）和Bio-Oss/PRF复合物（Bio-Oss/PRF组）,以未植入任何材料者作为空白对照。术后4、8和12周处死动物,行大体观察、Masson染色及BMP-2、OPG、RANKL免疫组化观察,并对其表达进行析因设计的方差分析。 结果Masson染色结果显示,Bio-Oss/PRF组术后8周时见部分成熟骨,12周见骨板形成,骨成熟度较高。析因分析显示Bio-Oss组在4、8和12周时BMP-2表达量逐渐增高,差异有统计学意义（F = 51.30,P<0.001）;OPG表达量随时间延长先升高后减低,差异有统计学意义（F = 167.03,P<0.001）;RANKL表达量随时间延长逐渐减低,差异有统计学意义（F = 5.39,P = 0.046）。PRF组在4、8和12周时BMP-2表达量无统计学意义（F = 0.68,P = 0.544）;OPG和RANKL表达量随时间延长逐渐减低,差异有统计学意义（F_OPG = 1070.93,P_OPG<0.001;F_RANKL = 2306.15,P_RANKL<0.001）。Bio-Oss/PRF组在4、8和12周时BMP-2、OPG和RANKL表达量逐渐降低,差异有统计学意义（F_BMP-2 = 13.29,P_BMP-2<0.001;F_OPG = 237.91,P_OPG<0.001;F_RANKL = 132.48,P_RANKL<0.001）。空白对照组在4、8和12周时BMP-2和OPG表达量先升高后减低,差异有统计学意义（F_BMP-2 = 88.33,P_BMP-2<0.001;F_OPG = 30.06,P_OPG<0.001）,RANKL表达量随时间推移逐渐减低,差异有统计学意义（F = 56.52,P<0.001）。 结论Bio-Oss骨复合PRF应用可促进成骨以修复牙周骨缺损。     

聚乳酸与重组人骨形成蛋白-2复合植入块修复兔下颌骨缺损的早期观察

采用冷冻干燥法，将聚乳酸（ＰＬＡ）制成多孔成形块状，并将ＰＬＡ与重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）有效的复合，植入兔下颌骨缺损动物模型，在术后２，４周通过Ｘ线片、组织学观察缺损部位的骨生成情况。结果表明：ＰＬＡ－ｒｈＢＭＰ－２植入组术后２周就有部分新骨形成，术后４周骨生成明显；而单独植入ＰＬＡ组术后４周仅有少量新骨生成。钙含量测定显示ＰＬＡ－ｒｈＢＭＰ－２组高于ＰＬＡ组。结果提示：ＰＬＡ为ＢＭＰ的有效传递系统，ＰＬＡ－ｒｈＢＭＰ－２复合植入块是一种有应用潜能的人工骨替代物。