PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路在人舌鳞癌细胞耐药中的作用

目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamycin、p70S6K抑制剂LY2584702作用该通路各个环节。Western blot检测通路抑制剂作用后相关蛋白的变化。Cyto-ID荧光染色检测自噬体的形成。流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:Western blot结果显示加入抑制剂后舌鳞癌细胞Beclin1表达分别高于对照组,LC3II与LC3I以及Bax与Bcl-2的比值均升高,该通路的p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白均有下降(P<0.05)。流式结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞凋亡率分别较对照组升高(P<0.05)。Cyto-ID荧光染色后结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞自噬小体的数目明显高于对照组(P<0.05)。对比两组细胞显示加入抑制剂后的Cal27细胞发生凋亡与自噬的水平高于Cal27/CDDP(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路可诱导舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP发生凋亡与自噬,激活的PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路抑制细胞凋亡与自噬是Cal27/CDDP细胞产生顺铂耐药的原因之一。     

mTOR调控口腔鳞状细胞癌增殖转移的机制研究

目的：研究Toll样受体4（TOLL-like receptor 4,TLR4）分子高表达与口腔鳞状细胞癌预后的关系,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通过TLR4信号通路间接调控口腔鳞状细胞癌增殖转移的潜在机制。方法：采用免疫组织化学法检测50例口腔鳞状细胞癌患者病理切片中TLR4的表达;使用mTOR抑制剂(雷帕霉素)作用于口腔鳞状细胞癌细胞系CAL27后,再用LPS激活TLR4信号通路,通过MTT法检测CAL27细胞的增殖能力,Transwell法检测CAL27细胞的迁移能力, Western 免疫印迹检测其对肿瘤细胞中NF-κB 及MAPK信号通路的影响。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果：TLR4分子高表达与口腔鳞状细胞癌预后差显著相关（P<0.05）;雷帕霉素能够显著抑制TLR4激活后的CAL27细胞的增殖和迁移能力（P<0.01）,显著抑制TLR4下游的NF-κB 及MAPK信号通路（P<0.01）。结论： mTOR通过TLR4信号通路调控口腔鳞状细胞癌的增殖与转移,有望成为治疗口腔鳞状细胞癌的新靶点。     

RNA干扰XBP1基因表达对口腔鳞状细胞癌生物学特性的影响研究

目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中X盒结合蛋白1(XBP1)的表达及观察抑制其表达后对人口腔鳞状细胞癌Tca8113增殖凋亡的影响,并探讨其机制。方法:RT-PCR检测42例口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中XBP1基因的mRNA表达;NC-siRNA和XBP1-siRNA转染至Tca8113细胞内,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,CCK8实验、流式细胞仪分别检测XBP1基因转染对细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达的变化。结果:口腔鳞状细胞癌中XBP1基因的mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.01);转染XBP1-siRNA能够显著降低XBP1的蛋白表达,降低细胞的存活率,促进细胞的凋亡,上调Cleaved caspase3蛋白表达,下调β-catenin、Cyclin D1蛋白表达(P<0.01)。结论:RNA干扰沉默XBP1基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低Tca8113增殖及诱导细胞凋亡。     

MicroRNA-27b通过靶向调控FZD7抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖

目的探讨microRNA-27b(miR-27b)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响及其作用的分子生物学机制。方法 MTT方法检测细胞增殖水平;实时定量PCR方法检测miR-27b表达水平以及卷曲蛋白7(Frizzled7,FZD7)、cyclin D1和c-myc的信使RNA(mRNA)表达水平;Western blot方法检测FZD7的蛋白表达水平;荧光素酶报告基因方法检测miR-27b与FZD7的靶向关系以及Wnt信号通路的活性。结果 miR-27b在口腔鳞状细胞癌细胞株中表达降低;过表达miR-27b可以显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖;miR-27b可以靶向FZD7并抑制FZD7的表达及其下游的Wnt信号通路。结论 miR-27b通过靶向抑制FZD7的表达来抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖,其机制可能与抑制FZD7介导的Wnt信号通路的激活有关。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂在舌鳞癌细胞系增殖和凋亡中的作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对舌鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:LY294002处理Tca8113细胞,MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及ELISA分析LY294002作用前后p-Akt及Akt蛋白的表达。结果:随LY294002浓度(0、10、25、50、75μmol/L)的增加及作用时间(24、48 h)的延长,实验组Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关LY294002干预细胞24 h后,细胞凋亡率显著高于未干预组,p-Akt蛋白表达明显降低,而总Akt表达无显著改变。结论:LY294002可诱导Tca8113细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路的效应分子p-Akt的活化有关。     

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶通路介导的p53基因抑制口腔鳞状细胞癌增殖和侵袭的实验研究

目的 探讨人重组p53腺病毒（rAd-p53）注射液抑制口腔鳞状细胞癌增殖和侵袭的分子机制。方法 采用 rAd-p53注射液转染人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113,观察p53基因过表达对该细胞系增殖及侵袭能力的影响,并用蛋白免疫印迹的方法检测Ad-p53转染前后Tca8113细胞系内丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT）信号通路相关蛋白,细胞周期及凋亡调控蛋白细胞周期素D1（Cydin D1）、P21、Bcl-2的表达。结果 Ad-p53 转染后显著抑制Tca8113细胞系增殖和侵袭（P<0.01）,并促进细胞凋亡（P<0.001）。蛋白免疫印迹结果显示,rAd-p53 转染后显著提高了Tca8113细胞P53和P21蛋白的表达,同时显著下调了Cydin D1、Bcl-2蛋白的表达及AKT蛋白的磷酸化（P<0.01）。结论 AKT信号通路可能是p53引起的口腔鳞癌细胞增殖和侵袭抑制的关键分子机制,Cyclin D1、P21和Bcl-2蛋白可能是AKT信号通路的下游调控基因,AKT信号通路及下游调控基因有望成为肿瘤基因治疗靶点。     

七氟烷通过MAPK/STAT3信号通路诱导人口腔舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探究七氟烷对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞的凋亡机制.方法:用2～10 μmol/L七氟烷作用体外培养人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞.MTT实验检测细胞活力;Hochest/PI双染法以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测MAPK/STAT3信号通路中相关蛋白表达含量的变化以及通过加入...     

可利霉素对口腔鳞癌细胞生物学活性的影响

目的: 体外评价可利霉素对口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤活性。方法: 梯度浓度可利霉素分别处理口腔鳞状细胞癌细胞（HN6/HB96细胞系）,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,绘制生长曲线;采用划痕实验分析细胞迁移能力;采用平板克隆形成实验分析细胞克隆形成能力;采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用 SPSS 18.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 可利霉素浓度依赖性抑制HN6/HB96的体外增殖,随着药物浓度增加,细胞迁移和克隆形成能力显著下降（P<0.05）;可利霉素使处理过的口腔鳞状细胞癌细胞G1期比例显著升高,S期和G2/M期比例显著下降,细胞周期阻滞于G1期（P<0.001）。可利霉素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡,随着药物浓度增加,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。结论: 可利霉素体外抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生物学活性,为可利霉素用于口腔鳞状细胞癌的治疗提供了实验依据。     

敲低DDIT4通过ERK1/2通路抑制口腔鳞状细胞癌增殖和侵袭

目的:研究敲低DNA损伤诱导转录子4(DDIT4)通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路抑制口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖和侵袭.方法:培养OSCC细胞系CAL27、Tca8113、SCC9及人正常口腔黏膜细胞系HOK,检测DDIT4的表达水平.将Tca8113随机分为对照组、si-阴性对照(NC)组、si-DDI...     

趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在口腔鳞状细胞癌细胞增殖和迁移中的作用

目的 检测趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在口腔鳞状细胞癌细胞中的表达及其在肿瘤细胞增殖和 迁移中的作用。方法 采用逆转录聚合酶链式反应和Western blot法检测20例口腔鳞状细胞癌组织、颈部淋巴结组织、舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113、颊鳞状细胞癌细胞株Bca885和10例正常口腔黏膜组织中CXCR4的表达,采用逆转录聚合酶链式反应检测CXCL12的表达,通过MTT法检测细胞的增殖能力,通过趋化实验观察CXCR4特异性配体CXCL12对口腔鳞状细胞癌细胞的趋化迁移作用。结果 1）在口腔鳞状细胞癌组织、Tca8113细胞及Bca885细胞中, CXCR4 mRNA的相对表达量分别为2.31±1.13、1.89±1.20、1.67±1.10,CXCR4蛋白的相对表达量分别为1.36±0.15、1.85±0.34、1.97±0.23,正常口腔黏膜组织在mRNA及蛋白质水平均未检测到CXCR4表达。口腔癌患者颈部淋巴结组 织中,CXCL12 mRNA表达量的平均值为1.14±0.87,而口腔鳞状细胞癌组织和正常口腔黏膜组织未检测出CXCL12的 表达。2）口腔鳞状细胞癌细胞在CXCL12作用下增殖反应明显增强,CXCR4抗体可明显抑制肿瘤细胞的增殖。3）趋化实验显示CXCL12可诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生明显迁移,在30~100 ng·mL-1的范围内,诱导口腔鳞状细胞癌细 胞迁移的作用呈明显量效关系。结论 CXCR4/CXCL12受体配体系统可介导口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移, 在癌细胞向颈部淋巴结转移中发挥着重要作用。     

三氧化二砷纳米粒对舌鳞癌细胞PI3K/AKT通路的影响

目的：探讨三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用前后PI3K/AKT信号通路关键因子表达情况。方法：使用MTT的方法观察三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用后的存活率情况,并用使用Western blot检测方法检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白PI3K、p-AKT、AKT的表达和变化。结果：三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌细胞作用后,MTT显示舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制,且具有浓度依赖性,PI3K/AKT信号通路关键因子PI3K、p-AKT、AKT表达降低。结论：三氧化二砷纳米粒降低舌鳞癌细胞的PI3K/AKT通路信号传导。     

HER2基因在唾液腺恶性多形性腺瘤细胞增殖、周期、凋亡中的作用

目的:通过体外抑制唾液腺恶性多形性腺瘤（malignant pleomorphic adenoma,MPA）中人表皮生长因子受体2（Human epithelial growth factor receptor 2,HER2）,分析其与肿瘤细胞增殖、周期和凋亡等恶性生物学行为的相关性,以期评估其作为靶向治疗位点的可能性。方法:检测MPA细胞系中HER2蛋白表达及基因扩增情况,应用靶向抑制剂处理肿瘤细胞,检测肿瘤增殖、周期、凋亡等生物学行为的改变,HER2蛋白表达改变及其对下游通路的影响。采用SPSS 16.0软件包进行独立样本t检验。结果:SM-AP1、SM-AP4细胞中均存在HER2蛋白表达及HER2基因扩增,应用HER2靶向抑制剂可以显著降低肿瘤细胞的增殖能力,阻滞细胞周期进程,诱导肿瘤细胞凋亡,并且HER2下游PI3K/Akt和MAPK/ERK细胞通路受到抑制。结论:MPA肿瘤细胞系中存在HER2基因过表达及扩增,HER2在MPA恶性生物学行为中扮演重要角色。抑制HER2,可以改善MPA的恶性生物学行为。     

Hippo/YAP信号通路与细胞增殖相关信号通路交叉作用的研究进展

Hippo/YAP信号通路首次被发现于果蝇中,在哺乳动物中具有高度保守的特性,可通过直接或间接地调节细胞增殖、程序性细胞死亡以起到平衡机体内环境稳态、维持器官大小的作用.YAP作为Hippo信号通路中的一个转录共激活因子,与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)、Wnt/β-联蛋白、细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2等通路中相关分子相互作用,使得Hippo通路与其他增殖调控相关信号通路形成“交通”,构成一个复杂的信号通路网,共同调控细胞的增殖.本文就目前对Hippo信号通路中共激活因子YAP与增殖调控信号通路间的交叉影响及其机制的研究进展作一综述.     

Expression and alterations of the PTEN / AKT / mTOR pathway in ameloblastomas

Objectives:  Recently, an allelic loss of phosphatase and tensin homologue (PTEN) was shown to occur in ameloblastomas. In carcinogenesis, loss of PTEN allows for overactivity of the phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B (PI3K / AKT) pathway inducing an upregulation of mammalian-target of rapamycin (mTOR) and its downstream effector ribosomal-subunit-6 kinase (S6K); allowing for uncontrolled cell proliferation, apoptosis inhibition and cell cycle deregulation.
Methods:  Thirty ameloblastomas and five dental follicles were studied, looking at the immunohistochemical expression of total PTEN and AKT, as well as their phosphorylated (p) active forms, and the downstream effector and indicator of mTOR activity p70 ribosomal-subunit-6 kinase (pS6K). Also assessed was the expression of extracellular-signal-regulated kinase (ERK), which cross talks with AKT.
Results:  Total PTEN was absent in 33.3% of ameloblastomas, while its stabilized, phosphorylated^{ser380 / thr382 / thr383} form was absent in 83.3% of tumors. In contrast, AKT was expressed in 83.3% of ameloblastomas, showing high expression of the p-thr³⁰⁸AKT and p-ser⁴⁷³ AKT forms in 93.3% and 56.6% of cases, respectively. Further, the mTOR activated pS6K^{ser240 / 244} was detected in 86.7% of ameloblastomas, while ERK was overexpressed in 70.0% of the cases.
Conclusion:  Immunohistochemical analysis of aberrant signaling in the PI3K/AKT/mTOR pathway in ameloblastomas may represent a valuable tool for elucidating pathogenesis, aggressiveness and selecting optimal therapeutics.     

The PI3K/Akt signalling pathway may play an internal role related to abnormal condylar growth: a preliminary study

Developmental deformity of the mandible is one of the most common craniofacial malformations and is closely related to abnormal condylar growth. In this study, the role of PI3K/Akt signalling in the regulation of chondrocyte proliferation and hypertrophic differentiation in the condylar cartilage was studied. Immunohistochemical staining was used to investigate the expression of PI3K and p-Akt in the rat condyle cartilage. Rat condylar chondrocytes were cultured for the investigation of chondrocyte proliferation and hypertrophic differentiation when PI3K/Akt was inhibited. In addition, organ culture of the rat mandibular condyle was performed to evaluate the condyle cartilage growth while PI3K/Akt was inhibited. PI3K-positive cells and p-Akt-positive cells showing cytoplasmic staining were found to be present in the condylar cartilage. Reduced cell proliferation was observed in the culture of rat condylar chondrocytes when PI3K/Akt was inhibited; however, the hypertrophic differentiation level was increased. The proliferative zone thickness of condylar cartilage in the experimental group was less than that in the control group (P = 0.00185), but the hypertrophic zone was greater than that in the control group (P = 0.01048). PI3K/Akt signalling exerts opposite influences on chondrocyte proliferation and hypertrophic differentiation of the condylar cartilage, and these data suggest that PI3K/Akt is a potential intracellular regulation signal pathway in condylar cartilage development.     

Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase amplifies TEGDMA-induced apoptosis in primary human pulp cells

Cytotoxicity of triethylene glycol dimethacrylate (TEGDMA), a co-monomer of dental resinous restorative materials, is firmly established in vitro, but the molecular mechanisms are unknown. Here we examined apoptosis and necrosis induced by TEGDMA in human primary pulp cells. The levels of apoptotic and necrotic cell populations differentially increased after exposure to increasing concentrations of TEGDMA. A two-fold increase in the percentage of apoptotic cells was induced by 1 mmol/L TEGDMA. However, a population shift among cells in apoptosis and necrosis was detected when cell cultures were exposed to 2 mmol/L TEGDMA. Inhibition of the MAP Kinase/ERK pathway had no influence on cell survival, but inhibition of phosphatidylinositol 3 kinase (PI3-Kinase; Akt/protein kinase B) by LY294002 amplified TEGDMA-induced apoptosis. Moreover, Akt phosphorylation was inhibited in the presence of TEGDMA. These results suggest that depression of PI3K signaling may be a primary target in TEGDMA-induced apoptosis.