转录因子Ets-2调控小鼠成釉细胞MMP-20基因表达的研究

目的:通过研究Ets-2转录因子对调控小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,进一步明确Ets-2在釉质发育中的作用。方法:应用免疫组化方法观察出生后5d小鼠切牙成釉细胞中Ets-2的表达;在小鼠成釉细胞中分别转染200ng pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-2和Ets-2siRNA后,利用实时定量RT-PCR法检测MMP20基因表达的不同变化;用双荧光素酶报告基因检测系统分析Ets-2对MMP-20启动子突变后转录活性的影响。结果:免疫组化显示Ets-2在成釉细胞中呈阳性表达。实时定量RT-PCR研究发现Ets-2过表达后,MMP-20表达水平显著增加;当Ets-2基因沉默后,MMP-20表达水平则显著下降。双荧光素酶报告基因检测系统检测显示,转染pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-2的实验组与对照组相比,MMP-20启动子的转录活性升高;对启动子Ets潜在结合部位进行定点突变后,MMP-20启动子的转录活性显著下降,Ets-2丧失上调MMP-20启动子转录活性的作用。结论:小鼠成釉细胞核中Ets-2可通过MMP-20启动子上Ets潜在结合位点,上调MMP-20基因表达水平。     

TGF-β1调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)启动子转录活性的研究

目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响.方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列.利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852 bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接.经酶切反应初步鉴定后,以pMD18-T-MMP-20为模板,利用PCR方法获得带酶切位点的MMP-20启动子片段(2842 bp),并与pGL3-Basic载体连接.pGL3-MMP-20瞬时转染小鼠成釉细胞系(ALC)过夜后,在培养基中加入1 ng/mL TGF-B1,12 h后检测荧光素酶的活性.结果:经酶切反应和测序结果证实MMP-20启动子成功插入pGL3-Basic质粒.与pGL3-Basic质粒转染相比较,转染pGL3-MMP-20后荧光素酶活性明显增强;培养基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20荧光素酶活性进一步增强.结论:外源性MMP-20启动子在成釉细胞中被激活;TGF-β1能增强pGL3-MMP-20荧光素酶活性,提示釉质发育过程中,TGF-β1具有调节MMP-20基因表达的生物学功能.     

EGF/EGFR/ErbB2调控成釉细胞MMP-20基因表达的研究

目的:研究EGF/EGFR/ErbB2信号通路对小鼠成釉细胞中基质金属蛋白酶-20(matrix metalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用.方法:用定时定量RT-PCR、双荧光素酶报告基因检测系统分析EGF/EGFR/ErbB2调控MMP-20基因的表达、EGF调控MMP-20启动子的主要区域、MAPK信号通路阻断剂对EGF调控MMP-20转录活性的影响、转录因子Jun家族介导EGF/ErbB2对MMP-20转录活性的调控;用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统分析EGF/ErbB2、C-Jun对MMP-20基因启动子转录活性的影响.结果:成釉细胞经20 ng/mL EGF刺激后,MMP-20的基因表达上调(P＜0.05),MMP-20启动子在(-157～+23)之前的区域转录活性增强(P ＜0.05);EGFR、ErbB2、ERK阻断剂均能抑制EGF对MMP-20基因表达的调控(P＜0.05);转录因子C-Jun介导EGFR/ErbB2上调MMP-20基因的表达(P＜0.05);突变MMP-20启动子的AP1结合位点后,MMP-20基因表达的水平下降(P＜0.05),同时EGF/ErbB2也失去上调MMP-20基因表达水平的作用.结论:在成釉细胞中EGF通过EGFR/ErbB2 ～ ERK～C-Jun信号通路对MMP-20基因的表达起到调控作用.     

基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1在口腔鳞状细胞癌中的表达研究

目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关性,探讨其在口腔鳞状细胞癌发生发展中的作用。方法 取20例正常口腔黏膜、40例口腔鳞癌(高、低分化鳞癌各20例),应用免疫组织化学SP法检测上述标本中MMP-9及TIMP-1的表达和分布。结果 口腔高分化鳞癌、低分化鳞癌组织中MMP-9、TIMP-1的表达均高于正常口腔黏膜组织(P<0·05)。口腔高分化鳞癌、低分化鳞癌、正常口腔黏膜组织中,MMP-9表达强度依次递增,TIMP-1表达强度依次递减。结论 MMP-9可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展中起重要作用,其活性受TIMP-1的负性调控。     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-3在大鼠牙周炎模型中的表达

目的 研究不同时期、不同严重程度的大鼠牙周炎模型中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-3（MMP-3）的表达和分布特征,探讨二者在牙周炎发生发展中的作用。方法 对大鼠牙周组织标本的石蜡切片进行MMP-2和MMP-3的免疫组化染色,并进行图像定量分析。结果 MMP-2和MMP-3在牙龈炎和牙周炎的牙龈上皮中呈强阳性表达,在牙周炎的牙周组织中,主要在牙周膜成纤维细胞、破骨细胞等细胞中呈强阳性表达。MMP-2和MMP-3的变化趋势为在健康牙周组织中呈弱阳性表达,急性龈炎和急性牙周炎中呈强阳性表达,到慢性牙周炎时期,表达较急性期有所降低。结论 MMP-2和MMP-3在牙周炎症组织中,随着炎症进程呈现不同特征的表达,可能直接参与牙周组织的炎性破坏。     

成釉细胞瘤基质金属蛋白酶-2表达的初步研究

目的:分析基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在成釉细胞瘤中的表达,比较其在成釉细胞瘤各病理类型间的差异及与侵袭性的关系.方法:收集2005—2009年于北京大学口腔医院手术所得成釉细胞瘤石蜡标本26块,对标本进行免疫组织化学(免疫组化)染色.MMP-2为一抗,在高倍镜...     

基质金属蛋白酶MMP-2在龋病发展过程中的表达研究

目的：观察基质金属蛋白酶MMP-2在健康及不同程度龋损牙齿牙髓中的表达，初步研究MMP-2与龋病发展的关系。方法：以健康、浅龋和深龋牙齿中牙髓组织为研究对象，利用免疫组化、RT—PCR、实时荧光定量PCR和Western印迹检测MMP-2在其中的表达差异。采用单因素方差进行统计学分析。结果：组织标本免疫组化显示MMP-2在健康组和浅龋组中呈弱阳性表达，在深龋组中则表达强阳性。在健康组中仅表达于成牙本质细胞中，而在龋病组中牙髓细胞亦有表达。实时荧光定量PCR和Western印迹均检测到MMP-2在深龋组中表达明显高于其他两组，健康组和浅龋组表达无明显差异。结论：MMP-2的表达部位和强度与龋病的进展相关。     

巨噬细胞移动抑制因子和基质金属蛋白酶2在口腔癌生长和转移中的作用

目的研究口腔癌中基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）在肿瘤生长和转移中的作用及二者之间的关系。方法收集口腔癌标本42例、正常口腔粘膜10例,采用免疫组化的方法检测MMP-2和MIF的表达,并分析二者之间及其和肿瘤分期、淋巴结转移的关系。结果口腔癌中MMP-2和MIF的表达均较正常组织明显增加,口腔癌中MMP-2和MIF的高表达和肿瘤的临床分期及淋巴结转移有关,同时二者的高表达存在一定的一致性。结论在口腔癌中MMP-2和MIF参与了肿瘤的生长和转移,但MMP-2的调控机制还是需要进一步研究的课题。     

基质金属蛋白酶-20及其与牙体硬组织疾病的关系

基质金属蛋白酶-20在釉质形成的分泌期和转换早期大量表达,水解基质蛋白,促进牙体组织的晶体生长和矿化。本文就基质金属蛋白酶-20的结构、作用特点及病理意义等研究现状进行综述。     

基质金属蛋白酶-2在人慢性牙周炎肥大细胞上表达的研究

目的观察基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在慢性牙周炎牙龈组织中肥大细胞上的表达,探讨MMP-2-tryptase双阳性肥大细胞(mast cells,MCs)在慢性牙周炎发病机制中的作用。方法将45例参试者依据慢性牙周炎的病变程度分成3组:健康对照组15例;轻度牙周炎组15例;重度牙周炎组15例。牙龈标本经10%福尔马林液固定48 h;制作牙龈组织连续切片,HE染色,光学显微镜下观察组织学改变;采用免疫荧光双染色法,荧光显微镜下观察牙龈组织中MMP-2-tryptase双阳性MCs的表达情况。结果与健康对照组相比,轻度和重度慢性牙周炎组牙龈组织MMP-2-tryptase双阳性MCs密度均显著升高(P<0.01);重度慢性牙周炎组牙龈组织MMP-2-tryptase双阳性MCs密度显著高于轻度牙周炎组(P<0.05)。结论慢性牙周炎牙龈组织MMP-2-tryptase双阳性MCs密度与牙周炎病变程度的趋势相一致,MMP-2-tryptase双阳性MCs在牙周炎的进展中可能有促进作用。     

基质金属蛋白酶-13的研究进展

基质金属蛋白酶-13是人体内最重要的蛋白酶之一,属于基质金属蛋白酶超家族成员中胶原酶的一种.其主要功能是分解细胞外基质,参与人体多种生理和病理过程.该因子在人体内较多细胞中都能表达,其表达又受细胞生长因子、激素和基质金属蛋白酶组织抑制剂等因子的调节.基质金属蛋白酶-13与成人慢性牙周炎的发生发展密切相关,且作用底物主要是Ⅰ～Ⅲ型胶原.     

炎症状态下张应力对成骨细胞基质金属蛋白酶-13和金属蛋白酶抑制因子-1表达的影响

目的 观察炎症状态下周期性张应力对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)基质金属蛋白酶-13和金属蛋白酶抑制因子-1表达的影响.方法 收集100 ng/ml的经牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g-LPS)刺激小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)24 h后培养上清液,以20％稀释浓度作用于MC3T3-E1细胞24 h,采用四点弯曲细胞力学加载仪对正常培养与炎症状态下培养的MC3T3-E1细胞分别加载张应力0 h(对照组)、1h、3h、6h,采用荧光定量聚合酶链反应(real time PCR)和免疫组化法检测基质金属蛋白酶-13和金属蛋白酶抑制因子-1的mRNA及蛋白水平表达的变化.结果 炎症状态下周期性张应力作用于小鼠成骨细胞后,加力组基质金属蛋白酶-13和金属蛋白酶抑制因子-1的mRNA和蛋白表达量较非炎症状态下显著增加,并随着时间的延长而不断增加,且不同时间段的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 炎症状态下张应力可显著影响成骨细胞基质金属蛋白酶-13和金属蛋白酶抑制因子-1的表达,从而为炎症状态与张应力共同作用下基质金属蛋白酶-13和金属蛋白酶抑制因子-1参与牙周组织细胞外基质代谢提供了理论依据.     

环氧化酶-2抑制剂对舌癌细胞侵袭及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨环氧化酶-2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌细胞系Tca8113侵袭、黏附及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）分泌的影响。方法Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,免疫组织化学方法检测细胞Cox-2蛋白表达,细胞外基质黏附实验检测细胞黏附力,Boyden侵袭小室测定细胞的侵袭力,酶联免疫吸附法检测培养液中MMP-2的水平。结果Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,Cox-2蛋白表达明显受到抑制,Boyden侵袭小室细胞穿膜数和细胞外基质黏附率明显降低,同时,培养液中MMP-2水平也明显降低。结论Cox-2抑制剂塞来昔布可抑制Tca8113细胞Cox-2蛋白表达,其抑制细胞侵袭力和黏附率作用可能与抑制MMP-2分泌有关。     

JNK抑制剂对鼠实验性牙周病后基质金属蛋白酶-2mRNA影响的研究

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过量氟对大鼠切牙基质金属蛋白酶-20及其组织抑制剂表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙生长过程中基质金属蛋白酶-20（MMP-20）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分为对照组和给氟组。8 周后处死动物,获取切牙标本,免疫组化染色观察MMP-20和TIMP-2在大鼠切牙中的表达定位和氟对二者表达的影响。结果 MMP-20和TIMP-2 在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞以及成釉器均有阳性表达,给氟组MMP-20的表达明显弱于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;TIMP-2在两组的表达无显著性差异（P>0.05）。结论 过量氟可抑制MMP-20的表达, MMP-20和TIMP-2表达失衡,TIMP-2的抑制作用加强,致使釉基质蛋白清除延迟,导致矿化不全和釉质缺损。     

糖尿病大鼠牙齿移动后牙周组织基质金属蛋白酶-2表达的变化

目的探讨糖尿病大鼠正畸牙齿移动过程中基质金属蛋白酶- 2（MMP- 2）的分布和表达变化，研究糖尿病对牙周组织胶原代谢的影响。方法选用80只雄性SD大鼠, 牵引左侧上颌第一磨牙近中移动。实验组以链脲佐菌素腹腔注射制备1型糖尿病模型，3周后开始实验，分别于加力后0、3、7、14、21 d处死大鼠，应用两步免疫组化法检测大鼠牙周组织MMP- 2的表达。结果MMP- 2免疫组化结果显示牙齿移动后，牙周膜两侧MMP- 2表达增加，破骨细胞、骨细胞、成纤维细胞和部分成骨细胞MMP- 2染色阳性。图像分析结果显示实验组变化较对照组小。平均光密度表现动态变化，7 d最低，而后缓慢升高。加力后积分光密度逐渐升高，7 d达到顶峰，而后缓慢下降，21 d时仍维持在较高水平。结论未加力时，糖尿病大鼠颌骨胶原代谢增强。在正畸牙齿移动过程中，糖尿病大鼠骨质反应能力降低，胶原代谢较弱，牙齿移动时MMP- 2呈规律性变化，与牙齿正畸骨改建关系密切，在牙齿移动中起着重要的作用。     

基质金属蛋白酶抑制剂—1、—2在人牙髓组织和细胞中表达的免疫组化研究

目的 探讨基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1、-2）在人正常、炎症牙髓组织及体外培养的人牙髓成纤维细胞中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学方法,观察TIMP-1、-2在体外培养的牙髓成纤维细胞和正常、炎症牙髓组织中的表达。结果 TIMP-1、-2在体外培养的人牙髓成纤维细胞呈阳性表达;TIMP-1在正常及炎症牙髓的成牙本质细胞及牙髓细胞表达阳性;TIMP-2在正常牙髓的成牙本质细胞及血管内皮细胞呈阳性表达,在炎症组织表达减弱,炎症区淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞TIMP-1、-2均未见阳性表达。结论 TIMP-1、-2在人牙髓成纤维细胞及牙髓组织均有表达,为进一步研究TIMP在牙髓组织 的作用机理提供实验依据。     

基质金属蛋白酶对牙本质粘接耐久性的影响

基质金属蛋白酶(MMP)是一组分解细胞外基质的钙锌离子依赖型蛋白酶的总称。牙本质粘接剂酸性环境可以激活MMP酶原,进而分解暴露的胶原纤维,破坏粘接界面而导致粘接的失败。抑制MMP可有效增加粘接耐久性。本文就MMP在粘接过程中的激活和对粘接耐久性的影响以及MMP抑制剂的研究进展作一综述。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与牙周炎的关系

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子广泛地存在于人类各种肿瘤细胞和一些正常细胞中,能刺激基质金属蛋白酶的合成,促进细胞外基质的降解,在恶性肿瘤的浸润和转移、风湿性关节炎、心血管疾病、糖尿病和牙周炎的发生和发展中起着重要的作用。本文将就细胞外基质金属蛋白酶诱导因子及其与牙周炎关系的最新研究进展作一综述。     

基质金属蛋白酶-3和金属蛋白酶组织抑制因子-1在兔下颌牵张成骨改建期的表达及意义

目的　研究基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在下颌骨牵张后形成的新骨组织中的定位表达。方法　对8只成熟大耳白兔按每天1 mm的牵张速率延长双侧下颌骨6 mm,在牵张结束后第4周处死动物,取牵张区新骨标本作组织学和免疫组化检测。结果　MMP-3与TIMP-1在牵张骨痂中均呈高水平表达,MMP-3阳性信号主要定位于新生骨小梁边缘的成骨细胞和埋入新骨基质中的骨细胞,TIMP-1则定位于成骨细胞。结论　MMP-3及TIMP-1可协同调节胞外基质的降解来影响牵张成骨的改建过程。