应用组织工程口腔黏膜固有层修复颊黏膜缺损的实验研究

目的：评价组织工程口腔黏膜固有层修复颊黏膜缺损的效果。方法：以壳多糖-胶原凝胶为网架，与体外培养的Wistar大鼠口腔黏膜成纤维细胞构建壳多糖-胶原凝胶口腔黏膜固有层（FPCCL），用5-BrdU标记其中的成纤维细胞后．移植修复同种异体大鼠口腔颊黏膜圆形缺损（用直径8mm的圆形刀制成）；21只Wistar大鼠随机分为FPCCL组（12只）及对照组（9只）。术后行大体观察、创面直径测量、组织学及免疫组织化学观察；所有数据用SPSSll．5统计软件包进行t检验。结果：术后大鼠创面无感染，术后7d时，2组创面均被浅黄色膜覆盖，术后14、21d时，2组创面完全被新生黏膜覆盖。术后7d时，对照组创面比FPCCL组创面显著为小（P〈0．05）。组织学观察：术后7d，2组创面未完全上皮化。术后14、21d时，2组创面完全上皮化，有钉突；上皮复层，表面有角化物；新生固有层中细胞数量较多。含毛细血管。免疫组织化学染色，FPCCL组术后7、14、21d时阳性成纤维细胞出现在肉芽组织的细胞密集处和新生固有层中．与新生组织共同参与了颊黏膜缺损的修复重建。未出现免疫排斥现象。结论：FPCCL在修复重建颊黏膜缺损、限制创口收缩方面明显优于对照组。FPCCL作为颊黏膜缺损区永久性固有层替代物是可行和有效的。     

用PGA支架体外构建人口腔黏膜固有层的实验研究

目的:探讨利用可吸收生物材料聚羟基乙酸(polyglycolicacids,PGA)和口腔黏膜成纤维细胞(oralfibroblast,OFC)在体外构建组织工程化口腔黏膜固有层的可能性。方法:取细胞经体外培养,扩增至第3代,与PGA混合培养,形成细胞—生物材料复合物,每2d换液一次。动态观察细胞形态和粘附生长状况,于体外培养1周左右,取组织作电镜观察、组织学和RT-PCR检测。结果:复合物体外培养6d,OFC粘附在生物支架上,沿PGA纤维纵轴方向向两极伸展,细胞分泌基质并形成拉网状结构。HE染色和Masson染色均提示胶原纤维形成,RT-PCR显示胶原成分主要为Ⅰ型胶原。结论:应用PGA支架可以在体外成功构建口腔黏膜固有层组织。     

以胚鼠脱细胞真皮构建口腔黏膜固有层的实验研究

目的:探讨以胚鼠脱细胞真皮构建组织工程化口腔黏膜固有层的可行性。方法:取胚鼠皮肤制备脱细胞真皮支架,将体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞复合入胚鼠脱细胞真皮支架中,分别于接种后的1、4、7 d行HE染色、荧光显微镜及电镜检测。结果:胚鼠脱细胞真皮支架行HE染色显示未见细胞残留,表皮-真皮结合面保存波浪状基底膜样结构,HE、荧光显微镜及电镜检测均显示成纤维细胞复合入胚鼠脱细胞真皮支架后可黏附、生长、增殖。结论:以胚鼠脱细胞真皮体外构建的口腔黏膜固有层具有较好的组织构架,为进一步研究成纤维细胞-上皮细胞相互作用机制和构建全层口腔黏膜提供良好的实验模型。     

以胶原膜为支架构建组织工程化人口腔黏膜研究

目的：应用组织工程技术,以胶原膜为支架构建组织工程化人口腔黏膜。方法：体外培养、扩增人口腔黏膜角化细胞,通过细胞形态学及角蛋白免疫组化染色等对细胞进行定性研究,角化细胞接种于胶原膜上液面下培养1周后,升至液-气平面培养1周,光镜、电镜下观察大体组织形态及超微结构。结果：口腔黏膜上皮细胞可在生物支架材料胶原膜上粘附生长,并可形成上皮样组织,但无成熟的桥粒及基底膜样结构。胶原膜降解快,14d左右难以操作。结论：胶原膜与口腔黏膜角化细胞具有良好的生物相容性;由于降解速度和不易操作等特点,胶原膜作为支架材料构建组织工程化口腔黏膜有待深入研究。     

粘膜固有层替代物体外培养的实验研究

目的：体外构建粘膜固有层的替代物,方法：将粘膜固有层的成纤维细胞,胶原、培养基等成分混合形成凝胶,并在体外培养,结果,复合的胶原细胞凝胶具有粘膜固有层的类似结构,收缩程度受细胞数量和胶原浓度的影响。结论：构建的胶原细胞凝胶可作为粘膜固有层的替代物。     

三维组织工程化口腔黏膜体外构建研究

目的　探讨以脱细胞异体真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）为生物支架,体外构建三维组织工程化口腔黏膜（tissue-engineered mucosa,TEM）的可行性。方法　选择10例患者第三磨牙拔除时切除的龈瓣,每块大小1.0 cm × 0.5 cm。利用组织块法结合胰蛋白酶消化法体外培养、分离口腔黏膜上皮细胞和成纤维细胞。以ADM为生物支架,先将成纤维细胞按1 × 106个/mL密度接种于支架上,培养1周后再将上皮细胞按同密度接种于支架上,继续培养1周后,将支架移至气-液平面培养1周。HE染色及免疫组化染色观察TEM体外构建情况。结果　     eHE染色显示,构建的TEM含有类上皮层和固有层,其中上皮层细胞分化层次较好,固有层细胞层次不清。免疫组化染色显示,TEM上皮层和固有层中的标志蛋白均呈阳性表达。结论　在体外可以构建出组织结构类似口腔黏膜的三维TEM。     

大鼠口腔黏膜固有层前体细胞复合不同支架材料的实验研究

目的 探讨口腔黏膜固有层前体细胞(oral mucosal lamina propria progenitor cell,OMLPPC)在不同支架材料上的生物学特性.方法 利用免疫磁珠方法筛选OMLPPC,体外培养分成2组:A组正常培养,B组利用矿化诱导条件培养基诱导.2组细胞分别与陶瓷化骨、胶原-壳聚糖支架材料复合,...     

利用Nestin筛选分离培养大鼠口腔黏膜固有层前体细胞

目的：对大鼠口腔黏膜固有层中前体细胞进行分离培养。方法：以nestin为标志物,利用免疫磁珠间接筛选法,对大鼠口腔黏膜固有层前体细胞进行筛选;免疫荧光鉴定,并用MTT法、流式细胞术检测其特性。结果：筛选细胞在体外呈克隆性生长,免疫荧光显示表达nestin、波形丝蛋白,不表达角蛋白;增殖活力旺盛;流式细胞检测结果显示85.02%的细胞处于G0/G1期。结论：成功分离培养出大鼠口腔黏膜固有层的间充质源性前体细胞,可为组织工程组织构建提供种子细胞。     

口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞与PGA的生物相容性研究

目的：观察口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞在聚羟基乙酸(PGA)上的粘附生长情况，在体外形成活的黏膜样组织的能力。方法：口腔黏膜上皮细胞无血清、无饲养层体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；口腔黏膜成纤维细胞体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；①光镜、扫描电镜下观察两种细胞分别与PGA的粘附生长情况；②用MTT法检测口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞在PGA上的增殖情况，绘制细胞生长曲线。结果：口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞能够在PGA上粘附生长，其生长增殖能力优于平皿培养。结论：PGA与口腔黏膜上皮细胞或成纤维细胞具有良好的生物相容性，其降解产物无毒。不影响细胞生长及分泌基质。     

胶原凝胶复合快速成型材料异位成软骨的研究

目的:通过凝胶包埋软骨细胞复合于快速成型(RP)材料在动物体内异位成软骨情况,探讨其作为组织工程载体的可行性.方法:胶原凝胶包埋软骨细胞接种快速成型聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)三维多孔支架.体外培养3 d,扫描电镜和倒置显微镜观察细胞在支架内的生长状况.复合物植入动物体内,大体观察,组织学染色检查软骨形成情况.结果:扫描电镜和倒置显微镜观察软骨细胞旱圆形均匀分布于支架材料中.组织学结果显示软骨细胞在体内生长增殖良好,12周时可见软骨组织形成.结论:胶原凝胶包埋快速成型支架材料可作为载体复合细胞进行软骨组织工程研究.     

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??objective??To engineer and investigate three-dimensional tissue engineered oral mucosal composite sheets that closely resemble native mucosa. Methods??The tissues sized 1.0 cm×0.5 cm were collected from retromolar trigone while the impacted tooth being extracted in 10 patients. The tissue was explanted with epithelial layer and lamina propria together. The epithelial cells and fibroblasts were dissociated by trypsin digestion method after tissue cells proliferated??The cells were identified with immunofluorescence technique and Hematoxylin-eosin staining??First??1 × 106/mL fibroblasts were seeded onto the acellular dermal matrix??ADM??scaffold. The ADM scaffold containing the fibroblasts was kept in a submerged condition for 7 days with medium. Then the proliferated epithelial cells were co-cultured onto the ADM scaffold containing the proliferated fibroblasts at a density of 1 × 106/mL for an additional 7 days. The construct was raised to the air–liquid interface to induce stratification of keratinocytes by lowering the medium level for 7 days. Overall morphology was assessed by hematoxylin-eosin stain. At the same time??epidermal components were analysed by immunohistochemistry. Results??The newly developed TEM construct had a well-developed??multilayered and stratified squamous epithelium??consisting of a basal??intermediate and superficial layer and resembles native oral mucosa. But the structure of the lamina propria is not clear. Conclusion??Three-dimensional tissue engineered oral mucosal composite sheets which histologically resemble human oral mucosa can be established in vitro.     

点阵Er:YAG激光照射兔口腔黏膜后的组织学变化

目的: 研究点阵Er:YAG激光照射口腔黏膜后的组织学变化。方法: 使用Er:YAG激光照射家兔口腔黏膜,应用H-E、Masson、弹性纤维染色方法,评估照射后1、2、4周黏膜上皮厚度、固有层胶原纤维和弹性纤维含量。采用SPSS19.0软件包对实验结果进行统计学分析。结果: 点阵Er:YAG照射后,黏膜损伤区仅限黏膜上皮内,3~7 d后完全愈合,不遗留色素及瘢痕,黏膜上皮厚度显著增加（P<0.05）,固有层胶原纤维、弹性纤维含量显著增加（P<0.05）。点阵Er:YAG激光照射家兔口腔黏膜损伤小、愈合快,黏膜上皮重构,黏膜固有层胶原变性、收缩。结论: 点阵Er:YAG激光照射口腔黏膜后,胶原纤维及弹性纤维增生、重组,黏膜收紧,弹性增加。     

不同临床类型OLP中STAT3的表达及意义

目的：研究不同临床类型的口腔扁平苔藓（OLP）中细胞信号传导和转录激活因子3（STAT3）的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法分别检测10例正常口腔黏膜组织,29例非糜烂型OLP、16例充血糜烂型OLP损害中STAT3的表达。结果：STAT3阳性表达分布于细胞质和细胞核内。正常口腔黏膜、非糜烂型OLP、糜烂型OLP上皮层中STAT3阳性表达率分别为30．00％（3/10）、75．86％（22/29）、93．75％（15/16）;固有层中分别为0％（0/10）、65．52％（19/29）、100．00％（16/16）;三种类型上皮层两两之间相比,差异有统计学意义（P＜0．05）;固有层两两之间相比,只有非糜烂型OLP和糜烂型OLP之间差异没有统计学意义（P＞0．05）。结论：STAT3与OLP上皮层的炎症进程密切相关,对STAT3表达的研究将有助于进一步探究OLP的发病机制和早期临床诊疗。     

Comparative ultrastructure of oral epithelium in fish and amphibia

The palatal epithelium and adjacent lamina propria of two species of fish and two species of amphibia were examined with the electron microscope. Corydoras posessed an orthogonal orientation of collagen fibres in the lamina propria. An unusual cell was described in the lamina profria of Bufo which contained large rhomboidal masses in the cytoplasm, possibly representing stored material. All four species studied contained abundant tonofilaments in the oral epithelium although they were not grouped to form tonofibrils as one sees in human oral mucosa. All species contained demosomes connecting the epithelial cells, and a basement lamina separating the basal cells from the lamina propria. Individual mucous cells were frequently observed in the epithelium. Dense granules, usually about 0.13 microns in diameter and of unknown composition were present in the palatal epithelium of Amphiuma. Specialized cells containing large amounts of arganualr endoplasmic reticulum oriented into a lattice-work of hollow tubes were visualized in the oral epithelium of Corydoras. The outer-most cells of the Corydoras palatal epithelium appeared to undergo a dehydration and compacting of cytoplasmic components which suggested a primative type of keratinization.     

IP-10和IL-6在口腔扁平苔藓中表达的研究

目的:检测正常口腔黏膜与口腔扁平苔藓(OLP)黏膜的上皮和固有层结缔组织中干扰素诱导蛋白10(IP-10)、细胞因子白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,探讨其在OLP中的作用。方法:应用荧光实时定量RT-PCR技术检测10例OLP黏膜和6例正常口腔黏膜的上皮和固有层结缔组织中IP-10、IL-6mRNA的表达量。结果:OLP黏膜上皮和固有层结缔组织中IP-10、IL-6mRNA的表达均较正常口腔黏膜明显升高(P<0.05),但IP-10、IL-6mRNA的表达量没有明显差异(P>0.05)。结论:OLP组织中趋化因子IP-10、细胞因子IL-6表达量改变可能与其发生发展有一定关系。     

TGF β1和bFGF对鼠口腔黏膜固有层前体细胞的影响

目的探讨转化生长因子B1（TGF-β1）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）对大鼠口腔黏膜固有层前体细胞（OMLPPC）的增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法体外扩增培养OMLPPC,利用5ng／mLTGF-β1、10ng／mlbFGF单独及联合作用于OMLPPC,利用MTT方法检测OMLPPC的增殖,利用试剂盒检测其碱性磷酸酶活性,以RT．PCR方法检测各组矿化基因骨钙素（OCN）的表达。结果对细胞的增殖,3d时各组间未见显著性差异;7、14d,bFGF单独作用明显促进细胞的增殖（P〈0．05）,TGF-β1单独作用抑制细胞的增殖（P〈0．05）。TGF-β1＋bFGF组7d时增殖不受影响,14d时增殖变缓。碱性磷酸酶活性检测,对照组及bFGF组各时间点增加均无显著性差异。TGF．131组间7、14d比3d时ALP活性有显著性差异（P〈0．05）。TGF-131＋bFGF组14d时ALP活性显著增强（P〈0．05）。RT—PCR检测OCN结果显示,各组培养14d后,TGF-131组、TGF-β1＋bFGF组表达OCN,对照组、bFGF组未见表达。结论一定浓度的bFGF和TGF-131联合作用,不仅可保证OMLPPCs的增殖,而且能诱导并促进其向矿化方向的分化。