酵母双杂交系统的应用研究进展

酵母双杂交系统的应用范围已扩展到蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA、蛋白质与RNA以及蛋白与其它小分子间相互作用的研究。基于传统酵母双杂交系统的衍生体系包括 :单杂交、三杂交和逆向双杂交等。本文拟对酵母双杂交系统的原理、应用发展以及存在的不足作一简要介绍     

酵母双杂交系统的应用研究进展

酵母双杂交系统的应用范围巳扩展到蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA、蛋白质与RNA以及蛋白与其它小分子间相互作用的研究。基于传统酵母双杂交系统的衍生体系包括：单杂交、三杂交和逆向双杂交等。本文拟对酵母双杂交系统的原理、应用发展以及存在的不足作一简要介绍。     

酵母双杂交系统筛选和验证与RARα-V相互作用的蛋白

目的 利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白,研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能.方法 构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V,利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列,并通过酵母回转试验与GST pull-down技术进行验证.结果 成功构建诱饵质粒,且没有毒性、渗漏和自激活现象;利用酵母双杂交技术筛选到16个能与RARα-V相互作用的蛋白质;经酵母回转试验得到8个阳性克隆;并经GST pull-down技术在体外验证了RARα-V与JTV-1蛋白的相互作用.结论 在细胞内RARα-V与多种蛋白有相互作用,白血病的发病机制可能与这些蛋白相互作用所致的生物学功能改变有关.     

酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用

酵母双杂交系统是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法 ,蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。本文简述了酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用     

酵母双杂交系统及其应用研究进展

酵母双杂交系统(yeast two hybrid system)是Stanley Fields等提出并建立的一种直接于细胞内检测蛋白一蛋白之间相互作用的遗传学方法，其最突出的特点是能够在酵母这种繁殖迅速、遗传背景清楚且操作简便的体系中研究真核细胞的蛋白质之间的相互作用，并通过cDNA文库的筛选可以直接找到与未知蛋白质相互作用的DNA序列。酵母双杂交系统作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台，广泛地应用于真核基因的表达与调控、细胞粘合因子间的相互作用、信号传导通路以及细胞周期与分化、反式因子的鉴定与分离等诸多领域的基础研究。随着这个方法的广泛应用，在原有酵母双杂交体系上发展了大量的衍生系统：单杂交系统、逆向双杂交系统、三杂交系统。本文就酵母双杂交系统的原理和组成及应用等方面作一综述。     

酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用

酵母双杂交系统是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法，蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝／苏氮酸蛋白激酶，在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。本文筒述了酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用。     

酵母双杂交技术的影响因素及其实验策略

目的　为了研究蛋白质分子间的相互作用 ,以大T抗原和P5 3为阳性对照 ,建立酵母双杂交实验系统。方法　通过比较共转化、顺序转化和交配实验三种方法的优劣 ,分析了影响酵母转化效率的因素 ,与此同时还分析了酵母体内 β 半乳糖苷酶的活性。 结果　①顺序转化比共转化转化效率高 ;②质粒纯度是影响酵母转化效率的一个主要因素 ,与经典碱裂解法提取质粒相比 ,试剂盒提取质粒的转化效率明显高 ;③PEG浓度对转化效率也有一定影响 ;④β 半乳糖苷酶定量分析能够区分蛋白质分子间的强相互作用与弱相互作用 ,实验结果更可靠。结论　在此基础上 ,我们提出了一种共转化与交配实验有机结合的有效的酵母双杂交新实验策略 ,并将之成功运用于筛选NGAL(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin ,NGAL)相互作用蛋白实验。     

问：荧光共振能量转移技术的原理和基本应用？

答：随着生命科学研究的不断深入，对各种生命现象发生的机制，特别是对细胞内蛋白质-蛋白质间相互作用的研究变得尤为重要。一些传统的研究方法如酵母双杂交、磷酸化抗体、免疫荧光、放射性标记等方法应用的前提都是要破碎细胞或对细胞造成损伤，无法做到活细胞生理条件下对细胞内蛋白质-蛋白质间相互作用进行实时动态研究。荧光共振能量转移（FRET）技术的应用结合基因工程等技术正好弥补了这一缺陷。[第一段]     

利用酵母双杂交研究与Ca~(2 )CRAC通道Orail相互作用蛋白

目的:利用酵母双杂交等技术研究与CRAC通道蛋白Orail发生相互作用的蛋白质,从而揭示CRAC通道分子作用机制。方法:以Orail-C端为诱饵蛋白筛选大鼠海马和皮质cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,运用营养缺陷型培养,X-β-Gal蓝斑筛选等实验去除假阳性克隆,并通过GST-Pulldown体外实验验证其相互作用。结果:以Orai1-C端为诱饵最终筛出了几个阳性克隆,经测序分析,发现了其中一个感兴趣的蛋白。结论:Orail可以和该蛋白发生相互作用,其相互作用可能与CRAC通道功能调节有关。     

利用酵母双杂交研究与Ca2+CRAC通道Orai1相互作用蛋白

目的:利用酵母双杂交等技术研究与CRAC通道蛋白Orai1发生相互作用的蛋白质,从而揭示CRAC通道分子作用机制.方法 :以Orai1-C端为诱饵蛋白筛选大鼠海马和皮质cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质, 运用营养缺陷型培养,X-β-Gal蓝斑筛选等实验去除假阳性克隆,并通过GST-Pulldown体外实验验证其相互作用.结果:以Orai1-C端为诱饵最终筛出了几个阳性克隆,经测序分析, 发现了其中一个感兴趣的蛋白.结论:Orai1可以和该蛋白发生相互作用,其相互作用可能与CRAC通道功能调节有关.