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1.
目的 研究靶向转化生长因子-β1(TGF-β1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表达TGF-β1的影响,并观察其对HPMC超微结构的影响. 方法 利用pcDU6质粒构建两个靶向TGF-β1的shRNA真核表达载体pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2,使用脂质体介导转染腹膜透析液刺激下的HPMC,采用半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)检测shRNA表达载体对于TGF-β1基因和蛋白质表达水平的抑制效果,使用透射电镜观察HPMC超微结构的改变. 结果 HPMC暴露于4.25%腹膜透析液中48小时后,其上清中TGF-β1的浓度与对照组相比显著增高分别为(39.71±6.60)pg/10^5 cells和(16.32±2.71)pg/10^5 cells,P<0.01),1.5%腹膜透析液对于TGF-β1蛋白合成无明显影响;而预先转染了shRNA载体的两组与转染pcDU6载体(空载体)的组相比,其由4.25%腹膜透析液诱导的TGF-β1蛋白增高幅度明显减少,分别下降了39.2%和47.2%(P<0.01);两组转染不同的shRNA载体的HPMC之间相比TGF-β1浓度无显著差异,pcDU6载体(空载体)转染组与4.25%腹膜透析液刺激组TGF-β1浓度亦无显著差异.透射电镜显示HPMC暴露于4.25%腹膜透析液可导致细胞扁平、微绒毛减少和线粒体水肿等,而转染shRNA载体组细胞的改变相对较轻. 结论 pcDU6质粒载体介导的短发夹结构RNA(shRNA)能够明显抑制腹膜透析液刺激下的人腹膜间皮细胞TGF-β1的高表达,并减轻其超微结构的异常,提示shRNA表达载体可能有益于腹膜纤维化的防治.  相似文献   

2.
目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和TGF-β1反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达及细胞外基质分泌的影响.方法利用带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6)构建TGF-β1短发夹RNA的产生质粒,用pcDNA3.1(-)载体构建反义TGF-β1基因真核表达载体,采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF-β1RNA的pcDNA3.1(-)的载体质粒人高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-β1mRNA的表达以及纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)和胶原Ⅰ(ColⅠ)的mRNA表达.采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-β1蛋白质水平.结果HPMC在高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)的刺激下可明显上调TGF-β1的表达(P<0.01),TGF-β1反义RNA转染HPMC后,与对照组相比,转染24小时后,FN、ColⅠ、PAI-1 mR-NA分别下调17.0%、26.0%、9.6%(P<0.05).pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA干扰组较Gs LPS组及pcDU6空载体组明显下调TGF-β1的表达(P<0.01),pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组与pcDU6空载体组比较差异无显著性(P>0.05),pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA干扰组较pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组明显下调TGF-β1的表达(P<0.01).结论pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA能够明显抑制在高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)的刺激下的HPMC转化生长因子β1的基因表达,可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法.  相似文献   

3.
目的研究G9PAMAM纳米载体介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(shRNA)质粒(pCTGF-shRNA)对小鼠腹膜间皮细胞CTGF表达的影响。方法设计并构建质粒pCTGF1-shRNA、pCTGF2-shRNA和阴性对照pHK-shRNA;应用G9PAMAM将质粒分别转染4.25%葡萄糖刺激下的第3代小鼠腹膜间皮细胞;采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测细胞CTGFmRNA水平,采用WesternBlot检测CTGF蛋白含量。结果4.25%葡萄糖可刺激小鼠腹膜间皮细胞CTGF的mRNA和蛋白表达明显上调。pcTGF1-shRNA转染组和pCTGF2-shRNA转染组的CTGF表达较高糖组明显下调(P〈0.05),尤其以pCTGF2-shRNA组显著。pHK-shRNA转染组与高糖组比较,差异无显著性(P〉0.05)。结论G9PAMAM纳米载体可介导pCTGF-shRNA转染原代小鼠腹膜间皮细胞,并能抑制高糖诱导的CTGF表达上调,提示PAMAM介导的pCTGF-shRNA可有效地用于腹膜纤维化的基因治疗。  相似文献   

4.
目的探讨肝细胞生长因子对腹膜透析腹膜纤维化的防治作用及其机制。方法①MTT法测定肝细胞生长因子对腹膜间皮细胞增殖的影响;②酶联免疫(ELISA)法检测细胞培养液中纤连蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平;⑧逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)法检测FN、PAI-1及TGF-β1 mRNA的表达。结果肝细胞生长因子浓度〉30ng/ml时,可以改善高糖对腹膜间皮细胞增殖的抑制作用。腹膜透析液组FN、PAI-1、TGF-β1蛋白水平显著升高,肝细胞生长因子组FN、PAI-1、TGF-β1蛋门水平均显著减少。腹膜透析液组高糖上调腹膜间皮细胞FN、PAI-1、TGF-β1 mRNA的表达,肝细胞生长因子组使FN、PAI-1、TGF-β1 mRNA的表达水平下调。结论肝细胞生长因子能改善高糖对腹膜间皮细胞增殖的抑制作用,同时可以使腹膜间皮细胞FN、PAI-1、TGF-β1的表达水平下调。  相似文献   

5.
目的 观察不同浓度氟伐他汀对高糖腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)转化生长因子β(TGF-β)合成及细胞外基质产生的抑制作用.方法 体外培养HPMC,同步化24 h后分组,正常对照组、高糖腹透液组、高糖腹透液+氟伐他汀(108~106 mol/L)组.RT-PCR方法检测过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、TGF-β1、I型胶原(Collagen I)、纤维连接蛋白(Fibronectin)mRNA的表达.ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化.结果 高糖上调HPMC刺激后PPAR-γ、TGF-β1、Collagen I、Fibronectin mRNA的表达,12 h达到最高峰.与高糖组比较,氟伐他汀10-7M、10-6M可以降低高糖诱导的PPAR-γ、TGF-β1、Collagen I、Fibronectin mRNA的升高,差异有统计学意义(P〈0.01).氟伐他汀10-7M、10-6M可以降低高糖诱导的Fibronectin蛋白表达的升高(P〈0.01).结论 氟伐他汀可以降低高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞PPAR-、TGF-β1、Collagen I的表达进而达到减少纤维连接蛋白表达.  相似文献   

6.
目的通过研究干扰素-α(IFN-α)对高糖环境下腹膜间皮细胞(HPMCs)分泌纤维连结蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的影响,探讨其对腹膜透析相关性腹膜纤维化的防治意义。方法收集行不卧床持续腹膜透析(CAPD)尿毒症患者腹膜透出液中的腹膜间皮细胞,进行原代培养,传代细胞用于实验。设实验组和对照组,实验组加2.5%的葡萄糖及不同剂量的干扰素,培养不同时间分别收集上清液,用ELISA法检测其中的FN、TGF-β1、MMP-2含量,并进行统计学分析。结果各加2.5%葡萄糖的实验组FN含量及TGF-β1含量均高于对照组,差异具有显著性(P<0.05);加干扰素的实验组FN及TGF-β1含量均低于不加干扰素的实验组,差异具有浓度依赖性,浓度为1000u时达到高峰;MMP-2含量:对照组与实验组间无显著性差异。结论高浓度葡萄糖可促进腹膜间皮细胞表达FN、TGF-β1,但对MMP-2含量无显著影响。而干扰素对FN、TGF-β1具有相反的作用,提示其可能减少CAPD时细胞外基质的堆积,对预防、延缓腹膜纤维化有一定意义。  相似文献   

7.
目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法将原代培养的第3代RPMC随机分为对照组、高糖组、钴原卟啉(CoPP)+高糖组和CoPP组。同步培养72h后,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞TGF-β1和FNmRNA表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果高糖组、CoPP+高糖组和CoPP组的HO-1mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组,其中CoPP+高糖组显著高于高糖组;高糖组和CoPP+高糖组的FNmRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组;高糖组、CoPP+高糖组TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组,其中CoPP+高糖组显著低于高糖组。结论 HO-1可抑制高糖诱导的RPMCTGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。  相似文献   

8.
【目的】阐明Smad作用蛋白1(Smad interacting proteinl,SIP1)与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells)转分化(epithelial—mesenchymal transition,EMT)的关系,探讨TGF-β1可能通过调控SIP1引起腹膜间皮细胞EMT的机制。【方法】培养的人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)随机分为对照组(TGF-β1刺激Oh)和TGF-β1刺激组,通过western blot及realtime PCR检测细胞中E-钙粘素(E-eadherin)、紧密连接蛋白(claudinl)、波形蛋白(vimentin)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)在不同时间点(12h,24h,48h,72h)的表达;并通过western blot及realtime PCR检测相应时间点细胞中SIP1的表达。【结果】5ng/ml TGF-β1刺激后,HMrsV5细胞E-cadherin、claudinl蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性降低(P〈0.01);vimentin、FN蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性升高(P〈0.01);SIP1蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性上调(P〈0.01)。【结论】TGF-β1可能通过上调HMrSV5细胞SIP1表达诱导HMrSV5细胞EMT及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积,将为进一步研究腹膜纤维化的分子机制提供新的靶点。  相似文献   

9.
【目的】探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。【方法】胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链反应法(Semi—QuantitativeRT—PCR)检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;酶联免疫双抗夹心法(ELISA)检测细胞上清液中TGF—β1和CTGF蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。【结果】辛伐他汀能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF蛋白质水平(TGF—β1,P〈0.05;CTGF,P〈0.01),并下调其mRNA表达(TGF-β1,P〈0.01;CTGF,P〈0.05),两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】辛伐他汀能抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF的过度表达。  相似文献   

10.
目的探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASON)对人腹膜间皮细胞(HPMC)体外增殖及其分泌纤维连接蛋白(FN)的影响,初步探索腹膜间皮细胞对腹膜纤维化影响和TGFβ1反义寡核苷酸对其的干预作用,为临床防治腹膜纤维化寻找有效途径。方法①人腹膜间皮细胞原代培养,第三代用于实验;②合成特异性针对TGFβ1mRNA转译起始区ASON及正义、错义寡核苷酸,并和阳离子脂质体形成复合物;③将合成的寡核苷酸与第三代腹膜间皮细胞共同孵育24、48h,分为对照组(F12培养基组)、TGFβ1反义寡核苷酸组、TGFβ1正义寡核苷酸组和TGFβ1错义寡核苷酸组,采用MMT法观察细胞增殖,ELISA法测定细胞上清液内FN蛋白含量以及RT-PCR测定FNmRNA表达。结果①TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后,其细胞增殖率明显低于其它各组(P均<0.05);②TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后其上清液中FN蛋白质的含量明显降低;TGFβ1正义寡核苷酸组明显升高(P<0.05);③正义、反义和错义各组寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24h时FNmRNA表达与对照组比较,正义组上调22%,而反义组和错义组分别下调22%和11%。结论TGFβ1反义寡核苷酸能够抑制人腹膜间皮细胞增殖和FN的过度表达。  相似文献   

11.
目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)对转化生长因子(TGF-β1)表达的影响及内源性活性氧(ROS)在此过程中的调节机制。方法体外制备AOPP-HSA模型,原代培养人腹膜间皮细胞。采用ELISA法检测TGF-β1蛋白水平,采用RT-PCR半定量分析HPYCs中TGF-β1 mRNA的基因表达水平,同时应用流式细胞仪检测细胞内活性氧的水平。结果AOPP-HSA能显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达,同时增加细胞内ROS的生成,呈时间与剂量依赖关系(P〈0.01),不同浓度的抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸预处理细胞,可明显地降低细胞内ROS的生成量,同时显著地抑制AOPP-HSA诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达,呈剂量依赖关系(P〈0.01),其中维生素E(50μmol/L)组和NAC(10mmol/L)组抑制更加显著。结论体外制备的AOPP可显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达,部分可能通过内源性ROS介导细胞内信号转导途径调节此过程,抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸可显著降低细胞ROS的生成量和显著抑制TGF-β1的分泌与基因表达。此研究揭示抗氧化剂在防治腹膜纤维化发生过程也许是一种可行的治疗策略。  相似文献   

12.
目的观察血必净对高糖刺激后腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMC)增殖、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法原代培养PMC;并用MTT和ELISA法测定血必净对高糖(2.5%葡萄糖)作用下PMC增殖及其分泌HMGB-1、TGF-β1的影响。结果高糖能显著抑制PMC的增殖(P<0.05),而2~20mg/mL的血必净能部分逆转高糖对PMC增殖的抑制作用(P<0.05);高糖能显著增加PMC表达HMGB-1和TGF-β1(均P<0.05),2~20mg/mL的血必净能明显减弱高糖上调HMGB-1和TGF-β1的作用(均P<0.05)。结论血必净可能通过逆转高糖对PMC的增殖抑制作用,抑制高糖上调PMC表达炎症介质HMGB-1和致纤维化因子TGF-β1的作用,进而修复高糖所致的PMC的损伤,延缓腹膜纤维化,为改善间皮细胞损伤和防治腹膜纤维化提供实验依据。  相似文献   

13.
目的探讨腹膜透析液对大鼠腹膜结缔组织生长因子(CTGF)的表达及细胞外基质(ECM)合成的影响。方法将中南大学湘雅二医院动物实验中心提供的SD大鼠随机分为4组:正常对照组(Con)、生理盐水组(NS)、低糖透析液组(LG)、高糖透析液组(HG)。4周后,评价腹膜的功能。VG染色镜下测量腹膜胶原组织厚度。免疫组织化学方法检测CTGF、TGF-β1及纤连蛋白(FN)蛋白质的表达。采用RT-PCR检测大鼠腹膜组织中CTGF和TGF-β1mRNA的表达。结果LG、HG组与Con、NS组相比较,超滤量均显著下降(P〈0.05);HG组与LG组比较,其超滤量明显减少(P〈0.05)。D/Pcr的比较:HG组比Con、NS组升高(P〈0.05);D/DO的比较:HG组比Con、NS组明显下降(P〈0.05),LG组比Con组低(P〈0.05)。HG组腹膜胶原厚度比与其余各组均增厚(P〈0.05);LG组比Con组增厚(P〈0.05);HG组CTGF、TGF-β1、FN蛋白表达水平显著高于其他各组(P〈0.05);LG组显著高于Con、NS组(P〈0.05)。在Con及NS组中,TGF-β1、CTGFmRNA呈低水平表达,TGF-β1、CTGFmRNA在HG组中表达最高(P〈0.05)。结论腹膜透析液尤其是高糖腹膜透析液,能明显诱导大鼠腹膜CTGF的表达增强,并促使腹膜纤维化发生。  相似文献   

14.
目的比较三种非病毒载体转染方法转染人鼻咽CNE-2细胞。方法分别采用脂质体转染法、电穿孔转染法、磷酸钙纳米颗粒转染法将pEGFP-N1质粒DNA转染人鼻咽癌CNE-2细胞,转染24h后荧光显微镜观察EGFP的表达,计算转染率;MTT实验比较各转染方法对CNE-2细胞的细胞毒性。结果脂质体转染组的转染率为(51.9±2.8)%;电穿孔转染组的转染率为(42.8±2.6)%;磷酸钙纳米颗粒转染组的转染率为(48.1±2.3)%。经统计学分析,三种方法转染CNE-2细胞的转染率相互之间有显著的差异(P〈0.001);MTT结果显示,磷酸钙纳米颗粒转染法的细胞毒性最小。结论磷酸钙纳米颗粒转染法转染效率相对较高,而细胞毒性小,可作为转染CNE-2细胞的首选转染方法。  相似文献   

15.
目的 观察高糖对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cell RPMC)中β-连环蛋白(β-Catenin)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)2者mRNA及蛋白表达的影响.方法 胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组.分为:正常对照组;不同浓度葡萄糖(1.5%,2.5%,4.25%) 组作用24h;2.5% 高糖作用不同时间(8,12,24,34,48 h)组,细胞免疫组织化学法检测β-Catenin蛋白在细胞上的表达情况,RealTime-RT-PCR 技术检测β-Catenin、OPN、TGF-β1mRNA的表达.ELISA法检测OPN蛋白表达.结果高糖刺激下RPMC 的β-catenin表达增加,与0 h 组比较,在8h即出现(但不具有统计学意义),12h具有统计学意义,24h达到高峰,48h 仍存在,组间差异均有统计学意义(P<0.05);高糖可刺激RPMC OPN 的表达显著增加,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);TGF-β表达增加,在8h表达于较高水平,12h降低,24h达到高峰,48h仍存在,与0 h组比较,组间差异均有统计学意义(P<0.01);高糖刺激下,β-Catenin、TGF-β1 表达显著增加,呈剂量依赖性,组间差异具有统计学意义( P<0.05).结论 高糖通过上调β-Catenin、OPN的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,β-Catenin、OPN参与了腹膜间皮细胞透析相关性腹膜纤维化的病理过程.  相似文献   

16.
目的探讨辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞在肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)诱导后转化细胞因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代,分为五组(每组设3个样本):空白对照组(完全培养液)、单纯TNF-a(1000ng/L)诱导组和TNF-a(1000ng/L)诱导加低、中、高剂量辛伐他汀(2.5、5和10μmol/L)组。采用MTT(单四唑)检测各组间皮细胞的活性;半定量RT-PCR检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;ELISA检测细胞上清液中TGF-β1和CTGF的蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。结果辛伐他汀能显著改善TNF-a诱导后人腹膜间皮细胞的活性(P〈0.05),并能显著降低TNF-a诱导后人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达(P〈0.05),两者在蛋白质和基因水平均呈剂量依赖关系。结论辛伐他汀能抑制炎症状态下人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达。  相似文献   

17.
长期腹膜透析可导致腹膜纤维化,其主要特征是间皮细胞剥落和细胞外基质(ECM)的异常积聚所致的腹膜增厚,使腹膜透析效率降低。腹膜纤维化的产生是多种因素作用的结果,多种促纤维化细胞因子具有重要的调节作用,其中作用最为关键的是转化生长因子-β1(TGF-β1)。最近的研究显示,  相似文献   

18.
【目的】用pcDU6质粒载体构建介导转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)表达的质粒。【方法】针对TGF-β1的以GGCC开始的21碱基大小的片段,分引设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pcDNA3.1(一)载体(命名为pcDU6),两对DNA双链通过BamH Ⅰ酶切位点连接后形成中间由6个碱基序列间隔的反向互补序列.构建成TGF-β1短发夹RNA的产生质粒。【结果】经酶切、连接后构建成的质粒称之为pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2,经酶切与测序讧买构建成功.无任何碱基突变。【结论】成功构建了能表达TGF-β1 shRNA的质粒载体pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2,可能为临床防治长期腹膜透析病人的腹膜纤维化提供高效的方法。  相似文献   

19.
目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法将原代培养的第3代RPMC随机分为对照组、高糖组、钴原卟啉(CoPP)+高糖组和CoPP组。同步培养72h后,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞TGF-β1和FNmRNA表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果高糖组、CoPP+高糖组和CoPP组的HO-1mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组,其中CoPP+高糖组显著高于高糖组;高糖组和CoPP+高糖组的FNmRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组;高糖组、CoPP+高糖组TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组,其中CoPP+高糖组显著低于高糖组。结论 HO-1可抑制高糖诱导的RPMCTGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。  相似文献   

20.
目的:针对转化生长因子-β(TGF-β)Ⅱ型受体基因的不同部位,构建不同TG-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA(shRNA)表达质粒载体,在转录后水平抑制TGF-βⅡ型受体的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法:用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒pSilencer^TM 3.1-H1 neo vector中,构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3.1-H1-TGF-β R ⅡshRNA1、2、3、4。脂质体介导转染成人原代成纤维细胞,经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆。结果:3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3.1-H1-TGF-βRⅡ shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westem blotting均证实3种shRNA重组质粒中pSilencer^TM3.1-H1—TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA峰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达。结论:成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilenceir^M3.1—H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3,并筛选出特异而高效的阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆。此实验结果为进一步研究TGF-βⅡ型受体蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。  相似文献   

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