电针对家免Oddi括约肌运动及其相关脑肠肽的影响

背景:"经脉一脏腑相关"是针灸经络学说中主要的研究内容之一,课题以一个脏腑为基础研究其与多条经脉之间的关系,探讨经脉与脏腑之间是甭存在相对特异性.目的:通过电针足三阳经穴对家兔Oddi括约肌肌电发放及其相关脑肠肽胆囊收缩素浓度的影响,探讨针刺对Oddi括约肌的调整作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-01/2007-12在湖南中医药大学针灸推拿学重点实验室完成.材料:新西兰大耳白兔60只,体质量2.0～2.5 kg,雌雄不拘,随机分为空白组、阿托品组、足三里组、阳陵泉组、四白组、承筋组,每组10只.方法:各组兔用生理记录仪记录Oddi括约肌肌电活动1 h后,除空白组滴注生理盐水外,其余各组均静滴阿托品,静滴的同时足三里、阳陵泉、四白、承筋组分别电针相应腧穴20 min.主要观察指标:记录处理前、后Oddi括约肌肌电各1 h,放射免疫法检测血浆及Oddi括约肌组织内胆囊收缩素的浓度.结果:与阿托品组比较:空白组、叫白、足二里、阳陵泉组慢波高活动相及快波平均振幅升高(除足三里组快波外,均为P<0.01或P<0.05);四白、足二里、阳陵泉组均能使Oddi括约肌组织及血浆巾胆囊收缩素的浓度升高(除足三里组Oddi括约肌组织胆囊收缩素浓度外,均为P<0.01或P<0.05),产生上调的效应依次为:四白组>阳陵泉组>足三里组.结论:经(穴)对所辖脏腑存在着或直接或间接的、特异性的调控作用,胆囊收缩素是针刺对胆道系统运动起调节作用的重要脑肠肽之一.     

电针足三阳经穴对家兔脑肠肽类物质影响的比较研究

目的：通过针刺足三阳经穴对血浆、胃窦及Oddi括约肌组织中肽类物质胃动素和缩胆囊素的影响，探讨一经与多脏及多经与一脏之间的相互关系。方法：将60只家兔随机分为：空白组(生理盐水组)、阿托品组、足三里组、阳陵泉组、四白组、承筋组。除空白组外，各组均静滴阿托品，与此同时足三里、阳陵泉、四白、承筋组分别电针相应腧穴20min。放射免疫法检测血浆及胃窦、Oddi括约肌组织内胃动素、缩胆囊素的含量。结果：①与阿托品组比较，电针四白、足三里、阳陵泉等三穴均能使胃窦、Oddi括约肌组织及血浆中胃动素、缩胆囊素的含量明显升高(F=2．873-13．986，P&;lt;0．01-0．05)；足太阳经承筋穴作用不明显(P&;gt;0．05)。②在产生上调效应的三穴中，四白效应最佳；足三里、阳陵泉两穴则根据组织及其脑肠肽的不同而有差异。结论：①经(穴)对脏腑的调控作用存在相对特异性。②胃动素、缩胆囊素是针刺对胃、胆道系统运动起调节作用的两种重要脑肠肽。     

电针足阳明足少阳经对胃窦及奥狄氏括约肌缩胆囊素-A受体基因表达的影响

目的：为了比较针刺足阳明胃经、足少阳胆经穴对胃窦平滑肌及Oddi括约肌组织中缩胆囊素(cholecystokinin，CCK)受体基因表达的影响。方法：将60只家兔随机分为空白组、阿托品组、足三里(足阳明经)、阳陵泉(足少阳经)、四白组(足阳明经)、承筋组(足太阳经)组。除空白组外，各组均静滴阿托品造成平滑肌抑制状态，与此同时足三里、阳陵泉、四白、承筋组分别电针足三里、阳陵泉、四白及承筋穴20min。实验结束后取胃窦平滑肌及Oddi括约肌组织，采用RT-PCR方法测上述组织内缩胆囊素A受体基因(CCKA-R-mRNA)表达。结果：电针足阳明及足少阳经穴均能上调胃窦及Oddi括约肌组织中CCKA-R-mRNA的表达。对胃窦平滑肌组织CCKA-R-mRNA表达上调作用，针刺足三里(2．533&;#177;0．413)作用大于阳陵泉(1．453&;#177;0．508)及承筋组(1．098&;#177;0．230)，差异有显著性意义(F=15．252，P&;lt;0．01)：对奥狄氏括约肌组织CCKA-R-mRNA表达上调作用，阳陵泉组(1．921&;#177;0．655)大于承筋组(0．820&;#177;0．399)，差异有显著性意义(F=6．628，P&;lt;0．01)及足三里组(1．359&;#177;0．105)。以上各组中以四白穴对上述两组织受体基因表达上调作用最强。结论：针刺足阳明、足少阳经对胃、胆运动的特异性调整作用，不仅与相关脑肠肽的释放有关，还与脑肠肽受体基因表达差异有关。     

电针足三阳经穴对家兔脑肠肽类物质影响的比较研究

目的:通过针刺足三阳经穴对血浆、胃窦及Oddi括约肌组织中肽类物质胃动素和缩胆囊素的影响,探讨一经与多脏及多经与一脏之间的相互关系。方法:将60只家兔随机分为:空白组(生理盐水组)、阿托品组、足三里组、阳陵泉组、四白组、承筋组。除空白组外,各组均静滴阿托品,与此同时足三里、阳陵泉、四白、承筋组分别电针相应腧穴20min。放射免疫法检测血浆及胃窦、Oddi括约肌组织内胃动素、缩胆囊素的含量。结果:①与阿托品组比较,电针四白、足三里、阳陵泉等三穴均能使胃窦、Oddi括约肌组织及血浆中胃动素、缩胆囊素的含量明显升高(F=2.873～13.986,P<0.01～0.05);足太阳经承筋穴作用不明显(P>0.05)。②在产生上调效应的三穴中,四白效应最佳;足三里、阳陵泉两穴则根据组织及其脑肠肽的不同而有差异。结论:①经(穴)对脏腑的调控作用存在相对特异性。②胃动素、缩胆囊素是针刺对胃、胆道系统运动起调节作用的两种重要脑肠肽。     

电针足阳明足少阳经对胃窦及奥狄氏括约肌缩胆囊素-A受体基因表达的影响

目的:为了比较针刺足阳明胃经、足少阳胆经穴对胃窦平滑肌及Oddi括约肌组织中缩胆囊素(cholecystokinin,CCK)受体基因表达的影响。方法:将60只家兔随机分为空白组、阿托品组、足三里(足阳明经)、阳陵泉(足少阳经)、四白组(足阳明经)、承筋组(足太阳经)组。除空白组外,各组均静滴阿托品造成平滑肌抑制状态,与此同时足三里、阳陵泉、四白、承筋组分别电针足三里、阳陵泉、四白及承筋穴20min。实验结束后取胃窦平滑肌及Oddi括约肌组织,采用RT-PCR方法测上述组织内缩胆囊素A受体基因(CCKA-R-mRNA)表达。结果:电针足阳明及足少阳经穴均能上调胃窦及Oddi括约肌组织中CCKA-R-mRNA的表达。对胃窦平滑肌组织CCKA-R-mRNA表达上调作用,针刺足三里(2.533±0.413)作用大于阳陵泉(1.453±0.508)及承筋组(1.098±0.230),差异有显著性意义(F=15.252,P<0.01);对奥狄氏括约肌组织CCKA-R-mRNA表达上调作用,阳陵泉组(1.921±0.655)大于承筋组(0.820±0.399),差异有显著性意义(F=6.628,P<0.01)及足三里组(1.359±0.105)。以上各组中以四白穴对上述两组织受体基因表达上调作用最强。结论:针刺足阳明、足少阳经对胃、胆运动的特异性调整作用,不仅与相关脑肠肽的释放有关,还与脑肠肽受体基因表达差异有关。     

八肽胆囊收缩素对游离脂肪酸损伤的胰岛β细胞的保护作用

目的：观察八肽胆囊收缩素对高浓度游离脂肪酸损伤的小鼠胰岛β细胞（NIT—1细胞）的保护作用，并观察同时应用胆囊收缩素受体非特异性拮抗剂丙谷胺对此作用的影响。 方法：实验于2004-03／12在河北省人民医院中心实验室进行。将体外培养良好的NIT—1细胞分为对照组、游离脂肪酸组（加入0．25mmol／L软脂酸）、八肽胆囊收缩素组（加入游离脂肪酸同时加入10pmol／L八肽胆囊收缩素）、丙谷胺组（八肽胆囊收缩素组同时加丙谷胺，终浓度32mg／L）。37℃、体积分数为0．05的CO2条件下分别培养48h和72h，放免法测定培养液上清中胰岛素水平；MTT法检测NIT—1细胞增殖情况；流式细胞术方法测定细胞凋亡率；免疫组化法观察bcl-2的表达。 结果：①培养上清中胰岛素水平：游离脂肪酸组48h和72h明显少于对照组（P〈0．01）；八肽胆囊收缩素组显著高于游离脂肪酸处理组（P〈0．01）；丙谷胺组与游离脂肪酸组无显著差异。②细胞增殖反应：游离脂肪酸组48h和72h明显低于对照组（P〈0．01）．八肽胆囊收缩素组则显著高于游离脂肪酸组（P〈0．01），丙谷胺组与游离脂肪酸组结果相仿。③细胞凋亡率：游离脂肪酸组48h和72h明显高于对照组（P〈0．01），八肽胆囊收缩素组则显著低于游离脂肪酸组（P〈0．01），丙谷胺组与游离脂肪酸组结果相仿。④bcl-2阳性表达水平：游离脂肪酸处理不同时间后其表达明显减少；八肽胆囊收缩素处理后表达增加，丙谷胺组较八肽胆囊收缩素组表达略少。 结论：①游离脂肪酸可导致胰岛β细胞明显损伤，表现在胰岛素分泌的减少、细胞增殖能力的降低、细胞凋亡率增加以及bcl-2基因表达减少。②八肽胆囊收缩素对游离脂肪酸损伤的胰岛β细胞具有明显的保护作用。③非特异性胆囊收缩素受体拮抗剂可以在一定程度上逆转八肽胆囊收缩素的保护作用；提示其保护作用可能是通过与胆囊收缩素受体结合实现的。     

针刺足三里穴对脑肠肽及胃肠功能的影响

足三里穴属阳明经脉 ,是四大总穴之首 ,具有健脾和胃 ,扶正培气 ,通经活络 ,开降气机的功用 ,主治消化、呼吸、循环、泌尿、神经多个系统数十种疾病。针刺足三里的临床疗效已得到肯定 ,但其作用机制尚有待研究。脑肠肽同时存在于脑和胃肠道 ,主要包括 :胆囊收缩素 (ＣＣＫ)、生长抑素 (ＳＯＭ)、胃泌素 (ＧＡＳ)、胃动素(ＭＴＬ)、Ｐ物质 (ＳＰ)、神经肽Ｙ (ＮＰＹ)、神经降压素(ＮＴ)、血管活性肠肽等。针刺同时影响中枢及周围脑肠肽的变化 ,共同参与对胃肠功能的影响。1针刺足三里对中枢脑肠肽的影响1 .1针刺足三里影响脑功能的影像学依据…     

电针足阳明经穴后家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度、三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量的变化

目的：通过测定胃窦平滑肌细胞内信使物质钙离子浓度及三磷酸肌醇、环磷酸腺苷含量的变化，探讨针刺足阳明经穴对胃窭平滑肌细胞内信息转导通路的影响。 方法：实验于2003-06／2004-05在湖南中医学院针灸基础实验室完成。选用清洁级健康成年新西兰大耳白兔55只，随机分为5组，每组11只。①生理盐水组耳缘静脉滴注9g／L氯化钠溶液。②阿托品组耳缘静。脉滴注0．25mg／L阿托品。③电针足阳明经穴组、电针足少阳经穴组和电针足太阳经穴组均在滴注阿托品总量的一半时，分别电针双侧足阳明经穴、足少阳经穴、足太阳经穴30min。各组分别处理后，分离胃窦平滑肌细胞，制成活的单个平滑肌细胞悬液；测定胞内钙离子浓度采用荧光法；测定胞内三磷酸肌醇含量应用蛋白质竞争结合分析法；测定胞内环磷酸腺苷含量采用放射免疫计数法。 结果：纳入家兔55只，每组11只。最终进入结果分析动物数为：钙离子浓度分析55只，每组11只。无脱失；三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量分析数均为45只，均脱失10只。①各组家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的比较：阿托品组、足少阳经穴组与足太阳经穴组钙离子浓度明显低于足阳明经穴组[（172．97&;#177;60．38），（203．57&;#177;72．20），（183．52&;#177;76．81），（321．22&;#177;55．36）nmol／L（F=9．37，P〈0．01）]。②各组家兔胃窦平滑肌细胞内三磷酸肌醇含量的比较：阿托品组、足少阳经穴组、足太阳经穴组三磷酸肌醇含量均明显低于足阳明经穴组[（21．87&;#177;10．16），（21．08&;#177;10．97）。（23．81&;#177;12．06）。（39．00&;#177;12．97）pmol／10^6 F=3．61，P〈0．01）]。③各组家兔胃窭平滑肌细胞内环磷酸腺苷含量的比较：各组差异均无显著性意义（P〉0．05）。 结论：针刺足阳明经穴可使家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子、三磷酸肌醇古量明显增高。脑肠肽是足阳明经与胃相关的重要物质基础，参与调节胃平滑肌运动的脑肠肽受体后信号转导通路可能与胞内钙离子、三磷酸肌醇等信使物质有关。     

足阳明经穴针刺对家兔离体胃窦平滑肌细胞舒缩活动与胞内三磷酸肌醇含量的影响

目的探讨针刺血清足三里、天枢、梁门等足阳明经穴针刺血清对家兔离体胃窦平滑肌细胞舒缩活动及胞内三磷酸肌醇含量的影响.方法实验于2003-07/12在广州中医药大学和广州中医药大学附属第二医院完成.将45只家兔随机分为5组,每组9只.生理盐水组耳缘静脉滴注0.9%氯化钠溶液剂量为10 mL/kg;阿托品模型组耳缘静脉滴注以生理盐水配制的2.5 mg/100 mL的阿托品;足阳明经穴组、足少阳经穴组、足太阳经穴组均先静滴阿托品(滴注方法同阿托品模型组),在滴完阿托品总量的一半时,开始分别电针双侧足阳明经穴(足三里、天枢、梁门、四白)、足少阳经穴(阳陵泉、带脉、日月、阳白)、足太阳经穴(承筋、背下点、背上点、攒竹)30 min,待电针完毕后,颈动脉采血6 mL离心15 min,取上清,制备成"针刺血清".另取家兔10只,手术取胃,分离胃窦平滑肌,经Ⅱ型胶原酶消化后制备胃窦平滑肌细胞悬液,以"针刺血清"与家兔胃窦平滑肌细胞作用,用戊二醛固定后测定细胞长度和细胞内三磷酸肌醇含量.结果进入细胞长度分析的家兔为43只,进入三磷酸肌醇含量分析家兔为45只.[1]细胞长度比较足阳明经穴组明显低于足少阳经穴组[(42.05±7.85,77.33±9.80)μm,(P＜0.01)];足太阳经穴组明显高于生理盐水组[(75.88±9.14,64.58±6.59)μm,(P＜0.05)].[2]三磷酸肌醇含量比较足少阳经穴组明显低于组阳明经穴组[(33.15±7.45,48.96±8.89)pmol/106,(P＜0.01)];阿托品模型组明显低于生理盐水组[(31.65±7.69,40.84±9.82)pmol/106,(P＜0.05)].结论足阳明经穴针刺血清能使离体胃窦平滑肌细胞产生明显的收缩效应,其收缩效应的产生与升高细胞内的三磷酸肌醇含量有关.     

温胆汤的睡眠改善作用与失眠大鼠脑中胆囊收缩素8表达的关系

目的：分析中药复方温胆汤改善睡眠的作用与脑肠肽-胆囊收缩素8表达的关系。方法：实验于2004-09／2005-01在黑龙江中医药大学中医方药分析实验室完成。选择健康雄性Wistar大鼠28只，按随机数字表法分为4组，即正常对照组、对氯苯丙氨酸化失眠模型组、温胆汤组及地西泮组，每组7只。除正常对照组外，其余3组大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸复制大鼠失眠模型，动物出现昼夜节律消失，白天也活动不停，整体观察与正常对照组有明显不同，表明模型复制成功。模型复制成功后，每日8：00am按1mL／kg体积灌胃给药，温胆汤组大鼠给予600g／L温胆汤水煎液（由半夏10g，竹茹10g，枳实10g，橘皮15g，甘草5g，茯苓7．5g，生姜5片、大枣1枚（5g）组成，6．1g／kg生药）；地西泮组给予92g／L地西泮水溶液；正常对照组和对氯苯丙氨酸化失眠模型组给予蒸馏水，1次／d，共6d。于末次给药50min后，将大鼠直接脱颈椎处死，取所需脑组织，按照免疫组织化学方法处理后，在CMIAS多功能真彩色病理图像分析系统下分析温胆汤对失眠大鼠皮质及下丘脑胆囊收缩素8表达的影响。结果：28只大鼠全部进入结果分析，无脱失。各组大鼠大脑皮质及下丘脑胆囊收缩素8阳性细胞百分率比较：对氯苯丙氨酸化失眠模型组大鼠皮质、下丘脑胆囊收缩素8阳性细胞百分率均显著低于正常对照组[（3．35&;#177;0．33）％，（15．14&;#177;0．69）％；（5．95&;#177;0．84）％，（27．96&;#177;2．42）％，t=3．6003．12．8119，P〈0．01]，温胆汤组大鼠皮质、下丘脑胆囊收缩素8阳性细胞百分率均显著高于对氯苯丙氨酸化失眠模型组[（5．47&;#177;0．89）％，（24．6&;#177;1.77）％，t=2.1211，9．4600，P〈0．01]。地西泮组大鼠皮质、下丘脑胆囊收缩素8阳性细胞百分率与对氯苯丙氨酸化失眠模型组相近[（4．17&;#177;0．18）％．（16．82&;#177;1．70）％，P〉0．05]。结论：中药复方温胆汤可以明显增强失眠大鼠大脑皮质、下丘脑胆囊收缩素8的阳性表达，进而增加大鼠睡眠，推测胆囊收缩素8可能是“胃不和”与“卧不安”之间的物质基础。