一例碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究1株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500的耐药机制。方法采用浓度梯度法（E-test）测定细菌的抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）,采用接合实验、聚合酶链反应（PCR）、质粒抽提、探针杂交印迹试验（Southern blot）、等电聚焦电泳及耐药基因克隆测序分析细菌的耐药机制。结果接合实验、质粒电泳和Southern blot结果显示耐药基因位于一个50 kb的可转移质粒上;等电聚焦电泳显示3条β-内酰胺酶条带,等电点（PI）分别为9.0、6.7（KPC-2）、5.4。PCR产物克隆分析比对为blaKPC-2型。结论碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500携带由质粒介导的KPC-2酶。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的表型和基因型分析

目的研究本院碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌的表型和基因型。方法用纸片扩散法进行药物敏感试验,改良Hodge试验和EDTA协同试验检测耐药表型,设计通用引物行PCR检测KPC、IMP、VIM、NDM-1和OXA-23耐药基因,并测序分析。结果 14株肺炎克雷伯菌呈现高度耐药性,有13株携带KPC-2基因,1株携带IMP-4基因,未检测出VIM、NDM-1和OXA-23基因。结论本院产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌主要为KPC-2和IMP-4基因型。     

KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药中的研究

目的运用RNA干扰技术探讨blaKPC表达与碳青霉烯类耐药的关系。方法用电转移法将双链小RNA（SiRNA）转入到2株产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2（KPC-2）的肺炎克雷伯菌中,检测RNA干扰前后菌株blaKPC的RNA水平和亚胺培南、厄他培南的最低抑菌浓度（MIC）值的变化。结果菌株在RNA干扰前后blaKPC-2的RNA水平有差异,但干扰前后亚胺培南和厄他培南的MIC值没有变化。结论 SiRNA虽然能在RNA水平上抑制blaKPC的表达,但对产KPC-2菌株碳青霉烯类耐药的影响不明显,证明革兰阴性杆菌对碳青霉烯类耐药由多种因素共同引起。     

耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌的耐药状况分析

目的了解南昌大学第三附属医院耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药状况。方法将2009年1月至2013年12月临床送检合格标本,采用西门子Micro Scan Walk Away40 Plus微生物分析仪及配套的革兰阴性菌鉴定药敏板,进行菌株鉴定与药敏试验,结果判读按照CLSI的标准,将分离到的肺炎克雷伯菌进行筛选,再筛选出CRKP。结果从检测到的769株肺炎克雷伯菌中筛选到17株CRKP。CRKP发生率2009年为0.0%,2013年上升到4.3%。CRKP对加替沙星耐药率最低占33.3%,对氨苄青霉素、阿莫西林/棒酸、头孢唑啉、环丙沙星、替卡西林/棒酸、耐药率高达100.0%;头孢类除孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦耐药率在50.0%以下,其余的均在50.0%~100.0%。美洛配能亚胺培南耐药率高达80.0%以上。结论 CRKP对常用抗菌药物有严重的耐药趋势,对重症患者、感染严重患者,不能单凭经验用药,应依据药敏试验选择抗菌药物。更多还原     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学和耐药基因分析

目的：探究徐州医学院附属医院临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征及耐药基因。方法收集并鉴定该院2013年2～12月临床分离非重复碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌株55株。肠杆菌基因间重复性共有序列（ERIC）‐聚合酶链反应（PCR）分析菌株的分子流行病学特征。药敏试验采用琼脂稀释法,改良 Hodge 方法检测碳青霉烯酶,亚胺培南＋乙二胺四乙酸双纸片协同法检测金属β‐内酰胺酶,PCR 方法检测细菌携带的耐药基因。结果 ERIC‐PCR 将55株肺炎克雷伯菌分为4型,以Ⅰ型为主,共41株。55株肺炎克雷伯菌对除多黏菌素和替加环素外的其他抗菌药物显示了较高的耐药性。改良 Hodge 试验阳性43株,金属酶检测试验结果均为阴性。 PCR 结果显示,K PC‐2型44株,CTX‐M‐9型27株,S HV 型22株, TEM 型23株,其中有25株同时携带3种或3种以上的耐药基因。结论该院分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对临床大多数常用抗菌药物显示较高水平的耐药性;其耐药机制主要是 K PC‐2碳青霉烯酶,CTX‐M‐9、S HV 和 TEM 型β‐内酰胺酶同时参与其多重耐药机制。     

KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药中的研究

目的运用RNA干扰技术探讨blaKPC表达与碳青霉烯类耐药的关系。方法用电转移法将双链小RNA(SiRNA)转入到2株产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2(KPC-2)的肺炎克雷伯菌中,检测RNA干扰前后菌株blaKPC的RNA水平和亚胺培南、厄他培南的最低抑菌浓度(MIC)值的变化。结果菌株在RNA干扰前后blaKPC-2的RNA水平有差异,但干扰前后亚胺培南和厄他培南的MIC值没有变化。结论 SiRNA虽然能在RNA水平上抑制blaKPC的表达,但对产KPC-2菌株碳青霉烯类耐药的影响不明显,证明革兰阴性杆菌对碳青霉烯类耐药由多种因素共同引起。     

广东省东莞地区发现1株泛耐药产KPC一2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌

目的研究泛耐药肺炎克雷伯菌的相关耐药机制和治疗对策。方法细菌鉴定采用VITEK2全自动细菌鉴定系统,药敏试验采用K—B法,通过产碳青霉烯酶确证试验（改良Hodge试验）及聚合酶链反应（PCR）检测KPC-2基因,并进行序列测定。同时调查感染患者的诊疗情况。结果常规药敏试验显示,该菌株对阿米卡星敏感,对其他抗菌药物均耐药;Hodge试验阳性,PCR检测到KPC-2基因,序列测定与GenBank1i844849序列一致。患者经拔除气管插管,人住隔离病房,加强支持治疗后,1个月内未检测到泛耐药肺炎克雷伯菌。结论加强泛耐药肺炎克雷伯菌监测,提高对泛耐药菌的认识有助于感染疾病的治疗和预防。     

碳青霉烯类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌产KPC酶监测

目的了解武汉地区肺炎克雷伯菌产KPC型碳青霉烯酶的耐药基因流行状况及型别,为有效监测和控制医院感染提供实验室依据。方法收集2014年6月至2015年10月武汉地区3家三甲医院对碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降的肺炎克雷伯菌53株,均采用Phoenix-100全自动系统进行鉴定和药敏试验,采用改良Hodge试验进行KPC初筛,聚合酶链反应对53株菌分别进行blaKPC基因扩增,阳性扩增测序验证型别。结果 53株菌中38株菌改良Hodge试验阳性,阳性率为71.70%(38/53);32株扩增出780bp左右的目的条带,阳性率为60.38%(32/53);经测序和比对分析为blaKPC-2基因。结论武汉地区对碳青霉烯酶类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶基因主要为KPC-2型,临床感染和控制部门应加强监控,防范产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌在院内暴发和流行。     

浙江省丽水地区发现1株泛耐药产KPC-2碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌

目的 研究泛耐药肺炎克雷伯菌的相关耐药机制及初步探讨治疗对策。 方法 细菌鉴定采用Vitek-compact细菌鉴定系统,药敏实验采用K-B法,通过产碳青霉烯酶确证试验(Hodge实验)及聚合酶链反应(PCR)检测KPC-2基因,并进行序列测定。同时调查患者感染的诊疗情况。 结果 常规药敏实验显示除多粘菌素、米诺环素外全部耐药;增加磷霉素K-B法药敏实验显示抑菌环直径为20 mm,K-B法协同药敏实验显示多粘菌素、米诺环素、磷霉素、亚胺培南等均无协同抗菌活性;Hodge实验阳性,PCR检测到KPC-2基因,序列与GenBank AF297554序列一致。患者经拔除导尿管,入隔离病房,加强支持治疗后,1个月内未检查到泛耐药肺炎克雷伯菌。 结论 加强泛耐药肺炎克雷伯菌监测,提高对泛耐药菌的认识有助于感染疾病的治疗和预防。     

碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的药物敏感性及分子特征分析

目的分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用。方法收集2012—2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型。用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(Amp C)编码基因及外排泵基因acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36的表达。结果碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿维巴坦等有很好的敏感性; blaCTX-M和blaSHV检出率依次为76.9%和57.7%;外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7%和19.2%;80%以上的细菌中存在acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH基因; CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用。结论替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物。CRKPPC菌株中存在Amp C、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值。     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌的耐药机制和同源性研究

目的研究肺炎克雷伯菌对耐碳青霉烯类抗生素的耐药机制和同源性。方法对卫生部中日友好医院从2006年1月至2011年2月临床标本中分离的肺炎克雷伯菌,用V1TEK-Ⅱ全自动微生物分析仪和常规方法进行菌种鉴定和药敏试验,筛选对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌;用三维试验和改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;用PCR扩增碳青霉烯酶基因,并对扩增产物测序,确定其基因型;接合试验研究其传播机制;通过基因外重复回文(REP)-PCR分析其同源性。结果共检测得4株耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌,其中2株菌对所测试的所有抗菌药物均耐药。1株菌产IMP-4型金属酶;未检测出其他碳青霉烯酶基因。转移接合试验呈阴性;REP-PCR显示4株菌属于3个不同的克隆型。结论该院出现碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌,属于不同克隆型,耐药机制复杂,产IMP-4型金属酶是其对碳青霉烯类抗生素耐药的原因之一。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药分子机制研究

目的了解该院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制。方法选择对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌(KP)7株,采用K-B法对其进行药敏实验。PCR检测18种耐药基因,分析耐亚胺培南KP的耐药表型及其基因型。结果 7株KP对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、复方磺胺甲噁唑较为敏感,对其他常用抗菌药物均耐药。耐药基因KPC、ant(3′′)-Ⅰ、SHV、CTX-M、ant(2′′)-Ⅰ的阳性检出率较高。结论分离的对亚胺培南耐药的KP携带多种耐药基因,其耐药机制主要与KPC有关,在此基础上可能存在其他耐药机制。     

产KPC-2 肺炎克雷伯菌的MLST 和wzi 分型分析

目的探讨产KPC-2肺炎克雷伯菌的多位点序列分型(MLST)并确定其wzi分型。方法收集南京鼓楼医院2012—2014年分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌108株,采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株,PCR和DNA测序技术鉴定KPC-2编码基因。对产KPC-2菌株,用MLST技术分析其遗传相关性,并用PCR技术对其进行wzi分型。结果 108株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中,72株产KPC-2。72株产KPC-2菌株经MLST分型分为9个不同克隆型,其中ST11(61/72,84.7%)最为流行,其次为ST15(4/72,5.6%);72株产KPC-2细菌有7种wzi分型,wzi209(K47荚膜型)最为流行(58/72,80.6%),其次为wzi64(K64荚膜型)(6/72,8.3%)。结论产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11型在我院存在克隆播散,大多为wzi209,荚膜型为K47,需加强感染控制措施。     

肺炎克雷伯菌介导碳青霉烯类耐药的基因型检测

目的对临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌进行耐药基因型分析。方法采用琼脂稀释法检测菌株最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)、DNA测序、脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)、等电点聚焦电泳(IEF)和质粒分子杂交等技术对实验菌株进行基因组DNA同源性、介导耐药的基因型、耐药酶pI和耐药基因携带状态等研究。结果12株肺炎克雷伯菌的亚胺培南和美罗培南M IC值分别为16~64μg/m l和8~256μg/m l;对其他被测的β-内酰胺类和喹诺酮类药物广泛耐药,氨基糖苷类耐药型不定。12株菌均扩增出编码碳青霉烯类抗生素耐药的blaKPC-2和编码β-内酰胺酶的blaSHV基因;部分菌株扩增出blaTEM或/和blaCTX-M基因。IEF和分子杂交揭示KPC-2的等电点为6.8,编码基因被携带在一个约56 kb大小的质粒上;PFGE结果显示12株细菌可分为2个克隆型。结论产KPC-2型碳青霉烯酶是本院肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的主要原因,垂直传播以及通过质粒传递耐药基因可能是其在本医院流行的主要方式。     

1株泛耐药肺炎克雷伯菌耐药机制的研究

目的研究1株泛耐药肺炎克雷伯菌(Kpn)的耐药机制。方法用Vitek-2系统进行细菌鉴定,纸片扩散法和肉汤稀释法进行药敏试验;PCR和DNA测序检测β-内酰胺酶基因和7个管家基因,多位点序列分型(MLST)进行7个管家基因的序列分析;改良Hodge试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)确证试验、利用抑制剂的双纸片增效试验和改良ESBLs确证试验检测β-内酰胺酶表型。结果该菌株呈泛耐药性,携带KPC-2和CTX-M-15基因,MLST显示ST11型;改良Hodge试验检出碳青霉烯酶;ESBLs确证试验呈假阴性结果,改良ESBLs确证试验呈阳性结果;用3-氨基-苯酚硼酸(APBA)的双纸片增效试验呈阳性结果,显示产KPC型A类碳青霉烯酶。结论该菌株的泛耐药性可能是由于产KPC酶,利用抑制剂的表型试验能简便准确地检出KPC和ESBL。     

重症监护室耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制和同源性分析

目的探讨安徽医科大学第一附属医院4个重症监护室(ICU)中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制和流行状况,为医院感染控制提供依据。方法收集4个ICU病房中CRKP菌株39株,采用纸片扩散法和Vitek 2 Compact仪器法测定临床常见抗菌药物的敏感性,用Carba NP试验对碳青霉烯酶进行筛选,同时对超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)、碳青霉烯酶基因进行PCR扩增和序列分析,用基质辅助激光解吸电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)技术及多位点序列分型(MLST)进行同源性分析。结果 PCR检测基因型显示36株CRKP以产KPC-2型酶为主,部分菌株同时拥有ESBL和AmpC耐药基因。MALDI-TOF MS将39株CRKP分为3大簇,MLST结果显示35株菌均为ST11型,ST379、ST751、ST307、ST490各有1株,经eBURST在线软件分析ST11与ST379、ST751的亲缘关系较近,来源于同一克隆株。结论 4个ICU病房中CRKP以产KPC-2型酶为主,是CRKP对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制。37株CRKP高度同源,提示不同ICU病房间应进一步加强感染控制。