核酸扩增技术在献血者血液筛查中的应用分析

目的探讨核酸扩增技术在献血者血液筛查中的应用价值。方法采用HBV/HCV/HIV核酸检测试剂对血站常规ELISA筛查阴性的献血者标本进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA 3个项目的8人份汇集检测,阳性汇集池再拆分检测。结果 33 714份ELISA筛查阴性标本中,检出HBV DNA阳性标本5例,阳性检出率为0.015%,未检出HCV RNA阳性标本和HIV-1RNA阳性标本。结论核酸扩增技术应用于无偿献血者血液筛查,有助于提高献血者的血液质量,保证输血安全。     

荧光定量聚合酶链反应检测库存血浆HBV-DNA及HCV-RNA

目的 调查库存血中HBV-DNA及HCV-RNA的阳性率。方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,对合格库存血浆进行微量汇集池标本(10份×50μl汇集)中的HBV-DNA和HCV-RNA测定,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。结果 250份(分25个汇集池)受检血浆中HCV-RNA阳性1份(0.4％),HBV-DNA阳性2份(0.8％)。结论 荧光定量PCR检测微量血浆汇集池标本法筛查血液病毒核酸是提高输血安全性的一种先进方法。     

荧光定量PCR技术在血液筛查中的应用及可行性分析

目的　了解 ELISA法筛查血液乙型肝炎病毒 ( hepatitis B virus,HBV)的漏检率 ,探讨荧光定量聚合酶链反应 ( Flurescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术用于混合血浆标本病毒核酸检测的可行性。　方法　应用 FQ-PCR技术对常规 ELISA初复检正常献血者 (包括无偿献血者和个体献血者 )的微量血浆汇集池标本 ( 1 0人份× 2 0 μ1 )进行 HBV DNA检测 ,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。用双蒸水和 HBV DNA阴性汇集池中的血浆标本分别对 HBV DNA标准品(浓度为 1 0 3拷贝 /ml)作 1 0～ 5 0倍稀释后行 FQ-PCR测定 ,观察不同的血浆标本混合后是否存在 Taq酶抑制物的叠加作用及对 PCR结果有无影响。对浓度为 1 0拷贝 /ml～ 1 0 4拷贝 /ml的 HBV DNA标准品分别进行 FQ-PCR检测 ,确定试剂盒的敏感度。　结果　 1 2 0 0份无偿献血者标本中有 1 1例 HBV DNA阳性 ( 0 .92 % ) ;4 70份个体献血者标本中有 1 0例 HBVDNA阳性 ( 2 .1 3% )。双蒸水与混合血浆稀释的 HBV DNA标准品的 FQ-PCR检测结果 (定性 )完全一致。试剂盒的检出下限为 1 0 2拷贝 /ml。　结论　 ELISA法筛查血液存在较高的 HBV漏检率 ,FQ-PCR用于混合血浆标本的病毒核酸检测是可行的     

核酸检测技术在无锡市献血筛查中的应用分析

目的：评估核酸检测技术（Nucleic Acid Technology ,NAT）应用于献血者血液筛查的必要性和可行性。方法采用美国罗氏诊断公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型＋2型）核酸联合检测试剂盒（PCR‐荧光法）,对2013年4月～7月本血站ELISA检测合格的献血者9418例血液标本进行 HBV DNA、HCV RNA和 HIV RNA1＋2联合检测,先对6人份混样标本进行检测,如为非反应性,则该合并检测池中的标本均为非反应性,如合并检测呈反应性,再进行拆分检测。本试剂盒合并和拆分检测使用相同的复合PCR扩增系统,单管实时荧光 PCR检测3种病原体,通过将探针标记不同的荧光信号分辨HBV、HCV、HIV‐1＋2反应性病原体种类。结果对9418人份ELISA检测 HBsAg、抗‐HCV、抗‐HIV均为阴性的合格血液标本共检测出HBV DNA阳性6例,阳性率为0．06％;HCV RNA阳性1例,阳性率为0．01％,HCV RNA阳性血液病毒定量为4．27×106 IU／mL ;未检测出HIV RNA。结论 NAT能在ELISA检测阴性的献血者血液标本中筛查到HBV、HCV反应性的标本,常规开展NAT能进一步提高血液及输血安全。     

核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用

目的探讨核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用价值。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)常规筛查血液,对免疫指标合格的血液采用美国Roche Cobas Amplicor全自动PCR诊断系统检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA,样本混合采用48人份×50μL汇集,采用汇集池阳性的再分拆检测。结果 70 953份无偿献血标本中,HBV DNA阳性10份(1.4/10 000),未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样本。结论血站系统采用微量标本混合方式使用核酸扩增检测技术筛查血液是可行的,能有效提高临床用血的安全。     

核酸检测技术在襄阳地区献血筛查中的应用分析

目的 评估核酸检测技术(NAT)应用于献血者血液筛查的必要性和可行性.方法 采用上海浩源生物科技公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(1型)核酸检测试剂盒(PCR-荧光法),对2011年8月～2012年5月本血站ELISA检测合格的献血者36 678人份血液标本进行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA-1项联合检测,先对8人份混样标本进行检测,如为非反应性,则该合并检测池中的标本均为非反应性,如合并检测呈反应性,再进行拆分检测.本试剂盒合并和拆分检测使用相同的复合PCR扩增系统,单管实时荧光PCR检测3种病原体,通过将探针标记不同的荧光信号分辨HBV、HCV、HIV-1反应性病原体种类.结果 对36 678人份ELISA法检测抗-HIV、抗-HCV、HBsAg均为阴性的合格血液标本共检测出HBV DNA阳性57例,阳性率为0.16％;未检测出HCV RNA和HIV RNA.结论 NAT能在ELISA检测阴性的献血者血液标本中筛查到HBV、HCV和HIV-1反应性的标本,常规开展NAT能进一步提高血液及输血安全.     

核酸检测在延边地区无偿献血者血液筛查中的应用

目的应用上海科华的核酸检测系统对自愿无偿献血者HBV、HCV、HIV核酸检测,评估核酸检测技术应用血液筛查的必要性,统计延边血站2017-2018年无偿献血者血液标本核酸检测的数据,分析核酸检测用于献血者血液筛查的重要性。方法对酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测结果阴性及丙氨酸转氨酶检测合格的献血者标本进行核酸检测。结果检测期间对30390份无偿献血者核酸标本进行筛查,检出乙型肝炎病毒(HBV)-DNA阳性标本11例,HBV-DNA阳性检出率为0.036%;HIV-DNA阳性NAT检出率为0.01%。结论血液核酸筛查的实施有效防止了病毒经血液传播,进一步保障了临床用血的质量和安全。     

核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究

目的评估核酸检测在大规模临床用血输血传染性指标筛查中的必要性和实用性。方法 ELISA法检测献血者HBsAg,抗-HBV和抗-HCV,以及抗-TP,非反应性标本再用国产HBV/HCV/H IV核酸检测试剂进行检测,从中筛查出ELISA检测非反应性,核酸检测阳性的标本。进一步对NAT阳性标本跟踪采样检测以确认血清学转化,或用进口核酸试剂复核检测确认核酸阳性。结果使用8份混样、阳性标本汇集池一次拆分的自动化检测模式,55 499人份ELISA检测合格的血标本中共检出11份HBV核酸阳性标本,1份HCV核酸阳性标本。其中3份经跟踪采样检测确认为HBV感染窗口期标本,1份由罗氏试剂复核检测确认为HCV感染窗口期标本。其余8份HBV核酸阳性样本经"两对半"检测确认为现行ELISA血筛漏检的HBV隐匿性感染或其它感染类型标本。结论核酸血液筛查可大大提高血液安全性,特别是提高对我国较为复杂的HBV低滴度感染标本的检出能力。     

自动化核酸扩增技术(NAT)在血液筛查中的应用研究

目的为了提高血液安全性,探讨自动化核酸扩增技术在血站血液筛查中应用的可行性。方法在酶联免疫试验(ELISA)常规筛查血液的基础上,应用STAR2000加样仪自编程序进行全自动血样汇集(8人份),在KHB-DP1000半自动核酸提取仪上自动化方法提取样本核酸,应用荧光PCR方法在AB I7300上进行扩增和检测分析结果,用临检中心室间质控品和澳大利亚室间质控品进行室间质评,用标准品考评检测限量。结果应用标准品考评检测限量,本法的95%的检出限量HBV DNA、HCV RNA和H IV RNA分别为100.9 IU/m l,155.1拷贝/m l和165拷贝/m l,95%可信限范围分别为(60.1、302.2),(98.9,398.6)和(105.2,425.8)。通过对16 744个样本共2093汇集池检测,初始检测HBV DNA阳性池2个,HCV RNA、H IV RNA未检出阳性池,进一步拆分检测,有2份献血者的血液HBV DNA阳性,HBV DNA阳性率为0.012%。结论随着国内相关技术的不断提高和相关制度的不断完善,可以考虑将国产自动化核酸扩增试剂纳入血站血液常规筛查。     

NAT技术在血液筛查中的初步应用

目的了解咸阳地区献血者经血传播疾病血液筛查方法的准确性与安全性，为核酸检测技术用于血站常规血液筛查提供理论依据。方法对53份抗-HCV阳性、29份抗-HIV阳性、27份HBsAg阳性标本进行NAT检测。采集自愿献血者血液标本共7981份分别使用ELISA法和实时荧光PCR法对3项经血传播疾病进行同步筛查。结果53份抗-HCV阳性标本中20份呈NAT阳性．29例抗-HIV阳性中NAT检测均为阴性．27份HBsAg阳性标本中7例呈NAT阳性。7981份标本中，HBsAg阴性HBV DNA阳性1例，HBsAg阳性HBV DNA阴性9例，二者同时呈反应性标本1例；抗-HCV阴性标本无HCV RNA阳性，抗-HCV阳性HCV RNA阴性标本26例，二者同时呈反应性标本3例；抗-HIV阳性10例，无1例HIV RNA阳性检出。结论为减少血液检测假阳性、缩短检测窗口期，有必要在本站开展血液的核酸检测。     

Co-infection of blood borne viruses in blood donors: A cross-sectional study from North India

Background

There are several studies on prevalence of individual infectious disease markers (mono-infection) in donors but none on prevalence of coinfection. Co-infection is significant as it leads to accelerated disease progression. We, therefore, evaluated the prevalence of co-infection among blood donors.

Acute hepatitis with observed increased blood phenytoin level: a case study

Acute hepatitis is a common problem in medical practice. This problem can be fatal if there is no proper management. For management, the investigation for the cause is necessary. In the case report, the authors present an interesting male case presenting with unexplained acute hepatitis. The routine laboratory investigation cannot reveal the cause of hepatitis. The additional toxicological drug test can reveal the unexplained increased level of phenytoin.     

库血HCV-RNA的检测分析

目的 为探索提高库血丙型肝炎病毒(HCV)的检出率。方法 采用逆转录套式聚合酶链反应(RT-PCR)技术，检测4530份抗-HCV阴性的库血HCV-RNA。结果 4530份库血中HCV-RNA阳性55份，阳性率1．2l％．其中个体献血者血液2110份，HCV-RNA阳性40份，阳性率1．90％；无偿献血者血液2420份，HCV-RNA阳性15份，阳性率0．62％。结论 RT-PCR可用于检测库血HCV-RNA，以减少因输血造成HCV感染。     

乙肝疫苗负载的树突状细胞诱导慢性乙型肝炎患者特异性免疫应答

目的 探讨自体乙肝疫苗致敏的树突状细胞(DC)回输慢性乙型肝炎(CHB)患者后的免疫应答效果。方法取患者外周血20ml分离单个核细胞,加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rGM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)进行DC体外扩增,于培养第5天加入50μg／ml乙型肝炎疫苗,7天收获细胞。34例慢性乙肝患者根据年龄和感染病毒时间分为治疗1、2、3组,皮内回输DC;20例对照组CHB注射等量生理盐水,与治疗组均每周一次,连续8次。于回输DC后2周检测患者血清HBV-DNA含量及外周血CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞。结果 3个治疗组患者回输DC后血清HBV-DNA含量拷贝数均较对照组及回输前显著降低(P<0.01),总应答率58.8％(20／34),对照组输注前后没有明显变化(P>0.05);治疗1组与3组相比HBV-DNA定量拷贝数降低幅度有显著性差异(P<0.01),治疗1组与2组、2组与3组相比均无显著性差异(P>0.05)。回输DC后患者CD4 细胞较回输前增高显著(P<0.01),CD3 、CD8 细胞增高不明显(P>0.05)。结论 经乙型肝炎疫苗致敏的DC回输CHB患者后可产生明显应答,且应答程度与患者感染病毒时间和／或年龄有一定关系。     

Glutathione status in the blood and tissues of patients with virus-originated hepatocellular carcinoma

OBJECTIVES: Glutathione status can be regarded as the redox status for many diseases. This study was performed to investigate the glutathione status in virus-originated hepatocellular carcinoma (HCC). DESIGN AND METHODS: The blood and tissue samples were obtained from 24 patients. Blood samples were also obtained from 137 controls for comparison. RESULTS: The GSH level and the ratios of GSH/GSSG and GSH/total glutathione of the blood samples from the patients were significantly lower than those of the controls, while the GSSG values were significantly higher. Meanwhile, levels of GSH and total glutathione, as well as the ratios of GSH/GSSH and GSH/total glutathione, were significantly decreased, whereas GSSG levels were significantly higher, in the HCC tissues than those of the adjacent cancer-free tissues. CONCLUSIONS: Glutathione status in the HCC suggested that the antioxidant system is severely impaired, supporting a consistent role of the free radical cytotoxicity in the pathophysiology of the disease.     

抗-HCV酶免试剂用于血站血液筛查的效果评价

目的 对目前国内血站采用的抗—HCV酶免试剂进行效果评价，为血站合理选用抗—HCV筛查试剂提供参考依据。方法 对不同厂家抗-HCV酶免试剂检测阳性标本分别用抗—HCV确认实验及逆转录—巢式PCR(RT—nPCR)技术进行检测，并对结果进行比较分析。结果 不同厂家抗—HCV酶免试剂对HCV的C区和NS5区抗体检测结果的差异无显性；但对NS3和NS4区抗体检测结果的差异有显性。结论 血站应根据不同抗—HCV试剂对HCV不同区段抗体的检出特性合理选择初复检试剂。     

丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试验阳性判断值在献血员血液筛检中的意义

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)测定阳性判断值(Cut-off)“灰区”在献血员血液筛检中的应用价值。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了503份抗-HCV ELISA测定为阴性的献血员血清(浆)标本的HCV RNA。如HCV RNA检测为阳性，则使用重组免疫印迹(RIBA)方法进一步检测抗HCV。结果在503份抗-HCV ELISA阴性献血员血清(浆)标本中，发现有5份HCV RNA阳性，其中2份标本抗HCV ELISA测定S/CO比值小于0．5，RIBA结果均为阴性。另外3份抗HCV阴性(ELISA检测的S/CO值在0．8-0．9之间)但HCV RNA为阳性的献血员血标本，进一步进行RIBA检测，发现其中2份为抗核心区(C22)单独阳性，另外1份为抗NS3单独阳性。阳性标本HCV RNA的含量测定均约为10^4拷贝/ml。结论为尽可能减少输血后HCV感染的发生，有必要将抗-HCV ELISA测定的Cut-off值下移20％，因为S/CO比值接近Cut-off值的血液有很大可能为HCV感染者。     

上海地区无偿献血者乙肝病毒核酸检测分析

目的了解无偿献血者乙肝病毒核酸筛查(NAT)阳性人群特点,为血液安全策略提供参考。方法无偿献血者血液经Murex和科华HBsAg ELISA试剂检测,结果为阴性的血液使用cobas TaqScreen MPX试剂进行HBV DNA,HCV RNA,HIV RNA 3项联合核酸检测。对于MPX反应性标本,使用COBAS AmpliPrep/TaqMan进行核酸鉴别试验,同时使用罗氏ECL电化学发光检测系统进行乙肝补充血清学试验。结果 2011年11月1日～2012年1月31日3个月共有献血者86 375人(次),其中有63 351人(次)为初次献血者,HBsAg反应性为1.04%,23 024人(次)为重复献血者,HBsAg反应性为0.46%,两者差异有统计学意义(χ2=63.63,P0.05)。84 990份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2阴性血液进行MPX核酸检测,共发现52例(0.060%)HBV DNA阳性,均为低拷贝,含量为(20～200)IU/ml间,其中32例(0.051%)来自初次献血者,20例(0.087%)来自重复献血者,两者比例差异无统计学意义(χ2=3.65,P0.05),没有发现HCV RNA与HIV RNA阳性。结论重复献血者HBsAg反应性比率低于初次献血者;HBsAg阴性献血者HBV DNA阳性率为0.060%,重复献血者HBV DNA阳性率与初次献血者比较,两者差异无统计学意义;开展HBV核酸检测能够进一步保障血液安全。