肾癌中EphA2／EphrinA1的表达及其意义

目的 探讨EphA2／EphrinA1在肾癌中的表达及其与肾癌临床病理特征的关系。方法采用半定量逆转录一聚合酶链反应（RTPCR）和流式细胞术检测22例肾癌组织和12例非肾癌正常肾组织中EphA2、EphrinA1的基因及蛋白表达情况,并对其进行比较和相关分析;利用免疫组织化学法检测68例肾癌组织和24例正常肾组织中EphA2、EphrinA1的表达,分析与肾癌临床病理特征之间的关系。结果肾癌组织中EphA2和EphrinA1的mRAN和蛋白均明显高于正常肾组织（1．60±0．80vs0．58±0．19,1．37±0．63vs0．91±0．40;424．38±43．14VS332．44±42．83,419．44±52．13vs325．36±42．33,均P〈0．01）。但两种蛋白与其mRAN表达均不存在相关关系（r=0．050,P〉0．05;r=0．171,P〉0．05）。在肾癌组织分级不同的各组间,EphA2、EphrinA1蛋白的表达差异有统计学意义（X^2=9．575,P〈0．01）X^2=7．947,P〈0．05）,且随着等级的增加,EphA2、EphrinA1蛋白的表达量也显著增加（r=0．350,P〈0．01;r=0．344,P〈0．01）。结论EphA2和EphrinA1蛋白高表达于肾癌高分期组、高分级组和淋巴结转移组,其高表达的机制除与基因表达上调有关外,EphA2蛋白降解受阻可能是导致其升高的重要因素。     

IGFBP-rP1、BDNF及TrkB在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-rP1)、脑源性神经营养因子(BDNF)及酪氨酸受体激酶B(TrkB)在子宫内膜癌中的表达,以及三者与子宫内膜癌临床病理特征的关系。方法选取102例子宫内膜癌患者作为研究对象,以40例正常子宫内膜组织作为对照,所有患者术前均未接受放化疗治疗;应用免疫组织化学Envison法检测IGFBP-rP1、BDNF和TrkB的阳性表达,分析三者与子宫内膜癌临床病理特征的关系,以及三者阳性表达之间的相关性。结果IGFBP-rP1、BDNF及TrkB在子宫内膜癌中的表达率分别为56.86%(58/102)、46.08%(47/102),49.02%(50/102)均高于在正常子宫内膜组织中的阳性表达率20.00%(8/40)、22.50%(9/40)、17.50%(7/40),差异均有统计学意义(χ²分别=15.74、6.69、11.93,P均<0.05);IGFBP-rP1、BDNF和TrkB的阳性表达均与内膜癌临床分期、细胞分级有关(χ²分别=4.03、4.51、5.31、5.06、6.30、7.81,P均<0.05);IGFBP-rP1在淋巴结转移组中表达率为100%(9/9),在无淋巴结转移组阳性表达率为52.69%(49/93),差异有统计学意义(χ²=3.88,P<0.05);BDNF和TrkB阳性表达率在淋巴结转移组和无淋巴结转移组中比较,差异无统计学意义(χ²分别=2.85、2.59,P均>0.05)。相关分析显示,BDNF阳性表达与TrkB阳性表达呈正相关(r=0.42,P<0.05),IGFBP-rP1阳性表达与BDNF、TrkB阳性表达均呈正相关(r分别=0.52、0.58,P均<0.05)。结论IGFBP-rP1可能通过BDNF/TrkB信号通路参与子宫内膜癌的发生发展。     

Mer基因过表达对内皮细胞株HMEC-1细胞血管形成的影响及其机制探讨

目的 探讨受体酪氨酸家族成员Mer基因对体外血管形成过程的影响及其具体作用机制。方法 利用脂质体法将人全长Met基因真核表达质粒转染到内皮细胞株HMEC-1细胞中，G418筛选转染细胞得到阳性克隆，利用PCR和Westernblot分别在mRNA和蛋白水平验证转染情况。利用Transwell和Matrigel分别观察Mer基因过表达对于内皮细胞迁移能力和血管形成能力的影响。通过荧光定量PCR筛选血管内皮生长因子（VEGF）-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及血管内皮生长因子受体（VEGFR）-1、VEGFR-2基因的表达情况。结果 经过G418筛选后，PCR和Westernblot检测结果显示Mer基因在阳性克隆细胞中有较高水平表达，分别较空质粒对照组上升3．61倍和2．12倍；高表达Mer的HMEC一1细胞迁移能力[迁移到Transwell下室壁的细胞为（21±6）／视野]较对照组[（36±11）／视野]明显下降。体外血管形成实验也表明高表达Mer基因的HMEC-1细胞血管形成能力明显下降，抑制率为76．9％；荧光定量PCR结果显示VEGF-C和VEGFR-2表达明显下降，VEGF-C表达量为对照组的44．7％，VEGF-C表达为对照组的25．6％。结论 Mer过表达可以显著抑制HEMC-1细胞的迁移能力和血管形成能力，并且可能是通过VEGF-C／VEGFR-2信号途径发挥作用。     

APP17肽对心肺复苏大鼠海马神经元IR IRS-1表达的影响

目的观察APP17肽对心肺复苏大鼠海马神经元CA1区胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物-1（IRS—1）表达的影响。方法24只SD大鼠随机分为3组：假手术对照组（对照组）、心肺复苏组（复苏组）、APP17肽组，每组8只。用窒息法制作大鼠心肺复苏模型。APP17肽组于自主循环恢复（ROSC）时立即静脉注射APP17肽3．33μg／100g体质量，约5mL；对照组和复苏组给予等剂量生理盐水。2h后断头取脑行免疫组化染色，观察3组大鼠海马CAI区神经元IR、IRS—1表达的变化。结果与对照组相比复苏组大鼠海马CAI区IR、IRS—1染色阳性神经元明显减少（P〈0．05—0．01）差异有统计学意义；与复苏组相比APP17肽组IR、IRS—1阳性神经元明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05—0．01）。结论心肺复苏大鼠海马神经元IR、IRS—1表达降低，复苏早期给予APP17肽干预可使其表达恢复正常或接近正常。     

Saitohin基因Q7R多态性与肌萎缩侧索硬化的相关性研究

目的 探讨中国人种Saitohin基因(STH)Q7R多态性与肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的发病相关性.方法 采用病例-对照研究,应用递减聚合酶链式反应-限制性酶切片段长度多态性(Touchdown-PCR-RFLP)方法检测135例ALS患者和135例正常人STH基因Q7R多态性.结果 所有DNA样本的STH基因均为QQ型纯合子.结论 STH基因Q7R多态性与ALS无相关性.     

免疫球蛋白G促进胶质瘤细胞系U87MG中PCNAP-ERK及P-SRC的表达

目的了解在体外培养条件下人源性免疫球蛋白G(IgG)刺激人胶质瘤细胞系U87MG后,对增殖细胞核抗原(PCNA)、激活的细胞外信号调节激酶(P-ERK)及激活的非受体酪氨酸激酶(P-SRC)表达的影响。方法用不同浓度的IgG(0.01、0.1、1μg/mL)刺激U87MG,24h后采用Western blot方法检测PCNA、ERK及P-ERK、SRC及P-SRC的表达变化情况。结果 IgG直接作用于体外培养的胶质瘤U87MG后,相对于对照组而言PCNA、P-ERK及P-SRC表达有明显的升高,并且表达呈现出一定的剂量依赖性。结论 IgG可能与神经系统癌症有关联。     

NRXN1基因和MECP2基因SNP检测及其与儿童自闭症临床表现的关联研究

目的 探讨神经轴突蛋白1(NRXN1)基因和甲基CpG结合蛋白-2(MECP2)基因单核苷酸多态性(SNP)与儿童自闭症临床表现及易感性的关系.方法 选取2019年9月至2021年6月于该院就诊或进行康复治疗的128例自闭症患儿为自闭症组,同期选取该院145例体检健康儿童作为对照组.采用Sequenom MassArr...     

HMGB_1和TREM-1在慢性牙周炎患者龈沟液与血清中的表达

目的分析慢性牙周炎患者牙龈、血清中高迁移率族蛋白B-1(HMGB_1)与髓样细胞触发受体-1(TREM-1)水平变化对牙周病发病及病情发展的影响。方法选择2016年1月～2017年12月我科就诊的慢性牙周炎患者62例,按照慢性牙周炎分级标准,分成轻度组38例,中重度组24例,同期选择健康体检者30例为对照组。检测入选者龈沟液与血清观察指标HMGB_1、TREM-1与慢性牙周炎的炎症因子IL-6,IL-8,IL-10,TNF-ɑ、IFN-γ,分析HMGB_1与TREM-1,IL-6,IL-8,IL-10,TNF-ɑ、IFN-γ在对照组、轻、中重度组患者中表达水平及其在龈沟液与血清中表达水平的差异,检验HMGB_1、TREM-1与IL-6,IL-8,IL-10,TNF-ɑ、IFN-γ的相关性。结果在龈沟液与血清中,对照组与轻、中重度组慢性牙周炎患者HMGB_1、TREM-1、IL-6,IL-8,IL-10,TNF-ɑ、IFN-γ的表达水平均有统计学差异(P0.05)。轻、中重度组患者龈沟液中HMGB_1、TREM-1、IL-6,IL-8,IL-10,TNF-ɑ、IFN-γ表达水平比血清中高(P0.05或P0.01)。相关性检测结果,HMGB_1、TREM-1与IL-6,IL-8,TNF-ɑ、IFN-γ呈正相关,与IL-10呈负相关,有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 HMGB_1与TREM-1在慢性牙周炎患者的龈沟液与血清中的表达水平异常,其对慢性牙周炎患者的发病及病情发展有一定的影响。     

靶基因调控的脐血干/祖细胞体外长期扩增与调控的实验研究

目的探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和安全性。方法构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和两个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(2xF36v,F2)组成。AP20187可与F36v特异结合引起JAK2二聚化而激活细胞内信号传导。该载体同时含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,用作检测细胞增殖的标记。应用MiniMACS免疫磁珠分选系统纯化分离脐血CD34 细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34 细胞。转导后的CD34 细胞在SCF、FL、TPO、IL-6细胞因子的联合培养条件下,以不加或加入AP20187分别作为对照组和实验组。定期检测CD34 细胞基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养和裸鼠致瘤试验。结果分选的CD34 细胞纯度为91%以上,基因转移率为49．3%±6．2%;实验组AP20187 SCF FL TPO IL-6(ASFTI)与对照组SCF FL TPO IL-6(SFTI)组均可获得CD34 细胞大量扩增。随着培养时间的延长,实验组扩增的CD34 细胞GFP阳性率由基线水平逐渐上升于第11周时达到95%以上,而对照组GFP阳性率逐渐下降到基线水平以下并逐渐消失。在培养6周左右,实验组CD34 CD38-、CD34 CD38 细胞亚群扩增倍数分别为(228．26±32．31)、(321．48±40．52),分别与对照组相比,差异有显著性。ASFTI组转基因CD34 细胞于12周后仍可产生造血祖细胞集落(BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix)。扩增后CD34 细胞检测染色体核型正常,裸鼠实验无致瘤特性。结论转染JAK2基因的人脐血CD34 细胞协同其他细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后开展干细胞治疗某些遗传性血液病有潜在的应用价值。     

非小细胞肺癌组织EGFR/ALK/ROS1基因联合检测的临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR),间变性淋巴瘤激酶(ALK)和肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶(ROS1)三种基因突变联合检测的临床意义。方法 收集2017年1月～2018年7月患者NSCLC组织标本146例,采用过柱法提取DNA和RNA,突变检测采用RT-PCR法和扩增阻滞突变系统(ARMS)法。结果 EGFR/ALK/ROS1三联检的突变频率为41.8%(61/146),明显高于单基因检测突变率:EGFR(33.6%,49/146),ALK(6.8%,10/146)和ROS1(2.7%,4/146)。EGFR的不同突变类型的检出率如下:19Del 52.9%(27/51),L858R 41.2%(21/51),G719X,L861Q 5.9%(3/51); 其中还检出四例双突变标本:19Del+ L858R(1例),19Del+G719X,L861Q(1例),ALK+19Del(1例),ROS1+L858R(1例)。EGFR/ALK/ROS1阳性标本中女性(56.7%,30/53)明显高于男性(33.3%,31/93),两者比较差异有统计学意义(χ²=7.516,P=0.006),肺腺癌(47.9%,58/121)明显高于鳞癌(4.8%,1/21),差异具有统计学意义(χ²=13.733,P=0.000)。不同来源组织突变检出率为:手术切除肿瘤组织标本41.0%(32/78),细针穿刺活检及支气管镜刷检细胞学等标本43.4%(23/53),胸腔积液标本40.0%(6/15),三者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 在NSCLC基因突变中:EGFR/ALK/ROS1三联检的突变频率明显高于EGFR,ALK和ROS1单基因检测。EGFR常见突变基因为19Ex Del和21Ex L858R。女性突变率明显高于男性。EGFR/ALK/ROS1的联合检测可一次获得更多基因突变信息,为靶向用药提供更多选择,尤其是对于临床稀有标本意义更大。     

转录因子E2F1调控KIR3DL1基因表达的分子机制

目的 研究转录因子E2F1对KIR3DL1基因启动子转录活性的影响,明确其调控KIR3DL1基因表达的分子机制.方法 采用PCR方法 从K562细胞基因组DNA中扩增突变型KIR3DL1基因启动子序列,将产物连接到pGL3-Basic荧光素酶载体,构建报告重组子;采用染色质免疫共沉淀方法 检测E2F1与KIR3DL1启动子在细胞内的结合;采用阳离子脂质体SuperFect包裹突变型和野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,然后转染K562细胞,染色质免疫共沉淀方法 检测E2F1与重组子在细胞内的结合,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性;将E2F1真核表达载体与野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子共转染K562细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.结果 成功构建突变型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,测序证实,在K562细胞KIR3DL1启动子区1个潜在的转录因子E2F1结合位点有1个自然发生的点突变(TTTGGCGC→TTCGGCGC);E2F1完全不能与K562细胞中突变型KIR3DL1启动子结合,但能与NK-92MI细胞中没有突变的野生型KIR3DL1启动子结合;突变型KIR3DL1启动子.荧光素酶报告重组子保留了部分与E2F1的结合能力,但其相对荧光素酶活性较野生型降低了50%;共转染E2F1真核表达载体使野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子的相对荧光素酶活性增加为对照组的2倍以上.结论 转录因子E2F1参与调控KIR3DL1基因转录激活,E2F1结合位点上CpG二核苷酸的数量和甲基化模式可能影响转录因子E2F1与靶序列的结合.     

肾上腺皮质肿瘤与MEN1基因的相关性研究

目的 从分子水平上揭爪散发性肾上腺皮质肿瘤的发病与MEN1基因突变的相互关系,为今后开展症状前诊断和产前基因诊断创造前提条件.方法 在对先证者进行临床诊断的基础上,用微量快提法制备模板DNA,用自行设计的9对引物对先证者MEN1基因的所有编码区以及外显子与内含子的交界部位进行PCR扩增和DNA序列分析.结果 先证者MEN1基因第4内含子存在隐蔽性拼接位点ⅣS4as（-9）G〉A的杂合突变,而正常对照无此突变.结论 所用检测方法快速简便、微量经济,可用于肾上腺皮质肿瘤的快速确诊.所发现的MEN1基因的ⅣS4 as（-9）G〉A隐蔽性拼接位点突变为国内首报的病理性突变.     

CPS1基因与肿瘤关系的研究进展

氨甲酰磷酸合成酶1（CPS1）是催化尿素循环限速酶之一,主要在肝细胞和肠上皮细胞中表达,正常生理情况下其在清除体内代谢废物氨的过程中起重要作用。研究表明,CPS1基因与肝癌、肺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤关系密切,通过多种信号转导通路或影响嘧啶合成等途径影响细胞增殖、凋亡、迁移等细胞生物学行为,从而影响肿瘤的发生发展或患者的预后。因此,研究CPS1基因与肿瘤的关系,对恶性肿瘤早期诊治、预后评价等方面有重要意义。该文就CPS1基因与肿瘤的关系进行综述。     

阿司匹林抵抗与基因多态性的相关性研究

目的:研究环氧化酶1(COX-1),环氧化酶2(COX-2)及血小板糖蛋白受体Ⅲa(glycoprotein Ⅲa,GPⅢa)的基因多态性与阿司匹林抵抗发生的相关性。方法:采用PCR产物直接测序分析法,对181例服用阿司匹林的心脑血管病患者的COX-1(-842A>G、22C>T、50C>T、128G>A、644C>A、714C>A),COX-2(765G>C)及GPⅢa(196C>T)基因的8个多态性位点进行基因型检测,光学法血小板聚集测定血小板功能。结果:COX-1(128G>A、644C>A)位点多态性在阿司匹林抵抗和半抵抗组与阿司匹林敏感组间分布无统计学差异(P分别为0.4351和0.8188);COX-2(765G>C)位点多态性在阿司匹林抵抗和半抵抗组与阿司匹林敏感组间分布有统计学差异(PG、22C>T、50C>T、714C>A),GPⅢa(196C>T)等位点未发现突变型等位基因。结论:调查人群中COX-1(-842A>G、22C>T、50C>T、714C>A),GPⅢa(196C>T)这两个位点多态性少见;COX-1的128G>A和644C>A位点的多态性与血小板对阿司匹林反应能力无关;COX-2(765G>C)位点多态性可能与阿司匹林抵抗的发生具有相关性。     

视网膜色素变性患者RP1基因突变位点与临床表型相关性初探

目的 探索视网膜色素变性1基因(RP1)的新突变及其与特殊临床表型的相关性.方法 将2018年1月至2019年7月在山东省滨州市人民医院眼科确诊的视网膜色素变性的25个家系的86例患者纳入研究,收集临床相关资料.采用高通量二代基因测序对患者及家系样本进行基因测序,用Sanger验证确认基因变异位点,并进一步分析患者相关...     

宫颈癌超声造影的诊断价值及与Egr-1基因表达的相关性

目的探讨宫颈癌患者的超声造影特征及其与Egr-1基因表达的相关性。方法分析40例病理确诊为宫颈癌患者的经腹超声造影特征,观察肿瘤的形态结构、血流信号分布及多普勒血流特征,对术后的肿瘤组织应用QRTPCR检测Egr-1基因的表达,分析超声造影表现与Egr-1基因表达之间的相关性。结果肿瘤组织的峰值强度(PI)为(75.71±2.13)显著高于正常组织(58.12±1.92),差异具有统计学意义(P0.001)。肿瘤组织的病灶达峰时间(TTP)为(32.43±1.76)s显著短于正常组织(40.41±2.24)s,差异具有统计学意义(P=0.003);Egr-1基因在宫颈癌组织标本中的表达明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P0.001);Egr-1基因的表达与宫颈有无肿物,肿块的大小(≤4 cm)、淋巴结转移及病理分级相关(P均0.05);宫颈癌造影增强强度与Egr-1表达相关,与肿瘤大小、淋巴结转移及病理分级无明显相关关系(P0.05);非均匀性增强在Egr-1低表达患者中的比率明显高于Egr-1高表达者,差异具有统计学意义(P0.05)。结论宫颈癌超声造影特征可显示其与Egr-1基因表达的相关性,有助于无创性评估宫颈癌的预后评估。     

上皮钙黏着蛋白mRNA表达与肺癌的相关性研究

目的 探讨E-cadherin(上皮钙黏着蛋白,E-cad)mRNA与肺癌及其病理类型之间的相关性.方法 用巢式RT-PCR检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中的E-cad mRNA的相对表达量.结果 癌组织1.33±0.53、癌旁组织1.65±0.60、远癌组织2.01±0.46、非肺癌对照肺组织2.09±0.09,经方差分析癌、癌旁和远癌组织差异有统计学意义(F=18.810,P<0.01),但远癌组织与非肺癌对照肺组织之间的差异无统计学意义(P>0.05).肺鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中E-cad mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 E-cad mRNA表达减少或缺失与肺癌的发生和发展有相关性,与肺癌的组织类型无关.     

Tiam 1基因在喉癌中的表达和意义

目的研究T淋巴瘤侵袭转移基因Tiam 1(T lymphoma invasion/metastasis 1)表达与喉癌浸润转移的关系.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例喉癌组织、12例喉癌转移的颈部淋巴结和10例正常喉部组织Tiam 1 mRNA的表达.结果有颈淋巴结转移和无颈淋巴结转移的喉癌原发灶Tiam 1 mRNA高表达率分别为75%(6/8)和18.2%(4/22),P=0.0072;有癌转移和无癌转移的淋巴结Tiam 1 mRNA高表达率分别为100%(8/8)和25%(1/4),P=0.0182.30例喉癌有10例Tiam 1 mRNA高表达,高表达率为33.3%.结论 Tiam 1 mRNA表达与喉癌浸润转移呈相关关系.     

EB病毒感染的系统性红斑狼疮患者中BYRF1基因和BcLF1基因的表达与系统性红斑狼疮分期的关系

目的 探讨EB病毒（EBV）感染的系统性红斑狼疮（SLE）患者EBV基因BYRF1和BcLF1表达与SLE的关系。方法 应用聚合酶链反应（PCR）-Southern杂交技术检测44例SLE患者和43名正常对照外周血单个核细胞中EB病毒（EBV）特异性DNA片段，反向（RT）-PCR检测EBV特异性DNA片段阳性患者病毒潜伏期基因BYRF1和增殖期基因BcLF1的表达。结果 SLE患者组EBV特异性DNA片段BamHI-W阳性率为72．73％（32／44），明显高于正常对照组6．98％（3／43）（X^2=39．1779，P=0）。32例EBVBamHI-W片段阳性标本中有20例BYRF1mRNA阳性，其中活动期患者9例，稳定期患者11例，活动期和稳定期患者阳性率的差异无显著性（P=0．2907）。EBV增殖期基因BcLF1mRNA16例阳性，其中活动期患者14例，稳定期患者2例，活动期和稳定期患者之间的差异有显著性（P=0．0002）。结论 BYRF1mRNA和BcLF1mRNA的表达可能在一定程度上参与SLE的发病和病程进展。