HLA相合亲缘供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的分析

本研究分析HLA相合亲缘关系供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因分布情况并探讨其KIR相合的可能性。采用Luminex流式技术和测序方法检测HLA—A，-B，-Cw和-DRBl位点；利用序列特异性引物PCR法（PCR．SSP）检测KIR基因。结果表明：在HLA—A，-B，-Cw和-DRBl等8个位点相合的27对亲缘关系供受者样本中检出17个KIR基因，其中KIR3DL3、KIR3DPI、KIR2DL4和KIR3DL2基因存在于所有个体；检出20种KIR基因型和12种单倍体。常见基因型为2，2。频率为29．6％；最常见单倍体是2，频率为53、0％，样本以A型单倍体为主，频率为67．2％；12对（44、4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全相同，13对（48、1％）供者KIR与受者KIR存在1个单倍体相同，2对（7．4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全不同；1对供者KIR2DLl与受者HLA—Cw（Lys80）配基完全相合，17对供者KIR2DL2／2DL3与受者HLA—Cw（Asn80）配基完全相合，5对供者KIR3DLl与受者HLA—B（Bw4）配基完全相合。结论：HLA相合亲缘关系供受者KIR匹配的错配率比较高。     

供者活化型KIR2DS5在单倍体相合造血干细胞移植预后中的意义

本研究探讨供者杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）和受者人类白细胞抗原（HLA）基因型在单倍体相合造血干细胞移植（HSCT）预后中的意义。26例患者接受单倍体相合HSCT,均未进行体外T细胞去除（TCD）。采用序列特异性引物聚合酶链式反应（PCR-SSP）分型技术对供、受者HLA和供者KIR基因型进行检测。根据供者KIR和受者HLA-Bw4组、-C1组、-C2组等位基因分析结果进行供受者KIR/HLA分组。对KIR/HLA不合与相合组、Bw4不合与相合组、C2不合与相合组、Bw4和C2均不合组与至少其一相合组在造血重建、移植物抗宿主病（GVHD）、无病生存（DFS）、移植后感染及移植相关死亡（TRM）等方面的差异进行比较;并就供者活化型KIR对单倍体相合HSCT预后的影响进行评价。结果表明：各组在造血重建、急性或慢性GVHD发生率、DFS、移植后感染及TRM等方面均无显著性差异（p均〉0.05）,但C2不合组发生严重GVHD4例。供者活化型KIR2DS5阳性组2年DFS明显优于阴性组,分别为（85.7±13.2）%、（31.2±12.8）%,p〈0.05〕。结论：供者KIR及受者HLA基因型对单倍体相合HSCT预后有影响,供者携带活化型KIR2DS5可能有助于提高患者的DFS。     

活化性及抑制性免疫球蛋白样受体对非去T细胞异基因造血干细胞移植预后的影响

本研究探讨异源反应性NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）与HLA配体的关系对非去T细胞异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）预后的影响。应用序列特异性引物分型技术检测供受者的K／R及HM基因型,并对我院67例接受非去T细胞allo—HSCT的病例资料进行回顾性分析。根据供者KIR及受者H厶4关系及供者是否表达活化性KIR进行分组,通过单因素及多因素分析确定抑制性及活化性KIR基因对移植预后的影响。结果表明,抑制性KIR／配体相合组无事件生存率（EFS）略高于不合组,其中KIR2DL1／C2相合组3年EFS显著高于C=2不相合组（69．2％vs44．8％,P=0．043）,而抑制性K／R／配体相合组的复发率、急性GVHD发生率及移植相关死亡率（TRM）与不合组无显著差异。供者表达活化性KIR2DS2的患者,其3年EFS更高（81．3％vs52．6％,P=0．05）,且复发率显著减低（7．7％vs34．2％,P=0．05）。而受者不表达c2组配体时,供者表达活化性KIR2DSl的患者。即KIR2DS1阳性／HLA—C2阴性组,其3年EFS明显下降（P=0．028）,急性GVHD发生率明显上升（P=0．028）。多因素分析表明,疾病进展期、活化受体数目增多、供者不表达KIR2DS2表型是生存率下降的独立危险因素（HR=3．34、2．19、3．18;95％CI=1．43—7．82、0．99—4．83、0．93一11;P=0．005,0．053,0．066）。此外,疾病进展期、供者不表达KIR2DS2表型也是高复发率的独立危险因素（HR=6．72,9．43;95％CI为1．36—33．16,1．03—8．33;P=0．019,0．047）。而供者KIR2DSl阳性／受者HLA-C2阴性是移植相关死亡的唯一危险因素（HR=3．27,95％CI1．78—9．06,P=0．023）。结论：在非去T细胞allo-HSCT中,抑制性K／R／HLA不合对移植后患者生存率、疾病复发率及TRM的影响较小,但可能干扰移植早期抗病毒免疫。抑制性KIR2DL1／HLAC2不合组EFS显著低于相合组,这可能与该组患者TRM上升、急性GVHD发生率升高有关。而活化性K／R对患者EFS、复发及急性GVHD发生率都有影响。供者不表达KIR2DS2预示着生存期延长,这与复发率低有关,而供者KIR2DS1阳性／受者HLA-C2阴性组,预示着生存期缩短及急性GVHD发生率增高,TRM增高。因此,在非去Tallo—HSCT中,分析供受者KIR及其配体可以为供者优化选择提供分子生物学依据。     

供者KIR基因型B／X对无关HLA全相合造血干细胞移植的影响

目的分析NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）B／X基因型对无关供者HLA全相合造血干细胞移植患者预后的影响。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP．PCR）和序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应（SSOP-PCR）的方法,对52对HLA全相合供．受者进行KIR与HLA分型．患者中急性淋巴细胞白血病（ALL）22例,急性髓系自血病（AML）13例,慢性粒细胞白血病（CML）15例,骨髓增生异常综合征（MDS）l例,急性杂合型白血病（HAL）l例。结果①28例供者KIR基因型为B／X,24例供者KIR基因型为A／A。②KIR基因型B／X组患者移植后中性粒细胞和血小板的重建时间与A／A基因型组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;两者的Ⅲ^。-Ⅳ^。急性GVHD（10．7％VS20．8％,P=-0．266）和慢性GVHD（53．6％Vs29．2％,P=0．067）之间的差异无统计学意义。B／X基因型组患者移植后3年持续缓解率（70．7％VS62．5％．P=0．414）和3年总生存率（75．5％VS62．5％,P=0．194）高于A／A组,但差异无统计学意义。结论在无关供者HLA全相合造血干细胞移植中,供者KIR基因型B／X可能增加了患者慢性GVHD的发生率,对持续缓解率和总生存率无明显影响。     

异基因活化的NK细胞与HLA全相合同胞造血干细胞移植预后的关系

最新的研究表明,在HLA全相合同胞造血干细胞移植中,当受者的细胞表面缺乏供者NK细胞抑制型受体的配体时,供者来源的NK细胞同样会发生异基因活化,通过特异性杀伤受体抗原呈递细胞达到阻止GVHD启动的目的,主动攻击受者淋巴细胞促进供者细胞植入,识别和攻击受者白血病细胞以降低移植后白血病复发率,从而改善HLA全相合同胞造血干细胞移植患者预后,同时活化型受体亦会对患者的预后产生影响。本文就抑制性和活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）对HLA全相合同胞造血干细胞移植预后影响的研究进展作一综述：     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因及其配体相合或错配对单倍相合骨髓移植效果的影响

本研究分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer cell Ig-like receptor,KIR）及其配体分子相合与否对单倍体相合骨髓移植效果的影响。分析了74例KIR基因及其配体分子HLA-Cw的分布频率和特点,同时比较KIR分子配体缺失与否对单倍相合骨髓移植患者总体生存、无病生存、GVHD发生以及复发等的影响。结果表明：19个KIR基因表型中2DL1、2DL4和3DL2-3在所有个体100%分布,其他高频率分布的还有3DP1（98.6%）、2DP1（98.6%）、3DL1（97.3%）、2DL3（97.3%）;抑制型基因分布频次是活化型的1.37倍;所有单倍体都含有2DL1、KIR3DL2、3DL3和2DL4,其中每个单倍体中均含有2DL2和/或2DL3。HLA-C14个等位基因中Cw7分布频率最高为37.8%;KIR2DL2/2DL3识别配体Group2（HLA-Cw1,3,7,8,13,14）组占43.2%。32例单倍相合骨髓移植中KIR基因错配发生比例为43.8%,其中9/14例为2DL不相合、5/14为2DL2或3DL1不相合;46对单倍相合骨髓移植中HLA-Cw全相合者29例,不相合者14例,HLA-Cw发生完全错配比例为30.4%,全相合比例为63.4%。14例KIR基因不相合和13例KIR基因相合移植病例中,KIR基因相合组生存率高于KIR基因不相合者（p=0.032）;17例KIR分子配体HLA-Cw不相合移植患者的DFS明显高于24例相合者（p=0.024）。按供受者KIR配体是缺失的GVHD矢量组生存率高于非GVHD矢量组（p=0.015）。急性重症GVHD发生与活化型KIR2DS1/2DS2有关,2DS1/2DS2不相合组高发急性重症GVHD同时复发减低,而2DS1/2DS2相合组低GVHD但是复发增多。14例KIR配体不相合髓系白血病患者骨髓移植后1例复发死亡,而12例KIR配体相合组患者有4例复发死亡。结论：单倍体相合骨髓移植的主要特点就是HLA不全相合,KIR基因表型不一致性及其配体缺失也是其主要免疫学特征,供者型KIR配体的缺失与移植效果有密切关系,在单倍相合移植中分析KIR基因及其配体对于供者选择和判断预后有重要意义。     

体外不去T细胞单倍体造血干细胞移植后NK细胞免疫球蛋白样受体重建的影响因素

目的探讨造血干细胞移植（HSCT）后早期NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）恢复的影响因素。方法借助三色和四色荧光标记技术，用流式细胞术对24例行体外不去T细胞的HLA不相合HSCT的患者（移植前、＋30天、＋60天）及其供者外周血中NK细胞KIR的表达进行了测定，包括CD158a（KIR2DL1）、CD158b（KIR2DL2）和CD158e（KIR3DL1）；同时用流式细胞术对移植物中CD3、CD4、CD8、CD14、CD34的含量进行了测定。结果发生Ⅱ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病（aGVHD）患者在＋30天NK细胞KIR的表达明显低于0～I度aGVHD患者，CD158b[分别为（19．27±9．40）％和（28．92±10．59）％，P=0．018]和CD158aCD158b[分别为（7．30±4．73）％和（14．26±9．71）％，P=0．016]尤为显著。多因素分析表明移植物中CD4^＋T细胞是引起aGVHD的危险因素。进一步的相关分析表明每千克体重输入的CD4^＋T细胞数与移植后早期NK细胞上CD158a、CD158aCD158b和CD158e的表达呈明显的负相关。结论体外不去T细胞的HLA不相合的HSCT中，不仅移植后aGVHD的发生或其相应的治疗措施抑制了移植后早期NK细胞上KIR的恢复；而且移植物中T细胞也直接或间接影响了移植后早期NK细胞上KIR的重建，进而影响了NK细胞功能的恢复。     

供者KIR和受者HLA遗传背景与血缘关系全相合造血干细胞移植预后的关系

目的探索供者抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like re- ceptor,KIR)和受者HLA遗传背景与血缘关系全相合造血干细胞移植(HSCT)预后的关系。方法采用反向序列特异性寡核苷酸探针(RSSOP)和(或)序列特异性引物PCR(PCR-SSP)分型技术检测HLA 基因型,采用PCR-SSP技术检测供者KIR基因型。对59例接受血缘关系HLA-ABDR全相合、非去除 T细胞HSCT的恶性血液病患者病例资料进行回顾性分析。结果Ⅱ-Ⅳ级急性移植物抗宿主病 (aGVHD)发生率在KIR-HLA相容组患者为32％,非相容组患者为78％,两者差异有统计学意义(P= 0．026);Ⅱ-Ⅳ级aGVHD在Bw4相容组患者为24％,Bw4非相容组患者为61％,差异亦有统计学意义(P=0．018)。真菌感染发生率在Bw4相容组患者为14％,Bw4非相容组患者为44％,前者显著低于后者(P=0．028)。髓系疾病中,真菌感染发生率在Bw4相容组与Bw4非相容组患者分别为12％和 80％,前者明显低于后者(P=0．002);C2相容组患者总生存(Overall survival,OS)率显著高于C2非相容组患者(P=0．01)。结论供者KIR和受者HLA遗传背景与血缘HIA全相合HSCT预后与 aGVHD发生率、OS率和真菌感染发生率均有相关关系。供者KIR与受者HLA相容时,受者aGVHD 发生率下降。选择Bw4相容的供者有助于减轻患者aGVHD及真菌感染发生率,选择C2相容的供者有助于提高患者OS率。研究结果为遗传学指标指导下供者优化选择提供分子依据,为临床制定治疗方案提供参考。     

人NK细胞表面KIR与HLA I类抗原

KIR受体与HLA相互作用在人类遗传、免疫应答及异基因造血干细胞移植等方面发挥着重要作用.KIR能识别HLA I类抗原;KIR与HLA各自能独立遗传,HLA配型不能准确推断KIR表型;KIR的表达主要与其基因型有关,HLA对KIR表达的调节作用微乎其微,KIR的基因型可以决定其表现型.供受者间KIR受体-HLA配体不相合有利于异基因造血干细胞移植,尤其是单倍体相合造血干细胞移植,KIR受体-配体模型可以更好地提示造血干细胞移植的预后.本文就KIR与HLA在造血干细胞移植中的相互作用、KIR与HLA的遗传学基础、NK细胞表面KIR表达与HLA的关系及KIR和HLA在免疫应答中的作用作一综述.     

异基因造血干细胞移植中杀伤细胞抑制性受体(KIR)在GVHD和GVL 发生中的作用

杀伤细胞抑制性受体(KIR)属于免疫球蛋白超家族成员Ⅰ型跨膜蛋白分子，主要表达于人NK细胞和某些T淋巴细胞。它们的配体为HLA Ⅰ类分子。当KIR所识别的MHC配体缺失时，即表现为对靶细胞的杀伤作用(所谓丢失自我“missing-self”机制)。已证实，)NK细胞和T细胞的KIR分子与靶细胞的MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗宿主病(GVHD)的发生并且影响移植物抗白血病(GVL)作用。KIR的存在可能是免疫活性细胞不攻击自身组织的主要机制。KIR基因家族及其配体HLA-C分子均具有基因多态性，因此在HLA相合和不全相合的异基因造血干细胞移植中，供受者KIR基因表达的差异在一定程度上影响移植效果。本文主要就KIR如何影响异基因造血干细胞移植后GVHD和GVL进行综述。     

抑制性和激活性免疫球蛋白样受体在亲缘半相合造血干细胞移植中的作用

目的 分别探讨NK细胞中抑制性和激活性免疫球蛋白样受体(KIR)在亲缘半相合造血干细胞移植(HSCT)中的作用.方法 检测47例亲缘半相合HSCT中的供者KIR基因型和患者HLA-C基因型,随访移植后2年总生存率、Ⅲ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病(GVHD)发生率和复发率.结果 ①按供受者抑制性KIR与其配体HLA-C是否匹配分为两组,匹配组的2年总生存率明显高于不匹配组[分别为(87.5±8.3)%和(54.5±9.0)%,P=0.03];复发率明显降低[分别为0和(25.4±9.5)%,P=0.05].将病例分为髓系白血病和淋巴细胞白血病,其中30例髓系白血病患者中匹配组复发率明显低于不匹配组[分别为0和(35.0±14.4)%,P=0.04].其他项目差异无统计学意义.②常见的激活性KIR主要包括3个:KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3.分别按其供者是否表达进行单因素分析,其中KIR2DS1(+)组Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD发生率比KITR2DS1(-)组低(分别为13%和28%,P＞0.05);KIR2DS2(+)组复发率低于KIR2DS2(-)组[分别为0和(17.3±7.1)%,P＞0.05];KIR2DS3(+)组Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD发生率低于KIR2DS3(-)组(分别为11%和26%,P＞0.05);其他无明显差异.结论 ①亲缘半相合HSCT中,供者抑制性KIR与患者HLA-C匹配组较不匹配组总体生存率明显升高,复发率明显降低.特别在髓系白血病中,复发率明显降低.②对于激活性KIR受体中KIR2DS1或KIR2DS3的表达,可能降低急性重度GVHD的发生率;而KIR2DS2(+)组表达,可能降低复发率.

Abstract：

Objective To investigate the effect of inhibitory and activating KIRs on a cohort of Chinese leukemia patients who received haplo-identical hematopoietic stem cell transplantation (HSCT).Methods Donor' s inhibitory and activating KIRs and recipient' s HLA-C from 47 cases who received haplo-identical HSCT were tested by PCR-SSP.2 year overall survival ( OS), incidence of severe ( grade Ⅲ to Ⅳ )acute GVHD (aGVHD) and relapse rate(RR) were analyzed.Results ①According to Matched (M) vs Mis-Matched( MM ) between donor' s inhibitory KIR and recipient' s HLA-C1/C2 subgroup, 2 year OS rate in M group[(87.5 ±8.3)%]was significantly higher than that in MM group (54.5 ±9.0)%, (P=0.03).Lower incidence of relapse rate was seen in M group than in M/MM groups[0 vs (25.4 ±9.5)%, P =0.05].In 30 cases of myeloid leukemia patients, there was lower RR in M group than in MM groups[0 vs (35.0 ± 14.4) % ,P = 0.04].②According to the 3 activating KIR genes: KIR2DSI/KIR2DS2/KIR2DS3,lower incidence of grade Ⅲ - Ⅳ aGVHD was seen in KIR2DS1 ( + ) group than in KIR2DS1 ( - ) group ( 13% vs 28%, respectively, P＞0.05); and so was done in KIR2DS3( + ) group( 11% vs 26%, respectively, P＞0.05).The RR was lower in KIR2DS2( + ) group[0% vs (17.3 +7.1)%, respectively, P＞0.05].Conclusions In our haplo-identical HSCT setting, match between donor' s inhibitory KIR and recipient's HLA-C can significantly reduce the incidence of relapse rate and improve OS.Although lower incidences of severe aGVHD are noted in the donors with KIR2DS1 ( + ) or KIR2DS3 ( + ), and lower relapse rate is noted in the donors with KIR2DS2( + ) but without statistic difference, no remarkable effects of activating KIRs on OS have been found in our relatively small clinical series.     

供受体KIR和HLA-Cw基因与无关供体造血干细胞移植后巨细胞病毒激活的相关性

目的 探讨移植物非去T细胞的无关供体造血干细胞移植(HSCT)后患者巨细胞病毒(CMV)激活与供受体杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)和HLA-Cw基因的相关性.方法 以2003年1月至2008年12月48例行无关供体HSCT患者为研究对象,采用PCR-SSP和PCR-SSOP方法 检测供受体KIR基因单体型和HLA-Cw位点,免疫组化监测这些患者移植后CMV感染情况.结果 供受体HLA-Cw相合33例,不合15例,CMV激活率分别为48.5%和66.7%,两组比较差异无统计学意义(χ~2=1.39,P=0.2375),供受体均属于HLA-C1组的有37例,均属于HLA-C2组11例,CMV激活率分别为64.9%和18.2%,两组比较差异有统计学意义(χ~2=18.13,P＜0.0001).供体为KIR单体型A的移植有26例,供体为KIR单体型B的移植有22例,CMV激活率分别为57.7%和50.0%,两者比较差异无统计学意义(χ~2=0.28,P=0.5941).供体激活性KIR基因小于、等于受体的激活性KIR基因的有34例,CMV激活率为70.6%,供体激活性KIR基因大于受体激活性KIR基因的有14例,CMV激活率为14.3%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=12.44,P=0.0004).结论 在无关供体HSCT中受体和供体不同激活性KIR的数量和HLA-Cw位点差异可能与CMV激活存在相关性.     

四川骨髓库汉族人群KIR及其HLA配体的相互关系研究

目的了解杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其HLA配体在四川骨髓库汉族人群中的基因频率分布和配对情况,探讨KIR和HLA的相互关系。方法随机选择四川骨髓库汉族街头无关捐献者标本286(人)份,采用聚合酶链式反应-序列特异性引物扩增(PCR-SSP)做KIR基因检测;采用聚合酶链式反应-直接测序分型法(PCR-SBT)测定HLA-A、B、C等位基因。结果所检测个体均具有结构基因3DL2、3DL3、2DL4和3DP1;共发现29种KIR基因型,ID为1和2的基因型最多见,频率分别为47.55%(136/286)和14.69%(42/286)。HLA-C1和HLA-C2的频率分别为85.15%(487/572)和14.85%(85/572);携带Bw4表位的HLA-A、-B的频率分别是20.78%(119/572)、31.99%(183/572)。所有个体均含有抑制性KIR/HLA-C配受体对,含有1、2和3对配受体对的频率分别是77.27%(211/286)、15.04%(43/286)和7.69%(22/286)。在KIR/HLA-Bw4配受体对中,仅含有3DL1+HLA-Bw4的频率为44.76%(128/286),仅含有3DS1+HLA-Bw4的频率为2.80%(8/286),同时含有3DL1+HLA-Bw4和3DS1+HLA-Bw4的配受体对的频率为25.17%(72/286),另外有27.27%(78/286)的个体无KIR/HLA-Bw4配受体对。结论四川骨髓库汉族人群KIR基因及其KIR/HLA配受体对的分布具有自身特点,抑制性KIR/HLA配受体对占优势。     

A human histocompatibility leukocyte antigen (HLA)-G-specific receptor expressed on all natural killer cells

Human natural killer (NK) cells express several killer cell immunoglobulin (Ig)-like receptors (KIRs) that inhibit their cytotoxicity upon recognition of human histocompatibility leukocyte antigen (HLA) class I molecules on target cells. Additional members of the KIR family, including some that deliver activation signals, have unknown ligand specificity and function. One such KIR, denoted KIR2DL4, is structurally divergent from other KIRs in the configuration of its two extracellular Ig domains and of its transmembrane and cytoplasmic domains. Here we show that recombinant soluble KIR2DL4 binds to cells expressing HLA-G but not to cells expressing other HLA class I molecules. Unlike other HLA class I-specific KIRs, which are clonally distributed on NK cells, KIR2DL4 is expressed at the surface of all NK cells. Furthermore, functional transfer of KIR2DL4 into the cell line NK-92 resulted in inhibition of lysis of target cells that express HLA-G, but not target cells that express other class I molecules including HLA-E. Therefore, given that HLA-G expression is restricted to fetal trophoblast cells, KIR2DL4 may provide important signals to maternal NK decidual cells that interact with trophoblast cells at the maternal-fetal interface during pregnancy.