新型冠状病毒核酸检测的性能验证及评价

目的验证实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测系统的主要性能。方法参考《医学实验室质量和能力的要求》第1部分通用要求GB/T22576.1-2018和第10部分分子生物检验学领域的要求GB/T22576.10-2018对该实验室RT-qPCR检测SARS-CoV-2核酸的检测系统的符合率、重复性、检出限、抗干扰能力、交叉反应等性能特征进行验证及评价。结果该实验室与国家卫生健康委临床检验中心2020年第1、2次SARS-CoV-2室间质评标本的阳性符合率为92%,阴性符合率为100%,总符合率为95%,其中有1例阳性标本未检出阳性,系标本浓度低于最低检测限;弱阳性标本检测的靶基因ORF-1ab和N的Ct值的批内变异系数(CV)分别为1.38%和1.16%,批间CV分别为1.84%和1.72%,均小于5%;检测限浓度(500 copies/mL)标本5次重复检测SARS-CoV-2核酸结果均为阳性;在加入严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、磷酸盐缓冲液(PBS)、人冠状病毒NL63(NL63)、人冠状病毒HKU1(HKU1)、人冠...     

不同新型冠状病毒核酸检测试剂的临床性能评价

目的 评价同一厂家新型冠状病毒(2019?nCoV)核酸检测扩增时间长的试剂(试剂A)与扩增时间短的试剂(试剂B)的临床性能,分析试剂更换的可行性.方法 用2019?nCoV阴性混合样本将商品化2019?nCoV RNA液体室内质控品(以ORF1ab浓度赋值17300 copies/mL)梯度稀释成1730、865、5...     

一种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能验证

目的　评估一种国产新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒是否满足临床SARS-CoV-2 核酸检测要求。 方法　采用15 例SARS-CoV-2 核酸阳性和15 例SARS-CoV-2 核酸阴性的临床样本,1 支SARS-CoV-2 RNA 干粉标准 品,5 支阳性定值参考品和5 支阴性定值参考品,对该试剂盒检测SARS-CoV-2 阴性和阳性符合率、精密度、检出限和 交叉反应进行验证。结果　20 例阴性和20 例阳性样本的N 基因和ORF1ab 基因阴阳符合率均为100%。2 例阳性样本 ORF1ab 基因重复性CV 为0.41%~0.56%,优于N 基因重复性,N 基因和ORF1ab 基因重复性、实验室总不精密度CV 均＜ 5%。检出限重复20 次的检出率为100%,SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体、与SARS-CoV-2 同种属病毒（人副 流感病毒1 型、鼻病毒、MERS,SARS,甲型流感病毒、乙型流感病毒、冠状病毒HKU1,NL63,229E 和OC43）之间不 产生交叉反应。 结论　该试剂盒阴阳性符合率一致,重复性好。SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体,与SARS-CoV-2 同 种属病毒不会产生交叉反应,适用于临床实验室和检测机构进行SARS-CoV-2 核酸筛查。     

新型冠状病毒核酸提取方法的性能评价及临床应用

目的 评价3种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸提取方法的分析性能及临床应用价值.方法采用目前临床常用的裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸,通过实时荧光反转录聚合酶链反应及自建检测系统检测SARS-CoV-2核酸[开放阅读框(ORF)1ab、核衣壳蛋白(N)],评价3种核酸提取方法下的检测精密度、...     

新型冠状病毒核酸检测分析

2020年,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在国内和其他国家暴发流行。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法以其高灵敏度与强特异性,被认为是COVID-19的确诊方法。然而,SARS-CoV-2核酸检测对于阳性患者的阳性率仅有30%~50%,临床较多的疑似病例需多次核酸检测之后才得到阳性结果,使SARS-CoV-2核酸检测阳性作为确诊标准备受质疑。本文结合相关文献及在SARS-CoV-2核酸检测中的工作经验,从病原学、标本采集、核酸提取过程、试剂盒等各个方面对SARS-CoV-2核酸检测方法的影响因素进行深入探讨,对SARS-CoV-2检测出现假阴性或假阳性的原因进行分析与归纳总结,为检测的准确性提供依据,也旨在为基层医院的核酸检测工作提供一定的帮助。     

多套仪器组成的新型冠状病毒核酸检测系统的性能验证方案设计

为新型冠状病毒核酸检测实验室提供适用于多台核酸提取仪和多台荧光定量PCR仪组成的检测系统的性能验证方案。本研究以配置4台核酸提取仪和4台荧光定量PCR仪的新型冠状病毒核酸检测系统为例,验证参数包括方法符合率、精密度和检出限,设计出三套性能验证方案。经过对三套性能验证方案的比较分析,笔者认为方案三最优,其方案是首先在1台核酸提取仪上提取核酸,分别在4台荧光定量PCR仪上进行扩增检测,以验证4台荧光定量PCR仪的性能,然后分别在4台核酸提取仪上提取核酸,在同一台荧光定量PCR仪上扩增检测,以验证4台核酸提取仪的性能,达到了16套组合检测系统的验证效果,保证了新型冠状病毒核酸检测的质量,试剂消耗和时间成本适中,可以有效、经济、快速地评估各性能参数是否符合厂商的声明。     

一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个检测体系中的检出限分析

目的 验证一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个不同检测体系中的检出限,以提升新型冠状病毒核酸检测质量。方法 选择1个试剂配套体系和3个非配套体系,使用中国计量科学研究院新型冠状病毒全序列假病毒核糖核酸标准物质验证检出限性能,并对未通过验证的体系进行分析,以查找原因。结果 该试剂在4个检测体系中检出限验证均通过,其中非配套体系1检出能力最强,其次为配套体系和非配套体系2。缩短细胞裂解、核酸释放与磁珠结合时间、减少核酸洗涤次数会影响试剂检出限。结论 该试剂检出限性能可满足检测需求。相关部门应出台相应仪器的生产标准和校准标准;实验室应关注加样量、非配套体系的优化和仪器设备的维护、保养、校准。     

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。     

不同检测系统对新型冠状病毒核酸的检测结果分析

目的评价不同检测系统对新型冠状病毒(2019-n Co V)核酸的检测能力差异,为选择2019-n Co V核酸检测试剂提供指导。方法用本实验室在用的提取试剂、扩增试剂及扩增仪组合成8个检测系统,分别对国家卫生健康委临床检验中心2019-n Co V室间质评发放的12个样本进行检测。结果纳入统计指标的10个样本中,有5个2019-n Co V阴性样本,8个检测系统对5份阴性样本均为未检出,与预期结果相符,另5份2019-n Co V阳性样本中,8个检测系统均未检出202010(128 copies/m L),均检测出202004、202008、202011。对202002(640 copies/m L)弱阳性样本,只有B及D 2个检测系统检出,其余均未检出。B及D检测系统扩增试剂均为e扩增试剂,检测的符合率总体优于f扩增试剂。N区的阳性率高于ORF区,样本2019-n Co V拷贝数越低,这一现象越显著。A-D检测系统检测到的ORF1ab基因的阳性率高于E-H检测系统,A-D检测系统均使用的是b快速提取试剂,而E-H检测系统使用的是a提取试剂,提取试剂的提取效率对检测结果影响较大。结论...     

不同核酸提取方法和新型冠状病毒核酸检测试剂室间质评结果分析

目的 分析2种不同核酸提取方法和2种新型冠状病毒核酸检测试剂检测室间质评样本的结果,进行性能比较.方法收集2020年江苏省临床检验中心和国家卫生健康委临床检验中心发放的新型冠状病毒核酸检测室间质量评价样本共15份,用2种常用核酸提取方法(磁珠法、核酸释放剂法)、2个厂家实时荧光定量PCR核酸扩增检测试剂检测,进行质评物...     

以组队模式考核450名新型冠状病毒核酸检测人员技能的结果分析

目的 以组队检测模式调查当前在应对疫情防控中大量培训的新型冠状病毒核酸检测后备人员的技术能力,考查团队检测效率,为后续有重点地提高核酸检测人员技能水平、提升整体应对疫情的检测能力提供数据依据.方法 从全省各地市医疗机构、疾控中心和第三方实验室的PCR岗位证名单中按一定比例随机抽调450人,每15人1组,共组建30支组队...     

沙门菌核酸检测试剂盒评价

目的 评价某沙门菌核酸检测试剂盒的性能.方法 研究所需196例临床粪便标本来源于复旦大学附属儿科医院细菌室,以细菌室培养结果为沙门菌检测阳性"金标准",将试剂盒检测结果与培养结果进行对比研究,通过分析灵敏度、特异度、精密度、约登指数、Kappa值、受试者工作特征曲线(ROC曲线)的曲线下面积(AUC)及交叉反应和抗干扰...     

某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估

目的：对某国产人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）的临床应用性能进行评估。方法收集不同H IV感染状态人群的血液样品共计247例,分别使用 H IV-1被评估试剂与已被SFDA批准的对照试剂进行临床检验平行对比。比较两种方法之间的相关性和一致性。对比不符样本用国际公认的Roche公司生产的 HIV-1病毒载量检测试剂进行复核。结果共检测247例样本,被评估试剂与对照试剂检测结果一致的样本有233例,检测结果不一致的样本有14例（其中8例阴阳性结果不一致、6例定量结果对数值差异大于1）,14例不符样本用复核试剂检测确认后,均与被评估试剂检测结果一致。以复核试剂检测结果最终判断：被评估试剂的一致率为100．00％。对177例被评估试剂与对照试剂定量线性范围内样本进行统计分析,定量相关性为0．9671。结论被评估试剂与已上市的国内同类产品在检测功能上具有等效性,被评估试剂灵敏度、定量准确性与Roche检测结果一致性相近,高于对照试剂。     

新型冠状病毒肺炎核酸检测中的假阴性分析及对策

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的疫情引发了全世界的关注。早期诊断对COVID-19的治疗、患者预后尤为关键。临床检验中发现早期的COVID-19患者核酸检测多次呈假阴性,特别是不同时间多次阴性结果后转为阳性,给临床诊断和疾病控制带来极大困扰。该文立足于疫情的早日防控,从临床、检验的不同视角,从标本采集、检测方法、产品稳定性等多方面剖析产生假阴性的可能原因,并且结合临床实践和检测技术,从整合特异性实验室指标,规范标本采集方式和过程,严格检测试剂的监管和审批等方面提出行之有效的方案,旨在为切实降低检测假阴性或假阳性率提供临床参考,为COVID-19临床准确诊断及疫情防控提供有力支撑。     

诺如病毒RNA检测的性能验证与临床应用

目的 对诺如病毒RNA检测试剂进行性能验证,并评估人群中诺如病毒的感染现况.方法 收集2020年12月至2021年7月北京协和医院各科室疑似诺如病毒感染的患者粪便样本,使用诺如病毒RNA检测试剂盒(PCR-荧光探针法,湖北朗德公司)进行检测,并从重复性、符合率、检测下限、抗干扰能力和交叉反应等方面对其检测性能进行评估....     

一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的应用评价

目的 探讨一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的适用性及有效性。方法 选取流感病毒H3亚型、乙型Yamagata系细胞株和甲型H1N1型鸡胚株各1株,对其倍比稀释液及2015年北京市流感病原学监测阳性的67份咽拭子样本,同时采用快速提取法及离心柱提取法提取病毒核酸,经实时荧光PCR法进行定性、定量检测,检测结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 快速提取法提取细胞培养液、鸡胚培养液中流感病毒核酸的最低检测限高于离心柱法10倍,咽拭子样本则高100倍;快速提取法提取核酸后检测到的病毒载量均低于离心柱法,其中对含有病毒量较高的毒株检测到的病毒载量低于离心柱法10倍,而对病毒量较少的咽拭子样本,则低100倍;快速提取法稳定性优于离心柱法;提取后的核酸-80℃保存10 d后冻融复测,快速提取法核酸损失量大于离心柱法。67份离心柱提取法检测阳性咽拭子样本使用快速提取法提取核酸后检测,两种方法阳性符合率总计为92.54%,其中10～102拷贝/ml组,阳性符合率为76.92%,102～103拷贝/ml组,阳性符合率为92.59%,103拷贝/ml组,阳性符合率为100%。结论 快速提取法具有稳定性高、易于操作、不易污染的优势,适用于细胞培养液、鸡胚培养液等病毒含量较高的大量样本中流感病毒核酸提取,适于检测样本量大、人手不足、设备欠缺的基层实验室使用;但-80℃冻融后核酸损失量较大,不宜反复冻融后使用;传统的离心柱法对于病毒含量较少的咽拭子样本及核酸需被反复冻融使用时具有优势。     

新型冠状病毒肺炎基本再生数的初步预测

目的预测新型冠状病毒感染肺炎(2019-nCoV)的基本再生数,为其防控和相关政策支持提供依据。方法基于包括"易感态-潜伏态-感染态-移除态"的SEIR仓室模型,假设2020年1月25日及以前出现症状的感染者均属于无干预自由传播期间感染的人员,结合截至1月26日凌晨已确诊和疑似病例数及国际同行预测的感染人数,参考SARS的流行病学关键参数,对新型冠状病毒感染肺炎的基本再生数进行估计。结果以《人民日报》和丁香园发布的新型冠状病毒感染肺炎疫情实时动态数据为基准,估计2019-nCoV的基本再生数在2.8~3.3之间;以国外同行预测的感染人数为基准,基本再生数在3.2~3.9之间。结论 2019-nCoV早期致病传播能力与SARS接近或略高于SARS,属于中高度传染性的传播疾病。迅速切断传播途径,采用及时有效的防控措施能够较快遏制2019-nCoV的进一步蔓延。