HMGB1对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究高迁移率蛋白1(HMGB1)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法膀胱癌细胞BIU-87分成对照组、siRNA control组、HMGB1 siRNA组共3组,siRNA control组、HMGB1 siRNA组细胞为感染siRNA control慢病毒和HMGB1 siRNA慢病毒的BIU-87细胞,对照组为不感染慢病毒的BIU-87细胞。用Realtime PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平。MTT检测膀胱癌细胞增殖活性,流式细胞术检测膀胱癌细胞凋亡,Western blot检测膀胱癌细胞中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、活化型Caspase-12(Cleaved Caspase-12)、活化转录因子4(ATF4)蛋白水平。结果 HMGB1 siRNA可以下调膀胱癌细胞中HMGB1的表达和转录,siRNA control对膀胱癌细胞中HMGB1表达没有影响。沉默HMGB1后膀胱癌细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-12表达水平升高,内质网应激蛋白CHOP、ATF4表达水平也升高。结论 HMGB1沉默可以通过内质网途径诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高。转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低。空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)%、(7.94±0.19)%、(7.93±0.17)%、(4.62±0.13)%。TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P0.01)。干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P0.01)。结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

组蛋白去乙酰化酶1对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对肝癌细胞增殖凋亡的影响。方法肝癌细胞SNU-449转染HDAC1小干扰RNA(HDAC1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),同时设置不转染的细胞为对照。采用RT-PCR检测细胞中HDAC1mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中HDAC1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肝癌细胞转染siRNA control后,细胞存活率、凋亡率及细胞中HDAC1、Cleaved Caspase-3、STAT3、p-STAT3表达水平与对照细胞相比无显著差异(P0.05)。肝癌细胞转染HDAC1 siRNA后,细胞中HDAC1mRNA和蛋白表达水平与对照细胞相比均受到抑制,并且细胞存活率只有(63.74±8.37)%,而细胞凋亡率升高为(32.84±6.92)%,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,p-STAT3蛋白水平降低。结论干扰HDAC1表达能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与STAT3信号通有关。     

WWOX对胰腺癌细胞活性、凋亡及ATP含量影响及机制初步研究

目的研究含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胰腺癌细胞增殖活性、凋亡及细胞中三磷酸腺苷(ATP)含量影响。方法在胰腺癌SW1990细胞中转染WWOX过表达质粒,同时转染对照质粒作为阴性组,设置只加入转染试剂的细胞为对照组。荧光定量PCR和Western blot法检测各组胰腺癌细胞中WWOX的表达水平,用MTT法测定胰腺癌细胞增殖活性,用流式细胞术测定胰腺癌细胞凋亡情况,用JC-1法检测胰腺癌细胞线粒体膜电位,用荧光素酶法测定ATP含量,用Western blot法检测胰腺癌细胞线粒体和胞质中细胞色素C(Cyt C)及细胞中剪切型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 WWOX过表达质粒转染后的SW1990细胞中WWOX mRNA和蛋白水平高于对照组(P0.05)。高表达WWOX后的SW1990细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中ATP含量降低,线粒体膜电位降低,线粒体中Cyt-C蛋白水平降低,胞质中Cyt-C蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。阴性组细胞WWOX mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率、ATP含量、线粒体膜电位、胞质和线粒体中Cyt-C蛋白水平、细胞中Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白水平与对照组相比均无显著差异(P0.05)。结论 WWOX可以抑制胰腺癌细胞增殖活性,诱导胰腺癌细胞凋亡,减少细胞中ATP合成,这可能与减少线粒体释放Cyt-C和线粒体膜电位有关。     

KLF8在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞生物学特性影响

目的探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)在骨肉瘤中的表达及对骨肉瘤细胞生物学特性的影响。方法通过RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤组织及配对的正常非肿瘤组织中KLF8 mRNA和蛋白水平。以骨肉瘤细胞F5M2为研究对象,细胞转染KLF8小干扰RNA(KLF8 siRNA组)及对照阴性序列(siRNA control组),同时以不做处理的细胞为对照组。RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中KLF8 mRNA和蛋白水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(pSTAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达。结果 KLF8在骨肉瘤组织中的表达水平明显高于非肿瘤组织(P0.05)。siRNA control组细胞中KLF8、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平及细胞存活率、凋亡率与对照组相比无显著差异(P0.05)。KLF8 siRNA组细胞存活率及细胞中p-STAT3、KLF8水平均明显低于对照组(P0.05)。KLF8 siRNA组细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3水平均明显高于对照组(P0.05)。结论 KLF8在骨肉瘤组织中表达上调。干扰KLF8表达可能通过作用于STAT3信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖,促进骨肉瘤细胞凋亡。     

沉默HDAC4抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用机制的研究

目的探究沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达对多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制。方法脂质体Lipofectamine 2000转入LP-1细胞中,实验分为对照组(不做任何处理)、阴性组(转入siRNA NC)、siRNA HDAC4组(转入siRNA HDAC4)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中HDAC4、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量。结果转染siRNA HDAC4后,LP-1细胞中HDAC4蛋白的表达量显著低于对照组(P 0. 05);与对照组相比,siRNA HDAC4组细胞的增殖活性显著降低(P 0. 05);而凋亡率显著增加(P 0. 05); siRNA HDAC4组细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05),但Bcl-2蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论沉默HDAC4基因可抑制多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖,诱导其凋亡,可能通过降低Bcl-2水平,促进Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达发挥作用。     

Survivin siRNA沉默对非小细胞肺癌细胞生物学的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白(Survivin)对非小细胞肺癌(NSCLC)H1299细胞株的生物学影响。方法通过脂质体介导将Survivin基因siRNA瞬时转染H1299细胞。采用RT-PCR及Western blot检测转染后H1299细胞内Survivin基因的表达水平。MTT比色法、流式细胞术(FCM)及Western blot观察细胞增殖、凋亡、周期及Caspase-9蛋白表达变化情况。结果 RT-PCR及Western blot证实,siRNA沉默的H1299细胞中Survivin mRNA、蛋白的表达水平较未转染组明显降低(t=10.970,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。MTT、细胞凋亡及周期结果表明,siRNA沉默的H1299细胞其增殖能力明显减弱、细胞凋亡明显升高,G2/M期阻滞,Caspase-9蛋白表达增加(t=8.162,P=0.001;t=10.800,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。结论 Survivin参与NSCLC细胞增殖、凋亡、周期这一生物学过程。     

MMP-2基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制。方法 Western blot和RT-PCR检测人正常前列腺上皮RWPE-1细胞和前列腺癌PC3细胞中MMP-2的表达情况;以脂质体Lipfectamine 2000将MMP-2 siRNA和MMP-2 control质粒分别转染至siRNA MMP-2组和siRNA control组细胞中,以不做处理的细胞为对照组。Western blot和RT-PCR检测其转染效果;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞的侵袭和迁移;FCM检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和Cleaved Caspase-8蛋白的表达。结果与RWPE-1细胞相比,PC3细胞中MMP-2蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P0.05)。MMP-2在siRNA MMP-2组细胞中的蛋白和mRNA表达显著低于对照组(P0.05),而siRNA control组与对照组间MMP-2的蛋白和mRNA表达水平差异无显著性(P0.05)。siRNA MMP-2组细胞的OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数和VEGF蛋白的表达水平显著下降,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-8蛋白水平显著升高,差异均显著性(P0.05);对照组和siRNA control组间OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数、细胞凋亡率、VEGF和Cleaved Caspase-8蛋白表达均未见显著差异(P0.05)。结论 MMP-2在前列腺癌PC3细胞中高表达,干扰其表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF蛋白和上调Cleaved Caspase-8蛋白的表达有关。     

Xklp2靶蛋白对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和Western blot检测感染后细胞中TPX2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,将各组细胞接种到裸鼠皮下,检测各组裸鼠肿瘤体积和重量,Western blot检测肿瘤组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、TPX2、p53水平。结果 siRNA-NC组细胞中TPX2 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率及Cleaved Caspase-3、TPX2、p53水平与Control组比较,差异无统计学意义(P0.05)。siRNA TPX2组细胞中TPX2mRNA和蛋白均明显低于Control组(P0.05)。siRNA TPX2组细胞增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,与Control组比较差异有统计学意义(P0.05)。接种siRNA TPX2组细胞的裸鼠肿瘤体积和重量均低于Control组,而肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、p53水平均高于Control组,TPX2水平低于Control组(P0.05)。结论下调TPX2抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞裸鼠成瘤能力,这可能与促进p53表达和促进Caspase-3活化有关。     

siRNA介导人结肠癌细胞诱骗受体3基因表达抑制的研究

目的:研究siRNA对结肠癌细胞株SW480 DcR3基因表达的影响.方法:化学合成靶向DcR3基因的4组siRNA,用脂质体转染试剂转染结肠癌细胞株SW480,应用噻唑兰(MTT)法检测siRNA对细胞生长的作用,RT-PcR和Western blot方法检测DcR3基因mRNA水平和蛋白表达量的变化.结果:与对照组相比,MTT试验结果显示各组siRNA对细胞增殖均有明显的抑制效应,但此抑制效应随时间延长而减弱.Western blot结果显示DcR3蛋白表达量明显降低.RT-PCR显示,转染后细胞内DcR3 mRNA的表达量与空白对照组相比降低至24%.结论:DcR3 siRNA通过特异、高效地沉默结肠癌细胞DcR3 mRNA的表达,发挥抑制结肠癌细胞生长的作用.     

siRNA介导入结肠癌细胞诱骗受体3基因表达抑制的研究

目的：研究siRNA对结肠癌细胞株SW480DcR3基因表达的影响。方法：化学合成靶向DcR3基因的4组siRNA．用脂质体转染试剂转染结肠癌细胞株SW480,应用噻唑兰（MTT）法检测siRNA对细胞生长的作用,RT—PCR和Westem blot方法检测DcR3基因mRNA水平和蛋白表达量的变化。结果：与对照组相比,MTT试验结果显示各组siRNA对细胞增殖均有明显的抑制效应．但此抑制效应随时间延长而减弱。Western blot结果显示DcR3蛋白表达量明显降低。RT-PCR显示．转染后细胞内DcR3mRNA的表达量与空白对照组相比降低至24％。结论：DcR3siRNA通过特异、高效地沉默结肠癌细胞DcR3mRNA的表达,发挥抑制结肠癌细胞生长的作用。     

抑制Shh信号通路增加胰腺癌细胞对紫杉醇敏感性的实验研究

目的研究抑制音猬因子(Shh)信号通路对胰腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法给予人胰腺癌SW1990细胞0、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇刺激,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度约为50 nmol/L。用Western blot方法测定0、50 nmol/L紫杉醇处理后细胞中Shh信号通路蛋白Shh、锌指转录因子1(Gli1)、补丁蛋白1(Ptch 1)的表达水平。分别用紫杉醇、Shh信号通路抑制剂cyclopamine处理SW1990细胞,用紫杉醇和cyclopamine共同处理SW1990细胞,MTT测定增殖,克隆实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平。结果 10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇抑制SW1990细胞的增殖,50 nmol/L的紫杉醇可以抑制细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白表达。紫杉醇和cyclopamine单独处理后的细胞增殖能力和克隆形成能力降低,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平升高。与紫杉醇和cyclopamine单独处理的细胞比较,紫杉醇和cyclopamine共同处理后的细胞增殖和克隆能力下降更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平更高,细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平更低。结论抑制Shh信号通路能够增加胰腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

冬凌草甲素干预SHH信号通路抑制人结肠癌细胞SW1116增殖的实验探讨

目的研究冬凌草甲素对结肠癌细胞SW1116增殖的影响及机制。方法用不同浓度的冬凌草甲素处理SW1116细胞,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度。SW1116细胞分为对照组、冬凌草甲素组、Cyclopamine组、联合组,对照组细胞培养液中不添加任何药物,冬凌草甲素组细胞培养液中添加70μmol/L的冬凌草甲素,Cyclopamine组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine,联合组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine和70μmol/L的冬凌草甲素,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中音猬因子(SHH)、平滑蛋白(Smo)、锌指转录因子1(Gli-1)、剪切的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平。结果冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖能力明显降低,其半数抑制浓度为(69.65±6.32)μmol/L。冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中SHH、Smo、Gli-1蛋白表达水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,与未用冬凌草甲素处理的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。SHH信号通路抑制剂处理也可以抑制SW1116细胞增殖和克隆形成,诱导SW1116细胞凋亡,促进细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少细胞中Bcl-2蛋白表达。联合组的SW1116细胞增殖能力和克隆形成能力下降更多,细胞凋亡增加更多,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高,Bcl-2蛋白水平更低,与单纯冬凌草甲素处理的SW1116细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论冬凌草甲素通过抑制SHH信号通路抑制结肠癌细胞增殖和克隆能力。     

Wnt信号通路抑制剂对下调PKM2表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及ROS水平的影响

目的研究Wnt信号通路抑制剂对下调丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法肺癌A549细胞转染PKM2小干扰RNA(PKM2 siRNA组)和小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC组),以没有转染的A549细胞作为对照组。Real-time PCR和Western blot检测三组PKM2水平。用含有5μmol/L的Wnt信号通路抑制剂IWR-1的细胞培养液培养,设置为PKM2 siRNA+IWR-1组和IWR-1组,同时以不含有IWR-1的正常细胞培养液培养PKM2 siRNA组和对照组细胞。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)法检测ROS水平,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果细胞转染PKM2 siRNA后的PKM2 mRNA和蛋白水平、细胞存活率明显下降,细胞凋亡率、ROS水平明显升高,细胞中β-catenin、c-myc水平下降,而Cleaved Caspase-3水平升高,与不转染的对照组细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理A549细胞后,细胞存活率也下降,细胞凋亡增多,细胞中ROS水平升高,Cleaved Caspase-3水平升高,与正常培养的A549细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理转染PKM2 siRNA后的A549细胞,细胞凋亡率最高,细胞存活率最低,细胞中ROS水平最高,与单纯Wnt信号通路抑制剂处理和单纯转染PKM2 siRNA后的细胞相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 Wnt信号通路抑制剂和下调PKM2均能够抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,ROS水平升高,并且二者共同作用后抑制肺癌细胞的作用更明显,下调PKM2可能通过抑制Wnt信号通路阻碍肺癌发生。     

甲基乙二醛对胰腺癌鼢LNC-1细胞增殖及凋亡蛋白表达的影响

目的：探讨甲基乙二醛（MGO）对胰腺癌 PANC-1细胞增殖影响及其作用机制。方法培养PANC-1细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测MGO对PANC-1细胞增殖的影响;Hoechst33258染色细胞后显微镜下观察MGO处理后PANC-1细胞形态变化,Western blot检测凋亡家族蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达变化。结果 MTT检测发现MGO对人胰腺癌PANC-1有明显的抑制作用,且在一定程度上呈剂量时间依赖性;MGO处理48 h后的PANC-1细胞在Hoechst33258染色后荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞核固缩表现;Western blot检测表明MGO能显著降低Bcl-2蛋白表达量而提高Bax和Caspase-3蛋白表达量。结论 MGO能够有效抑制人胰腺癌PANC-1细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过作用凋亡信号通路调控凋亡家族蛋白Bcl-2,Bax 和Caspase-3表达进而诱导PANC-1细胞凋亡。     

PDCD4对高糖诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的研究程序性细胞死亡4 (PDCD4)对高糖诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制。方法胰岛β细胞感染PDCD4 siRNA重组慢病毒,给予高糖处理,Realtime PCR和Western blot检测PDCD4表达水平。CCK8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot方法检测细胞中活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平,用黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测细胞分泌胰岛素水平。结果PDCD4 siRNA重组慢病毒能够有效下调高糖条件下胰岛β细胞中PDCD4的表达水平。高糖处理后的胰岛β细胞的增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,SOD活性降低,MDA含量升高,细胞分泌的胰岛素水平下调。敲低PDCD4可以明显提高高糖环境下胰岛β细胞增殖能力,减少细胞凋亡和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平,提高细胞中SOD活性,降低细胞中MDA水平,促进细胞分泌胰岛素。结论敲低PDCD4能够通过减轻高糖诱导的胰岛β细胞氧化损伤减少细胞凋亡,促进胰岛β细胞分泌胰岛素。     

miR-214对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-214对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡中的影响。方法以心肌细胞H9C2为研究对象,心肌细胞分为4组,依次为正常组、过氧化氢组、miR-214组、NC组,其中miR-214组、NC组细胞分别在转染miR-214模拟物和阴性对照序列后用过氧化氢处理,过氧化氢组用未转染的心肌细胞经过氧化氢处理,正常组用未转染的心肌细胞正常培养。RT-PCR检测细胞中miR-214表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化信号转导与转录因子3(p-STAT3)水平。结果过氧化氢组细胞中miR-214、p-STAT3表达水平和细胞存活率与正常组相比明显下降,而细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3表达水平与正常组相比明显升高(P0.01)。miR-214组细胞中miR-214、p-STAT3表达水平和细胞存活率与过氧化氢组相比明显升高,而细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3表达水平与过氧化氢组相比明显降低(P0.01)。结论过氧化氢能够诱导心肌细胞凋亡,miR-214能抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,STAT3信号通路可能是其作用机制之一。     

siRNA介导的HPV16E6/E7基因沉默对宫颈癌SiHa增殖及凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)介导的人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6/E7基因沉默对宫颈癌Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。方法设计靶向HPV16 E6/E7基因启动子区的siRNA序列,构建质粒转染Si Ha细胞,筛选稳定沉默E6/E7基因的细胞系。用QT-PCR和RT-PCR检测细胞E6/E7基因mRNA的变化、Western blot检测细胞E6/E7蛋白变化;利用MTT、RT-PCR、免疫组化法检测细胞增殖情况,Tunel检测细胞的凋亡情况。结果成功构建E6/E7基因稳定沉默的细胞株,其mRNA与蛋白沉降效率明显。MTT及Ki-67表达显示细胞增殖活性降低;Tunel显示沉默细胞凋亡增加。结论 siRNA技术可以成功诱导HPV16型E6/E7基因沉默,从而影响癌细胞的生长、增殖和凋亡。     

IncRNA MT1JP抑制乳腺癌细胞增殖并促进乳腺癌凋亡研究

目的探讨长链非编码RNA金属硫蛋白1J(IncRNA MT1JP)对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响。方法收集人乳腺癌组织及对应的癌旁组织,体外培养乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、HCC1569和人乳腺正常的上皮细胞MCF10A,RT-PCR检测组织和细胞中MT1JP水平。乳腺癌细胞转染MT1JP过表达载体和空载体分别命名为MT1JP组和NC组,同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,RT-PCR检测细胞中MT1JP表达水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达水平。结果 MT1JP在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.05)。MT1JP表达水平由高到低为:MCF10A、HCC1569、MDA-MB-231、MCF-7,后续选用MCF-7细胞继续研究。MT1JP组细胞存活率及p-Akt水平明显低于对照组,而凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组(P0.05)。结论 MT1JP在乳腺癌中表达下调,MT1JP能够抑制乳腺癌细胞增殖,促进乳腺癌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关。