黄连解毒汤对APP/PS1双转基因AD小鼠海马区病理形态学及脑内β-APP基因mRNA的影响

目的:探讨黄连解毒汤(HLJDD)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马CA1区的病理形态学及脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因mRNA的影响。方法:选用3月龄的APP/PS1双转基因AD小鼠模型50只,随机分为对照组、安理申组、HLJDD大剂量组、HLJDD中剂量组、HLJDD小剂量组各10只,分别给予安理申或不同剂量HLJDD灌胃治疗6个月,对照组不予治疗,记录并比较各组死亡率;分别于6月龄和10月龄时采用HE染色观察各组海马CA1区神经细胞形态,采用改良甲醇刚果红染色观察各组老年斑形成情况;于末次灌胃治疗后,通过实时荧光定量PCR检测各组脑内β-APPmRNA水平。结果:各组小鼠死亡率差异无统计学意义;10月龄HLJDD各剂量组海马CA1区神经损伤情况较对照组明显减轻,老年斑数量少于对照组(P0.05);HLJDD各剂量组β-APPmRNA水平低于对照组(P0.05),其中以中剂量组水平降低最明显(P0.01)。结论:HLJDD能保护海马神经细胞。     

pEGFP/A_2M(FP_6)转染神经干细胞海马移植治疗APP/PS1双转基因AD小鼠的实验观察

目的:携带pEGFP/A2M(FP6)的神经干细胞(NSCs)定向移植到APP/PS1双转基因AD小鼠海马内,观察移植细胞的分化、迁移,脑内Aβ沉积的变化,以及对AD小鼠学习记忆功能的影响。方法:APP/PS1转基因AD小鼠分为假手术(SO)组、人工脑脊液(ACSF)组、转染pEGFP的NSCs(pEGFP-NSCs)组及转染pEGFP/A2M(FP6)的NSCs(pEGFP/A2M(FP6)-NSCs)组,移植物小鼠海马CA1区定位注射,水迷宫实验检测小鼠认知功能,免疫组化观察小鼠脑内移植细胞的分化、迁移及Aβ病理变化。结果:pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较SO组及ACSF组显著缩短(P<0.05);pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较pEGFP-NSCs组缩短(P<0.05)。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠海马及皮质内,部分Aβ染色阳性斑块周围可见表达EGFP的移植细胞。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠额叶、海马区域,Aβ染色阳性斑块数量和平均面积均较其他3组显著减少(P<0.05)。移植的NSCs,部分细胞Nestin染色呈阳性,部分细胞GFAP染色呈阳性,少数细胞MAP-2染色呈阳性。结论:移植pEGFP/A2M(FP6)NSCs到APP/PS1双转基因AD小鼠海马,可减少AD小鼠脑内Aβ斑块沉积,部分移植的NSCs分化为神经元及星形胶质细胞,小鼠的学习记忆功能显著改善。     

基于APP/PS1双转基因小鼠初探输血传播阿尔茨海默症的风险

目的 初探输血传播阿尔茨海默病(alzheimer disease, AD)的风险。方法 3、6、9月龄APP/PS1小鼠各10只,雌雄各半,认知行为学能力测定,同龄C57小鼠作对照;采集上述尚未出现行为学改变的最大月龄APP/PS1小鼠血液,检测Aβ₄₀、Aβ₄₂含量后备用。制备Aβ₄₀、Aβ₄₂聚合物,免疫印迹分析后备用。6～7月龄昆明小鼠随机分为6组(10只/组,雌雄各半),实验组1～2尾静脉注射APP/PS1小鼠血液(100μL/只),1组为高频次注射(3次/周),2组为低频次注射(1次/周);实验组3～4注射Aβ₄₀、Aβ₄₂聚合后混合物(100μL/只),分别为高、低频次注射,具体同上;对照组1～2注射等量生理盐水,分别为高、低频次注射。上述组别注射均持续4周,注射完毕1周后进行认知行为学能力检测及分析,最后检测昆明小鼠血液Aβ₄₀、Aβ₄₂含量。结果 3、6月龄APP/PS1小鼠未出现认知行为能力改...     

高强度间歇运动训练上调APP/PS1转基因阿尔兹海默病小鼠海马线粒体自噬的研究

目的:观察高强度间歇运动训练干预是否能改善APP/PS1转基因AD小鼠病理表现,并探讨线粒体自噬在其间的生物学效应。方法:8月龄雄性APP/PS1转基因小鼠分为转基因模型安静组(SED-Tg)和转基因模型+高强度间歇运动训练组(HIIT-Tg),C57BL/6野生型小鼠纳入野生型安静组(SED-Wt)。HIIT-Tg组动物进行12周高强度间歇运动训练。避暗被动回避实验检测学习记忆能力,JC-1荧光探针检测海马线粒体膜电位,二氯荧光素探针检测海马线粒体ROS,Western Blot法检测脑海马Aβ-42、BDNF、AMPK、PINK1、Parkin、Bnip3蛋白表达。结果:(1)SED-Tg组与SED-Wt组比较,逃避潜伏期、线粒体膜电位、BDNF、AMPK、PINK1、Parkin和Bnip3蛋白表达显著降低(P<0.05—0.01),线粒体ROS产生速率和Aβ-42蛋白表达显著升高(P<0.01)。(2)HIIT-Tg组与SED-Tg组比较,逃避潜伏期、线粒体膜电位、BDNF、AMPK、PINK1和Parkin蛋白表达显著升高(P<0.01),线粒体ROS产生速...     

经鼻给予神经生长因子联合运动训练对APP/PS1转基因小鼠神经保护作用及学习记忆的影响

目的探讨经鼻给予神经生长因子（NGF）联合运动训练对APP/PS1转基因小鼠神经保护作用及对其学习记忆功能的影响。 方法采用随机数字表法将24只6月龄APP/PS1转基因小鼠分为对照组、NGF组、运动组及NGF联合运动训练组（简称联合组）。对照组小鼠每日给予50μl生理盐水滴鼻;NGF组小鼠每日经鼻滴入50μl含NGF（0.1mg/ml）生理盐水溶液;运动组小鼠每日给予50μl生理盐水滴鼻,同时辅以小强度跑台运动,每次持续训练30min;联合组小鼠每日8∶00经鼻滴入50μl含NGF（0.1mg/ml）生理盐水溶液,下午14∶00辅以小强度跑台运动,持续训练30min。采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力变化;于实验进行21d时取各组小鼠脑标本进行免疫组化染色,观察大脑皮质APP、Ki-67及海马区NeuN阳性细胞表达情况。 结果Morris水迷宫定向航行实验中4组小鼠找到平台的潜伏期组间差异具有统计学意义（P<0.05）,其中NGF组、运动组及联合组潜伏期分别为（21.8±5.9）s、（20.2±5.6）s、（12.3±4.2）s,均明显短于对照组水平［（30.7±9.6）s］,并且联合组潜伏期亦显著短于NGF组及运动组（P<0.05）;空间探索实验中各组小鼠目标象限时间百分比组间差异具有统计学意义（P<0.05）,其中联合组目标象限时间百分比［（36.3±6.6）%］明显大于NGF组［（27.1±11.9）%］及运动组［（26.7±8.5）%］,组间差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检查结果显示,联合组与其他3组比较,其神经元排列整齐、细胞致密,APP蛋白表达明显减弱,Ki-67及NeuN阳性细胞表达均显著增强。 结论NGF滴鼻联合运动训练能显著提高APP/PS1转基因小鼠空间学习及记忆能力,其治疗机制可能与抑制APP表达、减少神经元损伤、促进内源性神经细胞增殖及存活有关。     

过表达精神分裂断裂基因1对APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠突触可塑性及学习记忆能力的改善

目的 探索精神分裂断裂基因1(DISC1)对APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠突触可塑性及学习记忆能力的影响.方法 Western blot比较正常人和AD患者脑组织中DISC1的表达情况;体外培养C57胎鼠神经元,分为GFP组、GFP+Aβ组、DISC1+Aβ组,激光...     

APP/PS1阿尔茨海默病转基因动物模型前联合异常改变

背景:阿尔茨海默病研究大多主要集中在淀粉样β蛋白和神经元死亡之间的关系,但是对白质损害研究却鲜有报道.目的:观察APP/PS1阿尔茨海默病转基因动物模型前联合病理改变特点.设计、时间及地点:以组织学改变为依据,分组对照观察,于2007-09/2008-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科实验室完成.材料:雌性转基因APP/PS1小鼠(表达人突变的PS1(M1146L)基因和APP(KM670/671NL,V7171)基因,对照组老鼠选用的是没有淀粉样蛋白沉积的雌性PS1小鼠.分为年轻组(2月龄,包括8只APP/PS1,7只PS1)和老年组(24月龄,包括6只APP/PS1,7只PS1).方法:利用刚果红和免疫组织化学方法观测该AD转基因模型脑内淀粉样改变;采用氯化金髓鞘染色方法和轴突免疫组织化学染色,利用吸光度方法对前联合轴突密度和髓鞘化程度的染色进行相对吸光度定量分析.主要观察指标:①细胞内和细胞外淀粉样β蛋白的染色.②在冠状位前联合的平均面积大小测量.③前联合处轴突密度和髓鞘化程度定量相对吸光度值.结果:在老年组APP/PS1小鼠,大量的刚果红阳性染色出现在皮质,海马以及丘脑,前联合也出现阳性染色;细胞内淀粉样β蛋白仅出现在年轻组APP/PS1的皮质结构中.在老年组PS1组小鼠,前联合的表面积大小比年轻组PS1和老年组APP/PS1组小鼠都有显著的增长.老年组包括APP/PS1和PS1组轴突的染色都有显著的下降,髓鞘化程度比年轻组有增高趋势.不同表型分析显示,轴突密度和髓鞘化程度在年轻组APP/PS1和PS1组相当;老年APP/PS1组轴突密度比PS1组有显著的下降,老年组APP/PS1小鼠髓鞘化程度与PS1无显著差别.结论:随着年龄的增长,APP/PS1阿尔茨海默病转基因小鼠模型前联合存在着轴突的丢失,髓鞘相对保持完整.淀粉样β蛋白对轴突有直接的毒性作用.     

电针百会穴对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠18F-FDGPET/CT成像及学习记忆的影响

目的:观察电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠葡萄糖代谢水平以及学习记忆的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法:将30只雌性12月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,每组10只,另取10只同窝阴性野生小鼠为野生组。百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,每次30min,每天1次,每周5天,共治疗4周,野生组和模型组不干预。采用正电子发射断层扫描技术(PET)观察各组小鼠大脑18F-FDG摄取率的水平;Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆。结果:与模型组相比,百会组小鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),跨越平台次数增加(P0.01);非穴组小鼠逃避潜伏期与模型组相比无显著性差异(P0.05);百会组小鼠18F-FDG摄取率高于野生组、模型组以及非穴组。结论:电针百会穴可改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能是通过改善小鼠脑内葡萄糖代谢从而发挥神经保护作用。     

二苯乙烯苷对不同时程APP转基因拟痴呆小鼠脑内ERK蛋白表达及磷酸化的影响

目的 为探讨细胞信号转导异常在阿尔茨海默病(AD)的作用,以及中药有效成分二苯乙烯苷(TSG)防治AD的药理机制,观察不同时程APP转基因拟痴呆小鼠脑内ERK蛋白的表达和磷酸化改变,以及药物的干预作用.方法 拟AD动物模型为4～16月龄APP695V717I转基因小鼠.4月龄起灌胃给予TSG 6个月.另一批未处理的APP转基因小鼠饲养至10月龄开始灌胃给予TSG 6个月.同背景同月龄C57BL/6J小鼠为正常对照组.细胞外信号调节激酶112(ERK1/2)蛋白的表达和磷酸化改变检测应用Western blotting.结果 早期4月龄APP转基因小鼠海马/皮层被激活的磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)与对照组相比已明显降低;10月龄APP转基因小鼠皮层p-ERK蛋白表达进一步降低,而海马p-ERK蛋白表达与对照组相比虽显著降低但差异已明显减小;TSG各剂量组均能明显提高海马/皮层p-ERK蛋白表达;16月龄APP转基因小鼠海马/皮层p-ERK蛋白表达与对照组相比均明显升高,TSG给药组能一定程度地减少p-ERK蛋白表达的增高.总的ERK1/2蛋白表达在4、10、16月龄对照组、APP转基因模型组和各给药组小鼠脑内,均无明显变化.结论 ERK1/2作为MAPK信号转导通路的重要成分,其蛋白表达在不同时程APP695V717I转基因小鼠脑内无明显改变;但被激活的ERK1/2其磷酸化水平在APP转基因小鼠脑内明显改变,将影响信号转导功能,并进一步导致脑内功能障碍及病理损伤.TSG可调节p-ERK1/2至正常水平,对维持正常的细胞信号转导功能、防治AD等神经退行性疾病具有良好的应用前景.     

AD转基因模型研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是最常见的神经系统退行性疾病之一,以进行性认知功能损害、基底前脑胆碱能神经元退变、神经原纤维缠结和β-淀粉样多肽沉积为主要特点。AD转基因鼠的诞生为AD发病机制及治疗的研究带来了新的曙光。现综述几种主要AD转基因鼠,包括转APP、转PS、转ApoE、转tau、双转及三转基因鼠等的病理变化特点及其在AD相关研究中的应用。     

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的行为学研究

目的:研究APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的感觉运动活性/移动探索活性、情感和物体识别能力。方法:采用旷场实验和新颖物体辨别实验分别对6月龄(雌、雄)和12月龄(雄)的APPswe/PS1dE9转基因小鼠进行行为学研究,以同窝同龄同性别野生型小鼠为对照。结果:在旷场实验中,与野生型小鼠相比,双转基因小鼠在12月龄时出现探索活性降低且可能更具有焦虑倾向(P<0.05);而在物体识别任务中,各研究组间差异无统计学意义。结论:APPswe/PS1dE9双转基因小鼠能较好地模拟AD患者的部分精神行为症状,为AD的发病机制和治疗研究提供了有价值的工具。     

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠对挥发性吸入麻醉药药物敏感性的变化

目的:研究阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠对挥发性吸入麻醉药药物敏感性的变化.方法:C57BL/6J雌鼠与C3H/HeJ雄鼠交配得到F1代.再将F1代与3月龄的APPswe/PSldE9双转基因小鼠交配得到F2代.F2代小鼠提取鼠尾DNA,PCR扩增目的基因并鉴定.选8月龄F2代同窝小鼠根据是否含APP和PSI基因分为转基因组和野生对照组,用夹尾法分别测定两组异氟醚、七氟醚和地氟醚3种挥发性吸入麻醉剂的最低肺泡有效浓度(MAC值).结果:繁育F2代小鼠12只,其中转基因组7只,野生对照组5只.转基因组小鼠3种挥发性吸入麻醉剂MAC值分别为异氟醚1.129 ±0.160,七氟醚1.900±0.153,地氟醚5.614±0.363,均较野生对照组低,但是无统计学差异(P>0.05).结论:APP/PSI双转基因对8月龄小鼠异氟醚、七氟醚、地氟醚3种挥发性吸入麻醉剂的MAC值无明显影响.     

尾静脉注射THP-1细胞构建急性髓系白血病NOD/SCID小鼠模型及其鉴定

目的:应用THP-1细胞构建NOD/SCID小鼠白血病模型。方法:将18只3-4周龄的雌性NOD/SCID小鼠,随机分为对照、模型A和模型B 3组(每组6只)。接种前连续2 d每只小鼠给予腹腔注射环磷酰胺2 mg/(kg·d),预处理后于24 h内接种细胞。模型组分别经尾静脉接种对数生长期THP-1细胞悬液1×10^7/只(A组)、5×106/只(B组),对照组鼠尾静脉注射等剂量生理盐水。观察一般情况,预处理前、接种细胞后7、14、21和28 d及处死时进行血常规检测、外周血白细胞分类,濒死前处死取材,组织切片病理检查。结果:模型组小鼠分别于接种细胞d 7和d 10开始出现竖毛、萎靡少动等现象,与对照组比较,模型A和B 2组小鼠体重于接种细胞21 d后明显下降(P<0.01),建模28 d后模型组白细胞数明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),其中以接种1×10^7/只的模型A组最为显著。病理组织切片结果提示,模型组小鼠脾脏均可见白血病细胞弥漫性浸润。免疫组织化学结果提示,白血病细胞抗人CD13结果阳性,证实模型建立成功。结论:NOD/SCID小鼠经腹腔注射CTX预处理后,每只小鼠尾静脉注射THP-1细胞1×10^7或5×10^6个均可成功构建急性髓系白血病动物模型,符合急性髓系白血病的生物学特点,高浓度成瘤更快。     

Limitations of Small Animal PET Imaging with [18F]FDDNP and FDG for Quantitative Studies in a Transgenic Mouse Model of Alzheimer’s Disease

Purpose  We evaluated the usefulness of small animal brain positron emission tomography (PET) imaging with the amyloid-beta (Aβ) probe 2-(1-{6-[(2-[¹⁸F]fluoroethyl)(methyl)amino]-2-naphthyl}ethylidene)malonitrile ([¹⁸F]FDDNP) and with 2-deoxy-2-[F-18]fluoro-d-glucose (FDG) for detection and quantification of pathological changes occurring in a transgenic mouse model of Alzheimer’s disease (Tg2576 mice). Procedures  [¹⁸F]FDDNP (n = 6) and FDG-PET scans (n = 3) were recorded in Tg2576 mice (age 13–15 months) and age-matched wild-type litter mates. Brain volumes of interest were defined by co-registration of PET images with a 3D MOBY digital mouse phantom. Regional [¹⁸F]FDDNP retention in mouse brain was quantified in terms of the relative distribution volume (DVR) using Logan’s graphical analysis with cerebellum as a reference region. Results  Except for a lower maximum brain uptake of radioactivity in transgenic animals, the regional brain kinetics as well as DVR values of [¹⁸F]FDDNP appeared to be similar in both groups of animals. Also for FDG, regional radioactivity retention was almost identical in the brains of transgenic and control animals. Conclusions  We could not detect regionally increased [¹⁸F]FDDNP binding and regionally decreased FDG binding in the brains of Tg2576 transgenic versus wild-type mice. However, small group differences in signal might have been masked by inter-animal variability. In addition, technical limitations of the applied method (partial volume effect, spatial resolution) for measurements in such small organs as mouse brain have to be taken into consideration.     

阿尔茨海默病APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠脑区中老年斑的分布

目的:观察老年斑在不同月龄的APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠脑区中的分布。方法:将雄性的杂合子小鼠与C57BL/6J雌鼠交配,所生的小鼠提取鼠尾DNA,PCR扩增目的基因。取鉴定为阳性的2.5、4.5、8月龄的杂和子小鼠各3只,进行Thioflavine S和Aβ免疫组织化学染色,观察老年斑的沉积。结果:共生产小鼠F1代39只,鉴定为阳性的有17只,阳性率为43.6%。组织学染色发现2.5月龄小鼠的脑区未见老年斑沉积,而4.5月龄及8月龄小鼠的皮质及海马可见老年斑沉积,并且随着月龄的增加,老年斑的数目增多,面积增大。结论:APP-swe/PS1ΔE9双转基因小鼠在4月龄时已有老年斑的沉积,为研究AD提供了很好的载体。