环状RNA-PCAC1在肝癌细胞增殖、侵袭和转移中作用机制研究

目的：探讨环状RNA-PCAC1在肝癌细胞中的表达情况及其对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的作用机制。方法：采用实时荧光定量PCR检测不同肝癌细胞和正常肝细胞系中circ＿RNA＿PCAC1的表达情况。实验分为siRNA组和NC组,将将circ＿RNA＿PCAC1沉默慢病毒及阴性对照慢病毒感染肝癌细胞。分别采用CCK-8实验,平板克隆形成实验,划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖,迁移和侵袭能力。结果：qRT-PCR检测结果显示：circ＿RNA＿PCAC1在人肝癌细胞系Li-7、HepG2、Hep3B中的表达量明显高于HL-7702细胞系（P<0.05）,siRNA组的circ＿RNA＿PCAC1表达水平明显低于NC组（P<0.05）,与NC组细胞相比,siRNA组HepG2细胞明显抑制生长,circ＿RNA＿PCAC1进行siRNA后细胞形成的克隆数目,迁移数目和细胞侵袭数明显减少（P<0.05）。结论：circ＿RNA＿PCAC1在肝癌细胞中表达上调,沉默circ＿RNA＿PCAC1可以明显制肝癌细胞增殖,迁移和侵袭,其为治疗肝癌提供了新思路。     

lncRNA MSC-AS1通过调节miR429-/RhoA轴对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探索长链非编码RNA(lncRNA)MSC-AS1通过调节微小RNA(miR)-429/Ras同源基因家族成员A(RhoA)轴对人鼻咽癌(NPC)细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR法(qPCR)检测NPC细胞系(CNE-1、HNE2、HONE-1细胞)以及人鼻咽上皮细胞系NP69细胞中lncRNA MSC-AS1、miR-429、RhoA mRNA的表达水平。以CNE-1细胞为研究对象,将si-MSC-AS1、miR-429 inhibitor、miR-429 mimics及相应阴性对照分别转染或共转染CNE-1细胞,记为对照组(未转染)、si-NC组、si-MSC-AS1组、mimics NC组、miR-429 mimics组、si-MSC-AS1+inhibitor NC组、si-MSC-AS1+miR-429 inhibitor组。MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶实验分别验证miR-429与MSC-AS1、RhoA的靶向关系;免疫印迹法检测RhoA、B淋巴细胞因子相关x蛋白(Bax)、上皮细胞...     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

沉默Survivin基因对鼻咽癌CNE1细胞增殖和凋亡的研究

目的：探讨 Survivin表达降低时,对鼻咽癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法运用 RNA 干扰技术,结合 RT-PCR,Western blot技术,观察干扰 Survivin效果。干扰 Survivn后用 MTT法和 TUNEL法检测鼻咽癌细胞增殖,凋亡的情况。用 Western-blot方法检测凋亡相关蛋白 PARP,Bcl-2和Bax的表达。结果 RT-PCR检测显示 Survivin-siRNA干扰组,Survivin mRNA表达明显下调,其相对表达量为0.26±0.02,抑制率为43.7％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blot检测显示 Survivin-siRNA组蛋白表达下调,其蛋白相对表达量下降了57％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;MTT检测显示 Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用,在24,48和72 h的抑制率分别为21.9％,37.1％和29.6％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Tunel染色结果显示 Survivin-siRNA组细胞凋亡数明显增高。Western blot结果显示Survivin-siRNA组凋亡蛋白PARP（89KD）显著升高,为对照组的3.9倍,抑制凋亡蛋白Bcl-2降低,降低了70％,促进凋亡蛋白Bax升高,为对照组的2.4倍;同时也抑制AKT的磷酸化,磷酸化水平降低了57％,与对照组相比以上结果差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论干扰 Survivin表达,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。Survivin基因可成为鼻咽癌基因治疗的一个潜在靶点。     

miR-1299通过靶向调控CCND1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移和凋亡的影响

目的 探讨miR-1299通过靶向调控细胞周期蛋白D1(CCND1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、转移和凋亡的影响。方法 回顾性收集2021年1月至2022年1月入青岛大学附属青岛市中心医院胸外科行原发性NSCLC手术的患者29例,取癌组织和癌旁正常肺组织,培养人正常肺上皮细胞16HBE和NSCLC细胞系H1299、A549、PC-9、H1975、SPC-A1,RT-qPCR法检测组织和细胞中miR-1299和CCND1的表达,取生长良好的H1299细胞,将其分为对照组(转染miR-control)、miR-1299 NC组(转染miR-1299 NC)、miR-1299 mimic组(转染miR-1299 mimic)、miR-1299 inhibitor组(转染miR-1299 inhibitor)、PCDNA组(转染pcDNA3.1-NC)、PCDNA-CCND1组(转染pcDNA3.1-CCND1真核表达载体)、miR-1299 mimic+PCDNA组(共同转染miR-1299 mimic和pcDNA3.1-NC)和miR-1299 mimic+PCDNA-CCND1...     

eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用实时PCR法和Western blot法分别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达。构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、AnnexinⅤ-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P<0.01,P<0.05);构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达。与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

PI3K/AKT信号传导通路与鼻咽癌侵袭转移关系的探讨

目的观察PI3K/AKT信号传导通路与鼻咽癌侵袭转移之间的对应关系。方法选择我院及遵义医学院所收集的存档石蜡标本共计50例作为分析对象,25例标本为无淋巴道转移的鼻咽癌组织,25例标本为有淋巴道转移的鼻咽癌组织,分别设置为对照组以及观察组。所有标本均进行HE染色以及免疫组化染色处理,对处理结果进行观察分析。结果对照组患者P13K与E-cad表达呈负相关关系,AKT与E-cad表达呈负相关关系,P0.05,具有统计学意义;观察组患者P13K与E-cad表达呈负相关关系,P0.05,具有统计学意义。AKT与E-cad表达无明显相关性关系,P0.05,无统计学意义。结论 PI3K/AKT信号传导通路的激活与鼻咽癌侵袭转移之间存在相关关系,值得临床重视。     

LINC00665通过靶向miR-138/AKT1促进Hela细胞增殖和抑制凋亡的机制研究

目的 探究长链非编码RNA LINC00665通过靶向微小RNA(microRNA,miR)-138/AKT1促进Hela细胞增殖和抑制凋亡的机制.方法 分析TCGA数据库中宫颈癌患者miR-138水平与生存之间的关系.通过双荧光素酶报告验证LINC00665靶向miR-138和miR-138靶向AKT1.将宫颈癌细胞...     

MAPKAPK5-AS1在肝癌中的临床意义及通过AKT/mTOR通路调控增殖和转移的机制研究

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)MAPKAPK5-AS1在肝癌中的临床意义及通过AKT/mTOR通路调控增殖和转移的机制。方法通过生物信息学方法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中MAPKAPK5-AS1在肝癌中的表达水平及其与预后的关系。临床收集90例肝癌组织和癌旁组织,分析MAPKAPK5-AS1的表达水平及其与预后的关系。通过RT-qPCR检测人正常肝细胞MIHA和4株肝癌细胞系中MAPKAPK5-AS1的水平。LM3细胞分为shNC组和shMAPKAPK5-AS1组,HepG2细胞分为vector-NC组和MAPKAPK5-AS1组,检测沉默和过表达MAPKAPK5-AS1对肝癌细胞生物学行为的影响,并分析AKT/mTOR通路的水平。结果生物信息学分析结果显示,MAPKAPK5-AS1水平与高的TNM分期、更低的生存率和低的无进展生存期有关(P0.05)。临床检测结果显示,MAPKAPK5-AS1高表达与较高的TNM分期、血管侵犯和更低的生存率有关(P0.05)。shMAPKAPK5-AS1组的增殖、迁移、侵袭能力及AKT/mTOR通路中蛋白水平明显低于shNC组,而凋亡率明显高于shNC组(P0.05)。MAPKAPK5-AS1组的增殖、迁移、侵袭能力及AKT/mTOR通路中蛋白水平明显高于vector-NC组,而凋亡率明显低于vector-NC组(P0.05)。结论 MAPKAPK5-AS1高表达与肝癌患者较高的TNM分期、血管侵犯和不良预后有关,并且MAPKAPK5-AS1可能通过促进AKT/mTOR通路促进肝癌增殖、转移和抑制凋亡。     

曲古抑菌素A对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及作用机制。方法以不同浓度(300、400、500 nmol/L)TSA作用鼻咽癌CNE2细胞株,采用流式细胞术测定TSA作用前后鼻咽癌细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析TSA作用后鼻咽癌细胞中细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)表达的变化。结果以300、400、500 nmol/L TSA分别诱导CNE2细胞凋亡,作用24 h后凋亡率分别为12.52%±1.57%、19.69%±3.00%、19.63%±2.68%;48 h后凋亡率为24.50%±4.45%、36.24%±3.92%、34.82%±6.45%;与对照组(0 nmol/L TSA)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现,TSA可诱导CNE2细胞内p21基因表达明显增加(P<0.01)。结论 TSA能明显诱导CNE2细胞凋亡,其作用机制可能与p21基因的异常表达有关。     

NOB1影响胶质瘤细胞增殖、凋亡的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1基因的表达,探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响.方法 构建NOB1基因的短发卡（shRNA）慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251和U87-MG细胞,采用实时定量聚合酶链反应检测NOB1在恶性胶质瘤细胞系中的表达.采用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况;同时利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察NOB1基因对U251和U87-MG细胞增殖、凋亡的影响.结果 NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达.NOB1-shRNA慢病毒能有效感染胶质瘤细胞,实验结果显示感染后U251和U87-MG细胞的增殖能力明显下降;U251克隆形成能力明显受到抑制;细胞周期在G0/G1停滞,而且细胞出现显著性凋亡;上述差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达;降低NOB1基因的表达,可以显著降低胶质瘤细胞的增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡;NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用.     

白花蛇舌草总黄酮对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响

目的：探讨白花蛇舌草总黄酮（FOD）对鼻咽癌细胞株CNE1的增殖和凋亡的影响。方法：体外培养鼻咽癌细胞株CNE1,使用不同质量浓度的FOD作用24、48 h,分别使用CCK-8测定法检测细胞存活率,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡的情况。结果：FOD对鼻咽癌细胞株CNE1具有抑制增殖作用,24 h的半数抑制量（IC50）为（27.0±2.5）mg/L,48 h的IC50为（12.1±1.3）mg/L,在一定质量浓度范围内,呈剂量-效应关系和时间-效应关系。FOD可诱导CNE1细胞凋亡,存在剂量-效应关系和时间-效应关系。结论：FOD对鼻咽癌细胞株CNE1有显著的抑制增殖作用,作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

光动力作用诱导人鼻咽癌细胞凋亡超微细胞形态改变

目的 探讨光动力疗法（PDT）对人鼻咽癌细胞株HHNE1调亡的作用。方法 采用从光导纤维输出的氦氖激光,功率150mW,波长632.8nm,能量密度10J/cm^2,照射含癌光啉光敏剂的鼻咽癌细胞,分别在PDT后3,6,12,24,36和48h后,光镜和电镜观察凋亡细胞的形态学改变,并计数细胞凋亡率（%）。结果 人鼻咽癌细胞株HNE1经PDT24h后出现细胞凋亡的典型形态学改变,12h后出现早期凋亡细胞的形态特征,光镜和电镜下可见细胞大小不一,细胞质浓缩,核固缩,染色质边集,进而细胞裂解和凋亡小体形成。细胞凋亡率分别为0%,1%,6%,71%,86%和95%。细胞超微结构改变的严重程度依PDT后时间的增加而逐渐递增。结论 PDT对HNE1细胞具有明显杀伤效应,并诱导其发生调亡。     

miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的探究miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖、凋亡的作用及相关机制。方法取SDP级健康雄性SD大鼠作为实验对象,取血管平滑肌细胞(VSMC)消化离心后,转染50nmol/L miRNA-146a反义寡核苷酸、错义链和同等剂量磷酸盐缓冲液(PBS),进行对照比较。结果实验组细胞在转染后48h内VSMC的数目和吸光度值均低于其他两组,细胞凋亡率明显高于其他两组,核因子κBp65、PCNA的表达水平低于其他两组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论miRNA-146a可促进VSMC的增殖,抑制细胞凋亡的进行,这一作用机制与核因子κBp65、PCNA表达水平增高有关。     

沉默FRAT1基因对结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨沉默FRAT1基因对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其可能分子机制.方法 将成功转染FRAT1基因RNA干扰序列的人结肠癌HT-29细胞扩大培养,MTT比色法检测细胞增殖,双染流式细胞术检测细胞凋亡率,单染流式细胞术分析细胞周期,免疫荧光法激光共聚焦显微镜下观察β-catenin蛋白变化.结果 转染组细胞较对照组细胞生长明显减缓（P＜0.01）,凋亡率明显增加（P＜0.01）,细胞周期出现G0/G1期阻滞,差异显著（P＜0.01）,胞质β-catenin蛋白表达明显下调.结论 FRAT1基因RNA干扰序列可以有效诱导结肠癌HT-29细胞凋亡和细胞周期阻滞,抑制细胞增殖,其机制可能通过下调β-catenin表达实现.     

氟伐他汀诱导人膀胱癌细胞凋亡抑制细胞增殖与迁移的研究

目的研究羟甲戊二酸单酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂——氟伐他汀在体外对人膀胱癌T24细胞凋亡、增殖和迁移及侵袭能力的影响,并探讨相关分子机制。方法 MTT法检测氟伐他汀对T24细胞增殖的影响;流式细胞术（PI和Annexin V双染法）检测细胞凋亡率的变化;划痕愈合和Transwell试验检测氟伐他汀对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测Bax、Cleaved-caspase-3等蛋白的表达情况。结果氟伐他汀在体外能显著抑制T24细胞的增殖,成明显浓度和时间依赖性;可以显著诱导肿瘤细胞凋亡;能显著抑制T24细胞的迁移和侵袭能力。结论氟伐他汀能显著诱导T24细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

阿司匹林增强鼻咽癌细胞放射敏感性的研究

目的:观察阿司匹林(ASA)对鼻咽癌SUNE细胞系放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法:用MTT法检测ASA对SUNE细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,免疫荧光技术及流式细胞仪检测核转录因子-κB(NF-κB)的表达情况。结果:ASA在2、4、8Gy三种不同剂量的放射增敏比分别为0.329±0.052、0.404±0.067、0.615±0.033。ASA+照射组的凋亡率[(59.600±1.200)%]较单纯照射组[(39.800±1.124)%]明显增加(P<0.01)。免疫荧光技术及流式细胞仪显示照射后胞核内NF-κB表达增加,而这种增加可被ΑSΑ抑制。结论:ASA可提高鼻咽癌细胞对放射线的敏感性,其机制可能是通过阻止NF-κB的核内转移,继而抑制NF-κB的激活,从而增加放射线诱导的鼻咽癌细胞凋亡。     

GREM1对胃癌细胞增殖迁移的作用

目的检测胃癌细胞中GREM1基因的表达,探讨其对胃癌细胞生物学特性的影响并评估其在胃癌诊断和胃癌患者预后中的临床价值。方法运用数据库分析GREM1基因在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异,评估GREM1基因表达水平对胃癌患者预后的相关性。Western blot检测胃癌细胞系中GREM1蛋白质表达水平。AGS细胞中沉默GREM1基因后,采用平板克隆、Transwell和western blot检测其对胃癌细胞增殖、迁移、上皮间质转化(EMT)发生及Wnt/β-catenint通路的影响。结果 Kaplan-Meier分析表明,GREM1基因高表达患者总体生存率(OS)和无进展生存率(PFS)均降低。GREM1蛋白在AGS细胞系中的表达水平(1.967±0.056)最高。平板克隆、Transwell及western blot实验显示,沉默GREM1基因可导致胃癌细胞的增殖及迁移能力降低(t分别为22.00,29.60;P均0.01);E-cadherin表达上升(t=10.65,P0.01),ZEB1、MMP2表达均下降(t分别为10.74和13.67,P均0.01);Wnt/β-catenin通路中β-catenin、CyclinD1、c-myc、p-GSK3β和PCNA的表达水平均降低(t分别为12.65,16.21,8.74,7.75和8.42;P均0.01)。结论 GREM1通过激活Wnt/β-catenin诱导EMT发生,促进肿瘤转移和生长。GREM1可作为新的胃癌分子诊断和预后指标。     

腹腔镜手术对子宫颈癌细胞增殖和转移能力的影响

目的探讨腹腔镜手术对子宫颈癌细胞增殖和转移能力的影响。方法子宫颈癌患者36例,在腹腔镜下行广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术,采用流式细胞技术测定术前和腹腔镜手术后子宫颈癌细胞凋亡率,以及Bcl-2、TRAIL、nm23和MTA1基因表达水平的变化,并与开腹手术后子宫颈癌细胞,以及腹腔镜下子宫全切术正常子宫颈细胞手术前后相对比。结果子宫颈癌细胞术前凋亡率为(5.12±0.31)%,腹腔镜手术后为(28.36±0.58)%,与术前相比,差异有显著性,P<0.01;开腹手术后为(6.23±0.12)%,与术前相比,差异无显著性,P>0.05。正常子宫颈细胞腹腔镜手术前后的凋亡率分别为(19.26±0.39)%和(18.56±0.63)%,差异无显著性,P>0.05。子宫颈癌细胞MTA1和Bcl-2基因表达术前为(193.44±5.66)和(52.36±0.36),腹腔镜手术后为(114.28±5.12)和(30.41±0.79),差异有显著性,P<0.01;开腹术后为(189.32±6.25)和(60.43±0.68),差异无显著性,P>0.05。nm23和TRAIL基因术前表达率为(53.66±0.48)和(60.32±0.25),腹腔镜术后为(69.31±0.53)和(82.36±0.29),差异有显著性,P<0.01;开腹术后为(50.22±0.78)和(58.33±0.62),差异无显著性,P>0.05。正常子宫颈细胞MTA1、Bcl-2、nm23和TRAIL基因表达水平术前分别为(25.36±0.29)、(40.16±0.52)、(20.38±0.36)和(35.23±0.61),腹腔镜手术后分别为(27.22±0.55)、(39.56±0.38)、(19.56±0.39)和(33.77±0.51),差异均无显著性,P>0.05。结论腹腔镜手术治疗子宫颈癌,能抑制其细胞的增殖和转移,是一种安全的手术方法。