软骨利胶囊对骨关节炎小鼠股四头肌收缩蛋RmRNA表达的影响

背景:骨关节炎的病理改变涉及多种关节构成组织,其中骨骼肌的地位日渐引起研究者关注.目的:通过观察骨关节炎C57小鼠骨骼肌收缩蛋白α-肌动蛋白与肌球蛋白重链基因表达状况,探讨柔肝中药软骨制剂利胶囊对收缩蛋白基因表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-09/2007-01在上海市中医药研究院骨伤科研究所完成.材料:选取7周龄清洁级C57小鼠18只,雌雄各半,体质量(20±5)g.软骨利胶囊(柔肝中药制剂),由上海中医药大学中药标准化中心提供.方法:18只C57小鼠按随机数字表随机分为正常组、模型组、软骨利组,每组6只.除正常组外,对小鼠进行运动负荷训练造模.软骨利组给予0.2 mL软骨利溶液(约含2 mg软骨利)灌胃5周,正常对照组和模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃5周.主要观察指标:应用反转录-聚合酶链反应检测股四头肌肌α-actin、肌球蛋白重链4种亚型(Ⅰ,Ⅱa,Ⅱd/x,ITb)mRNh表达水平.结果:与空白组比较,模型组α-actin mRNA显著低表达(P<0.05),肌球蛋白重链Ⅱa,肌球蛋白重链Ⅱd/x mRNA低表达(P<0.05).与模型组比较,软骨利干预组α-actin与多种肌球蛋白重链亚型mRNA表达水平上调(P<0.05).结论:柔肝中药制剂软骨利能够促进骨骼肌收缩蛋白基因表达,提示其可改善骨关节炎动物骨骼肌肌力.     

骨关节炎兔软骨细胞凋亡与八味柔肝散的抑制效应

背景：传统中药对骨关节炎具有镇痛等治疗作用,但对关节软骨是否有保护作用及其通过何种机制起作用少有报道。目的：观察八味柔肝散对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法：将新西兰大白兔随机分为正常组、模型组和治疗组,模型组和治疗组行Hurth法骨关节炎造模。建模后1周,正常组和模型组每天生理盐水灌胃,治疗组行八味柔肝散水提液灌胃。建模后8周行组织学观察Mankin＇s评分,硝酸还原酶法测定关节液一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶活性,原位末端转移酶标记技术检测软骨细胞的凋亡指数。结果与结论：结果显示,治疗组关节软骨Mankin＇s评分,关节液一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶活性,关节软骨细胞凋亡指数均低于模型组（P〈0.05）。证实八味柔肝散对兔骨关节炎软骨细胞凋亡有抑制作用。     

H9C2细胞培养液诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

背景：文献报道间充质干细胞经体外化学药物诱导或自体移植体内诱导或模拟心肌样微环境体外诱导等方法可不同程度的诱导心肌细胞分化,但这些方法诱导率低、操作复杂、毒副作用大。 目的：验证心肌细胞株H9C2细胞培养液对骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的诱导作用。 方法：运用全骨髓贴壁筛选法分离培养大鼠间充质干细胞,制备 H9C2细胞培养液作为诱导培养液,将间充质干细胞诱导培养1,3,5,7 d;以单独10%F12-DMEM培养液培养的H9C2细胞为阳性对照组;单独10%F12-DMEM培养液培养的间充质干细胞为阴性对照组。用免疫荧光法和western-blot检测其肌钙蛋白T、心肌细胞结蛋白的表达,用实时荧光定量检测其心肌细胞特征性基因α-肌球蛋白重链和β-肌球蛋白重链mRNA的表达。 结果与结论：H9C2细胞培养液诱导间充质干细胞培养7 d,间充质干细胞增殖分化细胞中肌钙蛋白T阳性细胞达（16±7）%,显著高于对照组（P 〈0.05）;与阴性对照组比较,western-blot检测诱导培养间充质干细胞后分化细胞肌钙蛋白T表达明显上调（P〈0.05）,结蛋白表达明显上调（P 〈0.05）;RT-PCR检测分化细胞α-肌球蛋白重链与β-肌球蛋白重链mRNA表达均上调（P 〈0.05）。结果提示H9C2细胞培养液能诱导间充质干细胞向心肌样细胞分化。     

骨骼肌肌球蛋白重链与不同类型训练的影响

背景:研究表明,快肌和慢肌的最大缩短速度存在差异,这主要由于快慢肌所表达的MHC类型不同,引起肌球蛋白ATPase活性差异的缘故.目的:介绍不同运动条件下骨骼肌纤维肌球蛋白重链组成变化的研究内容,理解运动训练与骨骼肌收缩性能的关系.方法:应用计算机检索PubMed与Medline springlink数据库1990-01/2009-10有关骨骼肌肌球蛋白重链的文章,检索词为"skeletal muscle"、"myosin heavy chain"、"training",限定语言种类为English.同时计算机检索中国期刊全文数据库2000-01/2009-10期间的相关文章,检索词为"骨骼肌,肌球蛋白重链,训练",限定文章语言种类为中文.纳入标准:不同运动形式对骨骼肌肌球蛋白重链的影响.排除标准:重复或类似的同一研究.结果与结论:肌球蛋白的形态学特征:快慢肌中含有不同类型肌球蛋白重链.运动对肌球蛋白重链的影响:耐力训练可引起肌球蛋白重链由快向慢转变,但受训练时间、强度以及年龄因素的影响;抗阻力量训练使得快型肌球蛋白重链升高,同时也受训练强度、时程的影响;减少活动大多会引起慢型肌球蛋白重链向快型肌球蛋白重链转化.抗阻力量训练可引起骨骼肌肥大表现为肌纤维肌球蛋白重链增多,以及肌纤维的转化表现为MHC-Ⅱx(以前称Ⅱb MHC)向MHC-Ⅱa转化,低氧训练可以引起慢型肌球蛋白重链向快型方向转化,减少活动方式多数会引起慢型肌球蛋白重链向快型肌球蛋白重链方向转化.     

高糖对HSkMCs细胞株AT1R、mfn2mRNA表达的影响

目的探讨骨骼肌局部肾素血管紧张素系统（RAS）在高糖状态的变化及对线粒体融合蛋白2（mfn2）基因表达的影响。方法体外培养人骨骼肌细胞（HSkMC）,分为不同浓度葡萄糖组进行培养：5.55mmol/L组,11.1mmol/L组,22.2mmol/L组,分别培养48h,应用RT-PCR检测各组的血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）、mfn2基因表达。结果以5.55mmol/L组作为基础对照组,11.1mmol/L组、22.2mmol/L组AT1R mRNA表达均较对照组增加（P〈0.05）,而mfn2基因表达则下降（P〈0.05）。结论高糖能诱导骨骼肌细胞AT1RmRNA表达上调,mfn2mRNA表达下调,且呈剂量依耐性。     

腓肠肌肌球蛋白收缩功能在有氧训练后的变化

背景:已有实验证实长期耐力训练能导致肌纤维及其肌球蛋白重链异形体由快型向慢型转变,但对于运动训练中肌球蛋白重链异形体mRNA的变化仍有待进一步的实验观察与验证。目的:观察跑台训练对雄性SD大鼠腓肠肌肌球蛋白收缩功能的影响。设计:随机对照动物实验。单位:西安交通大学医学实验中心。材料:选用40只生后7周雄性SD大鼠,体质量(230±16)g,所有动物实验前均未进行过跑台运动。试剂:一抗为鼠源性抗骨骼肌肌动蛋白及快缩型肌球蛋白重链(MHCⅡ)单克隆抗体,ABCam产品。二抗为偶合碱性磷酸酶的抗鼠IgG,SIGMA产品。方法:实验于2005-03/10在西安交通大学医学实验中心完成。随机摸球法将大鼠分为对照组(n=10)和训练组(n=30)。训练组大鼠进行连续4～6周强度约为75%VO2max(18.5～24m/min,坡度为0°)的跑台训练,50min/次,2次/d。对照组自由活动,不给予任何干预措施。训练至4,5,6周,分别取10只大鼠,采用反转录聚合酶链式反应腓肠肌肌球蛋白重链mRNA含量,以免疫组化方法检测肌球蛋白肌纤维的改变情况及横截面积的大小,大鼠麻醉后游离腓肠肌,采用张力传感器及电刺激器给予方波脉冲刺激,逐步拉伸腓肠肌至等长收缩张力为最大时的肌肉初长Lmax位置,平衡10min,记录肌肉长度与张力。取右侧腓肠肌称量湿质量,计算其与体质量之比。肌肉质量与体质量之比按下式计算:肌肉质量(mg)/体质量(g)×100%。主要观察指标:①腓肠肌肌球蛋白重链mRNA含量。②肌球蛋白肌纤维的改变情况及横截面积的大小。③大鼠体质量与腓肠肌质量的变化。④腓肠肌等长收缩最大张力。结果:纳入大鼠40只全部进入结果分析。①腓肠肌肌球蛋白重链mRNA含量:经过4周耐力训练,训练组肌球蛋白总肌球蛋白重链表达是对照组的105%(P<0.01),肌球蛋白重链Ⅱa表达量高于对照组(1.27±0.08,1.17±0.06,P<0.05),肌球蛋白重链ⅡxmRNA表达量高于对照组(1.29±0.04,1.19±0.05,P<0.01)。②肌球蛋白肌纤维的改变情况及横截面积的大小:经过4～6周的有氧训练后,大鼠肌球蛋白重链主要以Ⅱ型慢缩型肌纤维表达为主,而Ⅰ型快缩型肌纤维表达较少。对照组大鼠腓肠肌Ⅰ、Ⅱ型肌纤维横截面积分别为(1958.0±30.5),(1656.1±35.3)mm2。而训练组4周后Ⅰ、Ⅱ型肌纤维横截面积较对照组分别增加24.5%与22.1%(P<0.01);训练组5周后分别增加26.4%与51.5%(P<0.01),训练组训练6周后分别增加33.2%与48.9%(P<0.01)。③大鼠体质量与腓肠肌质量的变化:训练组大鼠训练4,5,6周腓肠肌湿质量分别为(135.6±3.1),(139.2±5.1),(148.4±6.2)mg,高于对照组[(103.2±3.4),(87.5±2.9),(68.3±3.3)mg,P<0.01]。训练组大鼠训练4,5,6周腓肠肌相对湿质量分别为(0.55±0.01),(0.56±0.02),(0.59±0.03),高于对照组[(0.43±0.02),(0.37±0.04),(0.29±0.05),P<0.05～0.01]。④腓肠肌等长收缩最大张力:方波脉冲刺激后6周训练组等长收缩最大张力较对照组显著增加(P<0.01)。结论:短期耐力训练后,肌球蛋白重链中的两种慢型肌球蛋白重链异形体-肌球蛋白重链Ⅱx、肌球蛋白重链Ⅱb基因表达增加,肌纤维横截面积增加,等长收缩最大张力增加,表明有氧训练对提高肌球蛋白收缩功能有促进作用。     

常氧、低氧训练条件下肌肉蛋白表达及肌张力的变化

背景：环境因素以及运动水平均可显著引起肌纤维结构的变化。目的：观察常氧、低氧训练条件下大鼠腓肠肌肌球蛋白、肌动蛋白的表达及肌张力的变化特征。方法：将SD大鼠随机分为常氧对照组（氧体积分数20%,不进行任何处理）、常氧训练2,4,6周组、低氧训练2,4,6周组、低氧对照组（氧体积分数12.7%,不进行训练）。结果与结论：无论在常氧还是低氧环境下,运动训练后大鼠腓肠肌质量、腓肠肌肌纤维截面积均明显增加（P〈0.05,P〈0.01）;运动训练6周后大鼠腓肠肌等长收缩最大张力显著增加（P〈0.01）;经运动训练后大鼠腓肠肌总MHC及α-actin随着训练时间的延长逐步升高,并且低氧训练组升高幅度高于常氧训练组。说明低氧训练可以更有效促进骨骼肌肌球蛋白、肌动蛋白的表达,增强肌张力,强化Ⅰ型肌纤维,并且训练时间越长,效果越显著,表明低氧训练是一种有效的运动训练途径。     

氯化胆碱与制动性骨骼肌萎缩肌肉生成抑制素mRNA的表达

背景：研究发现类胆碱物质可增加乙酰胆碱的弥敝及终板电流的幅度,对神经肌肉接点功能退化有一定的对抗作用。目的：观察氯化胆碱对制动性骨骼肌萎缩的防治作用及对骨骼肌萎缩大鼠肌肉生成抑制素mRNA表达的影响。方法：将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。采用可塑性石膏固定模型组和治疗组大鼠右后肢制备肌萎缩模型。治疗组每目灌胃氯化胆碱（150mg／kg）,对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。4周后解剖右后肢腓肠肌,检测腓肠肌收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平及肌肉生成抑制索mRNA的表达。结果与结论：与对照组比较,模型组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）,肌肉生成抑制索mRNA表达显著增高（P〈0.01）。与模型组比较,治疗组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著升高（P〈0.05）,肌肉生成抑制素mRNA表达显著降低（P〈0.05）。说明氯化胆碱能够显著提高制动性萎缩骨骼肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平,减少肌肉生成抑制素mRNA的表达,从而有效抑制骨骼肌制动性萎缩的发生。     

透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响

背景：软骨进行性破坏为晚期骨关节炎的特征性病变,骨关节炎相关因子透明质酸、骨桥蛋白、CD44在骨关节炎软骨中表达增加。目的：通过透明质酸干预体外培养的人膝骨关节炎软骨细胞,探讨透明质酸对人膝骨关节炎软骨细胞CD44与骨桥蛋白表达的影响。方法：将软骨标本进行体外培养获取纯化的软骨细胞,分为3组：空白对照组、透明质酸干预组（100 mg/L）和透明质酸酶干预组（200 mg/L）。培养48 h后,采用Real-time Q PCR检测软骨细胞骨桥蛋白mRNA,CD44mRNA表达水平。用SPSS 17.0统计软件包分析骨桥蛋白mRNA和CD44 mRNA经透明质酸干预前后表达的差异。结果与结论：透明质酸组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组高,透明质酸酶组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组低;透明质酸组及透明质酸酶组的CD44 mRNA表达水平均较空白组低。结果提示透明质酸可以上调骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白的表达;透明质酸在骨关节炎软骨细胞内对CD44表达的影响具有双相性,其影响结果可能与透明质酸的相对分子质量有关。     

脊髓损伤肌萎缩肌球蛋白重链可塑性与训练的影响

骨骼肌的收缩特性部分是由肌球蛋白重链（MHC）亚型决定的。脊髓损伤后损伤水平以下的骨骼肌MHC各亚型mRNA和蛋白水平发生适应性变化,表现为慢MHC-Ⅰ亚型表达下调,快MHC亚型表达上调。MHC-mRNA的适应性变化先于蛋白的变化。不同物种、不同肌肉MHC转化的程度与速度不同。脊髓损伤后短时间训练不能引起MHC亚型发生显著的转化,而长期负重步行训练能够减缓肌纤维MHC亚型表达发生由慢向快的转化。